红景天苷在大鼠体内的代谢途径研究

目的 研究红景天苷在大鼠体内的代谢物谱,分析其代谢途径.方法 大鼠ig给予红景天苷200 mg/kg后,收集胆汁、尿液、粪便和血浆,应用高分辨质谱技术鉴定可能的代谢产物,分析红景天苷在大鼠体内的代谢途径.结果 共检测到除原型药物外的20个代谢产物,提示红景天苷在大鼠体内的主要代谢途径为葡萄糖化、乙酰化、硫酸化和甲基化.结论 红景天苷在大鼠体内经历了广泛的I相和II相代谢,代谢物主要通过尿液排出.应用峰面积归一化法计算主要代谢产物相对生成量,提示红景天苷在大鼠尿、粪、胆汁中的主要代谢途径为II相代谢,血浆中红景天苷原型药物为体循环系统中主要暴露物质.

曲古抑菌素A对人结肠癌细胞株Colo205组蛋白乙酰化及ING1b mRNA表达的影响

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)对人结肠癌细胞株Colo205组蛋白乙酰化及ING1b mRNA表达的影响.方法:培养人结肠癌细胞株Colo205,对照组(A组)不加TSA干预,实验组分3组(B、C、D组),分别应用组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂TSA50、100、200μg/L的浓度作用于人结肠癌细胞株Colo205,24h后用染色质免疫沉淀(ChIP)方法检测4组Colo205细胞乙酰化组蛋白H3结合的DNA情况,以了解抑癌基因ING1b相关组蛋白H3乙酰化的变化,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ING1bmRNA的表达.均用实时定量PCR方法分析.结果:A组人结肠癌细胞株Colo205组蛋白H3乙酰化水平及ING1b mRNA Ct值为23.25±0.08和23.32±0.05,经TSA干预后,C、D组组蛋白H3乙酰化水平较A组增加(P<0.05),2~(-△△Ct)值分别为4.21和4.38,ING1b mRNA表达亦比A组高(P<0.05),2~(-△△Ct)值分别为4.52和4.62.组蛋白H3乙酰化水平及ING1b mRNA表达C、D组间无显著性差异(P>0.05),组蛋白H3乙酰化水平及ING1b mRNA表达B组与A组比较无显著性差异(P>0.05).2~(-△△Ct)值分别为1.12和1.33.同时观察到C、D组Colo205细胞较A、B组细胞生长明显受抑制.结论:人结肠癌细胞株Colo205组蛋白去乙酰化可能是导致基因ING1b表达沉默的主要原因之一,100μg/L的TSA能较好地提高组蛋白乙酰化水平,并有效地激活去乙酰化所致ING1b基因转录,诱导该基因表达,从而抑制肿瘤细胞生长.

079野甘草中能增强神经生长因子活性的乙酰化黄酮苷

药物乙酰化与临床用药

探讨药物的乙酰化与临床用药的相互关系.从遗传基因所决定的有关机体对药物进行乙酰化处理过程, 来谈药物作用于人体的毒、副反应和药效、药动作用.凡药物对人体有肝、肾功能损害的均与乙酰化有关.对基础理论研究和临床医师掌握用药的个体化原则, 防范由遗传变异引起的药物反应, 能起到积极的参考作用.

肌内注射安痛定致过敏性休克1例

安痛定是临床上广泛应用的解热镇痛药物,其对上呼吸道感染引起的发热、头痛、肌肉酸痛有较好的疗效[1].安痛定注射液每支2 mL,含氨基比林100 mg、安替比林40 mg、巴比妥18 mg,为一复方制剂,其中氨基比林可使体内蛋白质乙酰化,进而诱发过敏反应.有文献报道,安痛定可引起各种过敏反应,轻者表现为皮疹,重者可出现过敏性休克[2],文献报道,肌内注射安痛定可导致过敏性休克死亡[3].现将我院1例肌内注射安痛定导致过敏性休克的抢救过程报道如下.

Salsalate能够成功逆转FTD动物模型中tau相关功能紊乱

近日，nature medicine上的一项研究称，乙酰化的tau蛋白是该蛋白的一种毒性形式，能够促进神经退行性损伤和认知缺陷的发生。Salsalate能够成功逆转FTD小鼠模型的疾病表型，降低脑中tau蛋白水平，挽回记忆损伤，并帮助小鼠避免下丘脑萎缩的发生。

用腺苷制备腺嘌呤的合成新工艺研究

将腺苷通过乙酰化反应制备得到乙酰腺嘌呤,然后再于氢氧化钠溶液中水解直接制备得到腺嘌呤,工艺简便易行,收率高,是适用工业化生产的绿色环保新工艺.

服用乙酰螺旋霉素引起药疹1例

乙酰螺旋霉素是从Streptomyces ambofaciens的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素.以螺旋霉素为原料,经乙酰化制得了乙酰螺旋霉素.具有广谱抗菌、口服奏效快、低毒的特点,广泛应用临床.笔者近年发现服用该药后引起药疹一例,报告如下.

反相-高效液相色谱法测定安必丁中双醋瑞因的含量

双醋瑞因(diacerein)是由大黄酸乙酰化后生成的化合物(见图1).研究表明它具有治疗骨关节炎[1,2]、牛皮癣[3]和肾病[4]等作用.目前,瑞士赞贝臣制药有限公司(TRB Pharma S.A.)开发的新药安必丁(双醋瑞因胶囊)已经上市,其有效成分为双醋瑞因.

禹州漏芦含药血清对人多发性骨髓瘤细胞株α-微管蛋白乙酰化水平热休克蛋白90分子伴侣功能影响的研究

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）又称浆细胞骨髓瘤，是浆细胞恶性克隆大量增生，出现以广泛溶骨病变和（或）骨质疏松、肾功能损害为特征的恶性肿瘤［1］。瘤细胞增殖比例低（通常＜1．5%）、多药耐药，且治疗反应差，终因多药耐药而复发。迄今，MM作为一种不可治愈的恶性肿瘤正严重地危害着人们的健康，因此，寻找新的植物来源的药物显得非常必要。

脱乙酰的甲壳素衍生物——羧甲基壳聚糖的不良反应

甲壳素(chitin)经高浓度强碱、高温处理后会有部分N-乙酰基脱落.又称为壳聚糖或几丁糖(chi-tosan).按脱乙酰程度的不同,β-(1-4)-linked-D-glucosamine(脱乙酰)和N-acetyl-D-glucosamine(乙酰化)两种结构单体的随机组成比例不同.

乙酰化肌细胞增强因子2D调节Nur77基因对T细胞凋亡的影响

目的:Nur77是介导T细胞凋亡的重要基因,它的激活需要第二信使钙离子,而Nur77基因启动子的钙反应元件是转录因子肌细胞增强因子2D的结合位点.探讨在Nur77诱导T细胞凋亡过程中肌细胞增强因子2D是否可以被乙酰化,以及通过调节Nur77基因乙酰化对T细胞凋亡的影响.方法:实验于2006-11/2007-09在吉林大学第一医院血液肿瘤科完成.①材料:大肠杆菌DH5α、pcDNA3质粒由吉林大学第一医院中心研究室保存.pET32M质粒、Flag-p300质粒、pSilencerTM-p300 RNAi质粒由香港科技大学Zhengguo Wu博士馈赠.NFATp质粒由哈佛大学Yun Chen博士馈赠.Jurkat细胞由吉林大学第一医院血液肿瘤科提供.②实验方法:PCR法产生全长的Nur77和依赖Nur77的荧光报告基因被亚克隆到pcDNA质粒中,产生的肌细胞增强因子2D(1-514)、(1-121)、(1-300)、(301-514)各片段以及含4个赖氨酸(K245/K250/K267/K279)位点突变为精氨酸位点的肌细胞增强因子2D (4KR)突变体亚克隆到pcDNA后在氨基端含有Flag抗原簇,于细菌表达载体上进行质粒构建,验证正确的质粒使用脂质体DMRIE-C进行转染.③实验评估:将Nur77荧光报告基因与肌细胞增强因子2D、p300、NFATp共转染到Jurkat细胞中,检测p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77转录的影响.免疫沉淀法检测内源性肌细胞增强因子2D是否能够被乙酰化,以及阻滞p300表达后是否影响其乙酰化.体外乙酰化法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化位点.荧光素报告分析法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化功能缺失对Nur77转录活性的影响.采用流式细胞仪检测其功能缺陷对Nur77诱导T细胞凋亡的影响.结果:①肌细胞增强因子2D与NFATp的二聚体虽然不能促进Nur77的转录,但p300、NFAT、肌细胞增强因子2D的三聚体却能明显促进Nur77的转录,且p300与肌细胞增强因子2D的二聚体也明显促进Nur77的转录.②PMA/Iono活化钙信号传导通路后,肌细胞增强因子2D被乙酰化.当内源性p300RNAi后,p300的表达被阻滞时,肌细胞增强因子2D的乙酰化水平显著下降.③K245,K250,K267,K279氨基酸同时突变可以使肌细胞增强因子2D乙酰化程度大部分丧失,说明在体外这4个赖氨酸位点是肌细胞增强因子2D的主要乙酰化位点.④与空载体比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D可使Nur77转录功能提高2.48倍;与转染野生型的肌细胞增强因子2D比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D能降低Nur77基因70.4%的转录功能.⑤与空载体比较,Nur77表达能够促进T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从4.3%提高至16.3%;共表达野生型肌细胞增强因子2D与Nur77能够进一步促进T细胞的凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%提高到31.0%;但肌细胞增强因子2D乙酰化功能缺失的突变体肌细胞增强因子2D明显降低Nur77介导的T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%降低到9.2%.结论:p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77的转录起主要作用.肌细胞增强因子2D在Nur77诱导的T细胞凋亡过程中可以被乙酰化,乙酰化的肌细胞增强因子2D通过上调Nur77基因的转录来促进T细胞凋亡.

壳聚糖乙酰化甲壳素材料与许旺细胞的体外相容性

背景:天然甲壳素溶解性差,不易加工处理.传统工艺制备的甲壳素存在较多致炎性杂质蛋白.目的:观察由高纯度壳聚糖乙酰化制备的甲壳素材料与许旺细胞的体外生物相容性.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-0912007-10在南通大学医学院组织学与胚胎学教研室及江苏省神经再生重点实验室完成.材料:新生一两天的SPF级SD大鼠坐骨神经和臂从神经用于培养许旺细胞,自制壳聚糖膜,脱乙酰度为92.5%.方法:将脱乙酰度92.5%的壳聚糖膜浸入5%的醋酐甲醇溶液中进行乙酰化反应后制备甲壳素膜.体外接种许旺细胞分别至壳聚糖膜和甲壳素膜上.主要观察指标:共培养6 d后通过抗S-100蛋白免疫细胞化学的方法鉴定,并进行光镜、扫描电镜观察细胞形态.CCK-8试剂检测在壳聚糖膜浸出液、甲壳素膜浸出液、L-15培养基、有机锡浸出液中生长2,4,6 d许旺细胞的细胞活力.结果:抗S-100蛋白免疫细胞化学的鉴定结果提示这类细胞为许旺细胞:光镜、扫描电镜观察均发现细胞能够在壳聚糖膜和甲壳素膜表面正常生长,细胞贴附牢固,外形饱满,大多数细胞晕长梭形,边缘清晰,细胞增殖情况良好.细胞活力检测的结果显示壳聚糖膜浸出液和甲壳素膜浸出液中生长的许旺细胞与L-15培养基中生长的细胞相比,细胞活力无明显差异(P＞0.05).有机锡浸出液中生长的许旺细胞活力均低于其他浸出液,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:壳聚糖乙酰化制备的甲壳素材料与许旺细胞体外生物相容性良好.

丁酸钠诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

背景:组蛋白乙酰化是诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的机制之一.目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对体外培养的骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响,并分析其诱导分化的机制.方法:分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行鉴定.取第2代骨髓间充质干细胞,应用1 mmol/L丁酸钠诱导其向心肌样细胞分化.结果与结论:实验分离培养的骨髓间充质干细胞高表达CD90,CD29;低表达CD45,CD31.加入丁酸钠后细胞增殖能力及组蛋白去乙酰化酶活性明显降低,但未发生明显凋亡现象,表明丁酸钠具有低毒性的特征.real-time PCR检测显示,经丁酸钠诱导后细胞GATA-4,MEF-2c,β-MHC等心肌细胞早期标志基因表达率明显增高(P < 0.05).Western blot检测发现,经丁酸钠诱导后细胞心肌细胞特异性蛋白连接蛋白43和肌钙蛋白T的表达明显增高.免疫荧光测得的肌钙蛋白T表达结果与Western blot一致.说明丁酸钠能够有效诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,其机制可能与抑制组蛋白去乙酰化酶活性,增强组蛋白的乙酰化有关.

染色质修饰和组蛋白修饰在成骨分化中的作用

背景:成骨分化是骨组织工程研究中的重要组成部分.染色质修饰和组蛋白修饰在成骨分化过程中的作用日益受到重视.其中甲基化和乙酰化是染色质修饰和组蛋白修饰的重要方式,也是目前骨组织工程研究中的热点问题.目的:阐述甲基化和乙酰化对成骨分化过程的影响,揭示其在染色质和组蛋白修饰中的作用机制,总结在骨内染色质和组蛋白修饰中的作用及其相关疾病.方法:由计算机检索2007年1月至2016年5月PubMed数据库相关文章,检索词为"osteogenesis,methylation,acetylation,epigenetics",语言设定为英文,检索文献类型为研究原著.按纳入和排除标准对文献进行筛选,分别对DNA甲基化及其生物调节、组蛋白翻译后的甲基化和乙酰化修饰及其调控、骨内DNA修饰和组蛋白修饰及其相关疾病等几个方面加以归纳和总结.结果与结论:①检索文献总计102篇,排除与检索主题关联性小、重复性文献,终纳入符合标准文献42篇;②综述结果揭示,甲基化和乙酰化是重要的染色质和组蛋白修饰方式,在成骨分化过程中具有重要作用;③骨源性基因的染色质和组蛋白修饰呈现动态化和特异性表现;④DNA甲基化利于基因沉默,组蛋白乙酰化利于成骨细胞相关基因表达,它们在细胞呈递和表观信息遗传中扮演了重要角色.

“一锅法”制备乙酰灯盏乙素苷元

目的 探索制备乙酰灯盏乙素苷元的方法.方法 以灯盏乙素为起始原料,与乙酸酐和吡啶共回流,经一步反应获得四乙酰灯盏乙素苷元和部分乙酰化产物6,7,4'-O-三乙酰基灯盏乙素苷元.结果与结论 采用“一锅法”合成了乙酰灯盏乙素苷元,总收率在80％以上.乙酰灯盏乙素苷元和其乙酰化产物6,7,4'-O-三乙酰基灯盏乙素苷元均是灯盏乙素结构改造和修饰的重要中间体.与现有的两步合成法相比,本方法具有合成路线短、收率高、反应条件简单等特点,该法为同时获得2个重要中间体提供了有价值的参考.

乙酰化对二甲基精氨酸二甲胺水解酶1表达水平的影响

目的 以去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(NaBu)和乙酰转移酶p300作为乙酰化作用因素,探讨人胚肾HEK293细胞中乙酰化对二甲基精氨酸二甲胺水解酶1 (DDAH1)表达水平的调节.方法 应用real-time PCR方法检测NaBu刺激或转染野生型及突变型p300表达载体后DDAH1 mRNA表达水平的变化;应用Western blot方法检测NaBu和p300对DDAH1蛋白表达水平的影响.结果 Real-time PCR结果显示NaBu以时间依赖方式上调DDAH1 mRNA表达水平,同时转染野生型p300表达载体显著上调DDAH1 mRNA水平,而突变型p300作用不明显;Western blot结果显示NaBu及野生型p300可提高DDAH1蛋白表达,但突变型p300无此作用,与对DDAH1 mRNA表达的作用一致.结论 乙酰化可上调HEK293细胞中DDAH1 mRNA和蛋白表达水平.

泛素-蛋白酶体系统在T细胞免疫和哮喘中的作用

1 泛素-蛋白酶体系统的结构及其功能蛋白的翻译后修饰与基因的转录和翻译一起共同调节蛋白的表达水平和活性,常见的蛋白翻译后修饰包括磷酸化、乙酰化、甲基化等.泛素化是蛋白翻译后修饰的一种,可对细胞功能进行广泛而复杂的调控.泛素化是指在泛素活化酶(Ubiquitin activating enzyme,E1)、泛素结合酶(Ubiquitin conjugating enzyme,E2)、泛素连接酶(Ubiquitin protein ligase,E3)的连续作用下,泛素被连接到目标蛋白上,标记蛋白进入蛋白酶体降解或改变蛋白的活性.泛素化是可逆的,去泛素化酶(Deubiquitinating enzyme,DUB)对泛素化进行负向调节.泛素、E1、E2、E3和蛋白酶体、DUB构成了泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)[1].UPS对底物作用的特异性主要由泛素修饰类型、E3和DUB决定.

组蛋白去乙酰化酶3在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 检测人胃癌组织中组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)的表达水平,分析其与胃癌临床病理特征的关系.方法 应用实时荧光定量PCR法及Western印迹检测30例配对人胃腺癌和癌旁组织中HDAC3表达的差异;免疫组织化学方法检测90例胃腺癌患者的术后癌组织中HDAC3的表达水平,并分析其表达与胃腺癌临床病理学指标的关系.结果 30例配对人胃腺癌组织中HDAC3 mRNA表达量(5.03±3.31)显著高于癌旁组织(3.55±2.79)(P＜0.05);不同分化组癌组织HDAC3蛋白表达量高于癌旁组织,高分化(0.74 ±0.06 vs 0.35±0.10,t=17.727,P＜0.01),中分化(1.26±0.08 vs0.90±0.10,t=15.652,P＜0.01),低分化(1.29±0.14 vs 0.75±0.20,t=12.000,P＜0.01);免疫组化结果显示90例胃腺癌组织中HDAC3蛋白表达阳性率为80％ (72/90),癌组织中HDAC3表达强度与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期和淋巴节转移相关(P＜0.05).结论 HDAC3可能与胃腺癌的发生、发展有关;胃腺癌组织中HDAC3高表达在胃腺癌的侵袭力及淋巴结转移中起到一定的作用.

肺炎球菌荚膜多糖中氨基己糖基团定量检测方法的优化及验证

目的 优化肺炎球菌荚膜多糖中氨基己糖基团的定量检测方法,并进行验证.方法 对肺炎球菌荚膜多糖中氨基己糖基团定量检测方法的水解条件(盐酸溶液分别为4、8、10 mol/L,时间分别为0.5、1、2、4、4.5、5、6h)和乙酰化条件(温度分别为80、90、100℃,时间分别为30、45、60、90、120 min)进行优化,并验证该方法的专属性、线性、准确性、精密性及耐用性.结果 佳水解条件为10 mol/L盐酸溶液水解2h;佳乙酰化条件为90℃水浴45 min.该方法可特异性检测肺炎球菌荚膜多糖中氨基己糖的含量;D-盐酸氨基葡萄糖对照品溶液浓度在100 ～ 500 μg/ml时,与A 530值呈良好的线性关系,R2均＞0.99;3次检测11个血清型肺炎球菌荚膜多糖样品的加标回收率均在90％～ 110％间;该方法的重复性及中间精密度的变异系数(CV)均＜2％;6份D-盐酸氨基葡萄糖对照品溶液乙酰化不同时间的CV值为1.3％ ～ 5.2％.结论 该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密性及耐用性,可用于肺炎球菌荚膜多糖中氨基已糖含量的检测.