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Lewis肺癌细胞通过TLR9对CD4~+CD25~+Treg细胞影响的研究
目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4~+ CD25~+ Treg细胞的影响.方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4~+ CD25~+ Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9mRNA表达的影响;采用TLR9受体阻断剂氯喹阻断Lewis肺癌TLR9的表达.结果:与对照组相比,共培养组CD4~+ CD25~+ Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达均明显增高(P＜0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养后可影响多种TLRs表达,其中TLR9 mRNA表达与对照组相比明显增高(P＜0.05),阻断Lewis肺癌细胞TLR9可明显降低CD4~+ CD25~+ Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达(P＜0.05).结论:Lewis肺癌细胞可通过TLR9促进CD4~+ CD25~+ Treg细胞产生及功能增强,参与诱导肿瘤的免疫耐受,从而促进肿瘤的发生和发展.
关键词： CD4~+ CD25~+ Treg细胞 FOXP3 TLRs 肿瘤免疫 -
自身骨髓瘤抗原致敏树突细胞介导特异性CTL反应的研究
目的:研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突细胞(DC)能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应.方法:用MM患者骨髓CD34+细胞诱生DC.将MM患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC.MTT法检测骨髓瘤抗原致敏及非致敏DC诱导的自身T细胞对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞)的杀伤率. 结果:骨髓瘤冻融物致敏DC诱导的自身T细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤远大于对K562细胞的杀伤. 结论:患者骨髓瘤冻融物致敏的DC能有效诱导自身T细胞特异性抗瘤免疫.
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瘤内注射MIP-3α对小鼠肝癌生长抑制作用的研究
目的 探讨瘤内注射巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)能否趋化外周树突状细胞(Dendritic cells,DCs)至肿瘤组织内,诱导特异性免疫应答.方法 成功建立小鼠皮下肝癌模型后随机分为3组,第10天起分别向MIP-3α治疗组、PBS对照组的小鼠皮下肿瘤内注射MIP-3α溶液及PBS,空白对照组小鼠不予任何处理.20天后取肿瘤组织,免疫组化法检测肿瘤内DCs、CD4+、CD8+细胞浸润情况,流式细胞术检测肿瘤内DCs浸润数量及其表型.另外,每组各10只小鼠持续观察,用于绘制肿瘤生长曲线并观察生存时间.结果 ①MIP-3α治疗组的小鼠肿瘤内浸润的CD4+、CD8+细胞及DCs数量均显著高于其他两组.2 MIP-3α治疗组小鼠肿瘤内浸润性DCs的CD80、CD86表达率显著高于其他两组(P< 0.05).3MIP-3α治疗组小鼠肿瘤生长速率显著低于对照组(P<0.001),生存时间较对照组明显延长(P<0.05).结论 ①瘤内注射MIP-3α可在小鼠肝癌病灶内趋化、募集外周的树突状细胞,使其摄取并提呈肿瘤抗原,有效诱导针对肝癌细胞的特异性免疫应答.2MIP-3α在小鼠皮下肝癌模型的局部微环境下可能具有促进树突状细胞成熟的作用.
关键词： 巨噬细胞炎症蛋白-3α 树突状细胞 肝癌 肿瘤免疫 -
HSP70多肽复合物修饰DCs疫苗抗胰腺癌荷瘤小鼠的实验研究
目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用.方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中HSP70-PC致敏DC对CTL的增殖及活化效果;建立MPC83荷瘤小鼠模型,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对荷瘤小鼠治疗的效果和小鼠存活期.结果:经上述方法分离、纯化获得了较高纯度的HSP70-PC蛋白质;HSP70-PC在1.5～2.0 μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞强效果,用HSP70-PC修饰的DCs能增强T细胞的增殖和活化能力;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,其修饰的DCs疫苗用于荷瘤小鼠免疫治疗有显著疗效,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础.
关键词： 胰腺癌 热休克蛋白70多肽复合物 树突状细胞 肿瘤免疫 -
负性刺激分子PD-L对T细胞介导小鼠L929肿瘤细胞免疫效应的影响
目的:探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用.方法:以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组.分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别检测淋巴细胞增殖反应、活化诱导的细胞凋亡以及脾细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤效应.结果:L929细胞表达PD-L1,而不表达PD-L2.体内与体外联合应用PD-L1抗体,能显著增强L929肿瘤细胞诱导的致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和特异性杀伤效应,并可抑制活化诱导的T细胞凋亡;PD-L1抗体亦可增加L929细胞诱导的未致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和促进其脾细胞培养上清对L929细胞的杀伤效应.结论:PD-L1抗体可通过阻断PD1/PDL途径促进初始T细胞和致敏T细胞介导的抗瘤效应.
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参杞合剂对荷瘤小鼠免疫功能及细胞周期的影响
目的:研究参杞合剂(SQ)对小鼠腹水型肝癌细胞免疫功能及细胞周期的影响.方法:用参杞合剂对荷瘤鼠进行连续胃饲治疗10天,观察其抑瘤率及免疫学指标的改变.流式细胞仪结合电镜观察其细胞周期的改变.结果:荷瘤小鼠抑瘤率为65.68%,SQ能增强荷瘤小鼠的免疫功能(P＜0.05);流式细胞仪检测肿瘤细胞形成S期阻滞.病理可见大片坏死,电镜可见坏死及凋亡.结论:参杞合剂可显著抑制肿瘤生长,其机理与提高机体免疫功能,阻滞肿瘤细胞增殖有关.
关键词： 参杞合剂 HcaF16A3细胞 肿瘤免疫 细胞周期 -
不完全弗氏佐剂诱导的髓样细胞抑制T细胞活性
目的：在肿瘤免疫治疗方法中，肿瘤疫苗前景广阔。在设计肿瘤疫苗时，由于许多肿瘤抗原的免疫原性弱，必须加入一些佐剂才能诱导出机体免疫应答。不完全弗氏佐剂（ IFA）是目前肿瘤疫苗研究动物实验中常用的佐剂之一，已知它能够有效诱导产生高滴度抗体。然而，实验发现，应用含有弗氏佐剂的肿瘤疫苗治疗肿瘤时并未出现期望的结果，原因仍不清楚。方法：BALB／c小鼠接受单次剂量的IFA注射，观察脾脏中CD11b＋细胞的比例。使用MTT法检测CD11b＋细胞对T细胞增殖的影响和γ干扰素（IFN-γ）分泌能力的影响。结果：IFA可诱导机体产生一群CD11b＋细胞，其能抑制T细胞的增殖和IFN-γ分泌。结论：CD11b＋细胞可能是导致含有IFA肿瘤疫苗临床效果不佳的原因之一，佐剂的选择会影响肿瘤疫苗的疗效。
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TBL教学法在研究生临床免疫学理论教学中的应用探索
以团队为基础的学习（ Team-based learning， TBL）教学模式不再以教师为主体，而是以学生为主体，提倡学生自主学习，注重提高学生分析和解决问题的能力，以将学生培养成终身学习者为目标的新型教学模式［1，2］。这种模式改变了以教师授课为主的被动式教学模式，激发了学生独立思考及团结协作、收集处理信息、获取和更新知识的能力，并且通过学生之间互帮互助、互相督促，既提高了学习效率，又培养了学生的团队合作精神和竞争意识。本教研室针对我校医学免疫学教学安排的实际情况，选用TBL式的教学方式对我校2013级考入基础各专业的研究生，共56名学生进行临床免疫部分，包括超敏反应、自身免疫病、免疫缺陷病、肿瘤免疫及移植免疫这五章的讲授。
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启发式教学在医学免疫学教学中的经验
医学免疫学是一门重要的基础医学课程,发展迅速,应用范围越来越广,如肿瘤免疫、移植免疫、生殖免疫等应用.新的研究发现层出不穷,许多疑难杂症的发病机制应用免疫学理论已得到了进一步诠释,新的预防和治疗措施也在不断出现.但学生反应课程内容理论性强,内涵丰富,繁杂抽象,学生感兴趣,但难以接收,有的理解了,又联系不起来.为此多年来笔者在医学免疫学的教学改革过程中积极地尝试了启发式教学法,取得了滿意的教学效果.
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2018年国内外免疫学研究重要进展
2018年,美国德克萨斯大学安德森癌症中心的詹姆斯·艾莉森(James P.Allison)教授与日本京都大学的本庶佑(Tasuku Honjo)教授因创建了新型癌症免疫治疗方法获得了诺贝尔生理学与医学奖.这一创新性研究成果充分体现了免疫学基础研究在重大免疫相关疾病发病机制研究及疾病防治中的基础性、支撑性作用.这一年,国内外免疫学研究在基础理论及临床应用各个方向蓬勃发展,对诸多免疫学根本性、关键性科学问题有了更为深入的认识,为免疫相关疾病发病机制研究和防治手段的革新带来了新的思路,特别是肿瘤治疗方面取得重大进展.特别值得一提的是,国内免疫学研究者做出了一系列受到领域同行认可的高水平、原创性科研成果,为免疫学研究的发展贡献了重要力量.本文中,我们回顾了2018年国内外免疫学研究领域的新理论和应用成果,与各位同行共同探讨免疫学研究的前沿热点和重大挑战.
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CD40分子在树突状细胞抗人多发性骨髓瘤免疫应答中的作用及其机理
目的：为研究CD40分子在人树突状细胞(DC)抗多发性骨髓瘤(MM)中的作用及其机制。方法：采用CD40配体(CD40L)转基因细胞及抗CD40的激发型单克隆抗体在体外激发DC，并通过DC细胞计数、形态学和细胞表型分析、IL-12定量检测、DC对MM抗原的摄取及混合淋巴细胞反应等手段对其进行研究。结果：CD40分子配基化可促进DC的体外增殖和分化，使DC增加分泌IL-12,并下调DC摄取抗原的能力，促进DC的成熟，同时赋予DC激发自体CD8+细胞增殖的作用，使后者对MM细胞产生特异性的杀伤作用。结论：CD40分子激发不仅有利于DC的增殖、分化和增强激发T细胞增殖，而且Th细胞表达的CD40L是DC获得直接激发抗MM抗原特异性CD8+T细胞的关键分子。
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慢性丙型肝炎患者外周血 DNT 细胞与HCV-RNA 病毒载量关系的研究
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus， HCV）感染机体后所引起的传染性疾病。大多数的丙型肝炎患者感染后转为慢性，病毒在体内持续存在，慢性丙型肝炎是引起肝硬化和肝癌的重要原因之一。CD3＋ CD4－ CD8－ T 细胞（双阴性 T 细胞， DNT）是一种新发现的调节性 T 细胞亚群，研究发现其在移植排斥、自身免疫性疾病、肿瘤免疫、感染性疾病、过敏性疾病以及移植物抗宿主病等疾病中发挥重要作用［1］，成为近年来免疫学研究的热点之一。本文利用流式细胞术检测慢性丙型肝炎患者外周血中 CD3，CD4，CD8及 DNT 细胞的表达，PCR方法检测 HCV-RNA 病毒载量，研究慢性丙型肝炎患者外周血中 DNT 细胞的表达与 HCV-RNA 病毒载量的关系。
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mB7-1重组真核载体的构建及表达
目的 构建mB7-1真核表达载体并检测其在B16细胞中的瞬时表达情况.方法 提取小鼠脾细胞mRNA,PCR法获得mB7-1片段,与pcDNA3连接,并进行酶切鉴定及测序.重组质粒经脂质体介导转染鼠B16细胞,检测基因表达情况.结果 完成mB7-1-pcDNA3重组载体连接及鉴定,基因测序与Genebank一致,并转染至B16细胞,检测到基因表达.结论 成功构建mB7-1-pcDNA3真核表达载体,获得mB7-1表达细胞系,为研究其抗瘤效应奠定了基础.
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Ag-NORS检测肿瘤患者的免疫功能
肿瘤免疫本质是细胞免疫,而T淋巴细胞免疫活性的高低代表了机体抗肿瘤能力.WHO资料证实细胞功能低下的人群中恶性肿瘤发病率是正常人群的100-300倍.恶性肿瘤群体T细胞Ag-NORS含量[1]明显低于正常人,这可使我们通过对T细胞Ag-NORS的检测进而对肿瘤进行监测.
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杀伤细胞受体KIRs的研究进展
自然杀伤(Natural killer,NK)细胞是骨髓来源的大颗粒淋巴细胞,NK细胞不同于T、B淋巴细胞,它不表达抗原特异性受体,其功能的发挥主要依赖于NK细胞能够表达多种能与MHC或非MHC配体结合的免疫球蛋白样受体(Killerim munoglobulin-like receptors,KIRs)KIRs为免疫球蛋白超家族成员,表达于NK细胞和某些T细胞亚群.KIRs包括抑制型和激活型受体,其通过识别表达于靶细胞上的人类白细胞抗原1(MHC-1)类分子,调节NK细胞的杀伤活性,在自身免疫性疾病、妊娠、移植、肿瘤免疫等生理病理过程中起重要的作用.
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髓源抑制性细胞的研究进展
免疫抑制是肿瘤患者治疗疗效差、预后不理想的重要原因之一。肿瘤免疫抑制不仅与恶性肿瘤的发生、发展有关，而且与肿瘤免疫治疗疗效不佳及治疗后复发密切相关。因而改善或逆转免疫抑制对成功治疗肿瘤具有十分重要的意义。多种免疫细胞成分，如髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）、肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associ-ated macrophage，TAM）、调节性 T 细胞（regulatory T cells， Tregs）、肿瘤相关树突细胞、肥大细胞、2型 NKT 细胞等均参与肿瘤免疫抑制［1］。越来越多的证据提示 MDSCs 可能是肿瘤免疫抑制形成的基础：首先，虽然肿瘤患者体内可检测到一种或几种上述免疫抑制细胞，但多数患者体内可检测到MDSCs［1］；其次，MDSCs 不仅可抑制固有免疫应答，而且可抑制适应性免疫应答；此外，MDSCs 可诱导具有免疫抑制功能细胞（TAM 与 Tregs）的扩增［2］。
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mB7-1修饰的B16细胞体外诱导免疫效应
目的 探讨mB7-1基因修饰的B16细胞的体外抗瘤效应.方法 提取小鼠脾细胞mRNA,PCR法获得mB7-1片段,与pcDNA3连接,并进行酶切鉴定及测序.重组质粒经脂质体介导转染鼠B16细胞,检测基因表达,MTT法检测CTL杀伤作用.结果 完成mB7-1-pcDNA3重组载体连接及鉴定,基因测序与GenBank一致,并转染至B16细胞,检测到基因表达.经mB7-1修饰B16细胞可诱导淋巴细胞产生明显抑瘤效应.结论 应用本文方法 可获得mB7-1修饰B16细胞系,为研究其抗瘸效应莫定了基础.
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CD4+CD25+Treg细胞、TGF-β1和IL-10在上皮性卵巢癌中的变化
目的 研究上皮性卵巢癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量及其相关基因Foxp3 mRNA的表达,同时检测抑制性细胞因子TGF-β1及IL-10的表达,探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用.方法 采用流式细胞术检测卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量变化；采用半定量RT-PCR方法检测卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA表达水平.应用ELISA方法测定上皮性卵巢癌患者外周血清TGF-β1及IL-10浓度.结果 卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量均明显升高(P＜0.05)；Foxp3 mRNA在卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌患者外周血中表达明显增高(P＜0.05).卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌患者外周血中TGF-β1及IL-10的表达均明显增强.结论 CD4+ CD25+调节性T细胞可能在卵巢癌免疫耐受中发挥重要作用.
关键词： CD4+ CD25+调节性T细胞 FOXP3 TGF-β1 IL-10 肿瘤免疫 -
CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞与结直肠癌关系研究进展
天然的CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)为目前研究为深入的一类Treg,是Sakaguchi等[1]1995年首先发现在体内外均具有独特抑制功能的T细胞亚群.研究发现Treg在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等患者外周血和肿瘤局部微环境中比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关[2-6].本文现对CD4+CD25+FOXP3+Treg与结直肠癌(CRC)的相关研究综述如下.
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肿瘤细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响
目的:探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响.方法:建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系.Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组:实验组Ⅰ(5×10~5个Lewis肺癌细胞与1×10~6个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅰ(1×10~6个淋巴细胞单独培养)、实验组Ⅱ(5×10~5个Lewis肺癌细胞与2×10~6个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅱ(2×10~6个淋巴细胞单独培养);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点:24、48和72 h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%.采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4~+CD25~+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3 mRNA表达的影响.结果:与对照组比较,实验组Ⅰ中CD4~+CD25~+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达明显增强(P<0.05),实验组Ⅱ中CD4~+CD25~+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明显变化(P>0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48 h可见CD4~+CD25~+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达明显升高(P<0.05),而72 h后变化不明显;20%和50%Lewis肺癌细胞培养上清均可明显提高CD4~+CD25~+Treg数量及Foxp3 mRNA表达(P<0.05).结论:肿瘤细胞及其培养上清可诱导CD4~+CD25~+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4~+CD25~+Treg细胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一.
关键词： CD4~+CD25~+Treg细胞 FOXP3 肿瘤免疫
