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毛壳素诱导SIRT1表达及其在低氧性肺动脉高压形成中的作用及机制研究
目的:探索低氧性肺动脉高压( HPH)的发生机制,明确毛壳素( Chaetocin)在HPH发生发展中的作用及机制。方法:将小鼠分为常氧组、低氧组、低氧sham组和低氧毛壳素组,运用低压氧舱模拟5000 m海拔低氧28 d复制小鼠HPH模型。导管法检测小鼠右心室压力,并分离计算右心室肥厚指数,肺组织切片染色观察肺血管结构。体外培养平滑肌细胞,给予毛壳素及低氧(1%O2)处理,运用报告基因、PCR、Western blot、流式细胞等方法检测去乙酰化酶SIRT1及凋亡相关指标。结果:毛壳素可改善低氧诱导的小鼠右心室肥厚及肺血管重构,并显著降低小鼠右心室压力,同时逆转低氧诱导的肺组织中SIRT1以及caspase-3、8的表达下调。体外细胞实验也发现毛壳素可显著激活平滑肌细胞中SIRT1的转录和表达,上调caspase-3、8的表达,并诱导平滑肌细胞凋亡。结论:毛壳素可显著改善低氧诱导的小鼠肺血管重构,防止右心室肥厚,并降低右心室压力。其机制与上调SIRT1及凋亡相关分子的表达,诱导平滑肌细胞凋亡有关。
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HIV-lenv,gag与IFNα-2b融合蛋白的细胞免疫
目的将编码艾滋病病毒(HIV-1)外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素(IFNα-2b)基因分别插入pSFJ16与pSFJ38真核表达载体,观察表达产物诱导机体产生细胞免疫的变化规律.方法利用分子克隆技术构建重组质粒,经脂质体转染与野生型痘病毒在Cos-7细胞内同源重组,筛选、纯化、获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b和vJ38gag/IFNα-2b.免疫小鼠后,检测小鼠外周血与脾淋巴细胞对ConA及Lps的反应性,用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4+,CD8+细胞计数.结果外周血与脾淋巴细胞对ConA,Lps的反应性,实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05).CD4+及T淋巴细胞与对照组比较差异有显著性(P<0.05).CD8+ T淋巴细胞与对照组比较差异无显著性,但呈增高趋势.结论重组痘苗病毒能诱导小鼠产生较强的细胞免疫.重组痘苗病毒能在体外与HIV-1env和HIV-1gag阳性血清发生特异性反应,具有免疫原性和免疫反应性.
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精索静脉曲张症患者精索静脉血CD3和CD19的变化
精索静脉曲张症患者部分可导致不育,多年来关于不育的原因也进行了许多探索,但至今仍没有完全阐明。为了从免疫学的角度进一步了解其与该病的关系,我们采用流式细胞记数仪从1998年12月至2000年3月观察了14例精索静脉曲张症患者精索静脉血中CD3和CD19的改变。现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料 临床诊断精索静脉曲张症的患者(曲张组)14例,其中左侧10例,右侧4例,临床分度均为Ⅲ度,年龄21~33岁,平均26.3岁。全部行精索静脉高位结扎,术中从已结扎的精索静脉近睾丸侧抽取精索静脉血3ml,立即送检。对照组选取5例21~30岁斜疝患者(斜疝组),均无精索静脉曲张,在行疝修补术时抽取精索静脉血。所有患者均无睾丸异常,精液常规正常。
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急性非淋巴细胞白血病并发尿崩症1例
患者女,27岁,因"倦怠、乏力,伴间断发热4个月"余于2011年8月20日入院,体格检查:体温37.9℃,浅表淋巴结无肿大,皮肤黏膜无出血点,心肺无明显异常,肝、脾肋下未触及.血常规检查:Hb 79 g/L,WBC 13.5 ×109/L,PLT 130×109/L;白细胞分类:原始细胞0.63;骨髓检查:骨髓增生活跃,原始细胞0.71;POX染色原始细胞阳性率占0.03,PAS(±),NAE(-),NaF(-);流式细胞免疫分型:CD13(+),CD117 (+),CD33 (+),CD34、HLA-DR(+),部分表达CD7,不表达淋巴系及巨核系标志,胞质MPO(+),染色体:45,XX,t(3;3)(q21;q26),-7[3];未发现FLT3、NPM1、C-KIT等基因突变.诊断为:急性非淋巴细胞白血病-M2a,于2011年8月23日予以CAG预激方案治疗1周后复查骨髓象提示:NR.
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RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响.方法:应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,用流式细胞仪分析RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA百分含量及增殖细胞核抗原的变化.结果:与对照组相比,RG50864处理组可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数(P<0.001),增加PASMC生长周期中的G0/G1期的DNA百分含量,抑制S期及G2M期 DNA百分含量(P<0.01或P<0.001).结论:RG50864可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达,抑制PASMC周期S期及G2M期DNA百分含量,阻止PASMC周期由G0/G1向DNA合成的S期及G2M期转化.
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SYSMEXXT-1800i全自动血球分析仪的主要构成及故障维修
SYSM EX XT‐1800i全自动血球分析仪在本院至今已使用5年多,其操作简便,结果准确,而且保养维护方便,故障率极低,该仪器主要由采样单元、白细胞(WBC )检测单元、红细胞(RBC)检测单元、压力单元、水路单元等组成。SYSMEX XT‐1800i全自动血球分析仪能提供24个参数报告,采用半导体激光器,通过鞘液机制包裹细胞,以流式细胞原理分析细胞使细胞计数的准确性和重复性有了进一步提高;通过核酸荧光染色对有核细胞进行染色分类,有效地对疑问细胞进行提示;采用经典的小孔阻抗计数法分析红细胞和血小板,分析血红蛋白采用十二烷基硫酸钠(SLS)血红蛋白检测法,此方法汇集了氰化高铁血红蛋白法和氧合血红蛋白法两种方法的优点[1]。现针对仪器各系统出现的故障具体介绍如下。
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2种HLA-B27检测方法在强直性脊柱炎诊断中的比较
目的:通过比较2种中国药监局(CFDA)批准的人类白细胞抗原(HLA)-B27体外诊断试剂盒,探讨荧光聚合酶链式反应(PCR)体外诊断试剂盒在 HLA-B27检测中的临床应用价值。方法收集该院573例临床血液样本,分别采用基于荧光PCR 技术和流式细胞法的2种上市获批试剂盒进行 HLA-B27检测,对于2种方法检测结果不一致的样本采用 PCR 测序方法进行确认,同时随机抽取5%的荧光 PCR 法检测结果为阳性的样本进行复验。结果573例样本,采用流式细胞法试剂盒检测出阳性191例,阴性382例;相同样本使用荧光 PCR 试剂盒检测 HLA-B27基因阳性共194例,阴性379例。终结果以流式细胞法作为参照,2种试剂盒阳性符合率为96.33%(184/191),阴性符合率为94.76%(362/382),27例样本不符(占总样本数的4.71%),2种方法的总符合率为95.29%[(184+362)/573],Kappa 值为0.896,(P =0.02);四格表资料卡方检验 P =0.021,2种方法检测结果一致性较高,但检测结果存在差异。复测标本中(包括27例检测结果不一致标本)HLA-B27基因测序结果与荧光PCR 试剂盒检测判断结果一致。结论相比临床 HLA-B27检测的权威方法流式细胞方法,荧光 PCR 法试剂盒在保证较高结果一致性的基础上,在 HLA-B27检测上可能具有更为准确的判断能力,且相比标本制备和操作更为简单,具有较强的临床应用价值和前景。
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流式细胞CD64检测在鉴别类风湿关节炎合并感染中的意义
目的 探讨CD64检测在类风湿关节炎(RA)合并感染中的临床意义.方法 根据2010年美国风湿病学会和欧洲抗风湿病联盟修订的RA分类标准和评分体系,选取2016年9月至2017年6月来该院就诊的RA患者64例,根据病原学结果分为RA合并感染组29例,RA活动期组35例.纳入同期健康体检者30例为对照组.测定各组中性粒细胞CD64与C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、降钙素原(PCT)水平,分析其相关性,绘制受试者工作曲线(ROC曲线).结果 RA合并感染组CD64为4.08(3.24~6.29),明显高于RA活动期组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05).RA合并感染组CD64水平与PCT呈正相关(r=0.409,P<0.05),RA活动期组CD64水平与CRP、ESR、PCT无相关性(P>0.05).ROC曲线分析显示,CD64诊断RA合并感染的灵敏度为82.8%,特异度为97.1%.结论 中性粒细胞CD64在区分RA合并感染及RA病情活动中具有较高的灵敏度及特异度,可为早期诊断及治疗提供帮助.
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类风湿关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群 CD4+/CD8+表达的意义
目的:探讨类风湿关节炎(RA )患者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的表达变化对疾病进展的关系。方法采用流式细胞术检测94例RA患者和22例健康对照者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+。其中94例RA患者按RA疾病活动指数(DAS28)评分分为低值、中值、高值3组。结果与健康对照组比较,RA组外周血中CD3+CD4+ T淋巴细胞的表达率明显升高( P<0.05),其中CD3+ CD4+ T 淋巴细胞在DAS28低值组为(41.03±9.53)%,DAS28中值组为(42.16±7.08)%,DAS28高值组为(43.72±9.63)%;CD3+ CD8+ T 淋巴细胞表达率明显降低(P<0.05),其中CD3+ CD8+ T 淋巴细胞在DAS28低值组为(21.33±6.67)%,DAS28中值组为(21.39±7.36)%,DAS28高值组为(21.28±6.60)%。结论 CD4+/CD8+比值与RA 患者疾病进程相关,表明CD4+/CD8+失衡在RA的发病中发挥了重要作用。
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2种腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白对人成纤维细胞转染效率的研究
目的 比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast, HFB)的转染效率.方法 原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of infection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度.MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性.结果 腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高, MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,高至MOI 106转染效率无显著提高.而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI 为106转染效率仅为(3.47±0.93)%.2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异.结论 AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力.
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骨髓细胞形态学临床实习带教的体会
血液科临床实习带教内容包括基础理论知识教学、患者床旁问诊、骨髓穿刺操作及骨髓细胞形态学教学.实习期一般为2周时间,大部分时间学生在病房接触患者或做操作,对骨髓细胞形态了解较少,然而从急性白血病的分型可以看出,不论是1976年提出的FAB分型,还是现在通用的MICM分型,骨髓细胞形态学均占据重要地位.在染色体分析、基因检测及流式细胞
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014.应用流式细胞计数方法检测血小板浓缩物血小板的激活
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支气管哮喘患者急性发作期血小板功能的变化
血小板作为一种血液中小的细胞参与体内的多种生理病理反应,在哮喘炎症反应中的作用也越来越受到重视.有研究表明支气管哮喘急性发作期存在血小板活化[1].本文采用流式细胞技术测定支气管哮喘急性发作期患者血小板表面α颗粒膜糖蛋白(GMP-140)和血小板胞浆内游离钙离子浓度的变化,以及末梢血小板计数的变化,初步探讨血小板活化与支气管哮喘发病的关系.
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胆囊癌患者外周血与局部组织细胞免疫状态的变化及意义
目的 探讨胆囊癌及癌旁组织中局部细胞免疫功能与肿瘤的发生发展及病理改变之间的关系.方法 应用流式细胞术分别对38例胆囊癌患者癌瘤局部、癌旁组织及外周血的CD4+、CD8+、NK细胞的含量及T淋巴细胞亚群进行检测.结果 CD4+、CD8+及NK细胞计数在胆囊癌组织中含量高,高于癌旁组织、胆囊癌患者外周血及结石性胆囊炎胆囊组织(P<0.05),但癌组织的CD4+/CD8+比值低于癌旁组织及胆囊炎组织(P<0.05);结石性胆囊炎胆囊组织及外周血中CD4+、CD8+、NK细胞计数和CD4+/CD8+比值与胆囊癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0.05),但外周血中上述指标均高于胆囊癌患者外周血(P<0.05).结论 胆囊癌及癌旁组织粘膜固有层内存在着NK细胞及T淋巴细胞亚群的比例失调和异常分布,胆囊癌组织内虽然有CD4+、CD8+、NK细胞的较高表达,但免疫功能呈低下和抑制状态.
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急性髓细胞白血病树突状细胞的体外定向诱导及鉴定
目的:从急性髓细胞白血病(AML)外周血细胞诱导产生树突状细胞.方法:将AML外周血细胞做原代培养,培养过程中加入GM-CSF、IL-4和TNF-α等三种细胞因子诱导细胞向DC分化,并运用形态和免疫表型特点鉴定细胞.结果:通过形态和免疫表型鉴定均证实,培养后多数细胞均符合DC特点,培养后细胞CD83和CD86共同表达的阳性率为52.7%,CD1a和HLA-DR共同表达阳性率为17.1%,外周血1×106个MNC经培养后可产生约(6~11)×104个DC.结论:体外培养的AML患者外周血单个核细胞可诱导分化出大量DC.
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急性脑出血并发SIRS及MODS患者血清细胞因子流式分析
目的 研究TNF-α、IL-10和IL-8在急性脑出血并发SIRS及MODS中的作用.方法 按照SIRS诊断标准和MODS病情分期及严重程度评分标准,收集59例AICH诱发SIRS、导致MODS的患者,并将其分为单纯AICH组、AICH诱发SIRS组和AICH诱发SIRS致MODS组.利用CBA流式蛋白分析系统检测59例AICH诱发SIRS、导致MODS的患者血清TNF-α、IL-10和IL-8含量.结果 单纯AICH组、AICH诱发SIRS组和AICH诱发SIRS致MODS组血清TNF-α、IL-10和IL-8水平全部高于正常对照组(P<0.05);AICH诱发SIRS和AICH诱发SIRS致MODS组血清TNF-α、IL-10和IL-8水平均显著高于单纯AICH组(P<0.05).结论 TNF、IL-10和IL-8参与了AICH诱发SIRS致MODS的病理生理过程,在脑出血并发SIRS及MODS中的起重要作用.
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UF-100全自动尿沉渣分析仪对红细胞检测的影响因素分析
尿沉渣有较高的临床价值,但传统镜检方法存在费时、误差大、重复性差、不能定量,受人为因素影响,难进行室内质控等缺点.UF-100型尿沉渣分析仪(以下简称UF-100)是对尿样直接作荧光染色后,利用流式细胞原理对尿中有形成分进行分析和计数.它具有操作简便、重复性好等特点.但我们工作中发现尿中细菌、结晶等存在均可影响红细胞的测定[1,2].为提高尿沉渣检验质量,我们作了UF-100、干化学、显微镜检查法三种检验方法进行比较,现报告如下.
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UF-100电导率为零的故障修复
我科于2008年1月引进日本Sysmex公司生产的UF-100全自动尿沉渣分析仪,该仪器采用流式细胞和电阻抗原理,通过荧光染色、电阻抗及散色光强度得出细胞形态、细胞横截面积、染色片断长度和细胞容积等信息,从而获得客观、可靠的定量数据,不受人为因素影响,结果具有可比性,实现了尿常规检测的标准化.该仪器具有很高的的灵敏度、准确度和重复性.但在日常工作中由于操作不规范或保养不够,会造成各种故障,而能够及时准确地查明原因、捧除故障是我们工作效率的关键,科室自引进仪器以来共排除1例主要故障,现总结如下,以共同行参考.
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UF-100流式尿沉渣细胞分析仪常见误差原因及分析
UF-100尿沉渣分析仪是由日本Sysmex公司生产的采用流式细胞原理,尿沉渣经荧光染色后,经气体激光检测产生散射光、荧光、阻抗等五种信号,经电脑处理后,可直接精确定量计数尿中的红细胞、白细胞、上皮细胞、细菌.
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胰岛素样生长因子1对β样淀粉蛋白引起的神经元凋亡和tau 蛋白磷酸化的作用
本研究的目的是阐明胰岛素样生长因子1(IGF-1)对β样淀粉蛋白(Aβ)引起的神经元凋亡的保护作用,以及tau蛋白磷酸化的作用.用MTT(四甲基偶氮唑盐)方法检测细胞活性,用流式细胞学结合Annexin V-FITC和PI(碘化丙锭)双染的方法检测早期凋亡和晚期凋亡/坏死,用Hoechst 33342染色观察凋亡细胞形态学,用免疫细胞化学的方法检测tau蛋白磷酸化.IGF-1阻止了Aβ25-35引起的培养的大鼠海马神经元的毒性,MTT值显著增加,从54.51%增至61.8%,Hoechst 33342阳性细胞的百分比从30.77%减少到22.81%.Aβ25-35孵育使Annexin V单标记细胞(Annexin V+/PI-)以及Annexin V/PI双标记细胞(Annexin V+/PI+)的百分比显著增加(分别为3.41%和19.47%),应用100 ng/ml的IGF-1可显著减少Annexin V单标记细胞和Annexin V/PI双标记细胞的百分比分别至2.98%和15.16%.Aβ25-35可增加tau蛋白磷酸化,AT8阳性细胞占41.84%,而IGF-1则可抑制这一效应.我们的结果表明IGF-1可保护神经元,降低Aβ的细胞毒性,减少早期和晚期凋亡/坏死细胞的比例,抑制tau蛋白磷酸化,这可能是IGF-1神经保护作用的细胞机制.