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表皮生长因子对大鼠肺表面活性物质合成的调控及机制
目的和方法:采用无血清成年大鼠肺组织培养,用液体闪烁计数器测定3H-胆碱掺入磷脂酰胆碱量,消化定磷法测总磷脂,薄层层析及薄层扫描测磷脂各组分含量变化,观察生理浓度表皮生长因子对成年大鼠肺表面活性物质合成的调控. 结果:①10-9 mol/L EGF作用8 h后,PC合成量显著增加,16 h达高峰; ②E GF可显著增加总磷脂、PS特征性成分PC、PG合成(P<0.01).而细胞膜特征性组分PE、PS e、SM、PI均无显著影响(P>0.05);③PTK抑制剂Tyrphostin 47、PKC抑制剂H7均对E GF促PS合成有阻断效应.④EGF、TP47、H7对肺组织LDH释放量无显著影响.结论 :EGF参与生理状态下成年大鼠PS合成的调控,其信号转导与EGF受体PTK和细胞内PK C途径有关.
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骨髓增殖性疾病JAK2基因V617F点突变研究
JAK2基因属于JAKs(Janus kinases)家族,是一种胞内酪氨酸蛋白激酶.多种细胞因子如白细胞介素3(IL-3)、红细胞生成素(EPO)等通过JAKs-STAT途径进行胞内信号的转导,终促进或调节细胞的增殖.
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表皮生长因子受体抑制剂与肺纤维化
酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,TPK)是一类能催化蛋白质酪氨酸磷酸化的蛋白激酶,其活性早是在癌基因src产物上发现的.该酶能催化ATP的γ磷酸基转移到自身或底物的酪氨酸残基上,使酚羟基磷酸化,通过蛋白质磷酸化的级联反应传递信息,导致生物效应.酪氨酸蛋白激酶介导的细胞内信号传导TPK为一个大的结构多样的酶家族,分为受体型和非受体型两种.受体型TPK(receptor tyrosine kinase,RTK)是细胞内段具有酪氨酸激酶活性的一类跨膜受体,如血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)等,非受体型TPK是细胞浆中具有酪氨酸激酶活性的蛋白质.
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酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子信号转导途径与支气管哮喘
众多细胞因子通过调节Th2优势应答、IgE的类型转换、嗜酸粒细胞的募集和活化等生物学效应,在哮喘的发生发展中起着至关重要的作用.而越来越多的证据表明参与哮喘发病的多种细胞因子是通过活化Janus激酶/信号转导子和转录激活因子(JAK/STAT)途径转导信号,从而促进哮喘的发生发展的.新近研究发现JAK/STAT途径的异常在哮喘的发病机制中具有重要意义,从而提示JAK/STAT途径可望成为治疗哮喘的新靶点.
关键词: 酪氨酸蛋白激酶 信号转导和转录激活因子 信号转导 支气管哮喘 发病机制 -
角质细胞生长因子对人卵巢癌细胞系CAOV3酪氨酸蛋白激酶活性及表达的影响
目的 观察角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖及酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及表达的影响.方法 培养人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;通过免疫沉淀法纯化蛋白并用TPK试剂盒测定TPK活性;免疫印迹法(Western-blot)测定TPK表达.结果 实验组CAOV3细胞增殖率、TPK活性及表达均大于对照组(P<0.05).结论 KGF可以促使人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖,机制与其增强TPK活性及表达有关.
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类风湿关节炎中Jak/Stat信号途径研究进展
Jak/Stat是一条重要的介导细胞因子信号传导的通路.Jak(Jants kinase)是一类重要的酪氨酸蛋白激酶;Stat(signaltransducer and activator oftranscription)是信号转导和转录激活因子的简称,是一类既具有信号传导功能又有转录活化功能的细胞质蛋白.细胞因子能与靶细胞上相应的受体相结合,通过Jak/Stat通路将信号由细胞膜传至细胞质并终传至细胞核,而发挥多种生物学效应.近来研究表明,Jak/Stat途径参与人体内生理和病理反应,与多种疾病的发病及防治密切相关.
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中医药调控JAK/STAT信号通路的研究进展
酪氨酸蛋白激酶/信号转导因子和转录激活因子(JAK/STAT)通路是一条由细胞因子刺激的信号转导通路,参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)家族是该通路重要的抑制信号因子。本文就中医药在调控 JAK/STAT、SOCS信号通路的研究做一综述。
关键词: 中医药 酪氨酸蛋白激酶 细胞因子信号转导抑制因子 信号转导通路 -
酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响
目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响.方法用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用细胞计数法,噻唑蓝(MTT)比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生等情况进行分析.结果与对照组相比,RG50864处理组能在24、48、72 h显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生,且呈剂量依赖性.结论RG50864可显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生.
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酪氨酸蛋白激酶抑制剂的研究进展
酪氨酸蛋白激酶(PTK)广泛存在于细胞的各种生理过程中,是主要与细胞的生长增殖和分化有关的信号途径.因此,PTK抑制剂具有广泛的多样的生物效应,本文回顾了近年来对PTK抑制剂的研究进展:新型PTK抑制剂的结构活性关系;PTK抑制剂对肿瘤细胞和正常细胞的影响.
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高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响
背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控 T 细胞的信号转导,形成级联放大或限制,终实现 T 细胞复杂的免疫功能。蛋白分子 Src 羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和 Src 羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src 羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src 羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的 Jurkat 细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中 Src 羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示 Jurkat 细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。
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胰岛素信号传导及其调节机制
1胰岛素信号传导通路胰岛素信号传导可大致分为几个步骤:(1)胰岛素首先与细胞表面胰岛素受体(IR)结合,激活其β亚基的酪氨酸蛋白激酶(protein Tyrosine kinase,PTK).
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以表皮生长因子受体为靶点的抗癌新药--C225
酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,TPK)在细胞增殖及分化过程中具有重要的调控作用,TPK介导的细胞信号传递系统异常与肿瘤的发生和发展关系密切,大多数TPK能增强肿瘤细胞的能力和特征.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是TPK受体超家族中的重要一员,以EGFR为靶点的抗肿瘤治疗是当前分子靶向治疗的热点.
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水蛭渗滤液对酪氨酸蛋白激酶介导的牛视网膜色素上皮细胞跨膜信号转导途径的影响
目的 研究水蛭渗滤液对酪氨酸蛋白激酶(PTK)介导的牛视网膜色素上皮(RPE)细胞跨膜信号转导途径的影响.方法 (1)MTT比色法筛选促牛RPE细胞增殖作用强的血小板源性生长因子(PDGF)浓度;(2)16mg/ml水蛭渗滤液与0.02μg/ml PDGF以3种加药方式分别孵育RPE细胞15分钟后,采用免疫沉淀,SDS-PAGE电泳,Western-blot检测转录因子STAT3磷酸化水平.结果 (1)0.02μg/ml PDGF促RPE细胞增殖作用佳(p<0.05);(2)16mg/ml水蛭渗滤液在3种加药方式下均能不同程度抑制细胞内PTK活性,降低转录因子STAT3的磷酸化水平.结论 水蛭渗滤液能阻断PTK介导的牛RPE细胞内STAT3下游通路的信号传递.
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bFGF诱导的兔晶体上皮细胞TPK及PKC磷酸化的研究
目的:探讨bFGF对培养的兔晶体上皮细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响,及对兔晶体上皮细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响.研究TPK及PKC信号系统在LEC增殖调控中的作用.方法:家兔晶体上皮细胞原代及传代培养,应用同位素掺入法检测不同浓度(0.1、1、10ng/ml)bFGF作用24小时后,1.兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化.2.细胞膜PKC及细胞质PKC活性的变化.结果:bFGF作用24小时后,晶体上皮细胞膜TPK、PKC及胞质PKC活性均较对照组明显升高(P<0.05).结论:bFGF可促进兔晶体上皮细胞膜TPK活性及胞膜、胞质PKC活性升高,该机制可能与促进晶体上皮细胞增殖有关.
关键词: bFGF晶体上皮细胞 酪氨酸蛋白激酶 后发性白内障 -
aFGF和Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及[Ca2+]i的影响
目的:探讨aFGF及TPK抑制剂Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及游离Ca2+浓度的影响.方法:用不同浓度的aFGF和Genistein诱导AGZY-83A细胞,(γ-P32)-ATP标记的Histone I为底物,液体闪烁测定PKC活性;Fura-2/AM负载荧光光度法测定细胞内游离Ca2+浓度.结果:aFGF诱导后,细胞内PKC活性及Ca2+浓度升高,且与aFGF呈剂量依赖效应.Genistein抑制细胞内PKC活性及Ca2+浓度,也呈剂量依赖效应.Genistein对aFGF诱导的PKC活性抑制更显著.结论:进一步证明PKC和Ca2+确是TPK的下游信号分子.
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bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响
目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7+bFGF、PD98059+bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.
关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 酪氨酸蛋白激酶 蛋白激酶C 胞外调节蛋白激酶 -
Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究
目的:研究genistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探索使用genistein防治后发性白内障.方法:兔晶体上皮细胞培养,应用Casnetllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化;同位素掺入法检测genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化.结果:不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降,genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高,genistein对PKC活性无明显抑制作用,但可抑制bFGF诱导的PKC活性升高.结论:genistein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖.
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脂多糖激活靶细胞NF-κB的机制与途径的研究进展
真核细胞核转录因子Rel/NF-κB是近年来发现的一类具有多向性转录调控作用的蛋白质因子,广泛调控着自昆虫至人类的免疫和炎症反应中一系列基因的表达。静息时,Rel/NF-κB二聚体与其抑制蛋白IκB结合成三聚体存在于胞质中,胞外刺激通过不同的信号转导途径使IκB降解,活化的NF-κB进入核内发挥功能。本文本要介绍了脂多糖激活靶细胞NF-κB的分子机制及酪氨酸蛋白激酶、丝裂原激活的蛋白激酶、蛋白激酶C等相关胞内信号转导途径的研究进展。
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重症急性胰腺炎胰腺组织血小板活化因子受体基因表达变化
近年来血小板活化因子(PAF)信号转导通路在重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中的意义引起了人们的关注.PAF是一种由多种细胞产生又可作用于多种细胞的内源活性物质,具有广泛的生物学效应.它通过与PAF受体结合,使G蛋白转导激活磷脂酶C、磷脂酶A2、腺苷酸环化酶和酪氨酸蛋白激酶[1],从而导致SAP的发生和发展.SAP时血中PAF含量显著增加[2],是否会刺激PAF受体数量增加从而扩大PAF对组织细胞的损害,本实验从胰腺组织PAF受体的mRNA水平进行研究.
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大鼠胰腺细胞表达血小板活化因子受体
血小板活化因子(PAF)是一种由多种细胞产生并可作用于多种细胞的内源活性物质,具有广泛的生物学效应.它与PAF受体(PAF-R)结合,通过G蛋白转导激活磷脂酶C、磷脂酶A2、腺苷酸环化酶和酪氨酸蛋白激酶等,从而参与炎症反应[1].PAF-R是PAF发挥作用的关键因素.国内外学者采用多种方法研究PAF-R在多种组织的定位.但据文献报道PAF-R在胰腺内仅分布在胰腺组织微血管中[2],难以解释PAF是急性胰腺炎发生发展中的关键因素.我们采用了与文献不同的针对N端的PAF-R抗体,对PAF-R在胰腺组织的定位进行了研究,并且以表达量多的肺组织作为阳性对照,检验实验的可靠性.