首页 > 文献资料
-
三氧化二砷与组蛋白修饰模式的作用研究进展
组蛋白作为细胞核蛋白的基本组件,在表观遗传学中扮演重要角色.外界环境的刺激会使细胞内组蛋白翻译修饰模式改变,从而引起染色质空间结构变化,进而影响基因的表达,而基因的表达又影响着疾病的发生及发展,因此,组蛋白修饰模式的改变对基因表达、疾病的研究及治疗起着举足轻重的作用.组蛋白作为蛋白质一种,其空间修饰模式有多种,但其中主要模式包括:乙酰化修饰模式、甲基化修饰模式、磷酸化修饰模式,其次包括组蛋白变异、DNA甲基化、非编码 RNA等,其控制着组蛋白的空间结构构型,进而影响着DNA中基因的表达,从而影响着生命过程.大量数据及实验证明,三氧化二砷对癌细胞起抑制作用,但作用机制不明.目前研究者从表观遗传学及分子层面入手,主要包括三氧化二砷对乙酰化修饰模式的改变、对甲基化修饰模式的改变、对磷酸化修饰模式的改变来研究三氧化二砷对肿瘤的抑制作用机制.本文对三氧化二砷抗肿瘤作用在表观遗传学中的作用机制作一概述,旨在说明现阶段研究新进展及当前研究热方向,对未来研究发展提出个人见解,为后续研究及新药物开发提供一定的理论支持.
-
组蛋白乙酰化酶介导的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化在孕期乙醇暴露致 MEF2C 过表达中的作用
目的：探讨组蛋白乙酰化酶介导的组蛋白 H3K9ac 的高乙酰化在孕期乙醇暴露致 MEF2C 过表达中的作用，为防治乙醇所致的心脏发育异常提供新的干预靶点。方法选取 C57BL／6小鼠作为研究对象，随机分为5组：空白对照组、二甲基亚砜（DMSO）组、乙醇组、乙醇＋漆树酸组、漆树酸组。收集胎鼠心脏，采用染色质免疫共沉淀技术和 Western blot 检测小鼠心肌组织中 MEF2C 启动子区域组蛋白乙酰化酶的结合量及组蛋白 H3K9ac 的乙酰化水平。运用实时荧光定量 PCR 检测心脏核心转录因子 MEF2C mRNA 表达水平。结果胎鼠心脏核心转录因子 MEF2C 启动子区域组蛋白 H3K9ac 乙酰化水平乙醇组（1．30±0．19）显著高于空白对照组（0．45±0．01），差异有统计学意义（P ＜0．05）；且乙醇组胎鼠心脏组蛋白乙酰化酶 E1 A 结合蛋白（p300）、p300／环磷酸腺苷反应元件结合蛋白辅助因子（PCAF）、类固醇受体辅活化子-1（SRC1）在 MEF2C 启动子区域的结合量（1．68±0．08、1．08±0．05、1．18±0．05）显著高于空白对照组（0．82±0．08、0．42±0．02、0．39±0．08），差异均有统计学意义（P 均＜0．05）。胎鼠心脏 MEF2C mRNA 表达量在乙醇组（1．36±0．12）显著高于空白对照组（0．29±0．03），差异有统计学意义（P ＜0．05）。组蛋白乙酰化酶抑制剂漆树酸能够显著降低 MEF2C 启动子区域 p300、PCAF 结合量（1．52±0．05比0．63±0．09，1．13±0．04比0．45±0．04）及组蛋白H3K9ac 乙酰化水平（1．58±0．08比0．67±0．05），显著下调心脏核心转录因子 MEF2C 的表达（1．36±0．12比0．41±0．05），差异均有统计学意义（P 均＜0．05）。结论p300、PCAF 介导的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化可能是孕期乙醇暴露致心脏核心转录因子 MEF2C 过表达的重要调控因素。漆树酸能够通过抑制 p300、PCAF 在启动子区域的结合量显著降低乙醇所致的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化，从而下调 MEF2C 的过表达。
-
急性期川崎病叉头框蛋白基因组蛋白乙酰化改变的意义
目的 探讨急性期川崎病(KD)患儿叉头框蛋白P3(Foxp3)基因组蛋白乙酰化改变及其在KD免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿42例,健康同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉输注丙种球蛋白(IVIG)治疗前、后取血备检.采用染色质免疫共沉淀-荧光定量PCR检测外周血CD4+T淋巴细胞Foxp3基因组蛋白H4乙酰化及Krueppel样因子10(KLF10)、p300/CBP相关因子(PCAF)结合水平;流式细胞术检测外周血CD4+CD 25 high Foxp3+细胞(Treg)比例及KLF10、PCAF、磷酸化Smad家族成员2/3(pSmad2/3)、痒同源物E3泛素蛋白连接酶(Itch)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测Treg细胞Foxp3、转移生长因子 β(TGF-β)、Ⅱ 型转移生长因子 β 受体(TGF-βRⅡ)、Ⅰ 型转移生长因子 β 受体(TGF-βRⅠ)、酪氨酸激酶2(Tyk2)、蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)、细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA4)mRNA表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血浆TGF-β、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 1.与对照组比较,急性期KD患儿Treg细胞比例、转录因子Foxp3和抑制功能相关分子TGF-β 表达及Foxp3基因启动子组蛋白乙酰化水平均显著降低(P<0.05),其中KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL+)前述5项指标均低于无冠状动脉损伤组(KD-CAL-),差异均有统计学意义(均P<0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05).2.与对照组比较,急性期KD患儿外周血Treg细胞KLF10、PCAF表达及其与Foxp3的结合水平显著下调(P<0.05)、其中KLF10、PCAF表达与Foxp3基因组蛋白乙酰化水平呈正相关(r=0.47、0.59,均P<0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P<0.05).KD-CAL+组KLF10、PCAF表达及其与Foxp3的结合水平均明显低于KD-CAL-组(P<0.05).3.急性期KD患儿血浆TGF-β水平及Treg细胞TGF-βRⅠ/Ⅱ、pSmad2/3、Itch、CTLA4、SHP2表达显著降低(P<0.05),IL-6水平及其下游信号分子Tyk2表达明显高于对照组(P<0.05),其中KD-CAL+组前述7项指标均低于KD-CAL-组、后2项指标高于后者(P<0.05),经IVIG治疗后均明显恢复(P<0.05).结论 Foxp3基因启动子组蛋白乙酰化水平低下可能是导致急性期KD患儿Treg细胞数量及功能异常的重要因素之一.
-
南阳汉族211例SM2乙酰化分型
在已知的药物代谢反应中，乙酰化反应、氧化反应和水解反应都有代谢的多型性现象，特别是含有伯氨及肼基的药物，在体内经乙酰化代谢，均呈代谢的多型性，原因是这些药物代谢受遗传基因的影响，与人体肝脏中N-乙酰基转移酶(N-acefyltransferase)的先天活性差异有关[1]。由于上述药物在体内乙酰化后其药效及毒性会出现质或量的改变，因此乙酰化的代谢类型直接影响药物的疗效或毒性反应。作者采用张风鸾等[2 ]所用的SM2给药方案及分型标准，从1997年4月～1998年11月在本校学生及部分职工中测定了211例，现总结报道如下。1 临床资料1.1 一般资料 211例健康成人，汉族，南阳籍。男69例，女142例，年龄16～40岁，检测期均未服用任何药物。
-
组蛋白密码
遗传信息的传递是从核酸序列三联密码子的转录和翻译,到合成具有完整结构的功能蛋白质的全过程.随着对遗传信息库的认识越来越深入,人们发现基因组DNA是非遗传信息库的唯一决定因素.晚近,有作者提出"组蛋白密码"学说,使组蛋白的研究倍受瞩目.该学说表明,组蛋白氨基末端的多样化修饰扩充了遗传密码的信息库.
-
组蛋白乙酰化、DNA甲基化在肿瘤发生中的作用
组蛋白乙酰化和DNA甲基化是调控基因表达的两种主要方式,目前认为组蛋白乙酰化和DNA低甲基化可促进基因表达,而组蛋白去乙酰化和DNA高甲基化可抑制基因表达.组蛋白乙酰化和DNA甲基化这两种分子机制相互协调,实现基因表达的精细调控.
-
姜黄素通过抑制p300/CBP下调酒精诱导的胎鼠心脏GATA4及NKX2.5过表达
目的:探讨p300/CBP是否参与介导了孕期酒精暴露所致的心脏核心转录因子GATA4和NKX2.5的过表达,为防治酒精所致的先天性心脏病提供新的切入点.方法:选取C57BL/6小鼠作为研究对象,随机分为对照组、酒精组、DMSO+酒精组和姜黄素+酒精组.收集胚胎16.5d胎鼠心脏,采用染色质免疫共沉淀技术和Western blot检测小鼠心脏组织中GATA4、NKX2.5启动子区域p300/CBP的结合量及组蛋白ac-H3的乙酰化水平.运用RT-PCR检测GATA4、NKX2.5基因mRNA表达量.结果:ChIP-RT-PCR结果显示,酒精能够显著提高GATA4、NKX2.5启动子区域p300/CBP的结合量及组蛋白ac-H3的乙酰化水平(均P＜0.01).Westernblot结果表明,酒精能够显著提高胎鼠心肌组蛋白ac-H3表达水平(P＜0.01).RT-PCR结果显示,酒精能够显著上调GATA4、NKX2.5基因mRNA表达量(均P＜0.01).姜黄素(p300/CBP抑制剂)能够显著降低GATA4和NKX2.5基因启动子区域p300/CBP的结合量,纠正酒精所致的组蛋白ac-H3的高乙酰化,并下调GATA4和NKX2.5基因mRNA过表达(均P＜0.05).结论:p300/CBP介导的组蛋白ac-H3高乙酰化可能是孕期酒精暴露致GATA4、NKX2.5基因过表达的关键调控因素.姜黄素通过抑制p300/CBP在启动子区域的结合能显著降低酒精所致的组蛋白H3高乙酰化,下调GATA4、NKX2.5基因过表达,可能成为防治孕期酒精暴露致子代心脏发育畸形的干预新靶点.
-
组蛋白去甲基化酶在前列腺癌中的作用研究进展
前列腺癌是一种常见的老年男性恶性疾病,在西方国家发病率位居恶性肿瘤首位[1].前列腺癌的生长是雄激素依赖性的,晚期前列腺癌抗雄激素治疗有效,但雄激素去势治疗一段时间后,大多数终发展为雄激素非依赖性前列腺癌或去势抵抗性前列腺癌(CRPC)阶段[2-3].组蛋白修饰是基因转录调节控制组织细胞发育分化的关键分子机制.研究发现,组蛋白修饰状态改变在肿瘤发生及进展中发挥重要作用.组蛋白修饰方式包括甲基化、乙酰化、泛素化、磷酸化修饰等[4-6],但它们在基因转录调节的作用不同.目前研究表明前列腺癌的发生及发展与组蛋白去甲基化密切相关[7-9].本文重点综述组蛋白去甲基化酶在前列腺癌发生及进展中的作用.
-
组蛋白去乙酰化酶在心血管系统中的研究进展
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是细胞核内催化组蛋白去乙酰化的一类蛋白酶,参与染色体结构修饰和基因的表达调控.已被证实,HDAC参与部分心血管疾病的发生与发展,在心血管系统中具有重要作用.本文将对HDAC在心血管系统中的研究进展做一综述,旨在为心血管疾病的临床治疗提供参考.
-
HDAC6在肿瘤细胞侵袭与凋亡自噬中的作用
0 引言近年来研究发现,组蛋白脱乙酰化酶H DAC6在肿瘤的发生和转化中具有重要的作用[1].HDAC6是第Ⅱ类组蛋白脱乙酰化酶的一个特殊成员,具有两个同源的催化结构域,每一个催化结构域都具有完整的生物功能,可以使HDAC6蛋白完全激活[2].HDAC6在羧基端含有一个泛素结合的锌指结构(称为ZnF-UBP结构域)和动力蛋白结合结构域.HDAC6的泛素结合结构有利于形成压力颗粒( stress granules,SG),干扰微管的排列或者损伤动力蛋白都会阻止SG的形成;HDAC6的锌脂结构域(ZnF-UBP)在清除错误折叠的蛋白质所造成的细胞毒性方面起关键作用.
-
急性白血病的表观遗传学治疗进展
0 引言过去几十年内,针对急性白血病诊断和治疗的研究主要集中在染色体异常和相关融合基因/蛋白以及白血病细胞的生物学特征上.人类基因组测序完成后,人们开始认识到DNA非编码区域和表观修饰的重要性,并开始尝试从非编码区域和表观遗传修饰的角度人手来探讨基因选择性表达的分子机制和相关疾病的治疗方法.
-
N-乙酰基转移酶10的功能研究进展
NAT10基因是位于11号染色体 (11p13) 的单拷贝基因,其序列跨度45kb,N-乙酰基转移酶10 (N-acetyltransferase 10,NAT10) 蛋白共包含1025个氨基酸,分子量116kD,存在三个保守结构域,包括N端乙酰化酶结构域(GNAT家族),ATP/GTP结合模型,ATPase结构域 [1].NAT10属于组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferases,HATs)氨合成通用控制蛋白5 (general control of amino acid synthesis protein 5,GCN5) 相关的NAT,拥有组蛋白和非组蛋白乙酰化转移酶功能,在细胞中扮演多重角色,包括调控端粒酶活性,核糖体RNA的合成和加工,组蛋白乙酰化与染色体解聚,并且其通过乙酰化微管蛋白影响胞质分裂.近年来,随着NAT10细胞功能的深入研究,因其在细胞中定位和表达的改变与多种肿瘤细胞的侵袭力密切相关,同时也是早衰症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)的一个潜在的治疗靶点,在临床上的研究及应用价值越发受到关注.本文对其相关功能与疾病进行综述.
-
曲古霉素A促进ICR小鼠骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞
目的 探讨曲古霉素A(trichostatin A,TSA)在ICR(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)向肝细胞体外分化中的作用.方法 分离培养正常小鼠mBM-MSCs,流式细胞仪检测mBM-MSCs表面抗原,实时荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)和白蛋白(albumin,ALB),生化分析仪测定尿素分泌量,高碘酸-希夫反应测定肝细胞合成与储存糖原能力;检测TSA处理前后mBM-MSCs增殖、细胞周期和染色质结构的变化,Western blot测定mBM-MSCs组蛋白3(Histone 3,H3)和组蛋白4(Histone 4,H4)乙酰化程度改变.结果 分离所得mBM-MSCs细胞表面CD44、CD73、SCA-1呈阳性反应,部分细胞CD90、CD105、STRO-1呈阳性反应,CD11b和CD45呈阴性反应;与未添加TSA组比较,诱导7 d后,TSA处理组中AFP明显增高(P<0.05),ALB和尿素分泌量开始增多,继续诱导14和21 d后,TSA处理组中ALB分别为(0.52±0.08)和(0.92±0.08),呈明显升高(均P<0.05),尿素分泌量分别为(0.23±0.02)mmol/L和(0.36±0.03)mmol/L,也呈明显升高(均P<0.05),且细胞储存的糖原更加丰富,而AFP水平逐渐下降;经TSA处理后,TSA浓度越大对mBM-MSCs增殖的抑制效应越强,细胞处于G0/G1期的比例明显增加,细胞核中异染色质的状态由浓缩、密集变为散状、疏松;Western blot结果显示2.0 mmol/L TSA处理后mBM-MSCs组蛋白H3和H4的乙酰化水平显著增加(均P<0.05).结论 TSA能够阻断mBM-MSCs组蛋白H3和H4的去乙酰化,打破组蛋白乙酰化的平衡状态,解除转录抑制,从而促进转录,提高其向肝细胞分化的效率.
-
PHI对前列腺癌PC3细胞组蛋白甲基化及乙酰化的调控
目的 探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的分子机制.方法 采用MTT方法观察PHI对PC3细胞的生长抑制情况;TUNEL方法检测PHI对PC3细胞凋亡的影响;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、Mcl-1、Cyt-C、XIAP及组蛋白乙酰化H3、H4,组蛋白甲基化H3K9、H3K4水平的变化.结果 ①PHI能抑制PC3细胞增殖,IC50为20 μmol/L;②PHI通过下调PC3细胞Bcl-2,Caspase-9、Caspase-3、Mcl-1、Cyt-C、XIAP表达,诱导PC3细胞凋亡;③PHI使PC3细胞组蛋白乙酰化H3、H4表达增加,组蛋白甲基化H3K4水平增高,H3K9水平降低.结论 PHI可使组蛋白H3、H4高乙酰化,并调控组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平,从而抑制PC3细胞的增殖,诱导其凋亡.PHI是一种潜在抗前列腺癌的新药.
-
CBP基因沉默对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响
目的 观察小干扰RNA (siRNA)重组慢病毒介导的CREB结合蛋白(CBP)基因沉默对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的影响,并探讨其作用机制.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为4组:假手术组、PBS对照组、慢病毒介导CBP基因siRNA转染组(CBP-siRNA-Lenti组)及慢病毒介导非CBP同源序列siRNA转染组(NC-siRNA-Lenti组),建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,术后28天处死动物.分别用实时定量PCR、Western Blot检测大鼠颈动脉CBP和乙酰化核因子κB p65(NF-κB p65)的表达水平；病理组织学观察血管内膜增生情况；免疫组织化学染色对损伤血管壁增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行评估.结果 术后28天,与PBS对照组和NC-siRNA-Lenti组比较,CBP-siRNA-Lenti组CBP mRNA和蛋白的表达显著下调(P均＜0.05),CBP沉默能明显抑制新生内膜面积(0.108 ±0.008 mm2比0.238±0.022 mm2、0.252±0.016 mm2,P ＜0.05)、内膜与中膜面积比(0.706±0.062比1.483 ±0.136、1.497±0.137,P＜0.05)的增加,及下调血管壁乙酰化NF-κB p65和PCNA的表达水平(P均＜0.05).结论 慢病毒介导的CBP基因沉默能有效地抑制颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成,其机制可能与抑制NF-κB p65的过度乙酰化有关.
-
组蛋白H3K9ac乙酰化与H3K9me3甲基化修饰对小鼠心脏发育的交互调控作用
目的 探讨组蛋白乙酰化和甲基化修饰对心脏发育的交互调控作用,为先天性心脏病的防治提供新的理论基础.方法 将24只昆明孕小鼠随机分为胚胎14.5 d(ED 14.5)组、胚胎16.5d (ED 16.5)组、新生0.5 d(PND 0.5)组及新生7d (PND 7)组,采集各组胎鼠及新生小鼠心脏,每组检测标本数为6.运用比色法检测心肌组织组蛋白乙酰化酶(HATs)及组蛋白甲基转移酶(HMTs)活性;Western blot法检测心肌组织组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化(H3K9ac)及组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化(H3K9me3)表达水平.结果 比色法结果表明:HATs和HMTs活性在出生前均呈现高表达,出生后均呈现低表达;且PND 0.5和PND7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 14.5时相比,以及PND 7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 16.5时相比差异均有统计学意义(P＜0.05);小鼠心肌组织HMTs活性在PND 7时与ED 14.5和ED 16.5时相比差异有统计学意义(P＜0.05).Westemblot结果显示:组蛋白H3K9ac和H3K9me3在出生前呈现高表达,出生后呈现低表达,且PND 0.5和PND 7时小鼠心肌组织组蛋白H3K9ac和H3K9me3分别与ED 14.5和ED 16.5时相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在心脏发育过程中HATs、HMTs及组蛋白H3K9ac、H3K9me3呈现动态表达,提示HATs和HMTs介导的组蛋白H3K9ac乙酰化及H3K9me3甲基化修饰在心脏发育过程中可能发挥了交互调控作用.
-
宫内生长受限大鼠肝脏组蛋白H3乙酰化的研究
AC1蛋白表达降低,引起组蛋白H3的乙酰化水平增高,染色质的表观遗传学变化可能是肝脏某些基因转录调控变化的分子基础.
-
MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态与多药耐药的关系
目的:分析MCF-7/Adr及MCF-7细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态,初步探讨乳腺癌多药耐药的表观遗传机制. 方法:用甲基化敏感PCR技术检测两个细胞系mdr-1基因启动子甲基化状态.实时定量PCR技术检测DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs) mRNA及组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs) mRNA的表达.光密度值法检测组蛋白H3和H4乙酰化水平. 结果:MCF-7细胞mdr-1基因启动子呈现高甲基化,MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子呈现低甲基化.与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞DNMT1,DNMT3a及DNMT3b mRNA表达显著下降(P＜0.05).MCF-7/Adr细胞组蛋白H3和H4乙酰化水平较MCF-7细胞明显升高(P＜0.01).与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞HDAC1,HDAC2,HDAC7及SIRT1 mRNA的表达显著下降(P＜0.01). 结论:mdr-1基因启动子低甲基化、组蛋白H3和H4高乙酰化、DNMTs mRNA及HDACs mRNA低表达可能是介导MCF-7/Adr细胞MDR形成的重要表观遗传学因素.
-
内皮型一氧化氮合酶活性的调节与心血管疾病的研究进展
内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)是合成一氧化氮(nitiric oxide,NO)起主要作用的酶,eNOS和NO在调节血管壁结构和功能中有重要作用,参与心血管疾病的病理生理过程.eNOS活性的改变除了常见的磷酸化途径外,还涉及乙酰化、谷胱甘肽化、蛋白质间的相互作用等机制,笔者将简要阐述eNOS的基本结构和功能、eNOS活性的调节途径及其在心血管疾病中的研究进展.
-
不同品种党参游离糖成分的气相色谱-质谱研究
目的 运用气相色谱-质谱联用技术对党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen及川党参Codonopsis tangshen Oliv.的游离糖成分进行分析鉴定.方法 采用震荡提取法从党参中提取多种游离糖化合物,游离糖成分经乙酰化后利用气相色谱-质谱法分析其组成、结构.结果 通过气相色谱-质谱分析结合标准品数据以及相关文献,鉴别出3种党参中7种游离糖成分,分别为山梨糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、果糖、肌醇、蔗糖,游离糖含量存在差异.结论 气相色谱-质谱联用技术可以对党参游离糖成分进行定性及定量分析,为党参品质分析提供科学依据.
