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大鼠血浆中芦荟大黄素浓度的固相萃取-高效液相色谱法测定及其药代动力学研究
目的:建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相色谱( SPE-HPLC)分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程.方法:SD大鼠,按50和20 mg· kg -1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1％磷酸水(70:30)为流动相,柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参数.结果:血浆中芦荟大黄素在0.016～19.53 μg·mL-1(r=0.998 1)范围内线性关系良好,提取回收率为88.7％～94.6％,低检测限为0.008 μg· mL -1,定量限为0.016 μg·mL-1,日内和日间精密度RSD均＜6％.结论:芦荟大黄素在大鼠体内呈二室模型,分布广泛.建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力学研究.
关键词： 芦荟大黄素 固相萃取-高效液相色谱法 药代动力学 -
高效液相色谱法同时测定维药达瓦依金丸中8种有效成分
目的:建立以HPLC多波长梯度洗脱法同时测定达瓦依金丸中的龙胆苦苷、胡椒碱、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚8个活性成分.方法:采用Waters C18 (250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,运行时间45 min,平衡时间为15 min;流速1.0 mL·min-1;柱温为25℃;在270 nm处检测龙胆苦苷、在225 nm处检测木香烃内酯和去氢木香烃内酯、在254 nm处检测芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和343 nm处检测胡椒碱.结果:龙胆苦苷、胡椒碱、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在35.8 ～357.9 μg·mL-1(r =0.999 3),49.9～498.8 μg·mL-1(r=0.9999),12.0 ～ 119.7 μg· mL-1 (r =0.999 3),16.8 ～168.3μg·mL-1(r =0.999 5),5.6 ～56.2 μg·mL-1 (r =0.999 6),7.4 ～74.0 μg·mL-1 (r =0.999 8),15.7 ～ 156.8μg·mL-1(r=0.9991),5.7 ～57.4 μg·mL-1(r =0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为:98.93％,97.96％,99.38％,99.22％,99.12％,97.37％,98.94％和99.03％,RSD分别为1.65％,1.98％,1.99％,1.53％,1.23％,1.67％,2.10％和0.44％(n=6).结论:该方法简便、准确、重复性好,可为达瓦依金丸的质量控制提供实验依据.
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高效液相色谱法同时测定当归龙荟片中四种活性成分的含量
建立同时测定当归龙荟片中芦荟苷,黄芩素,芦荟大黄素和汉黄苓素的含量的HPLC方法.采用Diamonsil C<,18>柱(200.0mm×4.6mm,5μm)分离,以甲醇-乙腈体积分数为0.3%磷酸溶液(220:4:200,v/v/v)为流动相进行洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为225 nm.芦荟苷的线性范围为1.450～29.00μ/mL(r=0.9992),黄芩素的线性范围为0.4050～8.100μg/mL(r=0.9994),芦荟大黄素的线性范围为0.1100～2.200 μg/mL(r=0.9997),汉黄芩素的线性范围为0.2160～4.320μg/mL(r=0.9991).方法的平均回收率分别为100.7%(RSD%=0.88%),101.0%(RSD%=0.89%),100.O%(RSD=1.3%)和100.1%(RSD=1.1%).为当归龙荟片的质量控制提供了科学的方法.
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高效液相色谱法同时测定中药制剂烧伤膏中芦荟大黄素等5个蒽醌类化合物含量
目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定中药制剂烧伤膏中5个蒽醌类化合物(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的含量.方法 以5个蒽醌类成分为指标,选择Diamonsil C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,使用甲醇-乙腈-0.1％磷酸(23∶42∶35)为流动相进行洗脱.结果 5个蒽醌类成分分别在0.005 5 ～0.176 1 μg(芦荟大黄素r=0.999 9)、0.010 1 ～0.323 7μg(大黄酸r=0.999 9)、0.016 6～0.522 3μg(大黄素r=0.999 9)、0.021 6～0.690 6μg(大黄酚r=0.999 9)和0.030 3 ～0.968 8μg(大黄素甲醚r=0.999 9)内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为97.6％、96.6％、98.8％、99.2％、97.5％;RSD(n =6)分别为2.0％、1.8％、2.9％、1.3％、1.2％.结论 该方法简便、可靠、重复性好,适用于烧伤膏中大黄的质量控制.
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大黄的药理作用研究进展
大黄始载于《神农本草经》,至今已有1 000多年的药用历史.为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L、唐古特大黄Rheum tangguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根和根茎.性味苦寒,归大肠、脾、胃、肝、心经,具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经等功效[1].其主要有效成分为大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素等.大黄在临床应用极其广泛,现就近年来其药理作用的新研究进展作一综述.
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不同商品规格的甘肃大黄的综合质量考察
大黄具有泻热通肠、凉血解热、逐瘀通经之功效,药用历史悠久,在中成药处方中广泛使用.大黄即是甘肃的大宗道地药材,又是甘肃的传统出口商品,产量大,质量好.甘肃大黄在历代诸家本草均有记载[1],因其质量优异,早在公元前114年即向欧洲出口,13世纪马可波罗<东方见闻录>中写到"中国甘肃凉州产大黄甚丰"[2].由于大黄药材野生资源有限,现甘肃境内广泛栽培,仅礼县、庄浪大黄种植面积约6666.67hm2,年产大黄5万吨.因大黄药材商品规格种类繁多,各种规格的大黄药材综合质量考察至今未见文献报道.我们深入甘肃各道地大黄产区采集收购不同商品规格的大黄样品,测定其芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚这五种蒽醌类化合物含量、浸出物含量及水分、干燥失重、总灰分、酸不溶性灰分检查,并按照国际市场对绿色无公害药材的要求对甘肃不同产地的大黄药材进行农残、重金属检测,及人体必需微量元素测定,为甘肃不同产地、不同商品规格的道地药材大黄综合质量评价提供科学依据.
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HPLC波长切换法同时测定三黄胶囊中7种成分的含量
目的：建立高效液相色谱波长切换法同时测定三黄胶囊中盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚7种成分的含量。方法：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm），以甲醇（A）-磷酸盐缓冲液（B）（磷酸氢二钠2.3996 g溶解于1000 mL水中，用磷酸调pH值至3.0）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，30% A；5~15 min，30%~60% A；15~35 min，60%~100% A；35~40 min，30% A）；波长：0~10 min，345 nm；10~15 min，280 nm；15~40 min，254 nm；流速为1.0 mL?min-1；柱温30℃；进样量10μL。结果：盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的线性范围分别是0.09044~1.809μg（r=0.9994）、0.2828~5.656μg（r=0.9995）、0.05805~1.161μg（r=0.9999）、0.05144~1.028μg（r=0.9999）、0.02034~0.4068μg（r=0.9997）、0.04682~0.9364μg（r=0.9998）、0.02540~0.5080μg（r=0.9990）；平均加样回收率（n=6）分别为97.76%、97.09%、98.06%、99.42%、99.28%、96.94%、97.73%，RSD 分别为1.67%、1.82%、1.46%、0.89%、1.17%、1.03%、1.59%。结论：该方法操作简单，重复性好，可用于三黄胶囊的质量控制。
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一测多评法测定小儿化食口服液中蒽醌类成分的含量
目的:建立"一测多评"法测定小儿化食口服液中5种蒽醌类成分的含量.方法:以大黄素为内标,建立其与芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的相对校正因子,用UPLC法进行含量测定,计算小儿化食口服液中5种蒽醌类成分的含量,对"一测多评"法的计算值与外标法实测值进行比较.结果:建立的相对校正因子重现性良好,采用相对校正因子计算的含量与外标法实测值无显著性差异.结论: "一测多评"法可用于小儿化食口服液中蒽醌类成分的含量测定,方法操作简单、省时,结果准确,重复性好,适用于小儿化食口服液的质量控制.
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跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析
目的:建立跌打活血散双通道指纹图谱分析方法以评价该制剂质量.方法:以C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1％甲酸为流动相梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1;蒸发光散射检测器漂移管温度:115℃;氮气流速:2.7L·min-1;进样量:20 μL,采用HPLC-DAD-ELSD联用法建立UV 254 nm与ELSD双通道指纹图谱,对7家生产企业的14批跌打活血散进行相似度评价.结果:在上述色谱条件下,相似度评价结果表明不同企业产品间存在一定差异,经对照品比对确认了指纹图谱中14个色谱峰(儿茶素、表儿茶素、羟基红花黄色素A、阿魏酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1/Re、川续断皂苷Ⅵ、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、11-羰基-β-乙酰乳香酸).结论:建立的跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析方法简便、可靠,可更为全面有效地控制该产品质量.
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决明"发根"蒽醌类化学成分的研究
我室成功地诱导了决明发根的产生,对其化学成分进行了系统地分离与鉴定,共分得12个化合物,经波谱测试鉴定其中8个化合物的结构,分别是:大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚-8-甲醚、大黄酚-1-甲醚、芦荟大黄素、1-羟基-3-甲氧基-8-甲基蒽醌(1-hydroxy-3-methoxy-8-methylanthraquinone)、1-羟基-7-甲氧基-3-甲基蒽醌(1-hydroxy-7-methoxy-3-methylanthraquinone)和1,2,8-三羟基-6,7-二甲氧基蒽醌(1,2,8-trihydroxy-6,7-bimethoxyanthraquinone), 其中后4个化合物均为首次自决明发根中分得，其余结构正在鉴定之中.
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芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后内膜增生及血管重塑反应的在体研究
目的探讨芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后内膜增生及血管重塑反应的影响.方法将14只纯种日本大耳白兔随机分为髂动脉球囊损伤用药组和非用药组,于手术前后分别给予芦荟大黄素[40 mg/(kg·d)×7 d]或等体积的生理盐水肌肉注射.14 d后,取出左右髂总动脉,用计算机图像分析仪对其切片进行形态测量分析.结果用药组与未用药组比较,大内膜厚度均值稍低[(0.043±0.013)mm比(0.048±0.015)mm,P＞0.05];新生内膜面积减小[(0.025±0.005)mm2比(0.035±0.008)mm2,P＜0.05];管腔面积增大[(0.098±0.011)mm2比(0.08±0 013)mm2,P＜0.05];管腔面积和内膜面积及外弹力膜面积之比升高(用药组为0.793±0.036、0.617±0.054;非用药组为0.699±0.063、0.538±0.057,P＜0.05).用药组与未用药组比较,外弹力膜面积稍增大[(0.160±0.010)mm2比(0 152±0.01)mm2,P＜0.2],但与未受损伤的正常髂动脉外弹力膜面积[(0.134±0.023)mm2]相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论芦荟大黄素可以抑制球囊损伤后内膜的增生,并有可能对损伤后的血管重塑产生有利的影响.
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几种减肥养生茶中芦荟大黄素、大黄素的含量测定
目的 测定几种减肥养生茶中芦荟大黄素、大黄素的含量.方法 采用HPLC法,色谱柱:Kromasil 100-5C1s;流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15);柱温:30℃;检测波长:254 nm;流速:1.0 ml/min.结果 芦荟大黄素在0.044～0.44μg范围内,线性关系良好(r=-0.9797),平均回收率为102.01％;大黄素在0.044～0.44 μg范围内,线性关系良好(r=0.9968),平均回收率为100.54％.结论 本测定方法快速、灵敏、简便,为该类中草药饮品中有效成分的分离和测定提供了依据,为膳食调理提供了参考.
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番泻叶的药理作用及临床应用
番泻叶性味甘苦、寒,归大肠经.功效泻热导滞.主要成分为蒽醌类衍生物,番泻叶苷A、B、C、D,大黄酸、大黄素、芦荟大黄素和葡萄糖甙等.现代药理证明:番泻叶除泻下作用,对多种细菌如葡萄球菌、白喉杆菌、大肠杆菌及伤寒、副伤寒杆菌亦有抑制作用,并能抗真菌.在临床上的应用主要有以下几种:
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芦荟大黄素对大肠癌LOVO细胞自噬、凋亡及迁移的作用研究
目的 探讨芦荟大黄素对大肠癌LOVO细胞自噬相关通路Akt/mTOR、凋亡及迁移的影响.方法 将大肠癌LOVO细胞分为对照组(正常培养)、低剂量组(LOVO细胞+10 μmol/L芦荟大黄素培养30 min)、中剂量组(LOVO细胞+30 μmol/L芦荟大黄素培养30 min)和高剂量组(LOVO细胞+50 μmol/L芦荟大黄素培养30 min).采用CCk-8法检测各组细胞培养24、48、72 h细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用Transwell小室检测各组细胞迁移能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞IC3-Ⅰ、IC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、p-mTOR、Akt及p-Akt的表达.结果 低剂量组LOVO细胞增殖抑制率、迁移能力、凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),中、高剂量组LOVO细胞增殖抑制率、迁移能力降低,凋亡率增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05).低剂量组细胞检测IC3-Ⅰ、IC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、p-mTOR、Akt及p-Akt表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),中、高剂量组IC3-Ⅰ、IC3-Ⅱ、Beclin-1表达增加(0.43 ± 0.03、0.59 ± 0.04比0.16 ± 0.00,0.57 ± 0.07、1.06 ± 0.17比0.34 ± 0.02,0.37 ± 0.02、0.49 ± 0.01比0.13 ± 0.00),mTOR、p-mTOR、Akt及p-Akt表达减少(0.85 ± 0.08、0.37 ± 0.02比2.08 ± 0.07,1.42 ± 0.09、1.19 ± 0.02比1.97 ± 0.11,0.97 ± 0.00、0.84 ± 0.06比1.19 ± 0.02,0.43 ± 0.02、0.31 ± 0.01比0.98 ± 0.08),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05).结论 芦荟大黄素可能通过降低Akt/mTOR信号通路表达及其磷酸化水平,达到诱导大肠癌LOVO细胞自噬、凋亡,并抑制其生长、迁移能力的作用.
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芦荟大黄素对大鼠实验性急性胰腺炎的作用
目的:研究芦荟大黄素对大鼠急性胰腺炎(AP)炎性介质的作用.方法:应用牛黄胆酸钠制备大鼠AP模型,将54只大鼠随机分为假手术组、AP模型组、芦荟大黄素治疗组.术后3、6、12 h各处死6只.测定AP大鼠血小板活化因子(PAF)、白介素-6(Ⅲ-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.结果:芦荟大黄素治疗组与AP模型组比较,血清中PAF及IL-6、TNF-α水平明显低于重症急性胰腺炎模型组.结论:PAF、IL-6及TNF-α水平的降低可能与芦荟大黄素对它们的抑制作用有关.
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高效液相色谱法测定小鼠血浆中芦荟大黄素的浓度
目的:建立以高效液相色谱法测定小鼠血浆中芦荟大黄素浓度的分析方法.方法:取0.3 ml小鼠血浆,二氯甲烷萃取;HPLC采用Agilent 1100高效液相色谱仪系统,以Symmetry Shield RP C18为色谱柱,流动相为甲醇-水-醋酸(65:35:0.2),并用荧光法测定(λex=40 nm和λem=510 nm).结果:芦荟大黄素的保留时间为11.7 min;芦荟大黄素浓度在10～1 000 ng/ml(r=0.999)的范围内具有良好的线性关系,低检测限(LOD)和低定量限(LOQ)分别为4.5 ng/ml和5 ng/ml.结论:本方法简便,准确,灵敏.特异性强,重现性好,可用于血浆中芦荟大黄素的测定及药动学研究.
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芦荟大黄素对硬皮病成纤维细胞增殖的影响
目的 探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞,显微镜下观察成纤维细胞生长状况并摄片;用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定芦荟大黄素对成纤维细胞增殖的影响.结果 荟大黄素对硬皮病成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用. 结论芦荟大黄素可显著的抑制硬皮病成纤维细胞的生长,降低成纤维细胞的增殖指数并诱导其调亡.
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HPLC法测定通腑胶囊中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素的含量
目的 建立高效液相色谱法测定通腑胶囊中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素含量的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱:Waters C18 (250 ×4.6mm,5 μm),以0.1%磷酸:甲醇(15:85)为流劝相,流速1.OpL/min,检测波长:254nm,柱温35℃.结果 大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素进样量分别在0.0162～0.323μg,0.016～0.318μg,0.0164～0.328μg,0.008～0.16 μg,0.020～0.406 μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,平均回收率分别为:99.0%.99.0%,99.2%,98.3%,99.4% (n=6).结论 该方法专属性强,重现性好,可用于通腑胶囊中蒽醌类成分的含量测定.
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番泻叶用于普外科手术前准备260例
普外科手术前要充分清洗肠道,可防止因肛门括约肌松弛而排便于手术台上,并且可以减轻术后复胀和便秘.以往术前肠道准备采用术晨服皂水清洗灌肠,不仅增加护士的劳动强度,病人不易耐受,而且普外科患者多为老年和儿童,配合性较差,影响效果.番泻叶是一种常用的泻下药,主要成份含番泻甙、大黄酚、芦荟大黄素及大黄酸等,为豆科草决明属植物.由于它泻下作用显著,在临床上通常用于解除便秘.我科采用番泻叶泡水饮服,替代清洁灌肠,效果显著,现将体会总结如下:
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芦荟大黄素对动脉损伤后平滑肌细胞PCNA基因表达的影响
目的通过观察芦荟大黄素对动脉损伤后平滑肌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）基因及蛋白表达产物的作用，探讨芦荟大黄素抑制平滑肌细胞增殖的分子作用机制。方法用3F Fogarty球囊拉栓导管对纯种日本大耳白兔腹主动脉进行球囊内皮剥脱损伤，48小时后取出腹主动脉中膜进行原代平滑肌细胞培养，细胞同步于G0/G1期后，实验组加芦荟大黄素20?μg/ml，对照组加等体积的细胞培养液，18小时后，分别用RT/PCR、Western 杂交法检测药物组与对照组平滑肌细胞PCNA 基因mRNA和蛋白表达产物的变化。结果与对照组比较，加用芦荟大黄素以后，平滑肌细胞PCNA mRNA和蛋白水平上的表达均显著抑制。结论芦荟大黄素对平滑肌细胞的增殖抑制作用可能是通过影响PCNA基因的表达实现的。
