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肌细胞增强子2的乙酰化功能缺陷后的功能变化
目的 探讨肌细胞增强子2C(MEF2C)乙酰化功能缺陷后的功能改变.方法 用荧光素酶报道分析检测MEF2C的乙酰化功能缺陷对其转录活性的影响,用电泳迁移率分析检测MEF2C的乙酰化缺陷对其DNA结合功能的影响,用免疫染色方法 检测MEF2的乙酰化缺陷对其协同肌细胞生成素的作用,用免疫共沉淀的方法 检测乙酰化缺失的MEF2突变体对肌肉分化的影响.结果 MEF2乙酰化功能缺陷后对其本身的转录活影响较小,主要降低了它的DNA结合功能,降低了它对肌细胞生成素的协同作用,抑制了肌肉的分化.结论 MEF2C的乙酰化功能缺陷影响其分子本身的生物活性,因此为进一步研究MEF2的分子机制奠定了基础.
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山姜素诱导组蛋白去乙酰化并调控炎症基因表达的实验研究
目的 通过检测山姜素作用下鼠巨噬细胞(RAW246.7)炎症基因启动子部位结合组蛋白乙酰化修饰状态以及炎症因子表达,初步揭示山姜素调节炎症因子表达的表观遗传学作用机制.方法 采用不同质量浓度(10～200 μg/ml)山姜素培养RAW246.7,培养结束后ELISA法检测养基中IL-6以及肿瘤坏死因子a(TNF-α)质量浓度,染色质免疫共沉淀(Chip-qPCR)法检测上述基因启动子片段结合的去乙酰化/乙酰化组蛋白(H3K9以及H3K14)表达比值,Pearson相关分析比值与炎症因子质量浓度的关联情况.结果 山姜素呈剂量依赖性抑制RAW246.7细胞IL-6以及TNF-α表达,同时明显上调RAW246.7胞内IL-6以及TNF-α启动子片段结合的去乙酰化/乙酰化H3K9比值,且上述比值与炎症因子的表达水平呈负相关(P＜0.05);山姜素作用下炎症基因启动子片断结合的去乙酰化/乙酰化H3K14比值无明显变化.结论 山姜素可能通过诱导炎症基因的启动子部位组蛋白H3K9去乙酰化以调节炎症因子的合成,提示表观遗传学修饰很可能是山姜素干预炎症性疾病的重要机制.
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线粒体近日节律的研究进展
生物节律是生物体基本的特征之一,近日节律是生物节律中广泛存在的一种.随着研究的深入,越来越多的证据表明生物体近日节律和新陈代谢有着密切的关联.线粒体是真核细胞的主要代谢中心,本文就目前线粒体近日节律方面的研究进展进行总结,为进一步探索线粒体节律在整个代谢节律中所起的作用提供参考.
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纳米聚吡咯/甲壳素复合膜的制备及其生物相容性观察
目的 制备纳米聚吡咯(polypyrrole,PPy)/甲壳素复合膜并观察其生物相容性.方法 采用微乳液聚合法合成纳米PPy,与壳聚糖共混并成膜后,进行乙酰化改性得到纳米PPy/甲壳素复合膜(A组),制备壳聚糖膜(B组)及经乙酰化改性得到的甲壳素膜(C组)作为对照组,使用扫描电镜、红外光谱观察等方法对纳米PPy、各组膜进行鉴定并测定其导电性.将3组膜与雪旺细胞体外共培养,采用倒置显微镜观察、活细胞染色、细胞计数、免疫荧光染色等方法观察膜的体外生物相容性,使用溶菌酶溶液评价膜的体外降解情况.结果纳米PPy合成后,经红外光谱观察,显示在1 543.4 cm-1和1 458.4 cm-1处出现PPy c=c的特征振动吸收峰;扫描电镜观察发现纳米PPy的粒子聚合体直径为100～ 200 nm.3组膜制备后,红外光谱观察显示,A、C组膜出现乙酰化改性后的1 562 cm-1左右的酰胺Ⅱ谱带特征峰,显示A、C组膜成功乙酰化成甲壳素.导电性检测显示A组膜的电导率为(1.259 2±0.005 7)×10-3 S/cm;B、C组膜均未检测出电导率.扫描电镜观察到A组膜表面有均匀分布的纳米PPy聚合颗粒,对照组光滑平整,显示纳米PPy与壳聚糖共混并改性后成功得到导电纳米PPy/甲壳素复合膜.将雪旺细胞与3组膜共培养,经二乙酸荧光素活细胞染色、可溶性蛋白-100免疫荧光染色及倒置显微镜观察发现,培养的雪旺细胞存活,功能状态良好;共培养2、4d后,细胞计数显示A组膜上细胞增殖数量显著多于B、C组(P＜0.05),显示A组膜表现出比对照组更强的支持细胞黏附增殖的能力.膜的体外降解观察发现各时间点A、C组膜体外降解率均显著高于B组(P＜0.05),表明同等条件下乙酰化改性处理的膜降解性能优于壳聚糖膜.结论 纳米PPy与壳聚糖可成功共混并顺利乙酰化改性,所得纳米PPy/甲壳素复合膜导电可降解,具有较好的体外生物相容性.
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蛋白组学中非2D-PAGE的一些新技术
1 引言人类细胞中的全部基因称为基因组,由这些基因编码和调控的蛋白质则称为蛋白质组.人类基因组中有30,000个基因,而人类蛋白组却有100,000多个蛋白质,产生这么多的蛋白质与蛋白质有着复杂的翻译后修饰有关,如磷酸化,乙酰化,糖基化等等.面对如此几倍于基因数量的蛋白质,蛋白组的研究急需高分辨率、高通量和全自动化的蛋白质在线分析和鉴定技术.目前,双相聚丙稀酰氨凝胶电泳(2D-PAGE)与质谱(MS)是分辨和鉴定蛋白质常用的方法,同时也存在许多缺点,人们正在不断改进和发展新技术,加速蛋白组的研究进展.
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表观遗传学与急性肾损伤
表观遗传学的研究进展表明,多种表观遗传学修饰包括乙酰化、甲基化和微RNA (microRNA,miRNA)参与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的发病机制.近期研究发现,通过药物抑制组蛋白去乙酰化酶增强组蛋白乙酰化导致更严重的肾小管损伤,并加重和延缓肾脏结构和功能的恢复.缺血/再灌注损伤肾脏发生DNA启动子甲基化的变化.MiRNA的表达也与AKI后肾小管损伤和再生调节有关.针对表观遗传学调节过程将可能有助于AKI患者的临床靶向治疗.该文对AKI表观遗传调控的新进展进行了总结,并阐述了乙酰化、甲基化及miRNA在AKI的发生发展过程中的作用机制.
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岩白菜素的部分甲基化乙酰化研究
目的:研究岩白菜素部分甲基化乙酰产物的合成.方法:在碱性条件下以碘甲烷对岩白菜素进行甲基化后乙酰化.结果:得到四个部分甲基化和乙酰化岩白菜素并阐明其结构
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丁酸钠下调CNE2鼻咽癌细胞IFN-γ诱导的吲哚胺2,3双加氧酶表达并促进其乙酰化和泛素化
目的 探讨丁酸钠(NaB)对CNE2鼻咽癌细胞γ干扰素(IFN-γ)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达调控及分子机制.方法 采用Western blot法、免疫共沉淀等方法检测鼻咽癌细胞内IDO的表达及乙酰化、泛素化修饰情况.结果 与单独加IFN-γ对照组相比,Western blot结果显示,IFN-γ和NaB联合处理的CNE2细胞IDO蛋白表达增加;免疫共沉淀实验结果表明,联合处理CNE2细胞乙酰化IDO水平和泛素化IDO水平均明显增高;与NaB和IFN-γ联合处理的CNE2细胞相比,NaB、IFN-γ和硼替佐米(bortezomib)联合处理的CNE2细胞的IDO表达量增加.结论 NaB能以剂量依赖性的方式下调鼻咽癌细胞内IFN-γ诱导的IDO表达,IFN-γγ和NaB联合处理促进IDO的乙酰化和泛素化.
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胃黏膜氨基己糖测定方法的研究及临床应用
目的研究建立适用于临床实验操作的黏膜组织氨基己糖的测定方法,探讨胃炎及胃溃疡患者胃黏膜氨基己糖的变化规律.方法采用糖蛋白的特定条件下水解释出氨基己糖,经乙酰化后与对二甲氨基苯甲醛显色反应.结果线性范围0～30 mg/L,批内CV2.8%,批间CV4.4%,平均回收率97.6%,大吸收波长530～560 nm,与经典法相比r=0.986,回归方程Y=0.998X+0.23.结论比经典法快速、准确,结果稳定,重复性好.胃炎患者胃黏膜氨基己糖均值为42 mg/g(蛋白);胃溃疡患者胃黏膜氨基己糖均值为26.2 mg/g(蛋白).两者有明显差异.
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组蛋白修饰对喉癌细胞系中 RASSF1A 基因表达的影响
目的:探讨喉癌细胞中RASSF1A基因表达水平与基因组蛋白修饰的关系.方法:应用染色质免疫沉淀技术(ChIP)和实时定量逆转录聚合酶链反应(Realtime-PCR)分析喉癌Hep-2细胞系在以下药物:5-氮杂-2 '-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxyeytidine,5-Aza-dC,DNA甲基转移酶抑制剂,5-AZa-dC)；曲古抑菌素A(TriChostatinA,TSA,组蛋白去乙酰化酶抑制剂)作用前后RASSF1A基因启动子区域组蛋白H3-K9甲基化、H3-K4甲基化、H3-K9乙酰化和RASSF1A基因表达情况.结果:TSA能轻度降低RASSF1A基因启动子区域组蛋白H3-K9甲基化水平、轻度提高H3-K4甲基化水平、明显提高H3-K9乙酰化水平.5-Aza-dC明显降低启动子区域H3-K9甲基化程度、明显提高H3-K4甲基化水平、提高H3-K9乙酰化水平,联合给予5-Aza-dC和TSA起协同增效作用.H3-K9甲基化水平降低、H3-K4甲基化和H3-K9乙酰化水平提高可使RASSF1A基因表达上调.结论:喉癌细胞中RASSF1A肿瘤抑制基因表达下调与其启动子区H3-K9甲基化、H3-K4甲基化和H3-K9乙酰化相关.甲基化抑制剂及乙酰化制剂均可使表达下调的基因表达上调.
关键词： 喉癌 RASSF1A 基因 甲基化 乙酰化 -
自噬与缺氧的研究进展
自噬(autophagy)是继凋亡后,当前生命科学热的研究领域之一.比利时科学家Christian de Duve在1955年通过电镜观察到了自噬体结构,并在1963年的溶酶体国际会议上首先提出了"自噬"这种说法,但近几年才开始阐明自噬过程的某些分子机制.正常情况下细胞内的自噬处于低水平,当受到饥饿、营养缺乏、缺氧应激等外界环境刺激时自噬被激活[1],以利于细胞存活,但当自噬水平过高时,又会因过度"吞噬"胞内物质而造成细胞死亡.近年来随着酵母模型的建立、分子生物学及基因技术的快速发展,对自噬的研究有了巨大的进展.本研究就缺氧与自噬的相互作用及其可能的分子机制做一简要论述.
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酒精代谢与表观遗传
本文综述了酒精在体内的基本代谢过程以及代谢相关酶ADH、ALDH基因多肽性;代谢相关基因的表观修饰对酒精代谢过程产生了怎样的影响及其可能的机制.指出在未来十年的乙醇研究中,表观遗传将占据重要的位置.
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纳升电喷雾串联质谱鉴定吗啡依赖2个重要相关蛋白的N端乙酰化修饰
目的:用纳升电喷雾串联质谱(nanoESI-MS/MS)鉴定吗啡依赖相关蛋白.方法:采用吗啡递增给药法建立吗啡依赖模型,用纳洛酮催促后出现典型的戒断症状,以盐水组为对照,对长期接受吗啡处理和纳洛酮催促戒断这2种状态的大鼠纹状体进行了比较蛋白质组研究,确定了33个差异点.其中差异点150和209用电喷雾串联质谱进行了氨基酸序列分析.结果:电喷雾串联质谱分析表明差异点150和209为2个重要的吗啡依赖蛋白质:G蛋白卢β1亚基和电压依赖型阴离子通道蛋白1(VDAC-1),并且这2个蛋白质都发生了N端乙酰化修饰.结论:纳升电喷雾串联质谱分析是研究蛋白质N端乙酰化的好方法.N端乙酰化对蛋白质生物学功能有重要作用.这2个蛋白质N端乙酰化的生物学功能及其与吗啡依赖的关系值得深入研究.
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纺织品中2,3,5,6-四氯苯酚残留量测定方法的研究
样品中的TeCP用碳酸钾溶液提取后,再用乙酸酐乙酰化,以正己烷提取,用气相色谱-电子俘获检测器(GC-ECD)测定,外标法定量.探讨了几种天然纤维纺织品试样提取、乙酰化等条件,方法的检出限0.02mg/kg,加标回收率88.4%～102.6%,RSD≤4.0%.
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组蛋白乙酰化、甲基化调控异常在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的意义
目的 研究组蛋白H3(H3K9、H3K14)、H4(H4K5、H4K8、H4K12、H4K16)乙酰化、组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞的表达意义及其相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测40例DLBCL,16例增生性淋巴结炎组织细胞中组蛋白H3、H4乙酰化水平、组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平并进行分析和比较.结果 在DLBCL组中,乙酰化组蛋白H3、H4和甲基化组蛋白H3K4阳性高表达显著低于增生性淋巴结炎组;而甲基化组蛋白H3K9的阳性高表达则显著高于增生性淋巴结炎组(P<0.05),差异均有统计学意义.在DLBCL组,乙酰化组蛋白H3与乙酰化组蛋白H4、乙酰化组蛋白H3与甲基化组蛋白H3K4、乙酰化组蛋白H4与甲基化组蛋白H3K4的表达均有显著的相关性(P<0.01).结论 DLBCL存在组蛋白乙酰化及甲基化调控异常,可能是致病的重要因素之一.
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尿中五氯酚和2,4-二氯-6-硝基苯酚气相色谱分析
目的 建立利用气相色谱分析检测尿中五氯酚和2,4-二氯-6-硝基苯酚的方法.方法 取空白尿液添加五氯酚和2,4-二氯-6-硝基苯酚标准品及内标2,4-二氯苯酚,经乙酸酐衍生化后,采用气相色谱法进行检测,并对提取方法、衍生化条件等进行考察.结果 经气相色谱分析,尿中五氯酚和2,4-二氯-6-硝基苯酚可得到有效分离,无杂质干扰且峰形较好.在pH值为2条件下,以环己烷作为萃取溶剂为佳萃取条件.衍生化优选条件为使用10μL乙酸酐并加入10μL无水吡啶,60℃反应30min.结论 采用气相色谱法检测尿中五氯酚和2,4-二氯-6-硝基苯酚,方法简单、结果准确,可在实际办案中应用.
关键词： 法医毒物分析 乙酰化 五氯酚 2 4-二氯-6-硝基苯酚 -
精子发生过程中的组蛋白替换
精子细胞在形态学上高度特化,其表观遗传学调控亦高度特化.组蛋白被鱼精蛋白替换为精子发生过程中独特的、非传统的表观遗传学调控方式.影响精子中组蛋白替换的主要因素有:组蛋白乙酰化修饰、组蛋白变体的影响、过渡蛋白TP1和TP2的作用、鱼精蛋白P1和P2的比值等.本文就精子发生过程中的组蛋白替换相关内容作简要综述.
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膳食与癌症
癌症不是一个单一病因的疾病,而是一种多病因联合作用的疾病.基因是细胞生长、突变的基础,即遗传学改变.但人们生活在一定的环境中,受环境、生活方式(包括膳食因素)和行为因素的影响.例如根据乙酰转化酶在机体内乙酰化降解快慢的多态性,即对鱼和肉烹调产物(杂环芳香胺)降解的快慢,将人群分成两种类型,绪果摄肉食后诱导快酶的比慢酶的发生结、直肠癌危险度要高80%.
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抗结核药物致肝功能异常112例临床分析
众所周知,抗结核药物作用于结核杆菌的同时,亦作用于肝脏,通过肝脏代谢,如异烟肼在肝内乙酰化,利福平在肝内代谢为脱乙酰基代谢产物.这就不可避免地引起肝脏的损害或对肝功产生影响,既要继续抗结核治疗,又要使损害的肝脏得已恢复,这两个问题处理恰到好处,绝非易事.
