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DNMTs在长期氡暴露致BEAS-2B细胞恶性转化过程中的作用
目的 检测经长期氡暴露而发生恶性转化的人永生化支气管上皮细胞(BEAS-2B)中甲基化转移酶(DNMT)基因的动态变化,从表观遗传学层面探索氡致肺癌的作用机制.方法 应用流式细胞仪分析法,软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验鉴定长期氡暴露过程中BEAS-2B细胞的恶性转化程度,以QPCR方法检测DNMT1、DNlMT3A的mRNA表达量.结果 与对照组细胞相比,染氡30代传代至40代的细胞软琼脂克隆形成率已升高至27.27％±1.10％(P＜0.05),转化细胞在裸鼠体内成瘤率达到30％(P＜0.05),呈低分化癌;QPCR结果显示各染氡组传至40代细胞DNMT1 mRNA表达量均低于对照组,DNMT3A mRNA表达量均高于对照组.结论 建立并确认了体外染氡诱发BEAS-2B细胞恶性转化模型,且细胞恶性程度随染氡代数和传代代数的增加呈现剂量-效应关系,细胞出现移植成瘤.本试验条件下,DNMTs表达的改变导致细胞增殖失控,打破内环境平衡,这可能是在表观遗传学中,长期氡暴露致BEAS-2B细胞恶性转化的机制之一.
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温胆汤对肥胖大鼠基因总甲基化和甲基化转移酶的影响
目的：探讨温胆汤对肥胖痰湿证大鼠腹腔脂肪基因总甲基化水平和甲基化转移酶的影响。方法采用ELISA法分析脂肪组织总DNA甲基化和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b甲基化转移酶的活性。结果肥胖大鼠的总DNA甲基化水平和Dnmt3b甲基化酶相对活性升高，温胆汤的干预可以降低DNA的总甲基化水平和Dnmt3b甲基化酶相对活性至正常水平，对Dnmt1、Dnmt3a的相对活性无影响。结论温胆汤可以降低肥胖痰湿证大鼠脂肪总DNA甲基化水平，其机制可能与抑制Dnmt3b甲基化酶相对活性有关。
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EGCG对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期及DAPK1基因甲基化影响的研究
目的:探讨表没食予儿荼素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期的影响及其作用机制.方法:应用EGCG 0、50、75、100及125 μmol/L分别处理NB4细胞24、48、72、96 h后,使用CCK-8法检测各时间点和浓度的细胞增殖水平,流式细胞术检测不同浓度EGCG处理NB4细胞48 h后的细胞周期情况,RT-PCR检测DNMT1、DNMT3a、DAPK1 mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR检测DAPK1基因的甲基化状态,Western blot检测DAPK1蛋白的表达情况.结果:EGCG明显抑制NB4细胞增殖并诱导细胞阻滞于G0/G1期,且呈时间-浓度依赖性(r =0.916).EGCG呈浓度依赖性下调NB4细胞DNMT1、DNMT3a的表达,且对DNMT3a的作用更为明显.随EGCG浓度增加,DAPK1基因的甲基化程度减弱(r=-0.813),DAPK1 mRNA和蛋白表达上调(r=0.96,r=0.991).结论:EGCG通过抑制DNMT1和DNMT3a基因的表达,下调DAPK1S基因的甲基化程度,从而抑制NB4细胞增殖和诱导其细胞周期阻滞.
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地西他滨治疗血液髓系肿瘤的临床现状
随着对肿瘤表观遗传学的深入研究，发现DNA甲基化异常在肿瘤的发生和转化中起着重要作用。这提示抑制DNA甲基化，激活沉默失活的基因，可作为肿瘤治疗的一个新靶点。研究发现【1】，地西他滨（DAC）主要通过抑制DNA甲基化转移酶生物学活性实现去甲基化作用，从而活化抑癌基因，并且诱导细胞分化。本文总结了地西他滨治疗骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病的临床现状，试图找出更好的方案。
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肝癌组织中乙型肝炎病毒感染与甲基化转移酶表达的关系
目的 分析肝癌组织中乙型肝炎病毒(HBV)感染患者体内DNA甲基转移酶(DNMT)表达量,探讨肝癌组织中HBV感染与甲基化转移酶表达的关系.方法 选取2013年1月间至2014年1月青岛市中心医院放疗科接受治疗的52例肝癌患者,根据肝癌组织中HBV感染情况分为HBV感染组和非HBV感染组,每组26例.采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,检测52例患者肝癌组织内DNMT1、DNMT2、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达量.结果 HBV感染组DNMT1 mRNA表达为1.21 ±0.24,非HBV感染组为0.83 ±0.21,HBV感染组DNMT1 mRNA表达高于非HBV感染组,差异有统计学意义(t=6.08,P＜0.05);HBV感染组DNMT2mRNA表达为0.77 ±0.15,非HBV感染组为0.63±0.12,HBV感染组DNMT2mRNA表达高于非HBV感染组,差异有统计学意义(t=3.72,P＜0.05);HBV感染组DNMT3a mRNA表达为1.36±0.25,非HBV感染组为0.94±0.17,HBV感染组DNMT3a mRNA表达高于非HBV感染组,差异有统计学意义(t=7.08,P＜0.05);HBV感染组DNMT3b mRNA表达为0.68 ±0.12,0.49±0.09,HBV感染组DNMT3b mRNA表达高于非HBV感染组,差异有统计学意义(t =6.46,P＜0.05).结论 肝癌组织中HBV感染促进甲基化转移酶的表达,从而促进抑癌基因甲基化.
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甲基化转移酶基因在乳腺癌组织中的表达及意义
① 目的 检测乳腺癌组织及对应乳腺癌旁组织中甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNM T)的表达情况,分析其表达水平在乳腺癌中的意义.② 方法 应用实时荧光定量PCR(Flures-cence quantitative-PCR,FQ-PCR)技术检测53例乳腺癌组织及其中20例对应乳腺癌旁组织中DNM T基因(DNM T1、DNM T2、DNM T3a、DNM T3b)mRNA表达水平,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征之间关系.③ 结果 乳腺癌组织中DNM T1、DNM T2、DNM T3a、DNM T3b的mRNA相对表达水平均高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);且DNM T1、DNM T3a、DNM T3b mRNA的表达水平在是否淋巴转移之间的差异具有统计学意义(P<0.05),而在乳腺癌其他临床病理特征参数之间差异无统计学意义(P>0.05).④ 结论 乳腺癌组织中DNM T1、DNM T2、DNM T3a、DNM T3b的基因表达水平明显高于对应的癌旁组织;不同DNM T基因表达水平的检测可以为了解乳腺癌的发病机理提供参考依据;高表达的DNM T可能成为乳腺癌预后的指标之一.
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血清DNMT1、DNMT3 a、DNMT3 b和HDAC1蛋白在肺癌患者中的表达及意义
目的：探讨血清甲基化转移酶（DNMT）1、DNMT3a、DNMT3b和组蛋白脱乙酰酶（HDAC1）蛋白在肺癌患者中的表达及意义。方法选取2013年2月至2014年10月于该院呼吸内科收治的肺癌患者104例，按其组织学分型分别为鳞癌35例，腺癌39例，其他类型30例，正常对照组选择100例健康志愿者。所有入选者均于清晨休息状态下采集空腹外周静脉血3 ml，采用酶联免疫法测定血清中 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b 和HDAC1的表达。结果实验组患者DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1的蛋白表达水平均高于对照组（P＜0．05）；各肺癌分型中，患者的 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1的蛋白表达水平差异小（P＞0．05）；通过 Logistic回归分析显示其与肺癌的发生发展关系密切。结论肺癌患者血清DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白表达升高，并随着肺癌的发生发展升高，对临床有指导意义，值得临床推广。
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原发性肝癌组织及细胞系中DNMT mRNA表达的检测及意义
目的 检测原发性肝癌组织及细胞系Hep3B、HepG2中甲基化转移酶(DNMT)mRNA的表达,分析乙型肝炎病毒(HBV)感染与DNMT mRNA表达之间的关系.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测44例原发性肝癌组织及2种肝癌细胞系中DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、GAPDH基因mRNA表达水平.结果 32例血清HBV标志物阳性患者肝癌组织中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平明显高于12例血清HBV标志物阴性患者肝癌组织(P<0.05).DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B mRNA在HBV相关细胞系Hep3B中相对表达分别为1.26±0.15、0.76±0.15、1.26±0.20、0.66±0.13,在非HBV相关肝癌细胞系HepG2中的相对表达分别为0.64±0.11、0.62±0.12、0.48±0.12、0.36±0.10,Hep3B细胞系中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达高于HepG2细胞系(P<0.01).结论 HBV相关原发性肝癌组织和肝癌细胞系中存在DNMT mRNA表达增高; HBV感染可能刺激DNMT mRNA的表达,进而促进抑癌基因的甲基化.
关键词： 甲基化转移酶 乙型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 表达 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对宫颈癌细胞生长及其甲基化转移酶和甲基结合蛋白DNA转录的影响
目的:检测5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基化转移酶(DNMT)及甲基CpG结合蛋白(MeCP)的DNA转录水平的影响,探索其对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:5-Aza-CdR(终浓度为5.0umol·L-1)与肿瘤细胞共培养72 h后,用PI染色及流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期;利用qRT-PCR鉴定药物组与空白组细胞DNMT及MeCP的mRNA浓度.吖啶橙(AO)细胞荧光染色法鉴定药物组与空白组细胞形态学上的差异及凋亡的程度.结果:FCM检测结果显示两组肿瘤细胞的细胞周期呈现明显差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,sub-G1峰明显.AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象且伴随少量的细胞坏死现象.qRT-PCR结果显示,空白对照组和药物组中均有一定量DNMT及MeCP的mRNA产物,但其mRNA表达量无显著差异(P>0.05).结论:5-Aza-CdR能够诱导体外培养的HeLa肿瘤细胞凋亡,而对于肿瘤细胞中甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的DNA转录无显著的影响.
关键词： 子宫颈癌 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 甲基化转移酶 甲基CpG结合蛋白 凋亡 -
NSD1缺陷可能相关婴儿胆汁淤积症1例病例报告
核受体结合SET域蛋白1( NSD1)属于组蛋白甲基化转移酶家族,包含多种功能区域,是一种转录调控因子,在胚胎早期发育中起调节作用. NSD1基因包含23个外显子,位于5q35,编码2696个氨基酸,表达在人体胚胎,成人的脑、肾、骨骼、肌肉、脾、肺和胸腺等组织,作为促进生长基因的辅阻遏物发挥作用[1]. NSD1 功能的丧失可导致Sotos综合征、Beckwith-Wiedemann 综合征( BWS )等,同时其在多发性骨髓瘤等肿瘤的发生中也起重要作用,NSD1基因的单倍剂量不足和突变是主要遗传学基础[2]. NSD1功能缺陷可表现为过度生长、骨龄提前、内脏肥大、智能发育迟缓、面部畸形、胚胎源性的腹部肿瘤和肾脏畸形等. 国外有报道NSD1突变病例中可见新生儿病理性黄疸[3] ,但多以间接胆红素升高为主. 本文报告1例NSD1缺陷可能相关的胆汁淤积症病例.
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地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株P15INK4B及甲基化转移酶表达的影响
目的 探讨地西他滨(DAC)和三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞株P15INK4B抑癌基因及甲基化转移酶表达的影响.方法 MTT方法检测地西他滨和三氧化二砷对SMMC-7721细胞株的抑制率.RT-PCR方法检测P15INK4B、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达.结果 2.0mmol/LDAC和2.0μmol/L As2O3联用,肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖抑制率均较4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As2O3单药组增强[(72h:(69.9±1.2)％比(33.8±0.7)％、(47.9±2.5)％,P<0.05)].地西他滨和As2O3作用细胞72h后P15INK4B抑癌基因表达增强,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As2O3单药组比较,差异有统计学意义[(0.74±0.14)比(0.57±0.15)、(0.56±0.11),P<0.05];甲基化转移酶表达水平下调,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As2O3单药组比较,差异有统计学意义[DNMT3A:(0.28±0.11)比(0.36±0.13)、(0.41±0.13),P<0.05;DNMT3B:(0.32±0.13)比(0.39±0.12)、(0.45±0.16),P<0.05;DNMT1:(0.31±0.15)比(0.44±0.19)、(0.44±0.12),P<0.05].结论 地西他滨和三氧化二砷可能通过抑制肝癌SMMC-7721细胞株甲基化转移酶,增加P15INK4B基因表达来抑制肝癌细胞增殖.
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良性脑膜瘤中IL-1β对NF2基因甲基化调控的作用研究
[目的]探讨良性脑膜瘤中炎症因子IL-1β在NF2甲基化中的作用及调控机制.[方法]利用2个脑膜瘤患者手术后的标本做原代细胞培养,不同浓度IL-1β (0,0.2,0.4,0.8,1.0,10ng/ml)处理细胞,利用RT-PCR和Western blot检测NF2、merlin和DNMTs的表达,利用甲基化特异性PCR检测NF2启动子甲基化水平.通过共同添加IL-1β和DNMT抑制剂或siRNA,观察IL-1β与NF2甲基化的关系.[结果]IL-1β能促进脑膜瘤细胞的增殖.RT-PCR及Western blot结果显示,IL-1β能降低脑膜瘤细胞NF2和merlin的表达.IL-1β能诱导脑膜瘤细胞NF2启动子甲基化;同时IL-1β能增加脑膜瘤细胞中DNMT1的表达,而IL-1β诱导脑膜瘤细胞的NF2启动子甲基化可以被DNMT抑制剂和siRNA抑制.[结论]IL-1β通过DNMT1诱导NF2基因启动子的甲基化,这种甲基化可以下调NF2基因的转录.抑制DNMTs可以考虑作为调控NF2表达和和抑制脑膜瘤发展的治疗靶点.
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DNA甲基化与胰腺癌关系的研究进展
胰腺癌是一种恶性程度高,进展迅速,预后极差的恶性肿瘤.国内外统计均显示其发病率呈不断上升趋势[1-3].但遗憾的是,目前对胰腺癌的发生及进展的分子生物学机制仍不十分清楚,尽管有文献报道称在胰腺病例中检测到重要基因的突变,以及突变后转录翻译的异常蛋白[4].但依据其提出的理论亦不能完全解释胰腺癌的发生及分化机制.因此,针对参与胰腺癌的准确的分子生物学机制进行有效的研究是迫切需要的.
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DNA甲基转移酶1、3A和3B在寻常型银屑病皮损中的表达
目的:探讨DNA甲基转移酶(DNMT)在寻常型银屑病发病过程中的作用.方法:采用RT-PCR法检测30例寻常型银屑病皮损和20例健康对照皮肤中DNA甲基转移酶-1、3A和3B mRNA的表达.结果:DNA甲基转移酶-1、3A和3B mRNA在健康对照皮肤中的表达依次为1.05±0.32、2.09±0.95、3.72±1.68；寻常型银屑病皮损中的表达依次为3.46±1.03、2.14±1.01、2.13±0.68.经统计分析,与健康对照组相比,银屑病患者皮损中DNMT1 mRNA的表达水平明显上调,DNMT3 mRNA的表达明显下调,两组之间具有显著统计学差异(P＜0.05).结论:寻常型银屑病皮损中存在DNA甲基转移酶表达的明显差异.
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姜黄素对非小细胞肺癌 A459细胞增殖及 CDH13甲基化状态的影响
目的：观察姜黄素对非小细胞肺癌（ NSCLC） A549细胞DNA甲基化转移酶（ Dnmts）活性和抑癌基因人H-钙黏蛋白（ CDH13）的影响，探讨姜黄素的去甲基化机制。方法将A549细胞分为两组，观察组加入40μmol／L姜黄素和培养液，对照组仅加入培养液。采用MTT法检测两组细胞增殖能力，RT-PCR方法检测CDH13 mRNA表达，甲基化特异性PCR （ MSP ）检测 CDH13启动子 CpG 岛的甲基化状态，酶活性连续循环比色法检测 Dnmt1、Dnmt3b活性。结果观察组和对照组的细胞增殖OD值分别为0．638±0．184、0．859±0．040，观察组低于对照组（P＜0．05）。两组CDH13 mRNA的相对表达量分别为0．64±0．09、0．43±0．12，观察组高于对照组（P＜0．05）。对照组出现甲基化扩增条带，无去甲基条带；观察组除甲基化条带外，出现去甲基化条带。观察组和对照组每mg核蛋白中Dnmt1的活性分别为（0．153±0．016）、（0．770±0．014）μmol／min，Dnmt3b的活性分别为（0．137±0．020）、（0．179±0．013）μmol／min，观察组Dnmt1、Dnmt3b活性均较对照组下降（P均＜0．05）。结论姜黄素可通过降低Dnmts活性来抑制CDH13的甲基化状态，从而抑制A549细胞增殖。
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肝癌组织中HBV感染与甲基化转移酶表达的相关性研究
目的:探讨肝癌组织中乙型肝炎病毒感染与甲基化转移酶表达的相关性.方法:以2012年1月到2017年2月在我院诊治的原发性肝癌患者178例作为研究对象,根据乙型肝炎病毒感染检出情况分为感染组78例与非感染组100例,两组患者都进行甲基化转移酶MGMT的活性检测与基因型分布PCR检测,同时进行临床资料的调查与相关性分析.结果:感染组患者MGMT活性为(3.45±1.46) U/ml,对照组患者为(5.14±1.89) U/ml,观察组明显低于对照组(f=8.341,p＜0.05).178例肝癌患者中MGMT(+)基因型65例,MGMT(-)基因型113例,两组患者MGMT型分布频率比较差异有统计学意义(x2=4.985,P＜0.05) 单因素分析显示肝癌患者合并乙型肝炎病毒感染主要与吸烟、MGMT活性、MGMT(+)基因型、糖尿病史等明显相关(P＜0.05);多因素Logistic回归分析显示吸烟、MGMT活性、MGMT(+)基因型、糖尿病史为肝癌患者合并乙型肝炎病毒感染发生的独立危险因素(P＜0.05).结论:肝癌组织中乙型肝炎病毒感染比较常见,多伴随有甲基化转移酶MGMT表达活性下降,MGMT(+)基因型减少,吸烟、MGMT活性、MGMT(+)基因型、糖尿病史为肝癌患者合并乙型肝炎病毒感染发生的独立危险因素.
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肝癌细胞系中DNMTs表达的检测及意义
目的:检测HBV相关肝癌细胞系(Hep3B)与非HBV相关肝癌细胞系(HepG2)中甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的表达,分析HBV感染与DNMT表达之间的关系.方法:应用荧光定量PCR(Flurescence quantitative-PCR,FQ-PCR)检测两种肝癌细胞系中DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、GAPDH基因mRNA表达水平,并将DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B表达水平与参比基因进行比较.结果:DNMT1、DNMT2、DNMT3A 和DNMT3B在HBV相关细胞系Hep3B中表达分别为:1.26±0.15、0.76±0.15、1.26±0.20、0.66±0.13；在非HBV相关肝癌细胞系HepG2中的表达分别为:0.64±0.11、0.62±0.12、0.48±0.12、0.36±0.10.Hep3B细胞系中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均高于HepG2(P均＜0.01).结论:(1)HBV相关肝癌细胞系Hep3B中存在DNMT过表达；(2)HBV感染可能刺激DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达,进而促进抑癌基因甲基化.
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人膀胱癌细胞RNA甲基转移酶双基因敲除模型构建与鉴定
目的 采用常间回文重复序列丛集(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术,构建RNA甲基化转移酶(METTL)3与METTL14的基因同时敲除的人膀胱癌细胞株T24细胞,为职业性肿瘤的靶向基因干预提供新的工具与手段.方法 设计并合成靶向METTL3和METTL14的小向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,构建至Lenti-multi-CRISPR载体;采用慢病毒系统将诱导型质粒Lenti-iCas9-neo转染至T24细胞,以流式细胞术分选阳性克隆,将重组质粒Lenti-multi-METTL3-METTL14转染至阳性分选细胞并筛选,以免疫印迹法检测T24-Lenti-multi-CRISPR空载体细胞(对照组)、METTL3-METTL14双基因敲除T24细胞株T24-KO-METTL3-METTL14(双基因敲除组)的METTL3和METTL14蛋白的相对表达量.结果 目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti-multi-CRISPR质粒载体,测序正确;诱导型质粒Lenti-iCas9-neo成功转染至T24细胞中,经流式分选获得大量阳性细胞;经强力霉素诱导后,获得METTL3-METTL14双基因敲除的稳定细胞株.强力霉素处理96 h后,双基因敲除组细胞的METTL3、METTL14蛋白相对表达量较对照组细胞分别下降52.08％和64.04％(P<0.01).结论 首次获得METTL3-METTL14双基因稳定敲除的T24细胞,为人膀胱癌细胞的候选基因干预靶点及膀胱癌的防治机制研究奠定基础.
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MGMT基因启动子去甲基化抑制MNU诱导的人胃上皮细胞恶性转化的机制研究
目的：研究O6－甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）在N－甲基亚硝基脲（MNU）诱导的人胃上皮细胞恶性转化中持续激活的分子调控机制。方法：建立MNU诱导的人正常胃上皮细胞（GES－1）恶性转化模型，real－time PCR和Western blot检测建模中1周、4周和8周MGMT的动态表达水平。报告基因实验检测MGMT启动子区的转录激活。 MSP和BSP定性定量检测MGMT基因启动子区CpG的甲基化程度。 ChIP实验检测DNA甲基化转移酶（ DNMT1）和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因转录激活中的作用。 Soft agar、平板克隆及细胞增殖实验检测MGMT基因表达上调在GES－1细胞恶性转化中的功能。结果：MNU诱导的GES－1恶性转化细胞中，MGMT的表达持续激活，但MGMT启动子区报告基因并不被激活。 MNU刺激显著抑制MGMT基因启动子区CpG的甲基化水平，同时抑制DNMT1与MGMT基因的结合，而且调控基因转录抑制和转录激活相关的组蛋白修饰类型H3K9met3与H3K4met2在该区域的富集分别减少和增加。此外，MGMT基因的高表达，抑制MNU诱导的GES－1恶性转化细胞的增殖和克隆形成能力，利用MGMT特异性抑制剂O6－BG处理细胞，显著促进MNU诱导的细胞恶性转化进程。结论：MNU通过诱导MGMT基因DNA去甲基化，持续激活其表达。 MGMT的表达上调抑制MNU诱导的人胃正常上皮细胞恶性转化。本研究揭示了MGMT基因在MNU诱导的细胞恶性转化中的表达调控机制，为进一步研究化学致癌物诱发肿瘤发生提供了新的实验依据。
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DNA甲基化参与细胞恶性转化过程中MGMT基因的表达调控
目的：研究O6－甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（ MGMT）在N－甲基亚硝基脲（ MNU）诱导的人胃正常黏膜上皮细胞GES－1恶性转化中的表达变化，明确其转录激活的分子机制。方法：建立MNU诱导的GES－1细胞恶性转化模型，动态分析MGMT的表达、启动子转录激活、DNA甲基化、组蛋白修饰变化及其表达改变在GES－1细胞恶性转化中的作用。结果：MNU暴露持续激活MGMT的表达。 MGMT高表达细胞的增殖和克隆形成能力显著下降。甲基化特异性PCR显示MGMT基因甲基化水平下降，亚硫酸氢盐基因组测序证实其启动子区呈显著低甲基化。免疫共沉淀分析发现DNA甲基化转移酶（ DNMT1）与MGMT基因的结合减少，组蛋白特异性修饰H3K9met3和H3K4met2均参与调控其表达。结论：MGMT的表达上调抑制化学致癌剂MNU诱导的细胞恶性转化，MGMT的持续激活依赖于其启动子区DNA的低甲基化。
