首页 > 文献资料
-
诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的 研究和评价转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞(SMCs)向软骨细胞分化的影响.方法 从大白兔的髂骨骨髓液中提取和分离骨髓基质干细胞,将无血清Mc5A培养液分为四组,含有5 ng的TGF-β1和100 ng的IGF-I组为A组、含有TGF-β1为B组、含有IGF-1组为C组及无血清Mc5A培养液为D组作为空白对照,先进行单层细胞培养的10天,再置于松质骨基质明胶(BMG)支架中继续培养10天,然后进行甲苯胺蓝染色、蛋白多糖含量的测定.结果 第5、10天后,各组单层细胞培养的细胞个数均有显著性差异,即A组＞B组＞C组＞D组;第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量检测结果,即A组＞C组＞B组＞D组(P＜0.05).结论 早期应用TGF-β1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力,而IGF-I可提高TGF-β1对骨髓基质干细胞软骨分化作用.
-
肿瘤分子靶向治疗进展(二)临床常用分子靶向药物
单克隆抗体1975年Koehler等采用细胞融合技术,使小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞,后者产生的抗体,称为单克隆抗体(monoclonal antibody,MoAb),简称单抗,由于单抗具有性质纯、效价高、特异性强,少或无血清交叉反应等特点,已被广泛应用于肿瘤的治疗.
-
角朊细胞培养技术新进展
角朊细胞的培养在组织工程化人工皮肤的构件中是重要的研究内容之一.近年来,人们对角朊细胞的几种主要培养方法进行了不同程度的改进.本文综述了角朊细胞的几种主要培养方法,以及培养过程中各种细胞生长因子和物质影响研究的新进展.
-
Flt3L与Tpo、SCF组合对脐血干/祖细胞的体外短期调控作用
我们对不同细胞因子组合在无血清无基质条件下对脐血干/祖细胞的调控作用进行了研究，旨在探讨一种体外培养方法，使脐血干/祖细胞在短时间内有效扩增，避免长期体外暴露引起的污染，避免异源血清带来的免疫反应和血源传播性疾病［1］，经济、省时，更适合临床应用。
-
不同培养基中CIK的生物学特性及其对肿瘤细胞的杀伤效果
目的 比较健康人和肿瘤患者细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine-induced killer,CIK)在淋巴细胞无血清培养基及普通无血清培养基中的细胞形态、体外扩增速度、细胞表型及其对肿瘤细胞株的杀伤活性.方法 取健康人和肿瘤患者外周血各3例,经密度梯度离心获得外周血单个核细胞(PBMC),分别在淋巴细胞无血清培养基及普通无血清培养基中,加入基因重组人干扰素γ(rhIFN-γ)、抗人CD3单克隆抗体(OKT3)和基因重组人白细胞介素2(rhlL-2),体外诱导CIK细胞,比较细胞的形态、扩增速度、细胞表型及杀伤活性.结果 在不同培养基中健康人外周血CIK细胞的扩增速度、流式细胞学检测的CD3+ CD8+和CD3+ CD56+细胞百分比以及对K562和HL-60肿瘤细胞株的杀伤活性均显著高于肿瘤患者,差异有统计学意义(P＜0.05)；两种来源的PBMC在不同的培养基中经过诱导获得的CIK细胞在增殖速度、流式细胞学分析结果及杀伤活性方面差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 在不同的培养基中肿瘤患者的PBMC经诱导培养获得的CIK细胞可有显著差别,为临床进一步提高CIK细胞的治疗效果提供了实验依据.
-
IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bc1-2表达的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠前成骨样MC3T3*E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax/BEl-2表达的影响.方法 MC3T3-E1细胞分组培养,应用4个浓度的IGF-1(1 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL)干预24 h.观察MC3T3-E1细胞动态生长状况;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax/Bc1-2的表达水平.结果 与正常血清对照组相比,无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加(P<0.05);与无血清组相比,IGF-1组MC3T3一E1细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax表达减弱(P<0.05),Bc1-2表达增强(P<0.05);各浓度组间比较,(1-50)ng/mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低(P<0.05),Bax表达逐渐减弱(P<0.05),50ng/mL浓度组Bc1-2表达明显增强(P<0.01),Bc1-2/Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.917,P<0.01).结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bc1-2表达,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡:并存在刺量依赖性效应.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 MC3T3-E1成骨细胞 无血清 凋亡 -
人表皮细胞的培养方法探讨
目的探讨适合临床推广、应用的人表皮细胞培养方法.方法对比人表皮细胞在无血清培养基K-SFM及有血清培养基DMEM中的生长情况.结果人表皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染.结论应用无血清培养基K-SFM培养人表皮细胞,方法简便,适合临床推广应用.
-
无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定
背景:近有研究者采用神经干细胞的无血清培养基从脑肿瘤组织中培养出肿瘤干细胞.目的:探讨利用无血清培养基从原发胶质母细胞瘤组织中分离培养胶质瘤千细胞的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08在山东省青岛市脑科研究所完成.材料:胶质瘤组织来自青岛大学医学院附属医院神经外科手术切除标本,DMEM/F12培养基、B27为GIBCO公司产品,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子Peprotech公司产品.方法:无菌条件下取肿瘤深部无坏死囊变、来电凝组织,剪切消化成单细胞悬液后,加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂的无血清DMEM/F12培养基,体外分离培养获得胶质瘤干细胞.待培养孔中细胞团数量增多、培养液刚刚变色时,吸取含有细胞团的培养液进行传代.取第3代胶质瘤十细胞,加入巢蛋白和CD133抗体行免疫荧光检测;加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导5 d,行胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色观察分化情况.主要观察指标:原代与传代培养的胶质瘤干细胞形态及生长情况,胶质瘤干细胞巢蛋白、CD133的表达及其分化.结果:原代培养7-10 d可形成大小不一的细胞团,球形或近似球形,呈悬浮或半悬浮状态牛长.细胞形态均,折光性好:传代24 h后次代细胞团形成,细胞的大小,形态与原代无明显差别,连续传代5次后细胞团增殖活跃.第3代胶质瘤干细胞呈巢蛋白和CD133阳性表达,加入胎牛血清后细胞球贴壁分化,呈胶质纤维酸性蛋白阳性.结论:人脑胶质瘤组织中存在胶质瘤下细胞,在体外无血清条件下可保持未分化的悬浮状态;加入血清后贴壁分化呈胶质瘤细胞样或神经元样,符合于细胞的自我繁殖和多向分化特征.
-
大鼠视网膜干细胞的增殖和多向分化
背景:国内对视网膜干细胞的体外分离培养及鉴定仍处于初步探索阶段.目的:体外分离、培养及鉴定新生大鼠视网膜干细胞,探讨其多向分化潜能.方法:用神经干细胞无血清培养方法分离和培养新生24 h的SD大鼠睫状体细胞,第6代视网膜干细胞经胎牛血清诱导分化,应用免疫细胞化学方法检测视网膜干细胞的分化特性.结果与结论:体外培养的细胞球具有连续克隆能力,Nestin抗原阳性,BrdU 标记结果显示悬浮细胞团主要由分裂增殖的细胞组成,并表达胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10;诱导分化后的细胞表达星形胶质细胞特异性标志物GFAP、神经元特异性标志物NSE、感光细胞标志物Opsin、双极细胞特异性抗原PKC和节细胞特异性抗原β-tubulin,实验初步证实培养的视网膜干细胞具有神经干细胞特性,能自我更新和增殖分化成为感光细胞类型的细胞.
-
昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离与培养
背景:对于神经干细胞的分离培养,目前多采用胰蛋白酶对组织细胞予以消化,但消化时间较难把握.目的:采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养,并进行初步的免疫组织化学检测.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-10/2007-09在广西医科大学基础医学实验室完成.材料:孕14～16d的昆明种小鼠由广西医科大学实验动物中心提供.方法:分离昆明种小鼠胎鼠的脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,在加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的B27无血清DMEM/F12培养基中培养.主要观察指标:用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞.结果:培养24 h后,细胞以悬浮方式生长,聚集成团;48 h后形成由数十个细胞组成的细胞球,形态规则,体积大小不等,细胞无突起,形成典型的神经球,可传代扩增.免疫细胞化学染色结果示细胞巢蛋白呈阳性表达.结论:在含有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清B27培养基条件下,有利于小鼠胚胎神经干细胞的体外培养和传代增殖.
关键词： 神经干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 表皮细胞生长因子 无血清 -
Numb基因在培养神经干细胞中的表达
目的观察参与细胞发育分化和细胞非对称性分裂的 notch信号传导路的分子 Numb在体外培养的神经干细胞内的分布和表达 , 以期为在体外控制神经干细胞的分化提供新的线索.方法取孕 14 d( E14) Balb/c近交系小鼠胚胎 ,采用无血清培养技术,在体外进行神经干细胞克隆的培养传代,经过免疫细胞化学鉴定后,用 Numb特异性引物对培养的神经干细胞进行 RT-PCR分析, PCR产物经克隆测序后,用地高辛标记,对神经干细胞克隆进行原位杂交.结果在培养的神经干细胞内有大量细胞 (>95% )均为 Numb基因表达信号阳性;干细胞克隆内部中心和边缘相互间未见明显差别.结论 Numb基因可能在神经干细胞的增殖和分化过程中起重要作用.
-
适合人肌母细胞的无血清培养基
背景:肌母细胞体外培养大多使用添加胎牛血清培养基,存在很多不足,开发无血清培养基,更加稳定、安全、经济,有广泛的应用前景.目的:初步探索适合人肌母细胞培养的无血清培养基.方法:配制含胎牛血清培养基(DMEM/F12 1:1添加胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子和体积分数20％胎牛血清),间充质干细胞无血清培养基组(无血清培养基、2％血清替代物、2 mmol/L L-谷氨酰胺,人脐带间充质干细胞,细胞纯度大于99％,UltraCULTURETM添加血清替代物,谷氨酰胺).自制无血清培养基组(GibcoTM添加胰岛素样生长因子1,碱性成纤维细胞生长因子,谷氨酰胺).3种培养基分别对人肌母细胞分别进行培养,观察肌母细胞的形态、免疫组织化学的鉴定,计算克隆的形成率,绘制细胞生长的曲线,MTT检测肌母细胞的活性,比较3种培养基培养肌母细胞增殖、分化的差异.结果与结论:各组细胞形态上无明显差异;各组免疫组织化学鉴定肌母细胞纯度均达99％;含胎牛血清培养基组和自制无血清培养基组克隆形成率显著高于间充质干细胞无血清培养基组(P＜ 0.01),含胎牛血清培养基组克隆形成率显著高于自制无血清培养基组(P＜0.01);含胎牛血清培养基组与自制无血清培养基组细胞数远高于间充质干细胞无血清培养基组;自制无血清培养基组细胞活性显著高于含胎牛血清培养基组和间充质干细胞无血清培养基组(P＜0.01).自制无血清培养基组可有效用于肌母细胞的培养,在促进肌母细胞早期贴壁、增殖上还需进一步优化.
-
骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡
背景:骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变.近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明.目的:观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制.方法:通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15％胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组.使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化.结果与结论:无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P＜0.05).p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P＜0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P＜0.05).结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变.
-
无血清培养促进脂肪干细胞向血管内皮细胞分化
背景：无血清培养对大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化影响的报道甚少。
目的：观察无血清培养大鼠脂肪干细胞后向血管内皮细胞诱导分化的情况。
方法：采用酶消贴壁培养法获得雄性SD大鼠脂肪干细胞，传代培养至第3代。实验组细胞无血清培养24 h，对照组用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养。然后应用血管内皮细胞诱导培养基培养3周。
结果与结论：大鼠脂肪干细胞经体外培养可呈多角形或梭形贴壁生长，并能稳定传代。传代后大鼠脂肪干细胞极低表达细胞表面标志CD31。大鼠脂肪干细胞定向血管内皮细胞诱导分化后细胞呈鹅卵石样，CD31阳性表达明显上升且实验组明显高于对照组。实验组诱导后大鼠脂肪干细胞能够吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白及在基质胶上形成2D小管样结构，其能力明显强于对照组。结果证实无血清培养可促进体外大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化。关键词： 干细胞 脂肪干细胞 血管内皮细胞 诱导 分化 无血清 血管内皮细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 省级基金 干细胞图片文章 -
自制血清替代物行无血清条件培养人表皮干细胞
目的:建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法,并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较,探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控,提高实验的准确性.方法:实验于2002-05/2004-07在江西医学院第二附属医院医学分子中心完成.①从幼儿包皮中分离表皮细胞、用胶原Ⅳ分别黏附表皮细胞10～15 min,收集黏附细胞,即为纯化的表皮干细胞.②分3组进行培养,3组培养条件均有无钙低糖Dulbeceo改良的Eagle培养基,0.05 mmol/L CaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松;有血清培养组还含有100 g/L螯合钙的干细胞专用血清;无血清培养组1还含有100 g/L无血清培养基血清替代物.无血清培养组2还含有100 g/L无血清培养基血清替代物和50 μg/L牛垂体提取物.③培养20 d后,在倒置显微镜下对所培养细胞进行形态学观察;同时计数细胞数(大于100个细胞团为1个集落称克隆),计数各组克隆数;采用胰酶消化传代,计数传代数及多次传代后所得细胞总数;流式细胞术分析α6,CD71(人表皮干细胞表面标记)的表达情况,计算人表皮干细胞α6bri CD71dim细胞百分率;采用流式细胞术进行细胞周期分析处于静止期/DNA合成前期人表皮干细胞百分率,采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白19及5/8(均表明人表皮干细胞生长情况,且以角蛋白19更能明确表明人表皮干细胞生成情况)和角蛋白10表达情况.结果:①人表皮干细胞细胞形态学观察结果:应用倒置显微镜下观察检测,无血清培养组1与有血清培养组人表皮干细胞细胞形态学基本相同,无血清培养组1集落形成时间稍晚于有血清培养组.②形成的克隆数及经胰酶消化可传代数、细胞总得数:胰酶消化传代后,形成的克隆数、细胞总得数及细胞传代数无血清培养组1与有血清培养组相近(P＞0.05),两组形成的克隆数、细胞总得数明显低于无血清培养组2(P＜0.05)而细胞传代数组明显高于无血清培养组2(P＜0.05).③细胞周期分析及α6,CD71鉴定结果:采用流式细胞术检测,有血清培养组与无血清培养组1中人表皮生长干细胞α6bri CD71dim细胞百分率及处于静止期/DNA合成前期细胞(即人表皮干细胞)百分率相近(P＞0.05),且均高于无血清培养组2(P＜0.05).④细胞角蛋白19和5/8及10表达情况:免疫细胞化学鉴定结果,有血清培养组与无血清培养组1角蛋白19和5/8及10阳性细胞百分率相近(P＞0.05),而两组角蛋白19阳性细胞百分率明显高于无血清培养组2(P＜0.05),角蛋白5/8和10阳性细胞百分率明显低于无血清培养组2(P＜0.05).结论:①利用自制的无血清培养基血清替代物,添加一些辅助因子(0.05 mmol/L CaCl2,10 μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松)能较好的培养表皮干细胞,传代次数多,培养时间长,形成克隆数较多,说明此类细胞具有较强的自我复制能力,结合所培养细胞中人表皮干细胞α6briCD71dim细胞及角蛋白19和5/8阳性细胞比例较高等特点,表明该无血清培养条件适合表皮干细胞的生长.②自制的无血清培养基血清替代物添加一些辅助因子(0.05 mmol/L CaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松,50μg/L牛垂体提取物)的无血清培养组2能较快获得大量人表皮细胞,当组织工程需要大量细胞时可用此种培养扩增方法.
-
人食管上皮细胞原代培养方法的改良研究
目的 探讨适合应用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法.方法 对比食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM及含血清培养基DMEM中的生长情况.结果 食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染.结论 应用无血清培养基K-SFM培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用.
-
人皮肤角质形成细胞无血清原代培养方法的建立
目的 建立人皮肤角质形成细胞体外无血清、无牛垂体提取物及无饲养细胞的原代培养方法.方法 应用胰蛋白酶.EDTA冷温两步消化法消化健康青年包皮皮肤,获取角质形成细胞并置于无血清、无牛垂体提取物、成分确定的角质形成细胞培养基中进行原代培养并传代.通过观察细胞形态和采用免疫组织化学方法鉴定及绘制生长曲线,分析、评价细胞质量.结果 该方法可稳定获得高纯度、活性好的角质形成细胞.原代角质形成细胞可稳定增殖2周左右,至少可稳定传代增殖5代.经免疫组织化学方法鉴定,99%以上为角质形成细胞.结论 冷温两步消化法及体外无血清原代培养技术可为科研工作提供足量高质量的角质形成细胞,是高效经济的获得人角质形成细胞的方法.
-
基因1～6型无血清 HCV 颗粒培养体系的建立和特点
近产生 HCV 颗粒（HCVcc）的细胞培养系统已经建立。构建无血清培养环境可能是制造无活性全病毒疫苗好的发展方向。来自 Hvidovre 医院的 Mathiesen CK 等描述了通过 Huh7．5细胞培养于腺病毒表达介质获得基因型1～6型的无血清 HCVcc（sf -HCVcc）。与 HCVcc 相比，sf -HCVcc 显示出0．6～2．1l g 倍的感染性滴度的增加，可能与 sf -HCVcc 的释放增加和特异性感染力相关。与 HCVcc 相反，sf -HCVcc 在密度梯度谱中只有一个同源性高峰。sf -HCVcc 的进入依赖于 HCV 共同受体 CD81、LDLr、SR -BI 和 clathrin 介导的细胞内吞。HCVcc 和 sf -HCVcc 能被慢性 HCV 感染者的血清中和，也能被抗构象表位的人单克隆抗体中和。因此作者发明了产生高滴度单一密度 sf -HCVcc 的无血清培养系统，显示与 HCVcc 相似的生物学特性。这种方法可能推进 HCV 疫苗发展，并有利于 HCV 的生物学研究。
-
适于重组CHO细胞培养的无血清培养基的制备
目的 制备适于重组CHO细胞培养的无血清培养基(Serum-fee medium,SFM).方法 在本室制备的无血清、低蛋白培养基SFMC的基础上,开发支持重组CHO-K1细胞生长的无动物源、无蛋白培养基(Protein-free midium,PFM,以柠檬酸铁、硫酸锌和酵母水解物替换SFMC中的转铁蛋白、胰岛素和动物组织水解物)及化学成分确定的培养基(Chemically defined medium,CDM,以PFM培养基为基础,通过调整和优化氨基酸的浓度和其他部分营养物质浓度制备),评价各种无血清培养基的适应性、稳定性以及冻存、复苏性能,并分别在125 ml摇瓶和1.4L生物反应器中进行培养.结果 CHO-K1细胞在PFM和CDM中生长良好,经125 ml摇瓶培养,高细胞密度分别为9.3× 106和7.3× 106个/ml,大细胞密度与SFMC培养基相比,分别提高了107％和62％.经1.4L搅拌式生物反应器流加培养,PFM培养基的高细胞密度可达9.8×106个/ml,培养216 h时,细胞活性仍维持在80％,重组蛋白表达量达110.5 mg/L;采用CDM培养基经流加培养,CHO-K1细胞大密度可达9.5×106个/ml,但细胞培养时间较PFM培养基短.结论 在SFMC培养基的基础上,成功开发出培养效果更优的PFM和CDM培养基.
-
重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达
目的 在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimu lating hormone,FSH).方法 用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSH α和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选并建立稳定表达工程细胞株,并对工程细胞的生长和表达进行分析.结果 重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH经双酶切和测序证明构建正确；转染CHO细胞获得高的阳性克隆率(80.65％),经MTX加压和克隆筛选获得稳定表达工程细胞株D5;D5细胞株在无血清摇瓶批次培养中FSH的表达量为2.5 IU/ml,在培养参数可控的生物反应器中FSH的表达量为摇瓶中的2倍多,达6 IU/ml.结论 建立了一种在CHO细胞中表达异二聚体糖蛋白的方法,获得的工程细胞适应无血清培养且易于扩大培养,在生物反应器中可获得高的表达量,且具有进一步优化提高表达量的潜力.
