首页 > 文献资料
-
非小细胞肺癌患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白表达与预后的关系
肺癌耐药性形成机制,已成为肺癌分子生物学研究热点[1].肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐药的原因较多,肺癌耐药机制复杂.肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)、多药耐药蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)是近年发现的肿瘤耐药相关基因,在肺癌耐药中起着一定的作用.本实验应用免疫组化方法检测LRP、MRP在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并进一步探讨与临床的相关性.
-
非小细胞肺癌血管生成因子与耐药相关基因的关系及其临床意义
肿瘤细胞对化疗药物产生原发或继发耐药是化疗失败的主要原因之一,研究表明非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)耐药不仅与耐药相关基因蛋白表达有关,亦涉及血管生成因子[1].
-
LRP在卵巢癌组织中的表达及其临床意义
LRP是近年发现的一种耐药相关基因,Izquierdo等采用免疫组化法测定了LRP在卵巢癌中表达,发现LRP表达与预后有关.我们采用RT-PCR法测定LRP在卵巢癌中的表达,报道如下.
-
肺癌耐药相关基因及逆转耐药策略的研究进展
肿瘤的耐药性,特别是在肺癌,一直是影响化疗效果的一大难题.随着现代分子生物学技术的发展,发现耐药性的产生主要与肿瘤细胞表达各种耐药相关基因有关,本文拟就目前肺癌耐药相关基因及其逆转耐药的方法的研究进展作一综述.
-
杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因的检测
随着抗生素的大量广泛应用,近年来耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已经成为医院感染中常见的病原菌,MRSA具有多重耐药特征,常表现为对β-内酰胺类、四环素类等多种抗生素同时耐药,给临床治疗带来困难.为进一步探讨MRSA对四环素类抗菌药物的耐药机制与MRSA的致病因子杀白细胞毒素(PVL)产生情况及其关系,对45株MRSA进行了四环素耐药相关基因tetM和PVL基因的检测,结果报告如下.
-
肺癌的化疗途径及护理进展
近年来的研究表明:肿瘤中存在多药耐药基因(MDR),这类基因的激活和表达使肿瘤耐受多种抗肿瘤药物而使化疗失败,而不恰当的化疗方式有可能诱导MDR或其他耐药相关基因的激活和表达.为尽可能地避免化疗中的各种不利因素和在肿瘤的临床治疗中取得理想疗效,本文就此对肺癌化疗途径的选择及护理进展报道如下.
-
结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr的建立及其耐药相关基因的表达
目的建立结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr并研究其耐药机制.方法采用阿霉素浓度递增法,建立人结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr,观察其生长规律;用MTT法鉴定耐药细胞株的耐药性;以流式细胞术检测其周围分布;用RT-PCR方法检测耐药相关基因mdr1、MRP、GST-π及TopoⅡmRNA水平在诱导耐药过程中的变化;采用免疫组化法检测P-gp的表达.结果LoVo/Adr细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,倍增时间延长,细胞形态较不规则,S期细胞减少,而G1、G2期增多,P-gp染色阳性.LoVo/Adr对阿霉素、长春新碱、丝裂霉素、环磷酰胺和5-FU耐药倍数分别是61倍、14倍、3倍、9倍和1倍.亲本LoVo细胞mdr1不表达,随着阿霉素诱导mdr1 mRNA水平逐渐增高,GST-πmRNA在诱导初期显著增高,但不随着对阿霉素耐受浓度增加而升高;ToopⅡmRNA水平一直无显著变化;未测到MRP的表达.结论耐药株LoVo/Adr是一个表达MDR表型的多药耐药模型,主要由mdr1和GST-π基因介导耐药,与TopoⅡ和MRP基因无关.
-
胶质瘤耐药细胞株的建立及其继发性耐药相关基因的筛查
目的: 构建胶质瘤耐替尼泊苷(teniposide,又称VM-26)细胞株,利用基因芯片筛查该细胞株继发性耐药相关基因并证实其表达.方法: 选用人胶质瘤细胞系SHG44为靶细胞,从低剂量起始逐步递增用药量(每4 000个细胞VM-26剂量由0.135 ng至4.5 ng)诱导建立对VM-26耐药的细胞株,绘制亲代细胞系和耐药细胞株增殖曲线比较两者倍增时间,采用细胞毒性实验计算半数抑制浓度(IC50)比较两者耐药程度的差异.应用人类cDNA表达谱芯片检测耐药和敏感细胞基因表达谱的变化,筛查出与耐药有关的基因并经半定量RT-PCR验证.结果: 经过72代诱导培养,建立了稳定耐药的细胞株SHG44/VM-26,耐药性是亲代细胞的52.6倍;耐药细胞倍增时间明显长于亲代细胞(25.6 vs 48.9 h);cDNA芯片筛选出11个基因表达上调,42个基因表达下调;半定量RT-PCR证实基因MDR1、NGFR、HSP22、CX IX、CDKN3和NADE的表达与基因芯片结果基本一致.结论: 成功建立胶质瘤耐替尼泊苷细胞株SHG44/VM-26,该细胞株的继发性耐药与基因MDR1、NGFR、HSP22的高表达和CX IX、CDKN3和NADE的低表达相关.
-
cDNA基因芯片对人胶质瘤组织原发性耐药相关基因的筛查
目的:利用cDNA基因芯片筛查与人脑胶质瘤原发性耐药相关的基因,为获取不同个体胶质瘤化疗药物药敏预报基因提供实验依据.方法:收集符合要求的临床手术切除的人脑胶质瘤组织标本共6例,原代培养肿瘤细胞;由MTT法检测替尼泊苷(teniposide ,VM-26)对胶质瘤细胞生长的抑制率,按VM-26 45 μg/ml(人血药峰浓度)时抑制率>30%为敏感、≤30%为耐药作为标准,将6例组织细胞分为耐药和敏感2组.cDNA芯片检测结合聚类分析方法筛查瘤细胞中与耐药相关的差异表达基因;以半定量RT-PCR法检测瘤细胞中HDAC1基因表达加以验证.结果:根据VM-26对细胞抑制率将6例胶质瘤细胞分为3例VM-26敏感和3例耐药.cDNA芯片结合聚类分析共筛选出有表达差异的基因21个,其中表达上调的基因6个、表达下调的基因15个.将表达差异明显的HDAC1经半定量RT-PCR验证,该基因在6例组织中都有表达,趋势与芯片结果一致.结论:胶质瘤原发性耐药可能与cDNA芯片筛查到的21个基因相关,其确切的耐药机制需要进一步深入研究.
-
基因芯片在白念珠菌耐药基因研究中的应用
近年来,临床上白念珠菌耐药现象日趋增多,利用基因芯片来绘制基因表达图谱是目前研究白念珠菌酎药基因常用的手段.通过基因芯片对菌株在不同药物处理或经不同途径产生耐药表型后大量差异表达基因进行分析,可用来寻找耐药相关基因,并阐明其功能,更有助于多基因协同作用机制的深入研究.
-
去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞逆转的分子机制
目的 探讨去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及可能分子机制.方法 (1)采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度(即对细胞抑制率<10%的药物浓度).并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的半数抑制浓度(IC50);(2)采用流式细胞仪分别检测1、2倍无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况:(3)采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdr1 mRNA、MRP1 mRNA、GST-PimRNA表达,并检测药物处理72h后GST-PimRNA的表达.结果 (1)SNCTD对A549/DDP的无毒浓度为5μg/ml,无毒浓度SNCTD与顺铂联合应用可使A549/DDP细胞对顺铂的IC50值下降为4.32ug/mI.逆转倍数为1.97倍;(2)无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强(P<0.05);(3)5、10μg/ml SNCTD处理耐药细胞株48h后mdr1 mRNA、MRP1 mRNA表达均明显减弱(P<0.05),而且10μg/ml SNCTD处理组减弱强度亦明显大于5μg/ml SNCTD处理组(P<0.05),呈现浓度依赖性;而GST-PimRNA表达并无明显变化(P>0.05),72h后GST-PimRNA表达也未出现下降(P>0.05).结论 SNCTD可以逆转A549/DDP细胞的耐药作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1、MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关.
关键词： 去甲斑蝥酸钠 A549/DDP细胞 多药耐药 逆转 耐药相关基因 -
多重耐药志贺菌临床分离株耐药基因检测及指标聚类分析
志贺菌(shigella)至今仍是影响人类肠道健康的主要致病菌之一,引起人类细菌性痢疾[1].婴幼儿胃肠道抵抗力弱,对志贺菌更加具有易感性.近年来在抗菌素的压力下志贺菌出现多重耐药,使临床用药显得棘手,而儿科适用药物谱较狭窄,治疗更为困难.有关志贺菌耐药机制的探讨,我们曾对复方新诺明耐药相关基因、氯霉素类基因、β-内酰胺类基因做了研究[2-4],由于试验菌株少,不能反应嘉兴地区志贺菌的耐药状况.因此,为进一步了解志贺菌对常用药的耐药机制,本研究共筛选了嘉兴地区耐药志贺菌58株,检测了β-内酰胺类基因、复方新诺明耐药相关基因、接合性质粒、转座酶、插入序列和整合子,共14种耐药相关基因,用指标聚类分析(SPSS法)分析获得性耐药相关基因和可移动元件遗传标记存在状况的相关性.
-
绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究
目的:采用目前治疗绒癌常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系,比较不同药物引起耐药机制的差异.方法:采用浓度梯度递增法和间歇诱导法,分别用 5-FU,MTX,VP-16诱导绒癌细胞系JEG-3,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对 5-FU、MTX 、KSM 、VP-16和Taxol的耐药指数,用RT-PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和多药耐药基因(MDR-1)的mRNA表达,比较各种细胞生长曲线,细胞群体倍增时间 .结果:JEG-3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST-π、DHFR的共表达,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化.诱导耐药前JEG-3细胞无MDR1的表达,用VP-16、5-FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR-1表达,且耐药指数增加.结论:JEG-3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST-π、DHFR表达的关系不密切,而与MDR1的表达有关.
-
紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX基因表达谱的变化
目的 比较紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3基因表达谱的差异,筛查获得性紫杉醇卵巢癌耐药的相关基因.方法 取对数生长期SKOV3、SKOV3/TAX细胞,抽提细胞总RNA,合成双链cDNA,生物素标记,用高通量Affymetrix人类基因组U133A基因芯片检测其基因谱.结果 与SKOV3相比,SKOV3/TAX有111条基因表达发生变化(45条基因表达上调,66条基因表达下调).结论 SKOV3/TAX的部分基因表达发生变化,与卵巢癌化疗耐药有关.
-
非小细胞肺癌组织中耐药相关基因的表达及意义
目的 探讨耐药相关基因在非小细胞肺癌(NSCLC) 中的表达及意义.方法 应用RT-PCR半定量法检测60例未行化放疗的NSCLC患者癌组织及癌旁组织中耐药相关基因[多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)]mRNA的表达.结果 与癌旁组织比较,癌组织中MRP1、LRP、ERCC1 mRNA表达显著升高,BCRP mRNA显著降低(P＜0.05);BCRP mRNA在癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关(rs=0.339,P=0.008),癌组织中MRP1 mRNA与LRP mRNA、BCRP mRNA与ERCC1 mRNA呈正相关.COX多因素回归分析示,MRP1 mRNA高表达是影响预后的独立因素(RR=4.784,P=0.026).结论 检测MRP1 mRNA对预测NSCLC患者生存期、协助临床选择化疗方案可能具有一定意义.
-
人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选
目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切.
关键词： 食管癌 耐药细胞系 耐药相关基因 DNA聚合酶beta -
鲫鱼沙门菌检出与水质间关系的调查研究
目的 监测杭州白马湖水域鲫鱼的沙门菌感染和耐药状况,了解该水域的水质污染状况.方法 收集不同水产市场的244份鲫鱼肠道样本,野生(白马湖水域)样本和健康饲养(养殖场)样本分别为97份和147份,PCR检测沙门菌保守基因invA与耐药相关基因.K-B药敏纸片法检测细菌的耐药性.结果 标本共计检测到6份肠炎沙门菌阳性.鲫鱼沙门菌感染率平均为2.5％ (6/244),野生鲫鱼和饲养鲫鱼的感染率分别为3.1％ (3/97)和2.0％ (3/147).6株菌均扩增出耐药相关基因parC和gyrA,1株还扩增出了blaTEM和tetB基因.药敏试验显示部分菌呈多重耐药,所有菌对喹诺酮类药物有不同程度耐药,部分菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类或四环素类药物耐药.结论 野生鲫鱼与饲养鲫鱼均存在肠炎沙门菌感染.药敏试验结果显示,野生鲫鱼耐药程度强于饲养鲫鱼,提示白马湖水域可能存在抗生素污染.
-
应用基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因
目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/Tax300与其亲本细胞OC3(敏感株)之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因,探讨基因表达谱差异与卵巢癌肿瘤耐药之间相关性.方法分别提取C3/Tax300与OC3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在BiostarH140S基因表达谱芯片上进行杂交.扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析.结果共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,主要涉及细胞信号蛋白和传递蛋白,蛋白翻译合成类以及细胞骨架和运动、离子通道和运输蛋白、代谢、发育等14大类相关基因.下调基因主要为EBNA-3、COP9、StIP1,上调的基因主要是JAK2、HSPS、NADH等.结论这些基因表达差异与卵巢癌化疗耐药有关.
-
喉癌耐药细胞株Hep-2/5-Fu的建立及其差异表达基因的筛选
目的:建立喉癌细胞耐药模型Hep-2/5-Fu并初步筛选可能的耐药相关基因.方法:采用5-Fu大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法建立人喉癌耐药细胞Hep-2/5-Fu,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定其耐药性并计算耐药指数(RI)；用基因芯片技术检测耐药细胞株Hep-2/5-Fu与其亲本细胞株Hep-2中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因；用半定量RT-PCR法进行验证.结果:Hep-2/5-Fu细胞与Hep-2细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,并对顺铂及长春新碱有不同程度的交叉耐药性.通过基因芯片筛选出差异表达基因1 210个,可能的耐药相关基因包括Cyclin D、IGF BP3、CASP9、CDK4/6,其中Cyclin D在Hep-2/5-Fu中的表达是亲本细胞的6.599 7倍.结论:Hep-2/5-Fu细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与Cyclin D等耐药相关基因有关.
-
人胰腺癌细胞STAT3下游耐药相关基因的初步筛选
目的 利用小分子干扰RNA( siRNA)和基因芯片技术初步筛选人胰腺癌细胞信号转导及转入激活因子3( STAT3)下游耐药相关基因,为探索STAT3调控耐药机制提供依据.方法 利用基因芯片技术比较人胰腺癌细胞SW1990与siRNA沉默STAT3后SW1990细胞中基因表达的差异,初步筛选STAT3下游耐药相关基因.结果 按差异显著性标准从47 000条基因(代表38 500个明晰的基因)中筛选出具有表达差异的基因共有982条(2.55%),其中上调表达2倍的基因有592条,下调表达2倍的基因有390条.与耐药相关基因有:显著上调的拓扑异构酶AⅡα( TOPOⅡα)、肿瘤坏死因子凋亡诱导相关配体(TRAIL)；显著下调的富半胱氨酸61( CYR61),Ras肿瘤基因家族成员(RAP1 A),bcl-2相关抗凋亡基因(BAG1),囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR).结论 胰腺癌耐药是一个多基因、多通路相互作用的结果.应用siRNA技术沉默STAT3基因后,有6条耐药相关基因发生改变.为进一步研究STAT3与胰腺癌耐药的关系提供新的线索,也为胰腺癌的治疗提供新的思路.
