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针刺“百会”透“曲鬓”对脑出血急性期大鼠PI3K和p-AKT表达的影响
目的:探讨针刺“百会”透“曲鬓”对脑出血大鼠脑组织中PI3K和p-AKT蛋白表达的影响.方法:选取清洁级健康Wistar雄性大鼠72只随机分为假手术组、模型组和针刺组3组,每组再随机分为6h、1天、3天、7天共4个亚组,每个亚组6只大鼠,制备大鼠脑出血模型.采用蛋白免疫印迹法(west-em blot)检测PI3K和p-AKT的蛋白表达.结果:模型组大鼠术后6h即出现PI3K、p-AKT蛋白表达明显增多,二者均于1天达到峰值,3天减弱,7天仍有表达.模型组、针刺组各时间点PI3K、p-AKT蛋白表达与假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);针刺组各时间点PI3K、p-AKT蛋白表达均高于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:针刺“百会”透“曲鬓”能够提高脑出血模型大鼠脑组织中PI3K和p-AKT的蛋白表达水平,从而起到保护脑出血灶周神经元、减少继发性损伤的作用.
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PI3K/PKB信号转导通路活性在重症急性胰腺炎急性肺损伤中的变化
目的 探讨重症急性胰腺炎急性肺损伤中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/PKB)信号转导通路的活性变化规律.方法 健康成年雄SD大鼠40只,随机分为SO组(n=10)、SAP组(n=30),BD针胰胆管逆行注入牛磺胆酸法建立重症急性胰腺炎急性肺损伤大鼠模型.SAP组3、6、12h检测血淀粉酶、血气分析、肺含水量,肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,光镜下进行胰腺和肺组织病变程度评分.免疫组化法检测肺组织ICAM-1和P-PKB的表达,蛋白印迹(Western blot)法检测PI3K/PKB信号通路的活性变化.SO组在术后12h检测上述相关指标.结果 肺损伤程度逐渐加重,组织含水量及MPO活性逐渐升高(P<0.05),PaO_2明显降低(P<0.05).制模后3h随p-PKB的活性逐步增强,ICAM-1表达逐渐增多,两者呈正相关(r=0.910,P<0.05);PI3K/PKB信号通路逐步被激活,至12h达到峰值,与肺损伤程度呈正相关(r=0.871,P<0.05).结论 P13K/PKB信号传导通路被激活是重症急性胰腺炎急性肺损伤的重要发病机制之一.
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磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号通路分子蛋白在大骨节病患者全血中的表达
目的：观察大骨节病患者全血中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）及其下游蛋白激酶B（Akt）信号通路分子蛋白（PI3Kp110、pAkt、pGSK3β）表达，分析PI3K/Akt信号通路的状态。方法20例大骨节病患者（大骨节病组）来自陕西省大骨节病区（旬邑、麟游、永寿、千阳、长武、陇县），同时选取性别、年龄相匹配的健康者作为对照组。采集大骨节病患者和对照组人群静脉血，应用Trizol法从全血中提取蛋白，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测全血中 PI3K/Akt 信号通路分子蛋白表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），GDS-8000凝胶成像系统观察并记录灰度值，组间比较采用t检验。结果大骨节病组与对照组年龄、性别比较，差异无统计学意义（t=0.701，P>0.05；χ2=0.400，P>0.05）。大骨节病组全血中 PI3Kp110、pAkt、pGSK3β蛋白表达均明显高于对照组（156.1±92.1比79.5±21.5、113.7±15.2比43.3±10.7、105.9±17.5比37.3±12.0），两组比较差异有统计学意义（t=2.563、6.567、7.916，P<0.05或<0.01）。结论大骨节病患者全血中PI3K/Akt信号通路分子蛋白PI3Kp110、pAkt、pGSK3β表达明显增加，PI3K/Akt信号通路呈激活状态。
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氟对大鼠骨组织3-磷酸肌醇激酶和蛋白激酶B1表达的影响
目的 观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(Akt1)蛋白和mRNA表达的影响,探讨PI3K/Akt信号通路在氟骨症发病机制中的作用.方法 将36只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组12只.对照组自由饮用自来水(含氟量<0.5 mg/L),低、高氟组大鼠分别饮用氟化钠(NaF)配制的含氟量为5.0、50.0 mg/L的自来水.实验6个月后处死大鼠,收集血清,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测骨钙素(BGP)、组织蛋白酶K(Cath-K).取大鼠股骨下段,用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR法检测骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA的表达.结果 各组大鼠血清BGP、Cath-K 水平比较,差异有统计学意义(F值分别为73.45、39.36,P均<0.05).与对照组[(0.15±0.03)μg/L、(18.32±2.27)pmol/L]比较,低、高氟组血清BGP[(1.99±0.62)、(2.38±0.16)μg/L]、Cath-K[(89.07±19.66)、(110.16±9.81)pmol/L]明显升高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).各组大鼠骨组织PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为178.16、118.08,38.81、52.31,P均<0.05).与对照组(181.55±4.24、188.46±2.18,3.84±1.69、4.33±0.89)比较,低、高氟组大鼠骨组织PI3K(171.66±2.85、154.12±4.15,11.31±4.18、20.54±6.68)、Akt1蛋白和mRNA表达(177.47±3.16、156.42±3.18.12.52±3.13、19.43±5.36)明显增高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).结论 血清BGP、Cath-K可作为慢性氟中毒骨病变的代谢指标.氟可导致大鼠骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平增高,PI3K/Akt 信号通路可能参与了氟引起的骨骼损伤机制.
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PI3K/AKT信号通路相关基因拷贝数变异与甲状腺癌关系的研究进展
目前越来越多的研究表明基因拷贝数变异可参与甲状腺癌的发生、发展及转归等多个环节.脂酰肌醇-3羟基激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)信号通路相关基因拷贝数变异情况的研究,为进一步认识甲状腺癌各亚型的基因图谱,以及甲状腺癌的准确诊断和开展精准的分子靶向治疗提供了分子学基础.以下就近年来PI3K/AKT信号通路相关重要基因拷贝数变异与甲状腺癌相关性的研究进展作一综述.
关键词： 拷贝数变异 甲状腺癌 磷脂酰肌醇-3羟基激酶 蛋白激酶B 酸酯酶和张力蛋白同源物 -
PTEN/Akt/CREB信号通路与砷致神经系统损伤关系的研究进展
砷暴露是世界范围内的重要公共卫生问题。许多国家都一直受到砷中毒的威胁，地方性砷中毒病区的居民更是承受着疾病的痛苦。更值得注意的是，神经系统是砷中毒的靶器官。尽管已经存在一些关于砷神经毒性的可能理论，但确切的分子机制仍不明确。因此，明确发病机制，有效拮抗砷的神经毒性十分重要。有研究表明，砷可以影响许多组织及器官中的第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN）、蛋白激酶B (Akt）和cAMP反应元件结合蛋白(CREB）的表达，并且PTEN/Akt/CREB信号通路在神经系统中发挥重要作用。因此，砷暴露引起的PTEN/Akt/CREB信号通路的变化对于研究砷神经毒性机制十分重要。
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蛋白激酶B对3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白质表达的调控
目的 研究异丙肾上腺素及胰岛素对脂肪细胞脂联素蛋白表达的影响,探讨蛋白激酶B(Akt)对脂联素的调控作用.方法 通过免疫印迹法检测胰岛素和异丙肾上腺素处理后的3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达,并比较表达myrAkt后3T3-L1脂肪细胞脂联素的变化. 结果异丙肾上腺素可明显降低3T3-L1脂肪细胞脂联素的蛋白质表达,胰岛素可纠正这一变化;表达myrAkt的3T3-L1脂肪细胞中脂联素明显减少,异丙肾上腺素可增加脂联素蛋白的表达,胰岛素不能纠正这一变化.结论 3T3-L1脂肪细胞中,胰岛素可纠正异丙肾上腺素引起的脂联素的降低,Akt的活性增加抑制了3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达,Akt参与了胰岛素对脂肪细胞内脂联素蛋白质表达的调节,但不是唯一的途径.
关键词： 脂联素 蛋白激酶B 3T3-L1脂肪细胞 -
阿魏酸钠通过ERK和PI3K信号传导通路对抗淀粉样β蛋白片段1-42引起的海马神经元凋亡
目的 研究阿魏酸钠对β蛋白片段1-42 (Aβ1-42)引起培养海马神经元损伤的保护作用的信号传导机制.方法 原代培养SD大鼠海马神经元,阿魏酸钠(100,200μmol/L)预处理6h后,加入50 nmol/L的Aβ1-42作用72 h,MEK阻断剂PD98059(10 μmol/L)、Akt阻断剂tricribine(1μmol/L)分别在加入阿魏酸钠前30 min加入,Hoechst33258细胞核荧光染色观察细胞凋亡变化,Western蛋白印迹法检测海马神经元磷酸化的MEK1、ERK1/2、CREB、Akt/PKB、p70s6K、GSK-3β蛋白表达.结果 与对照组相比,经Aβ1-42损伤的海马神经元细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),相应磷酸化的MEK1、ERKl/2、CREB、Akt、p70s6K、GSK-3β蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).应用阿魏酸钠预处理可明显拮抗Aβ1-42引起的海马神经元细胞凋亡和磷酸化蛋白表达水平的降低(P＜0.01),但阿魏酸钠的作用可被PD98059、tricribine所抑制.结论 阿魏酸钠可通过激活Akt/p70S6K、Akt/GSK-3β和MEK/ERK信号传导通路对抗Aβ1-42引起的海马神经元损伤.
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三种自噬调控蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达及意义
目的:研究自噬调控中的主要蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、蛋白激酶B(AKT)、Beclin 1在良、恶性多形性腺瘤中的表达及意义.方法:用免疫组织化学显色检测p-AKT和p-mTOR在腮腺癌在多形性腺瘤、良性多形性腺瘤和正常腮腺组织中的表达.免疫印迹检测p-AKT、p-mTOR、Beclin 1在各组织中的表达.结果:p-AKT在正常腮腺组织、良性多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的阳性表达分别为15％、40.5％、59.1％.p-mTOR在正常腮腺组织、良性多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的阳性表达分别为20％、43.2％、65.7％.AKT、mTOR的表达在正常腮腺组织、良性多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中呈递增的趋势.Beclin 1在3种组织中呈递减趋势.结论:mTOR、AKT在大部分腮腺癌在多形性腺瘤组织中呈现过度表达而Beclin 1表达下降,这可能与腮腺癌在多形性腺瘤病因、病理机制相关.
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参芎化瘀胶囊通过磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B信号通路抑制全脑缺血大鼠神经细胞凋亡
目的:探讨参芎化瘀胶囊对大鼠脑缺血/再灌注损伤神经细胞凋亡的影响.方法:雄性SD大鼠被分成假手术组,模型组,参芎化瘀胶囊高、低剂量组,以改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血模型.免疫组织化学法检测海马区磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达.原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果:与假手术组比较,模型组中PI3-K、Akt表达增高,凋亡神经细胞数量增多；与模型组比较,参芎化瘀胶囊组中PI3-K、Akt表达进一步增多,凋亡神经细胞数量减少,上述变化在高剂量参芎化瘀胶囊组更为明显.结论:参芎化瘀胶囊可抑制全脑缺血大鼠神经细胞凋亡,其机制与PI3-K/Akt信号通路有关.
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PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌肥厚中的表达
目的:观察PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌组织中的表达,探讨该通路在心肌肥厚发生、发展中的作用.方法:皮下注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠心肌肥厚模型,测定大鼠体质量、心质量、心肌细胞横径和横截面积;采用免疫组织化学方法检测大鼠心肌组织中肥大标志因子β-肌球蛋白(β-MHC)及PTEN/PI3K信号通路上PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、死亡相关因子(BAD)蛋白表达;利用计算机图像处理系统对各种蛋白进行定量分析.结果:模型组大鼠全心质量/体质量、左室质量/体质量、心肌细胞横径、心肌细胞截面积较对照组明显增加.模型组大鼠的心肌组织与对照组相比,β-MHC、PI3K与PKB表达水平均升高,PTEN和BAD表达水平明显降低.结论:PTEN在心肌肥厚中表达明显降低,起负性调节作用;PI3K/PKB信号通路激活,可能是导致心肌肥厚的机制之一,BAD可望成为生物学治疗靶点.
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磷酯酰肌醇3激酶抑制剂对碱性成纤维细胞生长因子诱导的平滑肌细胞增殖及迁移的影响
目的:研究磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin (WT)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响,为探讨bFGF诱导平滑肌细胞增殖和迁移的信号通路提供实验依据.方法:采用细胞计数、划痕损伤实验和免疫印迹法,观察Wortmannin对bFGF诱导的VSMCs增殖、迁移及磷酸化Akt表达的影响.结果:干预后24h, bFGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,同时磷酸化Akt的表达平行增高.加用Wortmannin后,明显抑制了VSMCs的增殖、迁移和磷酸化Akt的表达.结论:bFGF诱导的VSMCs增殖和迁移可能是通过PI3K/Akt信号通路发挥作用.
关键词： Wortmannin 血管平滑肌细胞 增殖 迁移 蛋白激酶B 碱性成纤维细胞生长因子 -
切应力对与内皮细胞联合培养的血管平滑肌细胞粘附的影响及其机制
目的 细胞粘附是细胞迁移的关键性起始步骤.研究切应力和内皮细胞(endothelial cells,Ecs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)粘附的影响及其可能的信号通路,为探讨流体切应力诱导的血管壁细胞迁移行为的机制提供一些实验依据.方法 应用VSMCs和Ecs联合培养流动腔系统,对Ecs面施加1.5 Pa切应力,12 h;以静止状态下,单独培养的VSMCs以及与Ecs联合培养的VSMCs为对照,应用细胞粘附实验和Western Blot技术,观察切应力对与EC联合培养的VSMCs粘附的影响及蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化水平表达变化.结果 静态联合培养12 h,VSMCs的粘附能力明显增强,同时磷酸化Akt的表达平行增高.切应力作用下,明显抑制了联合培养的VSMCs粘附,同时磷酸化Akt的表达平行降低.结论 生理大小切应力明显抑制了Ecs诱导的VSMCs粘附,其中Akt信号通路起了关键作用.
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机械张应变诱导蛋白激酶B活化对血管平滑肌细胞迁移的影响
目的 研究机械张应变诱导蛋白激酶B活化对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力的影响.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对大鼠血管平滑肌细胞施加牵拉幅度为15%、频率为1Hz的张应变.以Transwell和Western blot等方法观察张应变作用下蛋白激酶B磷酸化和血管平滑肌细胞迁移能力的变化,以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组.结果 与对照组相比,机械张应变增加细胞中蛋白激酶B磷酸化水平,促进血管平滑肌细胞的迁移;PI3K的特异性抑制剂Wortmannin抑制张应变诱导的蛋白激酶B的磷酸化,降低了血管平滑肌细胞迁移能力.结论 机械张应变通过上调蛋白激酶B磷酸化水平促进了血管平滑肌细胞迁移,提示蛋白激酶B信号通路参与机械张应变条件下血管平滑肌细胞迁移过程的信号传导.
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蛋白激酶B活化诱导骨桥蛋白表达与肝癌细胞骨转移间的关系
目的:研究蛋白激酶B(AKT)活化诱导骨桥蛋白(OPN)表达在肝细胞肝癌(HCC)骨转移中的作用及其机制.方法:收集40例HCC骨转移灶及其原发灶标本,并另选取22例无转移的HCC组织标本作为对照,行免疫组化染色检测AKT、OPN表达水平;同时用miR-21表达载体转染人HCC细胞系BEL-7402,诱导AKT磷酸化激活,同时用AKT特异性抑制剂(MK-2206)抑制AKT磷酸化激活,分别观察AKT磷酸化水平(p-AKT)与OPN表达间的关系;采用OPN特异性小干扰RNA (OPN-siRNA)沉默BEL-7402细胞OPN表达,并用MTT法检测其对细胞增殖的影响.结果:在发生HCC骨转移灶中,p-AKT和OPN阳性率分别为85.00％(34/40)和77.50％(31/40),明显高于其相应的HCC原发灶组织(p-AKT为60.00％;OPN为55.00％,P＜0.05)及无转移的HCC组织(p-AKT为54.55％;OPN为36.36％,P＜0.01);BEL-7402细胞转染miR-21诱导p-AKT上调后,OPN表达升高并促进肿瘤细胞增殖加速;反之,MK-2206抑制AKT磷酸化后,BEL-7402细胞OPN表达下降,肿瘤细胞增殖速率降低;采用特异siRNA沉默OPN表达,同样可抑制肿瘤细胞增殖.结论:HCC细胞OPN高表达与AKT信号通路的激活有关,AKT磷酸化水平的升高能诱导OPN表达,进而促进HCC细胞的增殖和转移,提示检测p-AKT与OPN的表达水平对于HCC恶性生物学行为的判断具有潜在的应用价值.
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蛋白磷酸酶PHLPP在消化系统肿瘤中的研究进展
近年来,蛋白磷酸酶PHLPP的研究日益受到重视.PHLPP能特异性地使蛋白激酶B(Akt)、蛋白激酶C(PKC)以及S6激酶(S6K)等因子的相应保守位点去磷酸化,通过抑制多条肿瘤相关信号通路发挥抑癌作用.目前已发现PHLPP在多种消化系统肿瘤中表达下调,与肿瘤发生发展密切相关,有望成为消化系统肿瘤诊治的新靶点.
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JAZF1基因对3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK信号途径的影响
目的 探讨JAZF1 (juxtaposed with another zinc finger gene 1)基因对3T3-L1脂肪细胞蛋白激酶B(Akt)和AMP活化的蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响.方法 构建pGenesil-JAZF1 shRNA重组质粒,转染3T3-L1脂肪细胞后分别用胰岛素或利拉鲁肽处理细胞.2-脱氧-3H-D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取,Western印迹法检测各组细胞Akt和AMPK的磷酸化水平.结果 成功构建的pGenesil-JAZF1shRNA重组载体转染3T3-L1脂肪细胞后下调JAZF1表达,使基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取降低33.6％和38.8％(均P＜0.05).胰岛素或利拉鲁肽增加3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK磷酸化水平(均P＜0.05),JAZF1表达下调降低基础和2种激素刺激的Akt和AMPK活性(均P＜0.05).结论 JAZF1基因可能通过Akt和AMPK信号通路改善糖代谢.
关键词： JAZF1 蛋白激酶B AMP活化的蛋白激酶 胰岛素 利拉鲁肽 -
高表达AQP7改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究
目的 探讨脂肪细胞中水通道蛋白7(AQP7)表达与胰岛素抵抗的关系.方法 培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟的脂肪细胞,并用地塞米松(DXM)处理建立胰岛素抵抗模型.构建Ad-AQP7重组腺病毒,转染胰岛素抵抗的脂肪细胞,检测AQP7表达水平的改变与脂肪细胞甘油释放水平、葡萄糖代谢能力以及磷酸化PKB表达改变的关系,从而阐明AQP7改善胰岛素抵抗的可能机制.结果 100 nmol/L DXM作用分化成熟的脂肪细胞诱导胰岛素抵抗,48 h后p-PKB水平和葡萄糖消耗量明显减少(P＜0.01),为胰岛素抵抗的佳状态.胰岛素抵抗状态下AQP7 mRNA和蛋白水平明显减少(均P＜0.01).Ad-AQP7腺病毒转染胰岛素抵抗的脂肪细胞72h,随着AQP7表达增加,培养基中甘油释放浓度增加,胰岛素刺激下的p-PKB水平呈现同样上升趋势,并且葡萄糖代谢能力得到明显改善.结论 AQP7可能参与胰岛素抵抗的分子机制;高表达AQP7可改善胰岛素抵抗,其机制可能与PKB信号通路改善有关.
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梓醇对糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制探讨
探讨梓醇对糖尿病大鼠肾脏是否具有保护作用及其可能机制.RT-PCR、免疫组化和Western印迹法检测糖尿病大鼠肾脏组织中胰岛素样生长因子I和蛋白激酶B表达,结果发现两者mRNA及蛋白表达均上调,梓醇可下调其表达并减轻肾脏损伤.
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内脂素激活PI3K-Akt和MAPK-ERK1/2信号通路抑制MIN6细胞凋亡
探讨内脂素对胰岛β细胞株MIN6细胞信号通路和棕榈酸诱导细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制.人重组内脂素呈剂量和时间依赖性促进MIN6细胞细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化,抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡(P<0.05或P<0.01).激活磷脂酰肌醇3激酶(PBK)-Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-ERK1/2信号通路是内脂素抑制MIN6细胞凋亡的分子机制之一.
关键词： 内脂素 蛋白激酶B 细胞外信号调节激酶1/2 MIN6细胞 细胞凋亡
