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Genistein对腺样囊性癌细胞SACC-83中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein诱导人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞凋亡的分子机制.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用Western印迹技术检测bax、bcl-2和survivin蛋白的表达,并利用电泳凝胶成像分析软件,对其结果进行量化分析,采用SPSS11.5软件包对结果进行方差分析.结果:随着Genistein作用时间的延长和浓度的增加,bax蛋白的表达明显增加,bcl-2和survivin蛋白的表达明显减少.SACC-83细胞经220μmol、L Genistein作用3d,其bax蛋白的表达量是对照组的3.43倍(P＜0.01),而bcl-2和survivin蛋白的表达量分别是对照组的85%(P＜0.05)和35%(P＜0.01).结论:Genistein诱导SACC-83细胞凋亡,与其上调bax蛋白的表达,以及下调bcl-2和survivin蛋白的表达有关.
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Genistein对腺样囊性癌细胞SACC-83中细胞周期蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein诱导人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞周期阻滞的分子机制.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用Western印迹技术检测CyclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达,并利用电泳凝胶成像分析软件,对其结果进行量化分析,采用SPSS11.5统计软件对结果进行方差分析.结果:随着Genistein作用时间的延长和浓度的增加,CyclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达明显减少.SACC-83细胞经220μmo1/L Genistein作用3d,其CvclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达量分别是对照组的58%、64%和46%、43%,差异非常显著(P＜0.01).结论:Genistein诱导SACC-83细胞周期阻滞于G2/M期,与其下调CyclinB1、Cdk1和CvclinD1、Cdk4蛋白的表达有关.
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Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinV/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析.结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/L Genistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P＜0.01).结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用.
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微生物来源的酪氨酸蛋白激酶抑制剂
酪氨酸蛋白激酶(PTKs)广泛作用于细胞的各种生理过程,与细胞的生长、增殖和分化的信号传导途径有关,因此PTKs抑制剂具有多种生物学效应.本文综述了己发现的微生物来源的PTKs抑制剂.
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Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用
目的观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制.方法以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著.结论bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖.
关键词： 酪氨酸蛋白激酶 蛋白激酶C 碱性成纤维细胞生长因子 抑制剂 -
TNFα对小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力影响
目的 观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对KM小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力的影响.方法 80只清洁级KM小鼠随机分为TNFα高剂量连续注射组(TH组,n=20)、TNFα低剂量连续注射组(TL组,n=20)、TNFα高剂量一次注射组(T1组,n=20)和正常对照组(C组,n=20).密度梯度离心分离组织细胞膜,麦胚凝集素(WGA)亲和柱层析纯化膜胰岛素受体,外源聚谷-酪多肽底物同位素32p掺入法测定酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力,观察各组胰岛素刺激前后的离体骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化.结果 1)TH和TL组基础(无胰岛素刺激)骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力均明显低于C组,且TH组明显低于TL组(P均＜0.01);2)TH组和TL组胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均明显低于C组,且TH组明显低于TL组,(P均＜0.01);3)T1组无论基础还是胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均与C组无显著差别(P＞0.05).结论 TNFα可抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,在组织细胞膜胰岛素受体信号转导障碍中发挥重要作用.TNF α抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,需连续刺激,一次刺激作用效果不明显.
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抑制素α亚基片段P33对大鼠离体培养黄体细胞凋亡的影响
我室先前的工作表明,抑制素α亚基片段P33显著抑制离体培养大鼠黄体细胞的孕酮分泌,整体实验显示P33促进黄体功能萎缩和细胞凋亡.本实验进一步在细胞水平探讨P33促进黄体细胞凋亡的作用机制.应用DNA电泳检测技术、DNA荧光(AO-EB PI)染色和流式细胞分析方法观察了P33对PMSG-hCG假孕大鼠胶原酶DNA酶分散的黄体细胞的自发凋亡的影响.结果三种方法一致显示,P33 (1 μg/ml)促进黄体细胞的自发凋亡.阻断酪氨酸蛋白激酶活性(genistein 50 μg)则抑制P33诱导的黄体凋亡;而阻断RNA和蛋白质合成(Cyx,50 μg/ml;Act D,50 μg/ml)均不抑制P33促进的黄体细胞凋亡.结果表明,P33促进培养大鼠黄体细胞的自发凋亡,其作用机制可能与TPK途径有关.本实验为抑制素α亚单位或其相关衍生物可能是卵巢局部调节因子之一的假说提供了又一证据.
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老年食管鳞癌组织中表皮生长因子受体的表达及临床意义
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)家族包括4个成员,即EGFR/HER1、C-erbB-2/HER2、C-erbB-3/HER3和C-erbB-4/HER4,都属于Ⅰ型具有受体功能的酪氨酸蛋白激酶[1].研究表明,EGFR家族在肿瘤发生发展、预后判断、化疗药物选择等方面有重要作用[2].
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衰老细胞相关信号传递系统
细胞信号传递系统是一个复杂的调控网络.激素、神经递质、细胞(生长)因子等生物信息通过cAMP(α受体)、磷脂酰肌醇(β受体)、丝氨酸/酪氨酸蛋白激酶(TPK)、及离子通道、离子泵等途径发挥生物效应.β受体通过激活A激酶而诱导细胞分化,抑制生长增殖;α受体及TPK则通过激活C激酶、G激酶、Ca2+CaM激酶,并通过酪氨酸蛋白激酶的激活,诱导核内多种生长调控因子,如fos、myc基因表达,从而促进细胞生长增殖.衰老对细胞信号传递系统的影响主要表现在对细胞周期进程及与细胞生长增殖相关的转录调控因子功能的影响.
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脑源性神经营养因子与嗜酒损害关系的研究进展
对脑源性神经营养因子与嗜酒损害关系的研究进展作一简述.
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Aurora-A激酶及多重酪氨酸蛋白激酶抑制剂类抗癌药ENMD-2076
由EntreMed公司开发的抗癌药ENMD-2076是口服有效的Aurora激酶和多重酪氨酸激酶抑制剂.Aurora激酶在细胞增殖过程中起重要作用,人类Aurora激酶有3种亚型:Aurora-A、-B和-C,它们虽具明显的序列同源性,但在细胞中所处区域和功能各异.
关键词： ENMD-2076 Aurora-A激酶 酪氨酸蛋白激酶 抗癌药 口服活性 -
矾酸钠和染料木黄酮对脑缺血/再灌注诱导海马神经元损伤的作用及分子机制
目的研究矾酸钠和染料木黄酮对脑缺血/再灌注后海马神经元损伤的作用及其分子机制.方法采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎诱导的短暂(15 min)前脑缺血模型,用底物γ-32P掺入法测定酪氨酸蛋白激酶(PTK)的活性,免疫印迹法分析NMDA受体2B亚基(NR2B)的酪氨酸磷酸化变化;采用体外孵育的大鼠海马脑片模拟缺血模型,测定海马神经元细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量作为神经元损伤的指标.结果沙土鼠缺血/再灌6 h,海马突触体总PTK活性显著升高,缺血前20min腹腔注射染料木黄酮对PTK总活性有明显的降低作用,而矾酸钠对其却无明显作用;短暂前脑缺血/再灌注6 h后,NR2B的酪氨酸磷酸化显著增加,矾酸钠与染料木黄酮可分别增加、减少这种磷酸化的增加,而对NR2B的蛋白表达无明显作用;大鼠海马脑片"缺血"30 min/再灌1 h,细胞LDH的漏出量明显增加,"缺血"前15 min,在海马脑片孵育液中加入矾酸钠与染料木黄酮可分别增加、减少LDH的漏出量.结论PTK和酪氨酸蛋白磷酸酶(PTP)共同参与缺血性脑损伤的调节,而PTK起着更为重要的作用.
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胆脂瘤型中耳炎胞内PTK途径的研究
目的探讨 EGFR和磷酸化酪氨酸在继发性胆脂瘤型中耳炎的表达情况,分析酪氨酸蛋白激酶( PTK)途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中的作用.方法应用免疫组化 SP染色方法和计算机图像分析系统,连续观察 10例具有典型鼓膜后皱襞处穿孔的中耳继发性胆脂瘤患者的不同部位(胆脂瘤上皮、鼓膜穿孔部位邻近皮肤、耳道深部正常皮肤)中 EGRF和磷酸化酪氨酸的表达情况.结果 EGRF和磷酸化酪氨酸在耳道深部正常皮肤、鼓膜穿孔部位邻近皮肤和胆脂瘤上皮中呈一致性连续阶梯状上升,它们在胆脂瘤上皮各层细胞均存在高度表达,以基底层和棘层为著;穿孔部位邻近皮肤则在基底层和棘层细胞中等表达;耳道深部正常皮肤仅基底层弱表达.且两者之间存在正相关,总相关系数为 0.989( p<0.01).结论酪氨酸蛋白激酶途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中起重要作用.
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酪氨酸蛋白激酶与突触可塑性及学习记忆的关系
近年来酪氨酸磷酸化在成年哺乳动物神经系统中的重要作用逐渐受到重视,酪氨酸蛋白激酶在调控与细胞增殖、分化、迁移及代谢相关的信号转导通路中起关键作用.本文主要对三种不同的酪氨酸蛋白激酶信号级联过程,即Trk受体酪氨酸激酶级联,Src家族非受体酪氨酸激酶级联及Eph受体酪氨酸激酶级联,以及它们在成年动物神经元突触可塑性及学习记忆形成过程中的重要作用及可能机制作一综述.
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JAKs-STATs信号转导通路与心肌保护的研究进展
体外循环心脏外科手术,尤其是心脏移植后,出现心脏缺血再灌注损伤是影响手术成功与否的关键.因此研究心肌缺血及心脏再灌注损伤机制和心肌保护是当今诸多学者研究追踪的热点.各种原因的心肌缺血均会伴随大量活性氧的增多,诱导促炎症因子如白介素(IL-6、IL-8、IL-18等)、核转录因子(NF-κB)等的释放,激活炎症信号通路的开放,影响包括抑制凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2( Bcl-2)和促凋亡基因(Bax)等的表达,激活多种凋亡酶,启动细胞凋亡的发生[1],其中酪氨酸蛋白激酶信号传导及转录激活因子(Janus kinase/signal Wansducer and activatior oftranscri -ption,JAK-STAT)途径越来越多的被证明是细胞缺血再灌注损伤中引起凋亡信号通路的关键所在[2-3].
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组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力测定方法
目的介绍一种组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力测定方法.方法密度梯度离心分离小鼠肝和骨骼肌细胞膜成分,不进行膜胰岛素受体纯化,用单位膜蛋白胰岛素刺激前后的膜TPK活力改变值,作为评估组织细胞膜胰岛素受体TPK活力的定量指标,并与传统方法的单位膜蛋白麦胚凝集素(WGA)亲和层析纯化后的胰岛素受体胰岛素刺激前后的TPK活力改变值进行比较.结果每mg膜蛋白基础(无胰岛素刺激)TPK活力明显高于每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力(P<0.01);每mg膜蛋白经胰岛素刺激的TPK活力改变值与每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力改变值无显著差别(P>0.05).结论组织细胞膜上存在TPK,用胰岛素刺激的组织细胞膜TPK活力改变值,可作为组织细胞膜胰岛素受体特异TPK活力.本方法不需要纯化组织细胞膜胰岛素受体,可作为评价组织细胞膜胰岛素受体功能的实用科研技术.
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Abl-酪氨酸蛋白激酶与白血病的相关性研究
信号转导是一个十分精细、复杂的过程,参与细胞的增殖、分化、成熟和凋亡的每一步.在正常情况下,Abl-酪氨酸蛋白激酶(PTK)参与细胞的信号转导,使机体保持正常功能.而在某些造血系统疾病中,由于bcr-abl基因所表达的融合蛋白具有较强的PTK活性,影响正常的信号转导途径,从而使造血细胞发生恶性转化、癌变,常见于慢性髓性白血病(CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL).综述Abl-PTK的结构、功能及所致白血病的发病机制,并对有关酪氨酸激酶抑制剂的研制与开发进行探讨.
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不同胰腺癌细胞HER2的表达变化及意义
目的 观察不同胰腺癌细胞中HER2的表达变化,探讨HER2对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法 以胰腺癌细胞PANC-1、BXPC-3、SW1990为研究对象,培养至对数生长期；分别采用实时荧光定量PCR、Western blot 法检测胰腺癌细胞中的HER2 mRNA及其蛋白,用细胞体外侵袭试验观察胰腺癌细胞侵袭作用.结果 PANC-1、BXPC-3、SW1990中HER2mRNA表达水平分别为0.0098±0.0001、0.006 4±0.000 2、0.006 5±0.000 2,HER2蛋白表达水平分别为0.717±0.003、0.537±0.008、0.243±0.003,穿膜细胞数分别为194.30±1.20、123.70±0.88、137.30±1.45,PANC-1与BXPC-3、SW1990比较,P均＜0.01.结论 HER2在不同的胰腺癌细胞株中均有表达,以侵袭性强的PANC-1表达强；HER2的表达可能与胰腺癌的侵袭作用有关.
关键词： 人类表皮生长因子受体2 酪氨酸蛋白激酶 细胞侵袭 胰腺癌细胞 胰腺肿瘤 -
酪氨酸蛋白激酶在β受体激动增加eNOS活性信号通路中的作用
体外培养人脐静脉内皮细胞;采用同位素两步色谱法检测eNOS活性,观察P11(特异性阻断剂Ty_phostin23(T23,1×10-4mol/L)及其无活性衍生物Typhostinl(T1,1×10-4 mol/L)与人脐静脉内皮细胞孵育10min,再与异丙肾上腺素(ISO,1×10-6mol/L)孵育30 min后eNOS活性变化.结果ISO与人脐静脉内皮细胞孵育30 min后eNOS活性明显增加(30.7±3.9)%,P＜0.001;Typhostin23阻断PTK后,ISO诱导的eNOS活性增加受到明显抑制,P＜0.001,而Typhostinl不影响ISO激活eNOS的程度(28.9±3.75)%,P0.05.证实酪氨酸蛋白激酶参与了ISO激活eNOS活性的过程.
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脑衰反应调节蛋白2的生理作用及其与阿尔茨海默病的关系
阿尔茨海默病(AD)的主要病理特征包括大脑中淀粉样斑块(淀粉样前体蛋白的β样剪切)和神经纤维缠结(tau蛋白的高度磷酸化).近年来,为了深入探讨AD患者记忆和认知缺陷的发病机理,许多研究者试图寻找与AD病理发展相关的早期分子机制.研究发现,脑衰反应调节蛋白(CRMP)是一种广泛表达于成人和婴幼儿大脑中的蛋白,而且伴随着AD的病理发展,CRMP2出现了明显的异常磷酸化.现就CRMP2的生理作用与AD的关系综述如下.
