首页 > 文献资料
-
急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的检测及其临床意义
目的 探究分析采用PML-RARα融合基因方法检测急性早幼粒细胞白血病的准确率,进而指导临床诊断.方法 选取于2017年1月—2018年1月间于该院进行诊断和治疗的64例急性早幼粒细胞白血病患者和64名健康体检者为研究对象,分别检测其血液中PML-RARα融合基因的阳性情况,以及治疗前后PML-RARα融合基因的表达情况.结果 健康体检者的PML-RARα融合基因阳性率为0.00％,而白血病患者的阳性率为95.31％,则白血病患者中PML-RARα融合基因阳性率显著高于健康体检者(x2=116.5373,P<0.05);治疗前PML-RARα融合基因阳性率为95.31％,治疗后为73.44％,则治疗后PML-RARα融合基因的阳性率显著降低(x2=11.6148,P<0.05).结论 急性早幼粒细胞白血病患者的PML-RARα融合基因的阳性率较高,通过对PML-RARα融合基因的表达量进行检测可以用于临床诊断急性早幼粒细胞白血病,同时PML-RARα融合基因表达的强弱能够反应病情的程度.
关键词： 白血病 急性早幼粒细胞 PML-RARα融合基因 诊断意义 -
PML-RARα转基因小鼠发生急性早幼粒细胞白血病
为了从整体水平上研究PML-RARα融合蛋白的致白血病作用,建立了仅在髓系细胞中表达PML-RARα融合基因的转基因小鼠.通过表型分析发现一个单系的3只hCG-PML-RARα转基因小鼠在1-5个月时发生急性早幼粒细胞白血病,从而说明PML-RARα融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用.
-
急性早幼粒细胞白血病诊治的回顾及进展
急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊的髓细胞性白血病,在法、美、英(FAB)分型中属M3型,具有独特的细胞形态学和生物学特性.APL的特征性标志是染色体t(15;17)(q22;q21)易位,并形成PML-RARα融合基因.因此,t(15;17)(q22;q21)染色体易位和PML-RARα融合基因可以作为APL的细胞遗传学和分子生物学标记物,对APL的诊断、治疗、监测复发、估计预后以及停药时机的确定均有重要意义[1].
-
急性早幼粒细胞白血病亚砷酸治疗后的微量残留病检测
90%以上的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者存在特征性染色体易位t(15;17)(q22;q21),导致PML-RARα融合基因形成成为APL的特异性分子标志[1].近年来由于全反式维甲酸及三氧化二砷(ATO)的临床应用,使得APL疗效显著提高[2-5].然而微量残留病(MRD)是APL复发的根源.
-
pIRES-PML-RARα重组载体的构建和表达研究
目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达.方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp和384 bp的基因片段,并将不同长度的基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性.将重组质粒转染K562细胞,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测该质粒在真核细胞中的转录.结果:NheⅠ/MluⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将构建的pIRES-PML-RARα质粒转染K562细胞后经RT-PCR和实时荧光定量PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα基因能够在真核细胞中进行正常转录.结论:成功构建了含有不同长度的PML-RARα基因的真核表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录,为研发DNA疫苗用于治疗急性早幼粒细胞白血病提供重要资料.
关键词： PML-RARα融合基因 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 -
PML-RARα245-hIL-2双基因表达载体的构建和表达研究
目的:采用长度为245 bp的PML-RARα融合基因片段构建一种新的PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR从NB4细胞的RNA中扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp的基因片段,通过RT-PCR从Jurkat细胞中扩增hIL-2基因,并将两基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性.将重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测该质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交和ELISA技术检测目的蛋白的表达.结果:Nhe L/Mlu Ⅰ和Sal Ⅰ/Not Ⅰ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段和hIL-2基因,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将构建的pIRES-PML-RARα245 -hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录并翻译出相应蛋白.结论:成功构建了含有245 bp的PML-RARα基因与hIL-2基因的真核双表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录并翻译出PML-RARα和hIL-2蛋白,为利用DNA疫苗治疗急性早幼粒细胞白血病提供了更丰富的资料.
关键词： PML-RARα融合基因 hIL-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 -
PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达
目的 采用长度为245 bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体.方法 用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245 bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体.用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性.将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况.结果 双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确.该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译.结论 成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料.
-
儿童急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因连续检测的临床意义
目的:研究儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床治疗和PML-RARα融合基因连续检测的意义. 方法:以全反式维A酸(ATRA)单用或联合化疗进行诱导缓解,常规联合化疗巩固,常规化疗、小剂量化疗和维A酸(Tretinoin)交替维持治疗的方案,治疗10例儿童APL.应用逆转录聚合酶链扩增(RT-PCR)方法在病程的不同阶段连续检测PML-RARα变化,作为鉴测微小残留白血病细胞的指标. 结果:10例APL中完全缓解(CR)9例,CR率90%.9例CR患儿中4例在CR后14～42个月复发;1例仍在继续治疗中;生存期达34个月;4例在连续CR 4～5年后已停药,停止治疗时间为18～96个月,生存期达72～156个月.10例患儿中,8例在病程中PML-RARα转为阴性,首次转阴时间为6～42个月,1例持续阳性.4例复发患儿中,2例复发前持续阳性,2例为病程中由阴性转为阳性.5例仍生存者,至少已2次连续检查为阴性.1例在病程中由阴性转为阳性、2例分别在持续CR 36和42个月仍阳性的患儿,在治疗干预后均转阴,且长期生存.结论:在连续CR期定期检测PML-RARα可早期发现分子复发,及时干预治疗可避免血液学复发.持续PML-RARα阴性的分子缓解是APL治愈的保证.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 全反式维A酸 PML-RARα融合基因 -
染色体分析及FISH法对急性早幼粒细胞白血病诊断的临床意义
目的 探讨染色体分析及FISH检测对急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断的临床意义.方法 骨髓标本经细胞培养后,采用染色体G带显带方法分析是否存在t(15;17),同时用FISH方法进行与t(15;17)相关的PMLRARα融合基因的检测.结果 38例确诊APL的患者中,病理形态学检出率为92.1%(36/38),染色体分析36例发现克隆性t(15;17)存在,检出率为92.1%;FISH检测发现所有病例均存在PML-RARα融合基因,检出率为100.0%.结论染色体分析及FISH检测t(15;17)相关的PML-RARα融合基因是诊断APL的可靠指标;其中FISH检测更为敏感.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 染色体分析 PML-RARα融合基因 -
PML-RARα融合基因检测方法学的建立
应用筑巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测23例急性早幼粒白血病(APL),早幼粒白血病基因PML维甲酸受体α融合基因(PML-RARα),肯定了2例与急非淋白血病M2不易鉴别的不典型APL.15例缓解在2年以内APL此融合基因均阳性,其中L型8例,S型7例,L型中尚发现一个变异型.8例缓解在3年以上APL,此融合基因4例阳性,其中L型3例,S型1例,L型1例已有复发倾向,而缓解超过4年APL此融合基因均为阴性.
关键词： 早幼粒白血病 聚合酶链式反应 微小残留病 PML-RARα融合基因 -
实时定量RT-PCR检测PML-RARα融合基因诊断APL的临床价值
目的 探讨一步法实时定量RT-PCR (RQ-RT-PCR)技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)患者诊断及微小残留病(MRD)检测中的临床价值.方法 应用一步法RQ-RT-PCR、Taqman探针技术检测42例APL初诊患者和30例完全缓解(CR)患者骨髓PML-RARo融合基因的两种常见异构体转录本mRNA的表达.同时采用多参数流式细胞术(FCM)对部分患者骨髓MRD进行检测,并比较两种检测方法的一致性.结果 ①42例APL初诊患者的PML-RARα融合基因转录本中位标准拷贝数(NCN)为61％(13％ ～284％),其中L型34例,S型8例.L型和S型异构体中位NCN分别为56％(28％ ～ 278％)和70％(13％ ～284％),两者比较,P＞0.05；②30例APL患者经标准诱导治疗CR后PML-RARα融合基因转录本中位NCN为4.00％(0.00％ ～ 8.26％)；③一步法RQ-RT-PCR和FCM同时检测结果有较好的一致性(x2=0.278,P=0.598),总符合率83.3％.结论 一步法RQ-RT-PCR具有操作简便、特异性好、灵敏度高、结果可靠、直观等特点,有利于对APL的诊断和MRD检测.
关键词： 白血病 早幼粒细胞 急性 PML-RARα融合基因 实时定量RT-PCR 微小残留病 -
非典型t(15;17)易位的急性早幼粒细胞白血病的遗传学分析
目的 探讨非典型t(15;17)易位的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的形态学、免疫表型、遗传学特征和预后的关系.方法 取骨髓液,瑞氏染色分析形态,短期培养法R显带核型分析,流式细胞仪检测免疫表型,FISH(荧光原位杂交)检测PML-RARα融合基因.结果 41例患者中,形态学典型的40例,不典型的1例为骨髓坏死.41例患者均为髓系表达:CD13+、CD33+、cMPO+、HLA-DR多为阴性(仅2例阳性).9例CD15+(22.0％),16例CD117+(39.0％),6例CD34+(14.6％),4例伴淋系抗原表达(9.8％).核型分析为经典的t(15;17)易位的29例(70.7％),有t(15;17)同时伴额外染色体异常的5例(12.2％),不伴t(15;17)易位的7例(17.1％).PML-RARα融合基因阳性34例(82.9％),阴性7例(17.1％).儿童患者不伴t(15;17)易位的比例较成人高(P＜0.05).儿童患者复发或死亡率高于成人(P＜0.05).结论 遗传学PML-RARα融合基因阴性的APL少见,容易误诊而延误治疗.儿童APL患者不伴t(15;17)易位的比例较成人高,且预后不良.
-
PML/RARα融合基因检测早幼粒细胞白血病微小残留病
目的:PML/RARα融合基因在监测急性早幼粒细胞白血病(APL)微小残留病(MRD)中的意义.方法:诱导缓解及巩固维持治疗期间,采用筑巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测患者骨髓细胞中PML-RARα融合基因的变化.结果:长期随访的18例完全缓解(CR)患者,2例分子学复发.其中1例发生于CRI后4个月,诱导缓解治疗后获CR2,CR2后2个月再次分子学与血液学的复发,诱导治疗1个疗程获得CR3;1例发生于CR1后74个月,诱导缓解治疗后获得CR2,随访结束时生存期已达106个月.结论:在CR期定期监测PML-RARα融合基因,可尽早发现分子学复发,及时治疗可避免血液学复发.
关键词： 白血病 早幼粒细胞性 急性 PML-RARα融合基因 微小残留病 -
应用荧光原位杂交技术动态观察急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合基因的变化
目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及疗效判断中的作用.方法:对初发的急性白血病患者行常规形态学、细胞化学染色,并采用FISH技术检测PML-RARα融合基因,流式细胞术分析白血病细胞的免疫表型,对治疗过程中患者PML-RARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察.结果:FISH对标准的PML-RARα融合基因的检出与形态学和临床符合率为100%,对流式细胞学免疫表型不符合的APL诊断的1例作出了明确诊断,对累及17号染色体的附加染色体异常也有一定的提示作用,对APL治疗过程中分子生物学缓解的判断非常直观.结论:FISH技术检测PML-RARα融合基因,实验方法简便、快速、直观和准确,具备了用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测的作用.
-
小儿急性早幼粒细胞性白血病的疗效分析
急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊类型的白血病.经过全反式维甲酸(ATRA)诱导缓解[2]和联合细胞毒药物巩固强化治疗,疗效有了明显提高,生存质量也明显改善.本文总结15例APL患儿的临床疗效和随访结果.报告如下.1对象和方法
关键词： 急性早幼粒细胞性 PML-RARα融合基因 全反式维甲酸 化学治疗 小儿 -
儿童急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因跟踪检测的临床意义
目的探讨跟踪检测急性早幼粒细胞白血病(APL)特有的PML-RARα融合基因在发现APL早期复发和指导APL临床治疗方面的意义.方法10例APL患儿用全反式维甲酸(ATRA)和(或)其它化疗药物进行诱导缓解、巩固治疗和维持治疗,并进行随访.在病程的不同阶段采集骨髓标本进行形态学检查,并应用RT-PCR方法检测PML-RARα融合基因.结果随访时间为14～156月(中位时间42月),5年无病生存率为56.0%±16.5%.10例APL患儿完全缓解(CR)率为90%,早期死亡1例.9例CR病人中4例在CR后14～42月复发,4例在连续完全缓解4～5年后已停药,停止治疗时间为18～96月.1例CR,仍在继续治疗中.9例CR患儿中,8例在病程中PML-RARα转为阴性,1例持续阳性.4例复发病人中,2例复发前持续阳性,2例在病程中由阴性转为阳性.5例仍生存的患儿中,1例在病程中PML-RARα由阴性转为阳性,2例分别在持续完全缓解36和42月仍呈阳性,这3例患儿经治疗干预后均转阴,且长期生存.结论对APL患儿跟踪检测PML-RARα可早期发现分子复发,及时干预治疗可避免血液学复发.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 全反式维甲酸 PML-RARα融合基因 儿童 -
PML-RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化
目的 构建PML-RAR o[融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化.方法 利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)以PML-RAR α全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RAR o[序列,并将它们分别插入PET32a(+)质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a(+)和Flag-RARα-PET32a(+).将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用表达蛋白的组氨酸“标签”(His-tag)进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质.结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindⅢ双酶切和测序鉴定证明构建正确.转化感受态BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白.结论 成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础.
关键词： PML-RARα融合基因 重组质粒 蛋白表达 蛋白纯化 急性早幼粒细胞白血病 抗体制备 -
实时定量PCR动态监测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的临床意义
目的:探讨实时定量PCR(RQ-PCR)监测PML-RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床意义.方法:采用实时定量PCR(RQ-PCR)法监测患者骨髓PMLRARα融合基因亚型及动态变化.结果:初发32例患者中28例(87.5%)患者PML-RARα融合基因阳性,其中长型(L)19例(67.9%),短型(S)9例(32.1%).23例(82.1%)患者初次诱导后完全缓解,其中L型18例(94.5%),S型5例(55.6%),L型完全缓解率优于S型(P＜0.05),而复发率和病死率均低于S型,但差异无统计学意义(P＞0.05).长期随访的28例完全缓解患者,4例分子学复发,其中1例发生于第一次完全缓解后3个月,诱导缓解治疗后达第二次完全缓解,随后3个月再次分子学与血液学复发,再次诱导后达第三次完全缓解;3例在第一次完全缓解后3、4个月复发,经1疗程诱导后缓解,随访结束时生存期已达24个月.结论:APL初诊时PML-RARα融合基因亚型的检测可在一定程度上提示疾病的预后.在完全缓解期定期监测PML-RARα融合基因,可尽早发现分子学复发,及时治疗,避免血液学复发.
-
实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因方法的建立
目的 建立用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα mRNA的方法.方法 制备目的基因PML-RARα的RNA标准品及管家基因β-actin的RNA标准品.然后将目的基因PML-RARα和管家基因β-actin的标准品梯度稀释作为模板进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线.利用成功构建的两个标准曲线测定APL患者的目的基因PML-RARα与管家基因β-actin的相对值,分析不同状态患者的微小残留病(MRD)水平是否有差别,从而指导临床的治疗.结果 用本研究建立的实时定量RT-PCR方法可检测出10～5 μg NB4细胞cDNA中的PML-RARα融合基因,其重复性的循环域值(Ct值),管间、批间变异系数(CV)分别为2.2%、4.0%.结论 本研究所建立的实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性好.应用本法检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因表达水平的改变,有助于监测白血病微小残留病,评价疗效及判断预后.
-
急性早幼粒细胞白血病对维甲酸的耐药机制和复发后的治疗
初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)单纯化疗的完全缓解率约为35%,全反式维甲酸(ATRA)联合化疗可以使完全缓解率提高到70%,不过仍有30%患者会复发并可能对维甲酸产生耐药.由于三氧化二砷(As2O3)在治疗APL方面与ATRA具有相加或协同作用,所以对于复发的APL患者,可以采用(As2O3))进行诱导、强化和维持治疗.在(As2O3))诱导后出现二次完全缓解的患者可以进行自体或异基因骨髓移植.此外,PML-RARα融合基因的检测对于尽早发现临床前复发,提高APL的长期缓解率具有重要意义.
