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组蛋白H4的乙酰化在急性冠脉综合征患者CD4+CD28-T细胞CD28表达缺失中的作用
目的 通过对急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+T细胞CD28mRNA水平和CD28基因启动子区域组蛋白H4(histone 4,H4)的乙酰化状态的研究,旨在探讨H4的乙酰化在ACS患者CD4+ CD28-T细胞CD28表达缺失中的作用.方法 免疫磁珠法分离外周血CD4+T细胞,经逆转录实时定量PCR(Real time-PCR)技术检测CD4+T细胞CD28mRNA表达水平,染色质免疫共沉淀和实时荧光定量PCR技术(ChlP-qPCR)检测CD28启动子区域H4的乙酰化状态.结果 与正常对照组相比,ACS患者CD4+T细胞CD28mRNA表达水平显著减低,差异具有统计学意义[正常对照组比ACS组:(1.063±0.131)比(0.739 ±0.065),t=2.65,P＜0.05].CD28基因启动子区域H4的乙酰化水平降低,差异具有统计学意义[正常对照组比ACS组:(3.115 ±0.545)比(1.275±0.168),t=3.222,P＜0.05].CD28基因启动子区域H4乙酰化化水平与CD28mRNA表达水平呈正相关(P=0.03,r=0.582).结论 ACS患者CD4+T细胞CD28基因启动子区域H4低乙酰化调控了CD28基因转录抑制.
关键词： 急性冠脉综合征 CD4+CD28-T细胞 组蛋白4 乙酰化 CD28基因启动子 -
组蛋白乙酰化对细胞分化的调控及其机制
近来大量实验提示体内组蛋白乙酰化状态的改变会影响到细胞的分化.目前研究主要集中在组蛋白乙酰化状态对肿瘤细胞分化、干细胞分化和胚胎发育等的影响.但其相关作用机制仍不十分清楚.本文就组蛋白乙酰化过程对细胞分化的调控以及其调控的机制进行讨论.
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甲基化CpG结合蛋白家族研究进展
甲基化CpG结合蛋白家族是一类能与甲基化CpG岛特异性结合并相互作用的蛋白质,它们具有共同的由60～80个氨基酸组成的甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD),能在甲基化的启动子区募集组蛋白去乙酰化酶、组蛋白乙酰化酶、组蛋白甲基化酶和DNA甲基转移酶,导致该区域染色质结构改变并介导基因沉默,在X染色体失活、印记基因沉默和肿瘤细胞抑癌基因沉默中发挥关键性的枢纽作用.该文综述了甲基化CpG结合蛋白家族的研究历史和新的一些研究进展以及它们在基因抑制中所起的重要作用.
关键词： 甲基化CpG结合蛋白 甲基化 乙酰化 表观遗传学 基因沉默 -
甲基化CpG结合蛋白家族(MeCPs)在表遗传中的作用
表遗传学(epigenetics)主要研究基因型和表型之间的关系.基因组表遗传修饰主要包括遗传物质DNA的甲基化修饰和核小体组蛋白修饰,终结果是DNA碱基不发生改变的情况下而表型却发生了变化.甲基化CpG结合蛋白家族(methyl-GpG binding proteins,MeCPs)是能与甲基化CpG二核苷酸结合的一类核蛋白,从而有机地将DNA甲基化和组蛋白修饰耦合起来,在表遗传中发挥着中枢纽带的作用.本文简述了近年来表遗传中DNA甲基化和组蛋白修饰的新研究进展以及MeCPs家族在表遗传中的重要作用,目的是使人们进一步了解表遗传作用规律.
关键词： 表遗传 甲基化 乙酰化 甲基化 CpG 结合蛋白 -
人卵子体外成熟过程中组蛋白乙酰化的动态变化模式
目的:组蛋白乙酰化与有丝分裂过程中的多个染色质相关事件有关,但是它在哺乳动物减数分裂过程中的作用仍不清楚.本研究通过观察人卵子体外成熟过程中不同阶段的组蛋白H3K9乙酰化变化模式,以探讨组蛋白乙酰化在减数分裂过程中的作用.方法:我们选择在我院进行单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的病人,共收集用于GV期卵子25个,MⅠ期卵子28个用于本研究.将其中一部分直接用4％多聚甲醛固定,另一部分体外培养成熟至MⅡ期,再用4％多聚甲醛固定.采用免疫荧光染色检测不同发育时期卵子的组蛋白H3K9乙酰化状态.结果:免疫荧光染色结果显示,GV期的卵子可检测到明显的H3K9乙酰化,MⅠ期和MⅡ期的卵子的H3K9乙酰化程度逐渐减弱.结论:人类卵子在成熟过程中会发生组蛋白H3K9乙酰化水平的逐渐降低,可能与减数分裂过程中特定的染色体分离、基因表达的重新编程密切相关.
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人脑胶质瘤GDNF基因启动子Ⅰ区H3组蛋白乙酰化修饰情况
目的:明确GDNF启动子Ⅰ区在人脑胶质瘤中H3赖氨酸残基9位乙酰化(H3K9Ac)情况,探讨其对于GDNF在胶质瘤中表达的影响.方法:RT-PCR检测各组中GDNF mRNA的表达;建立基于Real-time PCR分析的染色质免疫共沉淀(ChIP)方法,检测12例胶质瘤与6例正常脑组织中GDNF基因启动子Ⅰ区H3组蛋白乙酰化情况.结果:Real-time PCR验证人脑胶质瘤GDNFmRNA的表达,转录水平随级别的增高而增高,且低级别组、高级别组与正常组之间存在显著的统计学差异(P＜0.05).启动子Ⅰ区的H3组蛋白乙酰化水平,正常组与低级别组和高级别组之间比较均有显著性差异(P＜0.05),且低级别与高级别之间也有显著性差异.结论:在人脑胶质瘤组织中,GDNF启动子Ⅰ区发生了H3组蛋白高乙酰化修饰,这种修饰很可能会影响GDNF基因的表达.
关键词： 胶质瘤 胶质细胞源性神经营养因子 启动子 乙酰化 -
Ku70乙酰化介导TSA诱导的结肠癌细胞凋亡
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDI)trichostatin A(TSA)对Ku70的乙酰化及其在TSA诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法:以TSA处理结肠癌细胞HCT116和HT29细胞,采用免疫沉淀结合Western blot检测TSA对Ku70乙酰化的作用,流式细胞术检测TSA诱导的细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和细胞色素c(cytochrom c)的转位和表达.结果:TSA可引起结肠癌HCT116和HT29细胞Ku70乙酰化,并与凋亡密切相关,与对照组相比,HCT116凋亡率(P=0.007)和HT29细胞凋亡率(P=0.005)均显著增高,免疫共沉淀检测到TSA处理细胞后,Bax和Ku70之间的相互作用减弱,表明TSA引起的乙酰化促进Bax从Bax-Ku70复合物中释放,Westem blot结果显示TSA促进Bax由胞浆向线粒体转位,同时促进cytochrom c由线粒体向胞浆转位.结论:Ku70乙酰化作用介导了TSA诱导的结肠癌细胞凋亡.
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乙酰化与子宫内膜癌关系的研究进展
子宫内膜癌是与代谢综合征密切相关的恶性肿瘤,蛋白质的乙酰化修饰与肿瘤和代谢疾病的发生均有密切联系.乙酰转移酶和去乙酰化酶共同维持乙酰化水平的平衡状态,一旦平衡因细胞内外环境刺激而打破,直接导致癌症(如子宫内膜癌)发生.缺乏孕激素抵抗的过量雌激素和以胰岛素抵抗为核心的代谢综合征是子宫内膜癌的两大易感因素,乙酰化修饰对二者的影响,间接引起子宫内膜癌发生.
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人群外周血组蛋白乙酰化在氟骨症发生中的作用
目的 探索高氟暴露是否会影响外周血组蛋白乙酰化水平,氟骨症患者的组蛋白乙酰化水平是否存在异常,尝试从转录修饰水平上研究氟骨症的发病机制.方法 2012年,在青海省果洛州藏族居住地区和新疆维吾尔自治区阿勒泰哈萨克族居住地区,每个地区中选择2个县,并将每个县人口相对集中的3～4个饮茶型氟中毒病区乡确定为调查点.在病区按照年龄(相差不超过3岁)和民族匹配原则,选取59例典型成人氟骨症患者和59例健康人作为对照,共118人.对调查对象进行问卷调查,同时采集饮用茶水(或酥油茶)样、即时尿样和2 mL全血.采用便携式数字化X光机拍摄前臂、腰椎及骨盆关节X线片用于病情诊断;采用氟离子选择电极法检测茶水氟浓度和尿氟浓度;采用比色法检测全血样本组蛋白H3乙酰化水平.结果 人群外周血组蛋白H3乙酰化水平不同性别(男性:19.94 mg/g;女性:20.05 mg/g)和民族(藏族:17.73 mg/g;哈萨克族:20.49 mg/g)比较差异无统计学意义(U=1 664.5、-0.902,P均＞0.05),但会随着年龄的升高而下降(r=-0.213,P＜0.05).根据调查对象的日均茶水氟摄入量(0～3.25、＞3.25～8.05、＞8.05 ～ 12.33、＞12.33mg)和尿氟浓度(0～1.69、＞1.69 ～ 2.64、＞2.64～4.00、＞4.00 mg/L)的四分位数分为4组,不同程度的茶氟暴露组和尿氟暴露组人群外周血组蛋白H3乙酰化水平(21.12、20.05、19.94、35.0,24.42、18.13、19.80、28.90mg/g)比较差异无统计学意义(H=1.706、5.928,P均＞0.05).组蛋白H3乙酰化水平在对照组(19.43mg/g)和病例组(21.69mg/g)比较差异无统计学意义(Z=-1.39,P＞ 0.05).不同程度病情人群(正常组、轻度组、中度组)外周血组蛋白H3乙酰化水平(中位数分别为19.43、21.32、35.95 mg/g)比较,差异无统计学意义(H=1.692,P＞0.05).结论 高氟暴露不是氟骨症患者外周血组蛋白H3乙酰化水平的影响因素.
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经典型霍奇金淋巴瘤表观遗传学异常及其对免疫逃逸的影响
经典型霍奇金淋巴瘤（Classic Hodgkin lymphoma，cHL）恶性表型的维持和表观遗传学有一定关系，表观遗传学改变主要包括组蛋白乙酰化异常和DNA甲基化异常，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（ His-tone deacetylases inhibitors ，HDACis）的临床研究取得了进展。表观遗传学异常和cHL的免疫逃逸密切相关，甲基转移酶抑制剂、HDACis和免疫检测点阻断剂具有协同作用，采用联合治疗策略对进一步提高cHL的治愈率有重大意义。
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气相色谱串联质谱法测定尿中四种氯酚含量
[目的]建立同时测定尿液中2-氯酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚及五氯酚4种氯酚的气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)方法.[方法]尿样经盐酸水解结合型氯酚,液液萃取法(LLE)提取,乙酸酐衍生化,采用GC-MS/MS检测,内标法定量. [结果]采用人工模拟尿样作为空白,基质匹配标准条件下,2-氯酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚及五氯酚分别在0.50～100.0、0.50～100.0、0.50～100.0 μg/L和1.0～100.0 tg/L的范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999.方法的检出限为0.1～0.3 μg/L,回收率为88.8％～118.2％,相对标准偏差(RSD)为1.3％～5.5％. [结论]本方法操作简便、准确度高、重现性好,适用于尿样中多种氯酚含量的检测.
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响应面法优选款冬花多糖的乙酰化工艺研究
目的 研究款冬花多糖乙酰化的佳合成工艺,并考察化学修饰后多糖的抗氧化作用.方法 应用响应面法优化,以乙酰化的取代度为指标,分析款冬花多糖化学修饰乙酰化的工艺.结果 应用醋酸酐法乙酰化佳合成工艺为醋酸酐与多糖的摩尔比3.4,反应温度52℃,时间3.2h.乙酰化后的多糖溶解性提高,抗氧化性能提高.结论 款冬花多糖的乙酰化研究,提高多糖的抗氧化性,为多糖的药品、食品产业化工艺开发有较好的参考价值和依据.
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组蛋白H3K27乙酰化与H3S28磷酸化改变引起心脏发育相关基因的表达变化
目的 通过改变组蛋白H3K27和S28位点整体修饰水平并检测心脏发育相关基因表达,初步探索位点修饰对基因表达的影响,阐明位点修饰在先天性心脏病(CHD)发病中的可能机制.方法 ①使用丁酸钠、姜黄素、佛波酯处理培养的C2C12细胞;Western Blot检测组蛋白H3K27乙酰化(H3K27ac)和H3S28磷酸化(H3S28ph)水平;实时荧光定量PCR检测心脏相关基因表达情况.②对培养细胞行丁酸钠和姜黄素浓度梯度处理,检测位点修饰及表达差异相关心脏基因表达.采用Pearson相关检验位点修饰与基因表达的关系.结果 ①丁酸钠处理后的C2C12细胞H3 K27 ac水平较对照组明显上调[(1.90±0.04)vs(1.09±0.01),P＜0.05],伴H3S28ph水平明显下调[(0.04±0.01)vs(0.73±0.01),P＜0.05)];姜黄素组H3 K27 ac水平(0.04±0.00)较对照组明显下调(P＜0.05),伴H3S28ph水平上调[(0.97 ±0.06)vs(0.73 ±0.01),P＜0.05)];佛波酯组H3S28ph(1.67 ±0.00)和H3 K27 ac水平(1.58±0.03)较对照组上调(P＜0.05).②丁酸钠与姜黄素浓度梯度处理后,H3K27ac、H3S28ph水平与给药浓度的指数有显著的相关性(R2分别为0.993和0.966).在检测的8个心脏相关基因中,药物处理后均产生了表达改变,差异有统计学意义(ANOVAP＜0.05);丁酸钠梯度处理的细胞cTnT、Cx43和Six1基因表达与H3 K27ac水平呈负相关(R2分别为0.709、0.713和0.651),与H3S28 ph水平呈正相关(R2分别为0.866、0.822和0.766).姜黄素梯度处理未有显著的相关性(R2＜0.5).结论 组蛋白H3K27和H3S28位点修饰状态的变化影响心脏发育相关基因的表达,可能是CHD的潜在发病机制.
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血管生成相关因子在肿瘤中的表观遗传学变化
在肿瘤的发生、发展和转移过程中,新生血管的生成起着至关重要的作用,此过程受到相关血管生成因子的调控,这种调控既包括遗传学方面的,也包括表观遗传学方面的.与遗传学的变化不同,表观遗传学变化大多是可逆的.研究者正试图应用DNA甲基化转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂来拮抗肿瘤及其血管的生成,从而指导肿瘤的临床治疗.本文综述了近年来受表观遗传调控的肿瘤血管生成相关因子的研究进展,阐述了其在肿瘤血管新生过程中表观遗传的调控作用.
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Tubacin对β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响
目的:观察去乙酰化酶HDAC6特异性抑制剂Tubacin对MIN6细胞胰岛素分泌的影响,并探讨其可能机制.方法:用RT-PCR检测去乙酰化酶家族成员在MIN6细胞的表达,用免疫荧光技术观察HDAC6在小鼠胰岛和MIN6细胞内的定位;分别在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖的DMEM中加和不加10μmol/L Tubacin,用其处理MIN6细胞24h,收集上清,ELISA检测胰岛素浓度.同时用MTT法检测Tubacin对MIN6细胞活力的影响,RT-PCR检测上述处理条件下Insulin基因的表达情况.以Western blot和免疫荧光技术检测Tubacin 对MIN6细胞骨架蛋白α-tubulin乙酰化水平的影响.结果:MIN6细胞中各乙酰化酶家族成员mRNA的表达水平相差较大,其中HDAC6表达相对较高.HDAC6主要表达于小鼠胰岛β细胞及MIN6细胞胞浆中.在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖条件下,Tubacin处理24h可以显著抑制胰岛素分泌,但不影响MIN6细胞活力.同时,在5.6mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin不影响胰岛素基因表达,在25mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin可轻度上调胰岛素基因表达.Western blot和免疫荧光结果发现,Tubacin抑制胰岛素分泌的同时伴有α-tubulin乙酰化水平增加.结论:HDAC6抑制剂Tubacin可能通过增加MIN6细胞α-tubulin乙酰化水平,改变细胞骨架的活动度而抑制胰岛素分泌.
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肝硬化患者血清TNF-α和SA联检的临床意义
文献报告[1],TNF-α主要由单核-巨噬细胞产生,具有双重的生物学作用,在免疫病理损伤中具有十分重要的临床价值.血清唾液酸(SA)是神经氨酸的乙酰化衍生物.早年定为肿瘤标志物[2].近年来,国内外学者研究表明,SA在一些非肿瘤疾患中也有不同程度的升高[3].本文报告肝硬化患者血清TNF-α、SA联检的结果,并就临床意义作初步探讨,现报道如下.
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二氢杨梅素乙酰化衍生物的合成及其抗氧化活性研究
以二氢杨梅素(6)为原料,在不同的催化条件下与不同的酰化试剂进行乙酰化反应制备得3,5,7,3',4',5'-六乙酰基二氢杨梅素(1)、3,3',4',5'-四乙酰基二氢杨梅素(2)、3,7,3',4',5'-五乙酰基二氢杨梅素(3)、3-乙酰基二氢杨梅素(4)和二氢杨梅素丙酮加成物(5),且用MS、1H NMR和13C NMR确证结构.通过测试目标化合物对羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)的清除作用,考察二氢杨梅素乙酰化衍生物的抗氧化活性,结果显示抗氧化能力大小顺序为6＞4＞5＞2＞3＞1.
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乙酰阿魏酰氯的合成
乙酰阿魏酰氯(1)可用作医药、农药、化妆品和食品添加剂的中间体[1,2],可由阿魏酸经乙酰化、氯化制得[3].阿魏酸可由香草醛和丙二酸在吡啶、哌啶或苯胺催化下,在吡啶、吡啶和苯或甲苯的混合溶剂中缩合制得[4,5].本研究改用香草醛在乙酸钠作用下直接和乙酸酐反应得到乙酰阿魏酸(2),再经氯化即可制得1,反应周期短,操作简便,总收率79%.反应式如下:
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2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-溴-1-氯-β-D-甘露糖的合成
2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-溴-1-氯-β-D-甘露糖(1)是合成β-不饱和甘露糖苷的关键中间体[1],后者可进而获得具有抗炎作用的Sialyl Lewis X类似物[2]、生化试剂伴刀豆球蛋白A的糖配体[3]以及"分子标志"等糖药物或糖生化试剂[4].本研究以文献[5～8]为基础制得1(图1),并进行了工艺改进.文献[5]用β-D-甘露糖室温与乙酸酐、乙酸钠反应48h,得到α-和β-型的乙酰化甘露糖混合物,再用43%溴化氢乙酸溶液溴化12h得2,收率55%～75%.
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组蛋白修饰与胶质瘤发生发展
尽管组蛋白修饰的表观遗传学调控作用受到越来越多的关注,但其具体调控机制尚未明确.该文主要介绍组蛋白H3K23乙酰化修饰在胶质瘤发生发展中的作用,并进一步阐明H3K23乙酰化调控胶质瘤发生发展的新机制.该机制的揭示有望为胶质瘤治疗提供新思路.
