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上海市临床检验中心参加2015年国际血液学标准化委员会年度大会
2015年10月29至30日，2015年国际血液学标准化委员会（the International Council for Standardization in Haematology，ICSH）年度大会在深圳洲际酒店胜利召开，会议首次在国内召开，开启了我国血液学标准化融入世界的大门。上海市临床检验中心（以下简称中心）派员参加了此次会议，这也是中心第1次参加ICSH成员大会。
本次ICSH成员大会分3部分内容：第1部分是对已完成的项目工作进行总结，主要包括全自动HbA2定量分析仪的评估、细胞形态学分级标准、骨髓免疫组化标准。专家YuTing主持了这些标准的汉化工作，卫生部临床检验中心彭明婷主任指出这项工作对中国血液检验有非常重要的价值。第2部分是总结通报仍处于研究中的项目进展，主要包括危急值的沟通、血液学报告单位的标准化。各国专家对此2项议题进行广泛讨论。第3部分是介绍需要开展的新项目，如指南的制定规则、血沉检测指南的修订、41条复检规则的修订、骨髓活检CD34 IHC定量标准化草案、血图片App的移动软件、血细胞计数国际标准化质控规则修订、外周血白细胞流式分型技术、AML和MDS流式细胞诊断技术、HbA2标准品制备等，这些项目得到了多数成员肯定和支持。 -
2014版ICSH血液分析仪评价指南介绍（下）
介绍了2014年国际血液学标准化委员会（ICSH）关于血液分析仪的性能评价指南。该指南从仪器的进样模式、批内精密度、批间精密度、携带污染、线性、标本稳定性、参考区间、准确性和可比性等方面对厂商提出了具体确认、评价的方法和要求，并推荐对流式细胞术和／或数字成像技术的白细胞分类计数、有核红细胞计数和未成熟粒细胞计数采用流式细胞免疫表型参考方法进行评价。每个临床实验室在仪器用于患者标本检测前，应对上述性能进行部分确认或转移。
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2014版ICSH血液分析仪评价指南介绍(上)
本文介绍了2014年国际血液学标准化委员会(ICSH)关于血液分析仪的性能评价指南.在本指南中,从仪器的进样模式、批内精密度、批间精密度、携带污染、线性、标本稳定性、参考区间、准确性和可比性等方面对厂商提出了具体确认、评价的方法和要求,并推荐对流式细胞术和/或数字成像技术的白细胞分类计数、有核红细胞计数和未成熟粒细胞计数采用流式细胞免疫表型参考方法进行评价.每个临床实验室在仪器用于患者标本检测前,应对上述性能进行部分确认或转移.
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UF-100尿沉渣分析仪测定红细胞影响因素探讨
UF-100型尿沉渣分析仪是对尿样直接作荧光染色后,利用流式细胞原理识别和计数尿中红细胞和白细胞等有形成份.该仪器具有操作简便、结果重复性好等特点,但在红细胞计数中也存在一些干扰因素,应予注意!
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大蒜素对胃癌细胞株体外培养增殖的影响
近年来的研究表明,大蒜提取物--大蒜素对各种化学致癌物诱发的淋巴瘤、乳腺癌、肝癌、食管癌均有明显的抑制作用[1-4].本研究采用MTT法和流式细胞术探讨大蒜素对胃癌细胞的影响.
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胰腺癌病人外周血CD4+T、CD8+T和调节性T细胞的分析
目的:分析3个T细胞亚群,CD4+T、CD8+T和调节性T(regulatory T, Treg)细胞在胰腺癌病人外周血中的变化,为胰腺癌免疫治疗中靶细胞的确认提供理论依据. 方法:通过免疫荧光抗体标记和流式细胞检测外周血中CD4+T、CD8+T和Treg细胞,分析胰腺癌病人外周血中CD4+T、CD8+T和Treg细胞的水平与胰腺癌临床病理特征的相关性. 结果:胰腺癌病人外周血中CD4+T、CD8+T的水平与对照组相比无统计学差异,而Treg细胞在CD4+T细胞中的比例较对照组显著升高;除了Treg的比例与胰腺癌的疾病分期密切相关外,3个细胞亚群的水平与胰腺癌病人临床病理特征无相关性.胰腺癌合并梗阻性黄疸行胆道支架引流术后,CD4+T、CD8+T细胞的水平无变化,但Treg细胞的比例显著下降. 结论:在胰腺癌病人的免疫功能状态的变化中Treg细胞介导的免疫抑制可能占主导地位. 合并梗阻性黄疸行胆道引流术可缓解Treg细胞介导的免疫抑制.
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Side Population细胞的研究进展
1 SP细胞概述及分子机制在用流式细胞技术分析造血干细胞的过程中,有一小部分细胞表现为低的Hoechst33342荧光染色特性,称为Side Population(SP)细胞.
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应用流式细胞技术研究乳球蛋白-2在卵巢上皮癌组织中的表达与治疗反应和预后的相关性
背景与目的:为寻找新的特异性和敏感性更高的预后标志物,探讨卵巢上皮性癌组织中乳球蛋白-2(Mammaglobin-2,MGB-2)的表达与卵巢上皮性癌患者治疗反应和预后的关系.方法:采用流式细胞技术(flow-cytometry technology,FCM)检测85例原发性卵巢上皮癌组织中MGB-2的表达,分析其与卵巢上皮性癌临床病理因素、治疗反应、生存时间之间的相关性.结果:卵巢上皮性癌组织中MGB-2表达阳性率为78%.其中治疗后CA125下降不满意患者的阳性率(85%)显著高于下降满意者(62%,P=0.018);复发患者(83%)高于未复发患者(67%),但两者比较,差异无显著性(P=0.097).单因素分析显示,MGB-2表达阳性患者的中位数生存时间(25个月)明显短于阴性患者(＞39个月,P=0.021).结论:MGB-2阳性表达与卵巢上皮性癌患者的治疗反应和预后不良相关.
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肺癌患者Vit D与调节性T细胞检测的临床价值
本文收集临床肺癌外周血标本,采用电化学发光、流式细胞技术检测肺癌患者外周血Treg细胞与25-羟基维生素D水平,并探讨两者的相关性及其临床价值,为肺癌预防和干预提供依据.
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婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎Toll样受体4(TLR4)的检测及分析
目的 观察婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎急性期外周血单核细胞表面TLR4的表达以及TLR4表达和急性感染期疾病严重程度之间的关联,并对RSV感染的发病机制作讨论.方法 应用直接免疫荧光法对2374例急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行RSV病毒抗原检测,对其中40名婴幼儿鼻咽部脱落上皮细胞RSV阳性患儿,用流式细胞仪检测其外周血单核细胞表面TLR4的表达,同时设30名同龄健康儿童为对照组.结果 1岁以内患儿RSV阳性率为50.89%,男性阳性比例高于女性,但阳性率无显著性差异(χ2=2.106,P>0.05);患儿组TLR4为87.57%±7.49%,对照组TLR4为54.92%±4.21%,两者存在显著性差异(P＜0.05).结论 ①RSV是婴幼儿期间的急性下呼吸道感染的主要病原体.②RSV阳性肺炎感染患儿早期外周血单核细胞表面TLR4表达明显升高.
关键词： 呼吸道合胞病毒 Toll样受体4(TLR4) 流式细胞 婴幼儿 -
慢性低灌注脑血管组织细胞的改变
目的观察慢性低脑灌注状态软脑膜血管组织细胞活性改变.方法18只大鼠颈动脉-颈外静脉瘘(CJF)模型动物饲养26周后断头处死取软脑膜血管(CJF开放组),其中9只大鼠处死前CJF阻断0.5h(CJF阻断组),应用流式细胞仪测定血管组织细胞活性.结果CJF开放组软脑膜血管组织有6.28%细胞坏死,2.42%凋亡;CJF阻断组软脑膜血管组织细胞凋亡明显增加达17 95%.结论长期低脑灌注状态脑血管结构改变可能参与了"正常灌注压突破"的发生.
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应用流式细胞方法对网织血小板检测的评价
1969年Ingram和Cooper smith对失血性犬的外周血经新亚甲蓝染色后的镜检中,观察到部分血小板中有网状的染色物,被命名为网织血小板(Retilulated Platelet,Rp).有文献报道,在失血或血小板破坏的情况下,网织血小板水平明显增高[1],它与网织红细胞一样是反应骨髓血小板状态极有价值的指标之一.但由于传统的计数方法一些局限性,使得Rp检测的准确率不高.随着流式细胞仪的使用,Rp检测的精确度也大大提高.作者对流式细胞仪在Rp检测中的应用作了探讨,从而探讨其在临床应用中的价值.
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尖锐湿疣患者外周血Vα24+天然杀伤T细胞数量与体外活化的研究
由于尖锐湿疣发病机制不清,目前尚无满意治疗方法.近几年研究发现,表达部分天然杀伤细胞受体和T细胞受体(TCR)Vα24片段的天然杀伤T(NKT)细胞在抗病毒及免疫调节中都发挥着重要作用[1].本研究采用流式细胞技术检测了不同病程尖锐湿疣患者外周血NKT细胞的数量及体外活化特性,以探讨NKT细胞在尖锐湿疣患者免疫应答中的作用.
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英文文摘
组织工程疗法的成功依赖于支架材料引导祖细胞分化的能力。本研究中，我们应用一种新型仿生支架材料，即细胞外基质包裹的羟基磷灰石支架材料（ HA-ECM ），探讨HA-ECM对PDLCs体外成骨分化的影响，并用小鼠颅骨缺损模型对PDLCs接种的HA-ECM进行体内评价。采用流式细胞表型分析PDLCs的间充质干细胞标记物的表达，将PDLCs接种于HA-ECM或HA支架材料，采用成骨诱导液培养，在不同时间点，采用MTT、碱性磷酸酶（ ALP）试验、实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）来评估诱导效果。12周时，组织形态分析结果显示PDLCs接种的支架材料中有新骨形成。接种在HA-ECM支架上的PDLCs表现出更高的ALP活性，并表达更多的骨相关基因。体内实验表明，接种PDLCs的HA-ECM显著提高了颅顶骨修复能力，14 d时，新骨形成量达到大值。研究结果表明，PDLCs接种的HA-ECM复合体可作为颅颌面骨再生的一种有效方法。
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复方黄芩甙制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠淋巴细胞表型和趋化因子受体CCR5表达的影响
目的:探讨复方黄芩甙制剂(Co-baicalin)治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的有效性及其作用机制.方法:应用髓鞘脂质蛋白(PLP)139-151免疫SJL/J小鼠诱发慢性复发缓解性EAE模型,研究复方黄芩甙制剂对PLP139-151诱导的小鼠淋巴结细胞及脾细胞CD3、CD4、CD8及趋化因子受体CCR5的表达的影响,并通过神经功能评分观察复方黄芩甙制剂治疗EAE的有效性.结果:复方黄芩甙制剂治疗后,小鼠淋巴结细胞和脾细胞CD3、CD8阳性细胞百分比升高;而CD4、CCR5和CD4/CD8百分比下降,和对照组比较具有统计学意义(P＜0.001).复方黄芩甙制剂治疗组和强的松治疗组之间未见显著性差异(P＞0.05).此外复方黄芩甙制剂能够有效改善EAE小鼠神经功能评分(P＜0.01).结论:复方黄芩甙制剂可有效降低炎性细胞CD4阳性细胞数和CD4/CD8比例,下调CCR5的表达,为复方黄芩甙制剂用于临床多发性硬化的治疗提供了实验依据.
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问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞凋亡及caspase-3、-6活化对凋亡的影响
目的:了解问号钩端螺旋体(钩体)诱导小鼠单核-巨噬样细胞(J774A.1)凋亡的作用,以及caspase-3、-6活化对凋亡的影响.方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株J774A.1细胞感染模型.采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况.分别采用荧光比色法和Western Blot,检测感染细胞caspase-3、-6活性及其底物(PARA和LaminA/C)剪切情况.结果:多种不同浓度的问号钩体赖株感染均可使J774A.1细胞发生凋亡,其中以问号钩体∶细胞=100∶1的比例感染时凋亡率高(48.81%±5.95%).感染细胞caspase-3和-6大活性分别为(1453.41±36.07)FU和(618.65±39.82)FU,是未感染细胞的16.38和9.98倍.感染细胞的PARP和Lamin A/C均被剪切.Caspase-3、-6抑制剂对问号钩体赖株诱导的J774A.1细胞凋亡有明显的阻断作用.结论:问号钩体可诱导J774A.1细胞凋亡,caspase-3和-6与该细胞凋亡密切相关.
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T淋巴细胞亚群在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中T淋巴细胞亚群的表达及与预后的关系.方法 采用流式细胞技术,根据白细胞表面抗原分化群(CD)检测92例NSCLC 患者外周血中的CD3+、CD4+、CD8+、CD19+及CD25+细胞,以健康人群做对照,结合临床病理及随访资料进行分析.结果 NSCLC患者CD3+、CD8+细胞明显低于健康对照组(P<0.01),CD25+细胞显著高于对照组(P<0.01),CD19+细胞高于对照组(P<0.05).CD4+细胞两组间无差异(P >0.05).Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者外周血CD4+、CD25+T细胞水平较Ⅲ、Ⅳ期患者高(P<0.01).鳞癌患者外周血CD8+T细胞水平较腺癌患者高(P<0.01).结论 T细胞淋巴亚群在机体肿瘤免疫中的作用和地位不能单从数量上来判断机体的免疫状态,联合多因子检测才能较完整的反映机体的免疫状态.
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结直肠癌中EpCAM的表达及与DNA倍体改变的关系
目的 探讨结直肠癌细胞中EpCAM(CD326)表达的临床病理学意义及与DNA倍体改变的关系.方法 应用流式细胞直接免疫荧光法检测55例结直肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中EpCAM的表达,用阳性率(percentage of positive cells, PPC)、平均荧光强度(mean fluorescence index, MFI)表示;应用细胞周期分析仪对结直肠癌细胞进行细胞周期分析.用细胞定量术分析EpCAM表达和DNA倍体改变的相关性及其在结直肠癌早期诊断、预后中的价值.结果 55例结直肠癌组织中EpCAM蛋白的PPC为(83.48 ±7.07)％,明显高于癌旁正常黏膜组织(43. 56 ±5.29)％ (t =39.22,P＜0.001).55例结直肠癌组织中 EpCAM蛋白 MFI值为28.90(19.60 ～ 45.89),明显高于癌旁正常黏膜组织的4.89(3.79 ～6.28) (Z =-6.45,P＜0.001).癌组织:浸润型+溃疡型νs肿块型(包括浸润型νs溃疡型),中+低分化νs高分化(包括低分化νs中分化),Dukes分期C + D νs A + B,pTNM分期Ⅲ +Ⅳ νs I + Ⅱ,浸润深度PT3 +T4νs PT1 +T2,淋巴结转移pNl vs PN0,差异均有统计学意义,即生物学行为越差,EpCAM蛋白表达MFI值与PPC越高,而与患者年龄、性别无关.DNA含量分析结果显示:55例结直肠癌中39例(70.90％)为多倍体,DNA指数(DNA index, DI)和DNA倍体与肿瘤分化程度、Dukes分期相关,与淋巴结转移无关.同时,在 EpCAM阳性病例中,DI随着EpCAM表达增强而升高(r =0.668, P=0.000);而增殖指标S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)和增殖指数(proliferation index, PI)也随着 EpCAM表达增强而升高(r1 =0.664,P1 =0.000;r2 =0.651 ,P2 =0.000).结论 EpCAM在结直肠癌中的表达明显上调,与肿瘤细胞侵袭转移、增殖密切相关,同时检测EpCAM表达和DNA含量分析能为结直肠癌早期诊断和预后判断提供参考依据.
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灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究灵芝多糖肽对ECV304氧化损伤的保护作用.方法 培养ECV304细胞,以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(12.5、25、50、100 mg·L-1),以MTT法测细胞存活率;以光镜、电镜检测细胞形态学改变及线粒体损伤;用AnnexinV/PI双标记细胞,流式细胞检测细胞凋亡的百分率.结果 灵芝多糖(12.5、25、50、100 mg·L-1)可减少叔丁基氢过氧化物对ECV304的氧化损伤,MTF检测灵芝多糖给药组,ECV304细胞存活率增加.光镜下可见细胞损伤减少,电镜可见灵芝多糖(50 mg·L-1,温育24 h)减轻细胞器如线粒体氧化损伤,减少细胞凋亡.细胞流式检测表明:对照组、给药组、损伤组总凋亡百分率分别2.24%±0.43%、24%4±6.4%(P＜0.01)、82.1%±7.9%.结论 灵芝多糖肽(GLPP)对ECV304细胞氧化损伤具有保护作用.
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反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用研究
目的研究反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用.方法在HUVECs中MTT法检测细胞活性,电镜观察细胞死亡类型,流式细胞仪定量细胞凋亡率;用鸡胚尿囊膜模型观察新生血管形成;肉瘤S180小鼠体内模型观察反应停的抗肿瘤作用,并通过免疫组化观察反应停对肿瘤组织微血管数的影响.结果反应停对HUVECs有直接抑制作用,IC50为(22.91±1.74) μmol·L-1;经反应停作用48 h后的HUVECs,随剂量增加,电镜下可见核不规则,染色体浓集,空泡状内质网及凋亡小体等不同时期细胞凋亡现象;流式细胞检测显示反应停可依剂量诱导HUVECs凋亡或坏死;鸡胚尿囊膜新生血管形成模型中,反应停抑制新生血管形成的阳性率随剂量而增加;小鼠S180肿瘤移植模型中,反应停单独使用,虽可明显减少肿瘤血管密度, 无抑制肿瘤生长作用;与环磷酰胺联合使用,可减少环磷酰胺用量,与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用.结论反应停有抗新生血管形成作用,单独应用对小鼠S180肿瘤无抑制作用,但与环磷酰胺有协同作用.
