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大鼠肾系膜细胞饰胶蛋白聚糖乙酰化可增强其蛋白质稳定性和功能
目的 通过细胞学研究检测大鼠肾系膜细胞饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)的乙酰化及其对系膜细胞泛素化的影响作用.方法 体外培养大鼠肾系膜细胞,应用免疫共沉淀、蛋白质电泳分析及RT-PCR等检测DCN的表达改变.结果 大鼠肾系膜细胞存在DCN乙酰化修饰,且DCN的乙酰化修饰抑制了DCN泛素化降解,促进了DCN蛋白质的稳定.此外增强DCN乙酰化修饰可促进转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)以及Ⅳ型胶原的下调,同时抑制肾系膜细胞的生长.结论 DCN乙酰化修饰可抑制DCN降解,增强DCN抗肾炎的作用,在防治系膜细胞增生性肾炎中可作为潜在的干扰靶点.
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蛋白质乙酰化与肺癌及肺纤维化
蛋白质中赖氨酸ε氨基(Nt)乙酰化，是多肽侧链上氨基的乙酰化，由赖氨酸乙酰转移酶(acetyltrahsferases，KATs)催化。该过程是可逆的，去乙酰化是由组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)催化完成。Nt乙酰化(以下简称K乙酰化)是与磷酸化同等重要的蛋白质修饰，参与各种生理病理过程。蛋白质乙酰化参与肿瘤、尤其是造血系统肿瘤的发生已有大量研究，近，美国FDA批准HDACs抑制剂romidepsin(Istodax)和vorinostat(Zolinza)用于临床治疗皮肤T细胞淋巴瘤。蛋白质乙酰化与实体肿瘤和非肿瘤性疾病发生的关系可能会成为今后研究的热点，现将蛋白质乙酰化在肺癌及肺纤维化发生机制及肺癌治疗中的作用作一概述。
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乙酰化修饰调节代谢
赖氨酸乙酰化是重要的蛋白质翻译后修饰之一。除熟知的转录调控功能外，赖氨酸乙酰化还参与多种生理调控。新研究表明：乙酰化广泛修饰代谢酶及代谢相关酶，对代谢具有广泛调控功能。相关研究将深化代谢调控基础理论。
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鞘内注射乙酰化酶 p300抑制剂 Garcinol 对大鼠神经病理性痛的影响
目的：观察鞘内注射乙酰化酶抑制剂 Garcinol 对 L5脊神经结扎（spinal nerve ligation，SNL）大鼠痛觉高敏行为的影响，探讨其相关机制。方法雄性 SD 大鼠90只，日龄40～50 d，体重180～220 g。随机分为六组，每组15只。N 组不做任何处理，S 组仅暴露 L5脊神经。C、H、M、L 组大鼠行 SNL 手术。H、M、L 组分别将 Garcinol 按500、100、20μg／kg 溶于10μl 的100％二甲基亚砜溶剂中，SNL 术后第3天经鞘内导管给药，每天1次，连续给药4 d。C 组在相同时间鞘内注入10μl 二甲基亚砜溶剂。于 SNL 术前1 d（T0）、术后1 d（T1）、3 d（T2）、5 d（T3）、7 d（T4）、9 d（T5）、11 d（T6）、14 d（T7）测定各组大鼠热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency，TWL）。T4时取腰段脊髓，Western blot 检测 p300和乙酰化 p65蛋白的表达水平，采用免疫荧光法测定脊髓背角核因子κB（NF-κB）的表达。结果 T1～T7时 C、L、M、H 组大鼠 TWL 明显短于 N 组，p300和乙酰化 p65蛋白含量明显高于 N 组，脊髓背角 NF-κB 表达明显多于 N 组（P ＜0.05）。T3～T7时 M、H 组大鼠TWL 明显长于 C 组，p300和乙酰化 p65蛋白含量明显低于 C 组，H 组脊髓背角 NF-κB 表达明显少于 C 组（P ＜0.05）。结论 p65乙酰化水平的增高参与了神经病理性痛的形成，鞘内注射乙酰化酶p300抑制剂 Garcinol 可以发挥镇痛作用，其机制可能与抑制 p300介导的 p65乙酰化，降低 NF-κB表达水平有关。
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SIRT1与间充质干细胞衰老
间充质干细胞（ MSCs）是一种具有自我更新功能并可以分化为执行特定功能的体细胞，研究已经证实在体外培养的过程中MSCs会出现衰老的现象。哺乳动物沉默调节因子2相关酶1（ SIRT1）是一类依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD＋）的组蛋白去乙酰化酶，越来越多的研究表明， SIRT1可以通过调控 P53、组蛋白乙酰化、NF-κb和FoxO等关键分子的表达，进而参与调控细胞的衰老、凋亡、代谢等生理活动。作者就SIRT1在MSCs衰老中的作用作一综述。
关键词： 沉默调节因子2相关酶1 乙酰化 间充质干细胞 衰老 文献综述 -
KLF7b对斑马鱼胚胎发育的影响
目的:探讨KLF7b对斑马鱼胚胎发育的影响.方法:体外转录野生型KLF7b m RNA、KLF7b乙酰化位点突变体m RNA;设计合成特异性KLF7b反义吗啉代寡核苷酸(morpholino oligonueleitide,MO);在1～2细胞期注射到斑马鱼胚胎体内以实现KLF7b的过表达、位点突变与敲降;观察胚胎表型并利用定量PCR检测发育相关基因的表达变化,钙黄绿素染色观察斑马鱼骨骼发育情况.结果:过表达KLF7b对斑马鱼胚胎的发育无明显影响;敲降KLF7b或注射乙酰化位点突变的KLF7b后,斑马鱼胚胎出现心包积液、体轴和头部发育的异常,肌肉发育标志基因表达下调.结论:KLF7b可通过乙酰化修饰影响斑马鱼的发育.
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RNA干扰沉默p300基因对亚溶解型C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和ATF3乙酰化的影响
目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic) C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcrip-tion factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响.方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMC,再给予sublytic C5b-9刺激.Western blot筛选干涉效果佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMC凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Westem blot联合检查ATF3乙酰化水平.结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功.Western blot显示p300 shRNA-2具有佳沉默效率.p300 shRNA处理GMC后,由sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低.结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关.
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曲谷抑霉素A调控人干扰素调节因子3基因初步研究
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)曲谷抑霉素A(trichostain A,TSA)对人干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)基因表达的影响,初步分析TSA调控IRF3基因的乙酰化机制.方法:双荧光素酶活性分析法检测TSA和组蛋白乙酰化酶(histone acetylase,HAT)野生型p300对IRF3基因启动子活性的影响;实时荧光定量PCR检测TSA对IRF-3基因mRNA水平的影响;Western blot检测TSA对IRF3蛋白水平的影响.结果:不同浓度TSA干预后IRF3基因启动子活性均增加,TSA浓度为1μmol/L时,PS1、PS6相对荧光素酶活性分别增加75％、155％;过表达野生型p300后PS1相对荧光素酶活性增加267％;TSA(1、10 μmol/L)干预细胞6h后,IRF3基因mRNA水平增加23％、39％,干预24h后,mRNA水平增加17％、64％;TSA(0.1、1、5μmol/L)干预细胞24 h后,蛋白表达量分别增加15％、72％、191％.结论:TSA上调IRF3基因mRNA和蛋白表达,TSA和组蛋白乙酰化酶p300均可正向调控IRF3基因启动子活性,TSA可能通过IRF3通路发挥治疗免疫性疾病和抗肿瘤作用.
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PI3K-AKT信号通路对人肝癌Huh-7细胞乳酸和乙酰化修饰水平及细胞生长的影响
目的:探讨PI3K/Akt信号通路对人肝细胞癌Huh-7细胞乙酰化及糖酵解的影响及机制.方法:体外培养Huh-7细胞株,应用不同浓度的PI3K/Akt抑制剂LY294002与mTOR抑制剂雷帕霉素分别进行干预;乳酸试剂盒法检测乳酸水平;Westernblot法检测肿瘤细胞中三磷酸腺苷柠檬酸盐裂解酶(adenosine triphosphate-citrate lyase,ACL)表达水平与乙酰化修饰水平;WST法检测细胞增殖水平.结果:①LY294002干预组的乳酸水平低于DMSO对照组,下降66.15％,细胞内ACL的表达水平下降20.84％,乙酰化水平在多位点表达水平下降(P＜ 0.01,n=3);②雷帕霉素干预组的乳酸水平低于DMSO对照组,下降90.16％,细胞内ACL的表达水平下降64.16％,乙酰化水平在多个位点表现出不同水平的下降(P＜ 0.01,n=3);③以DMSO干预作为对照,20 mmol/L的LY294002和20 μg/L的雷帕霉素分别作用24 h后,对Huh-7细胞的增殖抑制率分别为24.78％和20.67％(P＜ 0.01,n=3).结论:Huh-7细胞中活化的PI3K/Akt/mTOR信号通路能通过提高ACL的表达,上调细胞内乙酰化的修饰水平,从而增加肿瘤细胞的糖酵解,促进肿瘤细胞的生长.
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黄蜀葵茎叶多糖的乙酰化修饰及其免疫调节活性研究
目的 应用乙酰化修饰方法与技术进行黄蜀葵茎叶多糖的结构修饰,并评价其体外免疫调节活性,以期为黄蜀葵茎叶废弃物的资源化利用提供思路和科学依据.方法 采用水提醇沉法及DEAE-52离子交换法制备黄蜀葵茎叶粗多糖(SLAMP)和中性多糖(SLAMP-a),应用乙酸酐法制备3种乙酰化修饰产物(SLAMP-a1、SLAMP-a2、SLAMP-a3),且通过化学组成分析、柱前衍生HPLC法以及红外光谱法对多糖结构进行初步鉴定;此外,通过考察SLAMP-a及其3种乙酰化修饰产物对脾淋巴细胞体外增殖及RAW264.7释放NO的影响,评价四种多糖的免疫调节活性.结果 SLAMP-a总糖含量为99.76%,无体外免疫调节活性;3种修饰产物中,只有SLAMP-a1具有显著的刺激脾细胞增殖作用及激活RAW264.7产生NO.SLAMP-a1总糖含量为82.50%,取代度为0.62,主要由葡萄糖组成,且含有少量的甘露糖、半乳糖及阿拉伯糖.结论 黄蜀葵茎叶多糖SLAMP-a经乙酰化修饰后,可显著提高体外免疫调节活性,SLAMP-a1有望开发成免疫调节剂,且乙酰化修饰方法与技术可作为黄蜀葵茎叶多糖资源化利用的有效途径.
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赖氨酸特异性去甲基化酶1对曲古抑菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡的作用
目的 赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)是黄素腺嘌呤二核苷酸依赖的胺氧化酶,其参与细胞的增殖、分化以及介导基因激活和抑制等多种生物学过程.文中旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对LSD1的乙酰化,以及LSD1在TSA诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用.方法 利用RNA干扰方法建立诱导型稳定敲低LSD1基因表达的卵巢癌HO8910和SKOV3细胞株;实验设置pLKO对照组(感染空载体慢病毒)、pLKO+Dox(100 ng/mL)组、LSD1-KD组(感染LSD1-shRNA慢病毒)和LSD1-KD+Dox(100 ng/mL)组.用免疫沉淀(IP)和Western blot检测LSD1乙酰化程度,及其底物组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)水平;AnnexinⅤ/PI和流式细胞术分析细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和p21 mRNA表达水平;染色质免疫沉淀(ChIP)分析Bax和p21基因启动子区H3K4me2程度.实验设置methanol对照组(2 mg/mL)、TSA组(200 nmol/L)、TCP组(抑制LSD1活性;100μmol/L)和TSA+TCP组,处理细胞48 h.在RNA干扰LSD1表达实验中,设置溶剂对照组(2 mg/mL methanol)、TSA处理组(200 nmol/L)、Dox组(干扰LSD1表达;100 ng/mL)和联合处理组(200 nmol/L TSA与100 ng/mL Dox)联合处理细胞48 h.结果 免疫沉淀结合Western blot检测结果显示,200 nmol/L TSA处理后LSD1蛋白的乙酰化和H3K9的乙酰化水平较methanol溶剂处理显著增加(P<0.01).与methanol溶剂对照处理比较,200 nmol/L TSA处理HO8910和SKOV3细胞后H3K4me2水平明显升高(P<0.01).AnnexinⅤ/PI结果显示,与methanol对照组比较,TSA组、TCP组和TSA+TCP组HO8910和SKOV3细胞的总凋亡率均显著升高(P<0.05);且TSA+TCP组较TSA组和TCP组细胞凋亡率明显升高(P<0.05).LSD1-KD+Dox组细胞中LSD1蛋白水平(HO8910:0.21±0.16;SKOV3:0.26±0.11)较pLKO对照组(HO8910:1.15±0.16;SKOV3:0.97±0.31)和LSD1-KD组(HO8910:1.07±0.19;SKOV3:0.98±0.21)显著减少(P<0.01).与溶剂对照组比较,TSA处理组、Dox组和联合处理组细胞的总凋亡率均显著增高(P<0.05);其中联合处理组较TSA或Dox组亦显著增高(P<0.05).RT-PCR结果表明,在HO8910细胞中,与溶剂对照组Bax和p21 mRNA水平比较,TSA处理组、Dox组及联合处理组均显著上调(P<0.05);且联合处理组较TSA处理组或Dox组亦显著上调(P<0.05).TSA处理组细胞中Bax和p21基因启动子区H3K4me2水平较methanol对照组显著升高(Bax:2.92±0.26 vs 0.86±0.19;p21:3.07±0.29 vs 0.93±0.17,P<0.01).结论 TSA诱导了LSD1蛋白的乙酰化,抑制LSD1表达或活性可增强TSA对卵巢癌细胞的杀伤作用.
关键词： 赖氨酸特异性去甲基化酶1 曲古抑菌素A 乙酰化 凋亡 卵巢癌 -
恶性间皮瘤高迁移率蛋白1乙酰化修饰分析
[目的]探索恶性间皮瘤中高迁移率蛋白1 (HMGB1)乙酰化修饰位点信息.[方法]利用Q Exactive四极杆—静电场轨道阱高分辨质谱和Proteome Discoverer软件,研究恶性间皮瘤细胞NCI-H2452中HMGB1的乙酰化位点,以肺癌细胞A549和卵巢癌细胞A2780作为参照.[结果]恶性间皮瘤细胞中HMGB1的较多Lysine发生乙酰化修饰,包括K43、K50、K57、K59、K60、K90、K136、K137、K167、K170,除K43和K90外,均为新报道的HMGB1乙酰化位点;然而在肺癌细胞和卵巢癌细胞中均未检测到HMGB1乙酰化修饰.[结论]本研究发现恶性间皮瘤中HMGB1存在特异性的乙酰化位点,其可能是潜在恶性间皮瘤诊断分子标志物.
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扑热息痛合成工艺研究
扑热息痛间广泛使用的解热镇痛药,具有副作用小、安全等特点,是目前国内生产大的原料药,该药近年来有大量出口.生产扑热息痛的传统工艺[1]为对氯硝基苯经碱熔、水解、铁粉还原等制得对氨基苯酚,再乙酰化制得扑热息痛.
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miR-203表达异常与甲状腺乳头状癌发生发展的关系
目的 探讨miR-203表达与甲状腺乳头状癌发生与发展的关系.方法 收集甲状腺乳头状癌标本40例,另选取良性甲状腺肿瘤标本30例,使用定量逆转录-聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测特定的miRNA表达,Transwell实验测定miR-203对细胞侵袭性的影响,通过启动子区乙酰化寻找与miR-203表达的关系.结果 甲状腺乳头状癌组织及细胞系中miR-203的表达量均低于良性甲状腺组织或细胞系(P＜0.05),且survivin的表达量有所上升(P＜0.05);miR-203启动子区的去乙酰化会导致miR-203的表达异常.结论 miR-203在甲状腺乳头状癌中的表达低于甲状腺良性肿瘤组织,在甲状腺乳头状癌中的诊断及靶向治疗方面具有广泛应用.
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姜黄素通过调控组蛋白乙酰化修饰上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1表达
目的:从组蛋白乙酰化修饰角度探讨姜黄素上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中多药耐药基因1(multidrug resistance protein 1,MDRl)表达水平的作用机制.方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法观察姜黄素对MCF-7和MCF-7/DOX细胞生长增殖以及多柔比星敏感性的影响;Real-time PCR和Western blot方法检测姜黄素处理前后两种细胞中MDRl mRNA和蛋白质表达水平的变化;染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)检测姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4乙酰化水平的影响.结果:不同浓度姜黄素处理72 h对MCF-7和MCF-7/DOX细胞的生长增殖有显著抑制作用,其IC50值分别为22.03 μmol/L和27.46μmol/L;10 μmol/L姜黄素处理72 h可显著提高两种细胞多柔比星敏感性,多柔比星IC50值分别下降了57.14％和54.52％ (P ＜0.05);姜黄素处理MCF-7和MCF-7/DOX细胞后,MDR1在mRNA水平分别上调(32.90±0.96)和(5.70±0.55)倍(P＜0.05),在蛋白质水平分别上调(2.26±0.18)与(2.90±0.21)倍(P＜0.05);CHIP结果显示姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平均有显著上调作用.结论:姜黄素在增强MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的同时,可通过调控MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平而上调MDR1的表达.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21WAF1/CIP1启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期
目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21WAF1/CIP1启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制.方法 采用实时定量PCR、Western blot和DNA-ChIP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)技术探究SAHA调控p21WAF1/CIP1启动子乙酰化水平的情况.结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21WAF1/CIP1基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21WAF1/CIP1 mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21WAF1/CIP1启动子乙酰化水平.结论 SAHA通过影响p21WAF1/CIP1启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程.
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下调组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1的表达引起人白血病Molt-4细胞的凋亡
目的观察LSD1基因对人类急性T淋巴母细胞性白血病Molt-4细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并筛选出针对LSD1基因的佳siRNA片段,将其转染入Molt-4细胞后,MTS法观察LSD1 siRNA对Molt-4细胞增殖的影响；流式细胞术分析细胞凋亡；Western blot检测LSD1 siRNA作用后组蛋白H3 K4、H3 K9甲基化及组蛋白H3乙酰化状态,以及p15、DNA甲基化酶1( DNMT1)和凋亡相关蛋白 Bcl-2、pro-caspase-3的表达变化。结果沉默 LSD1基因可抑制细胞增殖,LSD1 siRNA浓度为0、30、60、120 nmol·L-1作用48 h后,Molt-4细胞的增殖率分别为(99．65±1．21)%、(83．02±1．69)%、(65．72±2．16)%、(41．15±2．23)%,差异具有统计学意义( P<0．05)； LSD1 siRNA以60 nmol · L-1的浓度转染细胞0、24、48、72 h,增殖率分别为(99．86±1．35)%、(65．72±2．16)%、(48．26±1．92)%、(37．86±1．66)%,P<0．05,提示LSD1 siRNA可以抑制Molt-4细胞的增殖。 LSD1 siRNA 0、30、60、120 nmol·L-1作用48 h后,细胞凋亡率分别为(3．35±1．26)%、(12．16±1．74)%、(32．74±2．47)%、(54．64±2．58)%,P<0．05,凋亡率随着LSD1 siRNA浓度的增加逐渐上升；同时出现凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3的表达下降；LSD1 siRNA抑制LSD1蛋白及LSD1 mRNA,上调组蛋白H3K4一甲基化、二甲基化及组蛋白H3的乙酰化水平, H3 K4三甲基化、H3 K9甲基化水平无明显变化；LSD1 siRNA下调DNA去甲基化酶DNMT1的表达,上调 p15的表达。结论 LSD1 siRNA 能抑制 Molt-4细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与表观遗传学调控有关,有望成为白血病治疗的一个新的靶点。
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低分子量肝素乙酰化物的理化特性及其体外抗肿瘤活性研究
目的：合成低抗凝血性低分子量肝素乙酰化物( ALM-WH),并对其理化性质、抗肿瘤活性进行检测。方法采用高碘酸钠氧化,硼氢化钠还原法对普通肝素( UFH)进行选择性裂解,制得低抗凝血性低分子肝素( LMWH),以N,N二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶( DCC/DMAP)为催化剂,对其进行乙酰化,制得ALMWH,经X线衍射( XRD)和差示扫描量热( DSC )试验,分析其构型和理化性质。以乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞为模型,检测其抗增殖、抗侵袭转移能力。利用家兔全血激活凝血时间实验( ACT)检测其抗凝血活性。结果 XRD测得ALMWH与LMWH同属无定形结构,但DSC热损失曲线和LMWH明显不同。与LMWH比较,ALMWH含有更多的结合水较低的抗凝血活性。更有意义的是,在低浓度下ALMWH即表现出较LMWH强的抗肿瘤细胞增殖、转移的活性。结论 ALMWH抗凝血活性低,具有一定的抗肿瘤增殖及侵袭转移的作用。本研究为低毒性抗肿瘤药物筛选提供了基础方法。
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BIX-01294对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响
目的：观察甲基化转移酶G9a抑制剂BIX-01294对急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响。方法 MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax、抑癌蛋白P15、DNA去甲基化酶DNMT1、组蛋白H3乙酰化、组蛋白H3K9单、双、三甲基化水平,H3K27单甲基化、双甲基化水平的变化。结果 BIX-01294可下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白的表达, Caspase-3表达上调,诱导细胞凋亡,浓度为0、1、2、4μmol · L-1的BIX-01294作用Molt-4细胞24 h 后,凋亡率分别为(5．54±1．35)%、(10．24±2．26)%、(32．28±3．26)%、(47．52±4．37)%(P<0．05),差异有统计学意义。 BIX-01294抑制DNMT1表达,上调P15蛋白表达,抑制细胞的增殖；BIX-01294下调组蛋白 H3K9、H3K27单甲基化和二甲基化水平,而组蛋白 H3乙酰化及H3K9三甲基化水平无明显改变。结论 BIX-01294通过抑制G9a 的活性,下调 H3K9、H3K27单甲基化、二甲基化水平,抑制DNMT1,使上调P15蛋白,终抑制Molt-4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。
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丙戊酸对人脑胶质母细胞瘤细胞株抑制增殖及诱导凋亡作用研究
目的 研究丙戊酸(2-propylpentanoic acid,VPA)体外对人脑胶质母细胞瘤细胞株增殖抑制、诱导细胞周期阻滞及促进凋亡的作用,为临床治疗提供理论依据.方法 MTT比色法检测VPA对胶质母细胞瘤细胞株的杀伤作用;流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡的影响作用;Western blot法检测乙酰化组蛋白H3(acetyl-Histone H3)、乙酰化组蛋白H4(acetyl-histone H4)表达量变化情况.结果 VPA对胶质瘤母细胞瘤细胞株SF295、U87具有抑制增殖作用,诱导细胞周期阻滞于G2 / M 期,乙酰化组蛋白H3、H4表达量呈时间依赖性增加.大剂量可以诱导出现凋亡.结论 VPA能够在体外抑制胶质瘤细胞生长,诱导细胞周期阻滞及促进细胞凋亡,其机制可能与促进组蛋白乙酰化有关.
