首页 > 文献资料
-
致痫剂青霉素对新生大鼠锥体神经元细胞内游离钙离子浓度的影响
神经元异常放电的电生理基础是细胞内外离子的跨膜运动.本文报道应用激光扫描共聚焦显微镜技术观察青霉素(penicillin, PNC)致痫时锥体神经元Ca2+的跨膜流动情况.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 青霉素 神经元 钙通道 -
电磁脉冲对恒河猴眼损伤的研究
目的通过观察受电磁脉冲(EMP)照射恒河猴,探讨猴角膜、晶状体和视网膜的病理变化,研究EMP对视觉系统的影响.方法场强为6×104V/m的EMP照射恒河猴,采用Feulgen、AgNOR、PI染色方法,以激光扫描共聚焦显微镜和图像分析技术对眼辐射损伤进行检测.结果 EMP照射后30天死亡猴晶状体上皮细胞的AgNOR和DNA含量下降,照射后136、265和365天,AgNOR和DNA含量升高.眼组织对EMP损伤敏感程度依次为:晶状体》角膜》视网膜.晶状体后囊水肿,空泡和液泡形成,白内障发生.结论高场强EMP可引起视觉系统的损伤,晶状体对EMP损伤为敏感,可导致白内障的发生.
关键词： 电磁脉冲 猴 激光扫描共聚焦显微镜 晶状体 白内障 -
电磁脉冲对眼辐射损伤的研究
目的:通过电磁脉冲(EMP)辐照成年犬,长期动态观察角膜、晶状体及视网膜的病理变化,探讨EMP对视觉系统的影响.方法:高场强(2～12)×104 V/m的EMP、1～30次辐照实验犬,采用Feulgen,AgNOR和PI 染色方法,以激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和图像分析技术进行检测.结果:EMP辐射可使晶状体上皮细胞AgNOR和DNA含量下降,前皮质水肿,白内障发生.对EMP损伤敏感程度依次为:晶状体＞角膜＞视网膜.损伤具有剂量-效应相关性.结论:高场强EMP可引起犬晶状体前皮质混浊、白内障发生,损伤具有剂量-效应相关性.
关键词： 电磁脉冲 犬 激光扫描共聚焦显微镜 晶状体 白内障 -
激光扫描共聚焦显微镜及其在生物医学中的应用
激光扫描共聚焦显微镜有效地排除了非焦平面信息,提高了分辨率及对比度,使图像更为精确清晰.现广泛用于荧光定性、定量测定、三维图像重建、活细胞动态荧光测定、荧光光漂白恢复及激光显微外科手术等方面.本文描述了激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其在生物医学研究中的应用.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 光学切片 三维成像 -
运动心脏结构可复性的研究
为了进一步探讨运动心脏结构与功能的可复性问题及其与病理心脏的本质差异,通过实验动物模拟运动心脏,观察了停止运动训练8周后心脏重量和某些超微结构的变化,并应用激光扫描共聚焦显微镜与新一代钙荧光指示剂Fluo-3/AM负载方法对心肌活细胞内具有生物活性的游离钙的动态变化进行了研究.结果显示,经过12周耐力训练后,心肌活细胞内游离钙浓度静息值无显著性改变,心肌收缩时其游离钙浓度峰值较对照组显著增高11%(P＜0.05);心肌细胞内心房特殊颗粒的体密度、面密度及数密度分别显著增高41%、12%及5%;心肌细胞线粒体体密度及其与肌原纤维比值分别显著增高60%和61%,线粒体内膜和嵴体积密度显著增高18%;心肌毛细血管与肌纤维的比值显著增高78%;心肌毛细血管腔体密度和面密度分别显著增高28%和13%.停止训练8周后,心肌收缩时其胞内游离钙浓度峰值较训练时显著降低14%(P＜0.05);心肌细胞内心房特殊颗粒的体密度显著降低25%;心肌细胞线粒体体密度及其与肌原纤维比值分别显著降低25%和36%,线粒体内膜和嵴体积密度显著降低11%;心肌毛细血管与肌纤维的比值分别显著降低29%.心肌毛细血管腔体密度和面密度分别显著降低14%和12%,基本恢复到正常对照水平.研究结果表明,运动心脏超微结构和胞内钙产生了良好的适应性改变,心肌收缩时收缩结构钙可获得量增多,构成运动心脏收缩性、氧化代谢及自分泌功能增强的重要机制.停训后运动心肌细胞内游离钙,心房特殊颗粒,心肌线粒体及毛细血管结构适应性改变的消退证实运动心脏结构与功能改变具有可复性.
关键词： 停止训练 运动心脏 细胞内游离钙 心肌显微形态计量 激光扫描共聚焦显微镜 -
ATM基因在电离辐射诱导下对BRCA1、RAD51表达的影响
目的 探讨60Co γ射线照射前、后,BRCA1、RAD51蛋白在GM、ATM+AT、AT细胞中的 表达.方法 应用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜,观察GM、ATM+-AT、AT细胞在0和10Gy60Co γ射线照射后,BRCA1、RAD51蛋白在上述细胞中的定位及表达并进行定量分析.结果 60Coγ射线照射前,BRCA1、RAD51蛋白在GM、ATM+-AT、AT细胞中仅有少量表达并且无共定位表达,其中在AT细胞中表达量低;10 Gy 60Co γ射线照射后,BRCA1、RAD51在GM、ATM+-AT、AT细胞中表达量增高,其中GM、ATM+-AT细胞呈现共定位表达,AT细胞无共定位表达;GM、ATM+-AT细胞中BRCA1、RAD51蛋白表达量与AT细胞比较差异有统计学意义(P＜0.01);GM细胞中BRCA1、RAD51蛋白表达量与ATM+-AT细胞比较差异也有统计学意义(P＜0.01).结论 GM细胞和ATM+-AT细胞中存在ATM基因,ATM在射线等因素诱导下可以激活其下游基因BRCA1、RAD51,并且使这两种蛋白表达或表达量增加并且相互作用,共同完成辐射损伤后的细胞修复;外源性ATM转入正常GM细胞后,由于外源性的ATM基因不能完全弥补内源性的ATM突变基因的功能,对其下游基因Brca1"部分"磷酸化,表现为BRCA1、RAD51蛋白表达量均较GM细胞低.
关键词： atm基因 BRCA1 RAD51 电离辐射 激光扫描共聚焦显微镜 -
3种抗真菌生药活性成分对两种真菌细胞遗传物质的影响
目的研究抗真菌生药活性成分对真菌细胞遗传物质的影响,以期发现其抗真菌的作用机理.方法把对照组及用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,从而定量描述细胞形状、面积和DNA,RNA含量.结果用药组细胞形态及DNA,RNA含量发生不同变化.结论澳洲茄胺、紫檀和白鲜碱直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成以至不能完成正常细胞周期,从而抑制真菌生长甚至导致死亡.
-
结肠定位壳聚糖包衣氟尿嘧啶脂质体的制备、形态与体外释放
目的探讨药物结肠定位壳聚糖包衣脂质体的制备、形态及其在体外释药特性.方法用罗丹明B异硫氰酸(RBITC)和Bodipy-PC分别标记壳聚糖和磷脂,用前体脂质体方法制备氟尿嘧啶脂质体,利用激光扫描共聚焦显微镜观察壳聚糖包衣脂质体的形态;考察壳聚糖包衣脂质体在人工胃液、人工肠液和人工结肠液中的释放.结果脂质体包衣前后粒径分别为2.071和2.750 μm.壳聚糖能较好地包覆脂质体;3种脂质材料不同的包封率分别为99%,61%,72%.未包衣的脂质体在人工胃液中4 h已释放完全,而包衣脂质体在人工胃液4 h释放6.3%,在人工肠液中8 h仅释放6.8%,但在人工结肠液中释药明显加快,t1/2为3.63 h.结论结肠定位壳聚糖包衣脂质体制备可行,在人工结肠液中,体外释放符合Higuchi方程.
-
比较布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2+移动的影响
目的:应用激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2+移动的影响.比较它们的心肌毒性.方法:原代培养新生SD大鼠的心室肌细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜观察心室肌细胞内钙荧光强度的变化,比较不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对KCl诱导的荧光强度峰值的影响.结果:10μmol/L时两种局麻药对KCI诱导的大鼠心室肌细胞内钙荧光强度的变化无显著影响;50pμmol/L和100μmol/L时两种局麻药明显抑制细胞内钙荧光强度的变化;相同浓度的布比卡因抑制作用大于罗哌卡因.结论:同浓度布比卡因对心室肌细胞Ca2+移动的抑制作用大于罗哌卡因,表明布比卡因心肌毒性大于罗哌卡因.
关键词： 布比卡因 罗哌卡因 心室肌细胞 激光扫描共聚焦显微镜 细胞内钙离子 -
应用激光扫描共聚焦显微技术观察PDT导致癌细胞内钙水平的变化
目的:肿瘤光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)是现代癌症治疗中一种新的治疗法,为了更好地认识光动力诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制.方法:用Fluo-3AM荧光探针负载培养的人肺腺癌GLC-82细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内Ca2+浓度的变化.结果:激光单独照射前后GLC-82细胞内Ca2+的浓度变化不大;在PDT作用下,激光照射前GLC-82细胞内Ca2+的浓度变化明显.结论:本方法灵敏、简单、快速,能实时监测细胞内游离钙的变化.
关键词： 光动力治疗 钙离子 激光扫描共聚焦显微镜 -
二价锰和三价锰对神经瘤细胞线粒体膜电位的影响
采用0.25、0.50、0.75 mmol/L的二价锰和三价锰分别对神经瘤细胞(SH-SY5Y)染毒24 h,通过线粒体特异性染料罗丹明123进行荧光标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察染毒细胞的膜电位变化,并与未染毒的细胞对照组进行比较.结果表明二价锰和三价锰均可引起线粒体膜电位的改变(P＜0.05),且随剂量增高,有降低趋势.此外,在0.50 mmol/L和0.75 mmol/L剂量下,三价锰引起的线粒体膜电位改变比二价锰更为明显.提示线粒体膜电位的改变是锰神经细胞毒性作用的重要环节.
关键词： 锰 激光扫描共聚焦显微镜 线粒体 膜电位 -
旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究
为了确定旋毛虫Ts87抗原在虫体上的分布及其是否属于旋毛虫排泄分泌(ES)抗原,借助激光扫描共聚焦显微镜,采用免疫组化和Western Blotting等方法进行研究.结果表明:旋毛虫幼虫皮质层富含Ts87蛋白,而且Ts87抗原是旋毛虫排泄分泌抗原中的组分.
关键词： 旋毛虫 免疫组化定位 激光扫描共聚焦显微镜 -
萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞p53及PCNA蛋白表达
目的 研完热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃粘膜组织细胞p53及PCNA表述状态,以探讨长期热威饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法 采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,选取大鼠腺胃胃奏组织行激光扫描共聚焦显微镜标本翻备并对组织细胞结构的变亿进行动态观察.结果 正常姐胃粘膜组织细胞未见阳性表达.热盐水组在第12周在细胞核中可见p53及PCNA阳性表述,到24周,32周及65周时表达更加明显.双标记中可见两者共同表达.结论 热盐水长期灌胃可导致胃粘虞出现萎缩,p53及PCNA表达增加,在萎缩性胃炎形成过程中,p53及PCNA蛋白起着重要的调节作用.
关键词： 热盐水 胃粘膜 P53 PCNA 激光扫描共聚焦显微镜 -
利用优化的显微技术观察和定位Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达
目的 优化细胞免疫荧光染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术的实验步骤,观察并定位Merm 1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达,以期对后续深入研究Merm1/Wbscr22的分子功能提供技术支持.方法 采用Western blot 及细胞免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察Merm1/Wbscr22在NCI-H1299细胞的表达与定位,改进并优化免疫荧光染色实验步骤.结果 Merml/Wbscr22蛋白在NCI-H1299细胞内过量表达,并定位于细胞核内.细胞免疫染色步骤显著地影响Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色及F-actin、Merm1/Wbscr22、细胞核DNA染色荧光的强度.结论 结合细胞免疫荧光染色技术与激光扫描共聚焦显微镜技术可以清楚地观察Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299的表达与定位,该技术的优实验步骤是细胞固定、透膜、封闭、Texas Red-鬼笔环肽标记F-actin、一抗结合、二抗结合、DAPI标记细胞核DNA,后共聚焦显微镜成像,这样既能减少Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色,各组分荧光强度又足够清晰利于观察.
-
免疫荧光及激光共聚焦技术检测热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜组织细胞HSP60及ras蛋白表达
目的 研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(GAG)胃黏膜组织细胞HSP60及ras表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法 采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,选取大鼠腺胃胃窦组织行激光扫描共聚焦显微镜标本制备并对组织细胞结构的变化进行动态观察.结果 正常组胃黏膜组织细胞未见阳性表达,热盐水组在第12周,在细胞质中可见HSP60及ras表达,呈均质颗粒状,到24周、32周及65周时表达更加明显.双标记中可见HSP60和ras共同表达.结论 热盐水长期灌胃可导致胃黏膜出现萎缩,HSP60和ras表达增加,提示在胃黏膜萎缩形成过程中,HSP60与ras蛋白参与了重要的细胞分化调节过程.
-
激光扫描共聚焦显微镜在细胞凋亡研究中的应用
细胞凋亡(apoptosis)是不同于细胞坏死的一种细胞主动死亡方式,并由特定的基因控制.凋亡细胞在形态上出现变圆皱缩、染色质浓缩边集、核碎裂、凋亡小体形成等变化,并终由非炎症过程清除.由于细胞凋亡独特地影响着机体的细胞发育和代谢,在监测和清除肿瘤细胞与突变细胞等方面也可能发挥重要的作用,近年来受到了细胞生物学、分子生物学、免疫学等多学科的广泛关注.
-
丹参酮ⅡA对鼠肝星状细胞活化Ca2+效应的抑制作用
目的 研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法 健康SD大鼠32只,按随机数字表随机分为4组:肝纤维化模型丹参酮ⅡA组(8只) 给予用精制橄榄油配制的 40%CCl4 溶液,9 周后腹腔注射丹参酮ⅡA(15 mg/kg)15 d;肝纤维化模型对照组(8只)给予用精制橄榄油配制的40%CCl4 溶液,9周后灌服生理盐水15 d;正常大鼠丹参酮ⅡA组(8只)仅给予等量精制橄榄油9周,然后腹腔注射丹参酮ⅡA(15 mg/kg)15 d;正常对照组(8只)仅给予等量精制橄榄油,9周后灌服生理盐水15 d.结束后,经下腔静脉取血并分离血清.采用盲法,用上述 10%血清培养 HSCs24 h并负载好 Fluo23PAM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测 HSCs[Ca2+]i.结果 ①经正常大鼠丹参酮ⅡA组及肝纤维化模型丹参酮ⅡA组的血清预处理的 HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0.05);且二者与正常对照组相比也均差异有统计学意义(P<0.05).②经正常大鼠丹参酮ⅡA组及肝纤维化模型丹参酮ⅡA组血清预处理 HSCs后加入 AngⅡ,HSCs[Ca2+]i荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P<0.01).结论 丹参酮ⅡA能抑制肝星状细胞活化[Ca2+]i的升高,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
-
共聚焦显微镜检测扩张型心肌病患者心肌连接蛋白43表达的研究
目的 探讨激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测晚期扩张型心肌病(DCM)患者经心脏移植手术切除的心肌连接蛋白43(Cx43)表达变化及其意义.方法 应用冰冻切片、免疫荧光和LSCM等技术,对3例DCM和1例室间隔缺损(对照组A)患者经心脏移植手术切除的心脏及3例颅脑损伤死者(对照组B)心肌Cx43蛋白表达情况进行定位和定量研究.结果 心肌Cx43在镜下呈斑点状翠绿色荧光,DCM患者阳性着色斑点大小不一、强度不等、分布不均;对照组A阳性着色也呈大小不一的斑点状,但较DCM患者的斑点小,无明显强弱变化;对照组B阳性着色斑点分布较规则,大小及强弱较一致.定量检测发现DCM组与对照组B相比,差异有统计学意义(P<0.01);心脏移植患者(DCM组和对照组A)与颅脑损伤死者(对照组B)相比.差异有统计学意义(P<0.05);而对照组A与B相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组病例左、右心室的差异无统计学意义(P>0.05).结论 晚期DCM患者心肌Cx43蛋白表达的着色斑点大小不一、强度不等、分布不均,定量高于对照组;这些数量、强弱和分布的变化,很可能是DCM患者发生心律失常和心功能衰竭的病理基础.LSCM技术与免疫荧光技术相结合,能进行定位定量研究,较普通免疫组化更准确可靠.
关键词： 扩张型心肌病 连接蛋白43 心脏移植 激光扫描共聚焦显微镜 免疫荧光 -
纳米氧化铝在多重耐药质粒RP4接合转移过程中对细菌形态学的影响
目的 探讨纳米氧化铝(平均粒径为20nm)对液相条件下多重耐药质粒RP4接合转移的影响,并从形态学角度初步探讨其影响机制.方法 接合供体菌为大肠杆菌HB101(RP4),受体菌为Salmonella aberdeen Kauffmann 50312(strR),供、受体菌液均为109cfu/ml(浓度比为1:3),纳米Al2O3浓度分别为0.005、0.05、0、5、5、50mmol/L,25℃静止接合8h后计算转接合子数,然后采用透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜进行形态学研究.结果 RP4的接合转移随着纳米Al2O3浓度的升高具有上升趋势.5mmol/L和50mmol/L纳米Al2O3组接合率分别为空白对照组的150倍和40倍,差异均有统计学意义.透射电镜观察结果表明,空白对照组只能观察到单个供、受体菌接合,5mmol/L和50mmol/L纳米Al2O3组能观察到多个细菌同时发生接合的情况;50mmol/LAl2O3组一些细菌观察不到完整的细胞膜结构,该损伤可能是引起50mmol/L纳米Al2O3组接合率低于5mmol/L纳米Al2O3组的原因.激光扫描共聚焦显微镜观察结果提示纳米Al2O3能损伤细菌的细胞膜,细胞膜的损伤程度与进入细菌的纳米Al20,的浓度呈正相关.结论 纳米Al2O3,能够促进接合子的产生,其影响机制可能是因为纳米Al2O3能够改变细胞膜通透性,间接影响接合过程,或者直接促进接合基因的表达所致.
-
激光共聚焦显微镜的使用和管理
激光扫描共聚焦显微镜(ConfocalLaser Scanning Micoscope,CLSM),简称共聚焦显微镜,是目前生物医学领域中先进的荧光成像和细胞分析工具之一,其应用领域日趋广泛.
