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黄芩素对人乳腺癌MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶的抑制作用
目的观察黄芩素对MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响.方法采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率.TPK活性通过测定转移到TPK底物上[γ-32P]ATP的32P放射性活度来检测.结果黄芩素能够显著地抑制MCF-7细胞内TPK的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2.5μmol/L.结论黄芩素作为一种细胞内的TPK抑制剂具有潜在的抗乳腺癌应用价值.
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胃癌组织中EphB2受体胞外区结构域的克隆和序列测定
目的对胃癌组织中酪氨酸蛋白激酶EphB2受体胞外区结构域进行克隆.方法从胃癌患者手术切片标本中提取RNA,进行RT-PCR,将扩增片段克隆入pUC19质粒,进行测序及酶切鉴定.结果克隆片段序列正确.结论为进行表达、筛选与之相互作用的蛋白,阐明其生理功能打下基础.
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4,5,6-三羟基异黄酮对大鼠肝星状细胞骨架及胞浆内游离钙的作用
研究显示4,5,6-三羟基异黄酮(genistein)对肝星状细胞(HSC)的生长、激活有抑制作用[1].拟通过体外培养的激活HSC细胞模型来进一步研究genistein对HSC抑制作用的机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.
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4,5,6-三羟基异黄酮对大鼠肝星状细胞细胞周期的影响
4,5,6-三羟基异黄酮(genistein)是一种特异性的酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,TPK)抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI),现以血小板衍生生长因子(PDGF)作为刺激因素观察genistein对肝星状细胞(HSC)增殖的抑制作用,以探讨其抗纤维化的细胞学机制.
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肝硬化时肝细胞胰岛素受体和酪氨酸蛋白激酶表达的定量研究时德仁东传凌陆立丛闻天周燕
目的探索肝硬化时肝组织细胞胰岛素受体(IR)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)含量的变化规律. 方法应用图象分析系统对12例血清HBV标志物阳性的肝炎后肝硬化患者肝组织石腊包埋切片对抗胰岛素受体和酪氨酸蛋白激酶抗体免疫组化标记物的定量测定. 结果肝硬化糖耐量试验(GTT)异常组和GTT正常组IR含量分别为(41.44±6.47)AU和(43.36±4.78)AU,较对照组[(48.11±4.42)AU]显著减少(P＜0.01),肝硬化GTT异常组和GTT正常组IR含量无显著性差异(P＞0.05);TPK表达量:肝硬化GTT异常组较GTT正常组显著性减少,分别为(41.31±5.55)AU和(51.16±5.83)AU. 结论肝硬化时肝细胞IR减少;肝硬化时GTT异常与肝细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性减退有关.
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钒酸钠改善严重烫伤大鼠肌细胞胰岛素受体TPK活性的研究
目的探讨钒酸钠改善创伤后胰岛素抵抗和糖代谢紊乱的机制.方法:用钒酸钠胃饲30%TBSAⅢ度烫伤大鼠,观察血糖、胰岛素、肌细胞膜胰岛素受体结合特性和胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(IR-TPK)活性的改变.结果:钒酸钠降低严重烫伤大鼠空腹血糖水平,不改变胰岛素水平,也不改变肌细胞膜胰岛素受体大结合率和结合容量,但可显著增加胰岛素刺激的IR-TPK活性.结论:钒酸钠可不通过胰岛素受体介导而直接刺激IR-TPK活性,改善靶组织对胰岛素的敏感性.
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缺氧复合梭曼中毒对PC12细胞中IL-4、IL-8和TPK活性的影响
目的研究缺氧复合梭曼中毒PC12细胞中白介素-4、白介素-8(IL-4、IL-8)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的变化.方法采用ELISA法和放射免疫技术检测缺氧复合梭曼中毒PC12细胞的IL-4、IL-8和TPK活性.结果单纯梭曼中毒PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在中毒2 h升高,12 h活性水平高,24 h活性降低.缺氧复合梭曼中毒组PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在缺氧中毒2 h升高,6 h高,12 h活性降低,各时相点均明显高于正常对照组.结论提示酪氨酸蛋白激酶、IL-4、IL-8参与缺氧复合梭曼中毒所致脑损伤的发病机制.
关键词： 梭曼 缺氧 PC12细胞 酪氨酸蛋白激酶 白介素-4、白介素-8 -
酪氨酸蛋白激酶抑制剂联合放疗抑制乳腺癌细胞增殖以及荷瘤裸鼠肿瘤生长
目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂（TKI）联合放疗对乳腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法利用噻唑蓝（MTT）实验检测不同浓度的TKI对乳腺癌细胞MCF‐7的抑制作用。将乳腺癌细胞分为生理盐水组，TKI干预组（TKI处理后无X射线照射），X射线干预组（X射线照射，无TKI处理）和TKI联合放疗干预组。利用克隆形成实验比较各组细胞存活率。构建乳腺癌裸鼠异位瘤模型，考察不同干预组对肿瘤生长的抑制能力。结果克隆形成实验显示，单独利用X射线照射或者单独利用任何浓度的TKI抑制剂处理乳腺癌细胞，细胞的存活率均较处理前出现降低；但TKI联合放疗乳腺癌细胞存活率较前面两组（TKI干预组，X射线干预组）差异有统计学意义（P＜0．05）。与TKI预处理组或X射线干预组比较，TKI联合放疗干预组能够明显抑制荷瘤裸鼠肿瘤体积的增长，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论TKI抑制剂联合放疗可有效抑制乳腺癌细胞的生长。
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体外循环和非体外循环病人胰岛素受体TPK活性及血浆TNF-α变化及意义
目的观察体外循环和非体外循环手术中骨骼肌胰岛素受体TPK活性及血浆TNF-α改变,探讨胰岛素抵抗产生的机制.方法随机选择8例动脉导管患者及15例房缺或室缺患者,于麻醉前、麻醉后、开胸后20min、术毕、术后6h采取血样,测定血糖、胰岛素、TNF-α的浓度,并于手术开始即刻、术毕关胸即刻取骨骼肌标本,测定胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的变化.结果体外循环组血糖、胰岛素、TNF-α均明显升高,手术结束时骨骼肌胰岛素受体TPK活性明显低于手术开始时.动脉导管组血糖明显升高,胰岛素及TNF-α有所升高,但不显著,手术前后骨骼肌胰岛素受体TPK活性无明显改变.结论体外循环手术机体胰岛素抵抗程度明显强于非体外循环手术,体外循环可作为一个独立损伤因素影响胰岛素受体TPK活性从而干扰了胰岛素的正常信号传导,产生明显的胰岛素抵抗,TNF-α可能是体外循环手术降低胰岛素受体TPK活性的重要体液因子.
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RNA 干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶对哮喘小鼠树突状细胞功能的影响
目的 通过特异性微小干扰RNA(siRNA)靶向抑制小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的酪氨酸蛋白激酶(Syk)的基因表达,阻断树突状细胞的成熟,从而阻断Syk所介导的细胞内及细胞间的信号传导通路,研究Syk与DC之间的关系.方法 化学法合成21-23 bp的小鼠树突状细胞Syk基因siRNA片段A、B、C、D,用Lipofectamine 2000作为转染试剂,将siRNA片段转染哮喘小鼠骨髓来源DC,作用48 h后再与正常小鼠脾脏来源T淋巴细胞混合反应48 h,之后用ELISA法检测T淋巴细胞分泌细胞因子(IL-4、lL-13、IL-2和INF-γ)的水平.用Western Blot检测DC表达Syk蛋白的量,判断Syk基因是否被沉默,剔除无效片段.结果 siRNA片段A、C、D干扰组小鼠DC细胞Syk蛋白表达减少;B组没有明显变化,为无效片段.siRNA干扰组IL-4、IL-13的水平较未干扰组明显下降(P均<0.05),IL-2和INF-γ水平无显著差异(P>0.05).结论 Syk特异性SiRNA能够有效抑制Syk基因表达,可阻遏DC的抗原递呈作用以及活化、分化T淋巴细胞的功能.
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EGFR基因突变与酪氨酸激酶抑制剂疗效及预后之间的关系
背景与目的 已有的研究表明:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路在非小细胞肺癌的发生和发展中起重要作用.EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)是目前非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的热点.研究表明,EGFR基因突变与TKIs的疗效及预后相关.本研究旨在了解EGFR基因突变与两种酪氨酸激酶抑制剂疗效及预后的相关性.方法 共收集了34例接受gefitinib单药治疗和25例接受erlotinib单药治疗的晚期NSCLC患者的病理组织蜡块及相关临床资料.用PCR-PAGE检测EGFR 19外显子突变,PCR-RFLP检测EGFR 21外显子突变,均用直接测序进行验证.结合临床进行分析.结果 59例NSCLC标本中共检测出22例标本中有EGFR基因突变,突变率为37.3%.EGFR基因突变率在女性、腺癌、不吸烟患者中高(P＜0.05).有EGFR基因突变的患者接受酪氨酸激酶抑制剂治疗的有效率高于无突变患者(50% vs 18.9%,P＜0.05),疾病控制率高于无突变患者(86.4% vs 54.1%,P＜0.05).有EGFR基因突变的患者的疾病进展时间和总生存期均高于无突变患者,但是没有统计学差异(P＞0.05).结论 EGFR基因突变在女性、腺癌和不吸烟者中发生率高.有EGFR基因突变的晚期NSCLC接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗的有效率和疾病控制率高于无EGFR基因突变者.
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Genistein对大鼠肝脏星状细胞激活的抑制作用
目的探索酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对肝脏星状细胞(HSC)激活的抑制作用.方法采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注及Nycodenz一步密度梯度离心法分离大鼠HSC,并进行体外培养使之激活.用四唑盐比色法(MTT法)检测Genistein作用24、48和72小时对HSC增殖的抑制作用;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察Genistein作用后HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,HSC激活的标志之一)表达的变化.结果 MTT检测显示,10-5～10-9 mol/L 浓度的Genistein作用24、48和72小时对HSC增殖有抑制作用,并以10-7 mol/L的Genistein作用48小时的抑制作用明显.LSCM观察显示,10-6和10-7 mol/L的 Genistein作用48小时可使α-SMA表达明显减弱.结论一定浓度的Genistein能明显抑制HSC的活化和增殖,有可能成为抑制肝纤维化的潜在药物.
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内皮细胞缺血再灌注损伤中酪氨酸蛋白激酶的作用
缺血可以引起组织、器官的结构和功能异常.再灌注治疗则可以恢复组织、器官的血供,改善缺血,从而起到保护该组织、器官的作用.然而在一定条件下,再灌注也会加重缺血组织原有的损害,或者引起新的损伤.这种缺血后再灌注引起的损伤就被称为"缺血再灌注损伤”,简称"再灌注损伤”.再灌注损伤在一定程度上限制了溶栓、介入治疗、旁路手术等再灌注治疗的临床应用[1].在组织、器官再灌注过程中,先接触到的组织是血管内皮.正常血管内皮具有屏障作用,调节血管紧张性,调节器官血供等多种重要的生理功能.缺血再灌注时,内皮细胞产生一系列结构、功能的损伤改变,参与器官缺血再灌注损伤的发生.内皮细胞缺血再灌注损伤机制主要表现有三个方面:氧自由基生成增多,细胞内钙超载和急性炎症反应.近年来的研究发现,酪氨酸蛋白激酶活化和酪氨酸蛋白磷酸化在这些损伤机制中都起着重要的作用.本文就酪氨酸蛋白激酶在内皮细胞缺血再灌注损伤改变和损伤机制中的作用作一综述.
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严重烫伤大鼠肝脏胰岛素抵抗发生机制的研究
目的:探讨严重烫伤后胰岛素信号在肝细胞转导缺陷的环节,以阐明严重烫伤后肝脏胰岛素抵抗的发生机制.方法:以30%体表面积背部皮肤全层(Ⅲ度)烫伤大鼠为模型,采用WGA-Sepharose 4B亲和层析技术部分纯化大鼠肝细胞胰岛素受体,通过胰岛素受体结合实验、受体蛋白γ-32P-ATP自身磷酸化SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)放射自显影和外源性底物磷酸化,观察烫伤大鼠早期肝细胞胰岛素受体结合行为、受体β-亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的变化.结果:严重烫伤大鼠伤后3d肝细胞胰岛素受体大结合容量及亲和力无明显改变;但受体β-亚基自身磷酸化能明显下降;受体TPK活性亦明显降低并对胰岛素刺激的反应性明显减退.结论:严重烫伤后胰岛素信号在肝细胞转导发生偶联障碍,导致胰岛素生物效应受体后缺陷可能是严重烫伤后肝脏胰岛素抵抗发生的分子机制.
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酪氨酸蛋白激酶在紫外线引起的人晶状体上皮细胞PGE2合成增加中的作用
目的:探讨酪氨酸蛋白激酶途径在紫外线引起的晶状体上皮细胞前列腺素E2(PGE2)合成增加过程中的作用.方法:体外培养人晶状体上皮细胞,分别用紫外线照射、吲哚美辛(indomethacin)、酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein 处理,用酶联免疫法检测培养液中PGE2浓度的变化,用Western blot和免疫组织化学染色法检测培养细胞酪氨酸蛋白激酶磷酸化水平的变化.结果:紫外线照射可以引起培养的人晶状体上皮细胞PGE2的合成明显增加(对照组1h 200.0±24.8ng/g,2h253.7±45.7ng/g,4h 279.1±21.6ng/g,6h 255.6±43.8ng/g,UV组1h 613.4±43.5ng/g,2h 452.9±87.4ng/g,4h 538.2±33.5ng/g,6h 776.8±42.0ng/g,P＜0.05);照射前给予吲哚美辛可以明显抑制由紫外线引起的PGE2升高(UV+Indo组1h 93.2±10.8ng/g,2h 64.7±12.1ng/g,4h 117.2±17.5ng/g,6h 132.2±34.3ng/g,P＜0.05);事先给予genistein处理也可以明显抑制由紫外线引起的PGE2升高(Gen+UV组1h161.2±18.5ng/g,2h 240.3±25.0ng/g,4h 357.7±28.1ng/g,6h 478.6±62.4ng/g,P＜0.05).紫外线照射可以使酪氨酸蛋白激酶磷酸化增强,并可以被genistein抑制.结论:紫外线引起的人晶状体上皮细胞PGE2合成增加可能由酪氨酸蛋白激酶途径诱导.
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胰岛素样生长因子-Ⅰ受体（IGF-ⅠR）抑制剂的研究进展
胰岛素样生长因子（IGF）家族系统中以胰岛素样生长因子Ⅰ受体（insulin-like growth factor I re-ceptor，IGF-ⅠR）为重要，其为一种糖蛋白跨膜受体，属于酪氨酸蛋白激酶家族成员，在多种肿瘤中上调表达或增加激酶活性从而介导肿瘤发展、浸润以及抗细胞凋亡等［1］；同时，IGF-ⅠR 还与多房棘球绦虫、线虫［2］、血吸虫［3］等致病因素有关，这些特性使IGF-ⅠR 成为一个具有一定吸引力的抗肿瘤、抗寄生虫靶向治疗潜在靶点。本文对近年来以 IGF-ⅠR 为靶点的抑制剂的研究进展进行综述。
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钒酸钠改善严重烫伤大鼠胰岛素抵抗的作用机制
目的探讨钒酸钠改善创伤后胰岛素抵抗和糖代谢紊乱的作用机制.方法用钒酸钠胃饲30%TBSAⅢ度烫伤大鼠,观察血糖、胰岛素、乳酸动态变化,糖原储存和脂肪合成的变化,以及对胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(IR-TPK)活性的影响.结果钒酸钠降低严重烫伤大鼠高血糖、高胰岛素和高乳酸血症,增加肌肉和肝脏糖原储存及胰岛素刺激的脂肪合成,对骨骼肌细胞膜胰岛素受体影响不明显,但可明显恢复IR-TPK活性.结论钒酸钠可明显改善严重烫伤大鼠胰岛素抵抗及糖代谢紊乱,其机制不涉及胰岛紊受体,而是直接刺激肌肉细胞膜IR-TPK活性.
