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丁酸钠通过维持乙酰化平衡改善帕金森病模型鼠认知功能和情感障碍
目的 研究丁酸钠对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠认知功能和情感障碍影响及机制.方法 C57BL/6J鼠随机分为对照组、MPTP组、丁酸钠组、MPTP+丁酸钠组,通过悬尾实验和Morris水迷宫实验研究丁酸钠对PD模型鼠认知功能和情感障碍的影响;Western blot和RT-PCR检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)蛋白表达和mRNA水平.结果 与对照组比较,PD模型鼠表现为学习记忆能力下降和抑郁样行为;丁酸钠能够改善PD模型鼠抑郁行为,并明显提高PD模型鼠学习记忆能力;丁酸钠可使PD模型鼠脑组织TH和HDAC1蛋白表达和mRNA水平明显升高.结论 MPTP诱导TH蛋白表达明显降低,引起PD模型鼠认知和情感障碍,可能是干扰了组蛋白乙酰化平衡;丁酸钠能够使PD模型鼠脑组织TH表达明显升高,改善PD模型鼠认知功能和情感障碍,主要是通过保护多巴胺神经元、修复和维持组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡来完成的.
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姜黄素诱导Raji、HL-60和K562组蛋白乙酰化的研究
目的研究姜黄素对淋巴瘤细胞系Raji细胞的抑制增殖作用,并在组蛋白乙酰化/去乙酰化水平对其抗肿瘤机制进行探讨.方法 MTT法检测不同浓度姜黄素、TSA作用于Raji细胞的抑制增殖率.以TSA处理后的细胞为阳性对照,免疫组化法定量分析及免疫荧光流式细胞化学定量检测姜黄素作用后Raji、HL-60、K562细胞的组蛋白乙酰化H3水平.结果姜黄素抑制Raji细胞增殖,并呈时间剂量依赖性;25 μmol·L-1姜黄素可致Raji、HL-60、K562细胞的乙酰化H3水平增加(P<0.05),50 μmol·L-1姜黄素的诱导作用增强(P<0.01).结论姜黄素可以选择性地抑制Raji细胞增殖;且类似于TSA诱导Raji,HL-60,K562细胞组蛋白乙酰化增加.
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血管衰老的乙酰化调控机制
蛋白质乙酰化修饰对基本生命现象进行广泛调节，如心血管稳态和肿瘤发生。探索乙酰化修饰机制及其在疾病中的异常表现，已成为医学研究的基本问题之一。血管衰老与老年性高血压、冠状动脉粥样硬化等疾病的发生发展密不可分，内皮细胞衰老是其中的关键环节。该文综述了血管衰老的乙酰化调节研究进展，并对该领域的研究做展望。
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白藜芦醇通过降低 NF-κB p65乙酰化缓解大鼠神经病理性疼痛
目的：观察白藜芦醇对腰5脊神经结扎( L5 spinal nerve ligation ,SNL)大鼠的镇痛作用及其相关机制。方法90只♂ SD 大鼠随机分为6组(n =15)。正常组；假手术组；疼痛组；高、中和低剂量白藜芦醇组。正常组不做处理,假手术组仅暴露腰5脊神经,其余各组行 SNL。高、中、低剂量组分别将300、30、3μg 白藜芦醇溶于10μL 的100%二甲基亚砜溶剂中,于 SNL 术后 d 4经鞘内导管给药,每天1次,连续给药4 d。术后1、3、5、7、9、11、14 d 测定各组大鼠热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)。行为学测试结束后处死大鼠,取腰段脊髓。 Western blot 检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和乙酰化 p65蛋白的表达水平,采用免疫荧光法测定脊髓背角活化的核因子κB (NF-κB)表达。结果与假手术组比较,疼痛组大鼠术后PWL 明显降低(P <0．05),SIRT1蛋白含量明显减少(P <0．05),乙酰化 p65蛋白含量和活化的 NF-κB 表达明显增多(P <0．05)。与疼痛组比较,高、中剂量组大鼠给药后 PWL和 SIRT1蛋白含量明显升高(P <0．05),乙酰化 p65蛋白含量和活化的 NF-κB 表达明显减少(P <0．05)。结论鞘内注射白藜芦醇可缓解神经病理性疼痛,其机制可能与激活SIRT1,促进 p65去乙酰化,从而抑制 NF-κB 活化有关。
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沉默 DNMT1基因对 Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响
目的：探讨 siRNA 沉默 DNMT1基因对人急性 T 淋巴细胞性白血病 Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响。方法将 DNMT1特异性 siRNA 经 LipofectamineTM2000转染Molt-4细胞后,应用 RT-PCR 检测 Molt-4细胞 DNMT1 mRNA表达,MTT 法绘制细胞生长曲线；流式细胞术分析细胞凋亡。 Western blot 检测 Bcl-2、procaspase-3、P15蛋白表达以及组蛋白甲基化、乙酰化状态的改变。结果 DNMT1 siRNA可沉默 DNMT1基因的表达,并呈现浓度依赖性；抑制 Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡。经0、30、60、120 nmol·L -1 DN-MT1 siRNA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为(4．27±1．42)%,(15．25±1．54)%,(35．63±2．54)%,(66．27±3．02)%,差异具有统计学意义(P <0．05)。 DNMT1 siRNA可上调 P15的表达；下调 Bcl-2、procaspase-3的表达,下调组蛋白 H3K9甲基化水平,上调组蛋白 H3K4的甲基化水平,而组蛋白 H3乙酰化水平无明显变化。结论 DNMT1 siR-NA 可以有效地抑制 Molt-4细胞中 DNMT1的表达,下调组蛋白 H3K9甲基化水平,上调组蛋白 H3K4的甲基化水平,从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。
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曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用
目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法 建立PC12细胞缺糖/缺氧 (oxygen and glucose deprivation,OGD) 损伤模型,1-640 nmol·L-1 TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide (PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量.结果 与模型组相比,80 nmol·L-1 TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P＜0.05).结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤.
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TLR4乙酰化对LPS-TLR4-NF-κB通路的影响及其在妊娠期糖尿病发病机制中的作用
目的 研究Toll样受体4 ( TLR4 )乙酰化在妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血单核细胞(PBMC)中的表达及其在内毒素( LPS)-TLR4-核因子κB( NF-κB)通路中的作用,进一步探讨GDM的炎症发病机制. 方法 选取正常孕妇、GDM孕妇各30例,抽取静脉血15 ml,密度梯度离心法分离PBMC进行体外培养,并保留血清用于检测LPS的量;将研究分成正常组(对照组)、正常+LPS组、GDM组和GDM+LPS组.PBMC用于免疫共沉淀法、Western blot法检测TLR4乙酰化和NF-κB蛋白的表达量;上清液用于ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-10(IL-10)的水平. 结果 正常孕妇、GDM孕妇体内LPS量的差异有统计学意义( P<0. 05 ). GDM组发生TLR4乙酰化变化,而对照组未检测到TLR4 乙酰化;LPS 干预后,正常+ LPS组、GDM + LPS 组TLR4 乙酰化的程度明显增加,且GDM +LPS 组TLR4 乙酰化程度明显高于GDM 组和正常+ LPS 组,差异有统计学意义(P < 0. 05).4 组NF-κB 的表达和炎症因子TNF-α、IL-1、IL-10 水平的差异均有统计学意义(P <0. 05).各组TLR4 乙酰化与NF-κB 蛋白表达量之间具有正相关性(P < 0. 05).结论 TLR4 乙酰化通过影响LPSTLR4-NF-κB 通路的活化介导炎症因子的释放,促进孕妇体内抗炎-致炎的失衡,从而参与GDM 的发生.
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灵芝多糖乙酰化及其抗氧化活性研究
目的 通过化学修饰改变灵芝多糖分子结构,并研究其体内抗氧化活性.方法 乙酰化修饰灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP),得到GLP乙酰化衍生物(GLP acetyl derivatives,GLPa);将昆明种小鼠随机分成空白对照组,阳性对照组,GLP高、低剂量组及GLPa高、低剂量组,测定小鼠血清和肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,TAOC)和过氧化氢酶(catalase,CAT);建立高脂血症大鼠抗氧化损伤模型,考察GLP及GLPa的抗氧化能力.结果 GLPa及GLP均可以显著提高正常小鼠肝组织CAT活力及T-AOC,降低小鼠血清及肝脏MDA含量,GLPa抗氧化活性明显优于GLP,且与给药剂量相关.此外,GLPa及GLP还可以显著降低四氧嘧啶致高脂大鼠的氧化损伤程度,提高其血清超氧化物歧化酶活力及肝脏T-AOC,并降低其血清MDA含量.结论 乙酰化修饰可显著提高灵芝多糖的抗氧化活性.
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甘露醇乙酰化衍生物的制备
目的 改进甘露醇乙酰化衍生物的制备,以便顺利获得衍生物的结晶鉴别甘露醇.方法 调整试剂混合顺序等.结果 获得衍生物的结晶变得容易,测定衍生物熔点鉴别甘露醇变得可能.结论 本改进方法优于原标准.
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浅谈薄层色谱法鉴别乙酰螺旋霉素
乙酰螺旋霉素(acetyl spriamycin.Ac-Spm)是大环内脂类抗生素螺旋霉素的乙酰化衍生物.严格地说它是一种混合物,其组分为:单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ.
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罗库溴铵的合成工艺研究
目的 研究罗库溴铵的合成工艺.方法 以2β-(4-吗啉基)-16β-(1-毗略烷基)-3α,17β-二弪基-5α-雄甾烷为原料,经乙酰化,再选择性水解得到17β-乙酰化物,然后与烯丙基溴成盐得到罗库溴铵.考察了乙酰化、选择性水解的条件,同时分离得到3α,17β-二乙酰化物.结果 与结论罗库溴铵及其中间体的结构经核磁共振氩谱(1H-NMR)、碳谱(<'13>C-NMR),质谱(ESI-MS)确证,总收率59.6%.
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乙酰化TLR4在GDM孕妇外周血单核细胞中的表达及意义
目的 探讨乙酰化Toll样受体4(TLR4)在妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血单核细胞中的表达及意义.方法 选取2017年1月至2017年10月在我院治疗的GDM孕妇67例(GDM组),同时选取健康孕妇67例作为对照组,采用Western blot法检测TLR4、乙酰化TLR4和NF-κB p65蛋白表达,微板法检测血清脂多糖(LPS)、ELISA法检测肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-10(IL-10).结果 GDM组和对照组TLR4蛋白相对表达差异比较无统计学意义(P＞0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达为(1.012±0.062),而对照组未检测到乙酰化TLR4表达,差异比较有统计学意义(P＜0.05);GDM组LPS、TNF-α、IL-1及IL-10分别为(0.95±0.11)IU/ml、(56.01±3.18)pg/ml、(76.82±3.05)pg/ml和(32.17±4. 07)pg/ml,明显高于对照组(P＜0.05);GDM组NF-κB p65蛋白相对表达为(0.763±0.073),明显高于对照组(P＜0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达与LPS、TNF-α、IL-1、IL-10及NF-κB p65蛋白相对表达呈正相关(r=0.321、0.304、0.335、0.341和0. 482,P＜0.05).结论 GDM孕妇外周血单核细胞存在乙酰化TLR4,其与炎症因子水平有一定相关性,值得进一步研究.
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丹皮酚的合成工艺改进
目的 改进丹皮酚的合成工艺.方法 以间苯二酚为原料,经乙酰化、甲基化反应,后经重结晶,得到丹皮酚针状结晶.结果 合成丹皮酚总收率68％(纯度99.99％).所得产品经熔点、质谱和核磁共振氢谱等方法确证结构.结论 本工艺制备得到高纯度、高收率丹皮酚.制备过程操作简单,适合工业化生产.
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壳聚糖的药剂学应用
壳聚糖由甲壳素乙酰化制得,含β(1-4)-2-乙酰胺基-D葡糖单元和p(1-4)-2-氨基-D葡糖单元的共聚物,后者一般超过80%.
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比色法测定葡糖胺和半乳糖胺
Zuckerkandl和flMessiner-Klebermass报道了一种用于测定葡糖胺的比色法[1].按其操作,被检液应含盐酸葡糖胺1～4mg,蒸发至干并用新鲜配制的甲氧基钠溶液处理,然后用醋酸酐将游离葡糖胺碱乙酰化以生成Ⅳ_单乙酰化衍生物.N-单乙酰化衍生物经稀碱预处理后加入对二甲氨基苯甲醛的酸溶液(Ehrlich试剂)可以显现强的紫红色.我们发现此法是不完善的.在Zuckerkandl和Messiner-Klebermass所述条件下,产生的葡糖胺Ⅳ-单乙酰化衍牛物不能定量且加入对二甲氨基苯甲醛试剂后生成颜色的迅速衰褪增加了比色估测的难度.从他们对反应的叙述来看,意识到采用此方法进行定量的困难,并指出估计量的误差多可达6%.
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血浆唾液酸测定与红细胞沉降率的相关性探讨
唾液酸是指乙酰化的神经氨酸,它作为肿瘤监测、心血管疾病的危险因素、风湿热、慢性肾病等的生化指标已经有较多的报道,目前已知它是一个非特异性的生化诊断指标,但它与红细胞沉降率的关系却少见报道,本文探讨了血浆唾液酸与红细胞沉降率的关系,现报告如下:
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N-乙酰化代谢多态性与妊娠和妊娠高血压综合征
妊娠是胚胎和胎儿在母体内发育成长的过程.卵子受精妊娠开始,胎儿及其附属物自母体排出妊娠终止.妊娠过程是一个非常复杂、多变而又协调的生理过程.胎盘是主要的胎儿附属物,其主要功能包括气体交换、营养物质供应、排出胎儿代谢物以及防御功能和合成功能等.胎盘具有活跃的物质合成能力,主要合成激素和酶.合成的酶有催产素酶、耐热性碱性磷酸酶等,近年来,又在胎盘中发现了N-乙酰基转移酶,从而为妊娠妇女的药物代谢研究开拓了新的领域.
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分光光度法测定阿司匹林肠溶片中的游离水杨酸
阿司匹林肠溶片是临床上常用的解热、镇痛药物,<中国药典>2000年版收载品种.在阿司匹林肠溶片的质量标准中制订了对游离水杨酸的限度检查.游离水杨酸是阿司匹林在生产过程中由于乙酰化不完全而带入或在贮存期间阿司匹林水解产生的.
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乙酰化海带褐藻多糖硫酸酯的制备及其抗氧化活性研究
目的 优选乙酰化海带褐藻多糖硫酸酯的制备方法,并测定不同条件下制备得到的乙酰化衍生物的体外抗氧化活性.方法 以甲酰胺为溶剂;乙酸酐为酰化试荆,N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)为催化剂,采用正交设计法,考察反应时间、反应温度及酰化剂用量对海带褐藻多糖硫酸酯酰化反应的影响,测定不同条件下乙酰化衍生物的清除超氧阴离子、羟自由基和有机自由基DPPH的能力,及还原能力.结果 酰化荆用量和反应温度对海带褐藻多糖硫酸酯乙酰化有显著影响(P＜0.05).不同条件下制备的乙酰化衍生物的清除超氧阴离子、羟自由基和有机自由基DPPH的能力,及还原能力不同.结论 NBS作为催化荆对海带褐藻多糖硫酸酯进行乙酰化是可行的,可以代替传统毒性较强的吡啶对海带褐藻多糖硫酸酯的羟基进行乙酰化.乙酰化后多糖的抗氧化活性明显增强,对其进行深入研究有重要意义.
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七氟醚预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧后转录沉默信息调节器3的表达及乙酰化水平的影响
目的 探究七氟醚预处理对大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧后,对转录沉默信息调节器3(SIRT3)的表达及细胞蛋白乙酰化的影响.方法 将大鼠H9C2心肌细胞随机分为对照组、缺氧/复氧组和七氟醚预处理组.低氧培养箱构建缺氧/复氧模型:对照组心肌细胞无任何处理;缺氧/复氧组心肌细胞缺氧2h/复氧2h;七氟醚预处理组心肌细胞在缺氧/复氧前予以2.5％七氟醚预处理1 h.四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞存活率;采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;采用Western blotting法检测细胞整体蛋白及线粒体蛋白乙酰化水平、SIRT3表达及线粒体自噬水平的变化.结果 缺氧/复氧组较对照组心肌细胞SIRT3(0.78±0.04 vs 1.04±0.06)表达减少,细胞整体蛋白(1.72±0.06 vs 0.98±0.03)及线粒体蛋白(0.96±0.03 vs 0.45±0.03)乙酰化水平升高(P<0.05);同时心肌细胞存活率[(48.2±0.4)％vs 100％]、线粒体膜电位(1.72±0.14 vs 2.83±0.11)下降,线粒体自噬水平升高(P<0.05);与缺氧/复氧组相比,七氟醚预处理组心肌细胞SIRT3表达增加(0.93±0.03 vs 0.78±0.04),细胞整体蛋白(1.34±0.05 vs 1.72±0.06)及线粒体蛋白(0.65±0.04 vs 0.96±0.03)乙酰化水平降低(P<0.05);同时心肌细胞存活率[(65.80±1.53)％vs(48.20±0.40)％]及线粒体膜电位(2.33±0.12 vs 1.72±0.14)升高,线粒体自噬激活水平降低(P<0.05).结论 七氟醚预处理可以增加SIRT3表达,降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后蛋白的乙酰化水平,可能是七氟醚预处理对心肌细胞保护作用的潜在分子机制.
关键词： 七氟醚预处理 乙酰化 转录沉默信息调节器3 线粒体自噬 缺氧/复氧
