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大肠癌中生长抑素基因甲基化研究
目的 生长抑素( somatostatin,SST)不仅能抑制内分泌肿瘤的增殖,而且对消化系实体性肿瘤亦存在抑制作用.本研究旨在探讨生长抑素基因甲基化与大肠癌发生的关系.方法 采用甲基化特异PCR(MSP)方法在31对大肠癌标本及癌旁正常组织中检测SST基因启动子甲基化状态；用5-aza-dC处理结肠癌细胞系,RT-PCR方法检测SST基因转录水平.结果 MSP检测发现26例(84％)大肠癌标本及10例(32％)癌旁正常组织中SST基因呈甲基化状态.4个结肠癌细胞系中SST基因均为甲基化状态,并且SW1116细胞经5-aza-dC处理后SST基因表达复活.结论 SST基因甲基化与大肠癌发生相关,是大肠癌发生中的甲基化相关基因.
关键词： 大肠癌 生长抑素(SST) 甲基化 甲基化特异PCR(MSP) RT-PCR -
饮水砷暴露孕期妇女的尿硒尿砷分布
无机砷是在地表水或地下水中发现的世界公认的毒物、致癌剂.砷暴露可以引起皮肤病变、生殖系统损害及癌症.人类砷代谢有2种途径:还原反应和甲基化反应,后者是在砷化物上加上甲基基团,形成单甲基砷酸和二甲基砷酸,单甲基砷酸、二甲基砷酸、In-As从尿中排出.近研究表明,尿中的另一种类金属物质硒与尿中砷的排出量和砷的甲基化分布有关.为探讨这种关系,在智利进行了砷和生殖效应的前瞻性研究,问卷调查了93个怀孕妇女,内容包括人口学资料、生活习惯以及其他信息.用ICP-MS方法对她们的尿样进行了砷和硒浓度的检测.双变量回归分析发现尿硒与尿砷存在相关性;多元线性回归分析显示,升高的尿硒水平与升高的尿总砷、升高的二甲基砷酸以及下降的In-As水平有关.研究结果提示,在砷暴露人群中,硒摄入可能和尿中砷的排出有关,并有可能改变砷的甲基化代谢水平.
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粪便SPG20、FBN1及VIM基因启动子甲基化联合检测在结直肠癌诊断中的意义
目的:探讨粪便标本的痉挛性截瘫-20(SPG20)、微纤维蛋白-1(FBN1)及波形蛋白(VIM)基因启动子甲基化联合检测在结直肠癌诊断及筛查中的意义.方法:选取结直肠癌患者75例为观察组,30例健康、年龄匹配的经结肠镜检查阴性者为正常对照组.提取组织及粪便标本DNA,应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)方法检测组织及粪便标本中SPG20、FBN1及VIM基因启动子甲基化状态.结果:结直肠癌患者癌组织中SPG20、FBN1及VIM基因启动子甲基化显著高于远癌组织;结直肠癌患者粪便中SPG20、FBN1及VIM基因启动子甲基化显著高于健康对照人群.联合检测显示,96%的患者表现为至少有一个基因启动子区呈现异常的甲基化状态,而在健康人群中,仅有4个(13.3%)呈现基因的异常甲基化状态.因此应用SPG20、FBN1、VIM三个基因启动子区甲基化状态对结直肠癌患者进行筛查的敏感性为96.0%,特异性为86.7%.结论:粪便标本的SPG20、FBN1及VIM基因启动子甲基化联合检测在结直肠癌的诊断和筛查中具有重要的应用价值.
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甲基化在食管胃结合部腺癌及胃远端腺癌的表达
目的:探讨食管胃结合部腺癌(AEG)和胃远端腺癌(GDA)的甲基化情况及其发生的分子机制.方法:采用甲基化特异性PCR对26例AEG,28例GDA组织、癌旁不典型增生组织及癌旁正常组织的甲基化情况进行检测.结果:在AEG中,各基因在肿瘤中甲基化率高于正常组织,RASSF1A(65.38% VS 15.38%),RASSF2(69.23% VS 16%),RUNX3(61.54% VS11.54%);而在GDA中,甲基化率在肿瘤、正常组织中分别为RASSF1A(53.57% VS 14.29%),RASSF2(57.14% VS 17.86%),RUNX3(53.57% VS 10.71%),无论在AEG,还是在GDA中,各基因在肿瘤中甲基化率均高于正常组织(P＜0.05),而AEG和GDA之间的甲基化率无显著性差异(P＞0.05).结论:相关基因高甲基化状态可能是引起AEG和GDA的共同分子机制之一,甲基化程度都随病理病变的加重而呈上升趋势.
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TSHR和RASSF1A基因甲基化与乳头状甲状腺癌的相关性
目的:研究乳头状甲状腺癌TSHR和RASSF1A基因启动子甲基化的状况,分析两种抑癌基因甲基化与临床病理资料间的关系及两种抑癌基因甲基化的相关性,探讨PTC的发生机制.方法:提取50例PTC组织和32例对照组织DNA,使用甲基化PCR检测两种基因启动子区甲基化的情况；对两种基因甲基化和未甲基化的组织测序；采用SPSS13.0软件分析两种抑癌基因甲基化之间的关系及两种抑癌基因启动子甲基化和主要的临床病理参数的关系.结果:50例PTC中,发现34例TSHR基因、30例RASSF1A基因启动子发生甲基化；32例对照组中,7例TSHR基因、10例RASSF1A基因启动子发生了甲基化；PTC组TSHR基因和RASSF1A基因启动子甲基化率均显著高于对照组,差异有统计学意义.DNA测序证实,两种抑癌基因发生甲基化的其CpG岛的碱基仍为CG,未发生甲基化的碱基由CG变为TG.计算TSHR和RASSF1A基因甲基化间的相关系数r=0.490,提示PTC组两个抑癌基因甲基化之间存在显著相关性.RASSF1A和TSHR基因甲基化与患者的年龄、性别、临床分期均未见相关性；RASSF1A基因甲基化与患者是否伴有淋巴结转移无关,TSHR基因甲基化与患者是否伴有淋巴结转移相关.结论:两种抑癌基因启动子甲基化与PTC的发生有关,且可能在甲状腺肿瘤的早期阶段既已存在；TSHR基因甲基化在甲状腺癌的恶性进展中可能发挥一定作用.
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MGMT与肿瘤的治疗
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因定位于10q26,整个基因长度为170kb,其cDNA中的第4外显子中的半胱氨酸残基为烷基受体,是蛋白酶的活性部位.烷化剂主要是造成肿瘤细胞内DNA烷基化损伤(包括甲基化、乙基化、氯乙基化等),其中以形成O6-甲基鸟嘌呤(O6-mG)对细胞威胁大,O6-mG能造成碱基的错误配对,使G不与C配对而与T配对,终导致细胞突变和死亡.
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大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究
目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用.方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达.结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37).癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01).MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态.癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05).结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加.结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关.
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非小细胞肺癌组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化研究
目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径.方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测.结果:(1) 96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化.(2) RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P＜0.05); p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P＜0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P＜0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P＜0.05).(3) RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P＜0.05).结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因.
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肝癌癌前病变相关癌基因及抑癌基因研究
目的本文研究了肝癌癌前病变的相关癌基因，对这些基因的子区域甲基化状态的基因异常表达进行了分析，并研究了抑癌基因在肝癌癌变中的作用，希望对治疗肝癌有所帮助。方法本文应用了甲基化基因聚合酶反应技术，并对多项肝癌组织进行了实验，与正常肝细胞进行了对比，分析了抑癌基因在子区域中的甲基化表达，在分析这项病历时，研究人员还参照了相关临床病理资料，希望可以使研究的结果更加准确、可靠。结果通过实验发现，GSTP1在肝癌癌细胞中、癌旁肝组织中以及正常肝细胞中，甲基化率分别是57.1%、37.1%、0%，p16在三种肝细胞中甲基化率是54.3%、37.1%、0%，RIZI的甲基化率分别是68.6%、14.3%、0%，RASSFIA的甲基化率分别是88.6%、74.3%、10%。从这几组数据中可以看出，GSTP1与RIZI的甲基化率均高于癌旁组织以及正常肝组织，其他两种基因的甲基化率也高于正常肝组织。所以，这四种基因对肝癌癌前病变研究有着重要的意义。结论 GSTP1与RIZI有着明显的甲基化异性，其可作为肝癌早期诊断的重要标记物。 P16的甲基化出现失活现象主要是由HBV感染导致的，GSTP1出现甲基化可能是由于肝细胞癌遇到侵袭或者干扰。
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p21基因启动子甲基化对血管平滑肌细胞向泡沫细胞转化的影响
目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对血管平滑肌细胞(VSMC)p21基因启动子甲基化及对VSMC向泡沫细胞转化的影响。方法采用组织贴块法培养人脐血管平滑肌细胞，给予不同浓度氧化低密度脂蛋白ox-LDL(0,10mg/L,20mg/L,40mg/L)孵育24h，甲基化特异PCR(MS-PCR)检测p21基因启动子区CpG岛甲基化程度，MTT比色法测定VSMC增殖活性，油红O染色镜下观察计数泡沫细胞比率。结果 ox-LDL呈浓度依赖性促进p21启动子甲基化，同时平滑细胞增殖活性增高，向泡沫细胞转化增加。结论 ox-LDL可以通过p21基因甲基化促进VSMC向泡沫细胞转化，p21基因甲基化可能在动脉粥样硬化发生中起到一定作用。
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探讨APC基因启动子区甲基化状态及其在宫颈癌发生发展中的意义
目的研究与分析腺瘤性结肠息肉病基因启动子区甲基化表现状态及其在宫颈癌中发生及发展的作用及意义。方法选取本院所收治的120例宫颈鳞癌患者及30例正常宫颈上皮组织进行研究，并采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测其组织中腺瘤性结肠息肉病基因启动子区甲基化状态，分析并比较。结果经检测发现，30例正常宫颈上皮组织中未检测到腺瘤性结肠息肉病基因甲基化片段，而宫颈癌组织中，其腺瘤性结肠息肉病基因甲基化阳性率为65.0%(78/120)；两组阳性率比较(<0.05)。宫颈癌组织中，其不同临床分期间腺瘤性结肠息肉病基因甲基化阳性率比较(<0.05)；而不同组织学分级和是否淋巴结转移间腺瘤性结肠息肉病基因甲基化阳性率比较(>0.05)。结论宫颈癌形成过程中，腺瘤性结肠息肉病基因启动子区异常甲基化是早期且较为频繁发生的事件，因此，其可能参与到宫颈癌的发生与发展中，进而为临床疾病诊断及预后判断提供重要的参考价值。
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表观遗传学与食管癌相关性研究进展
食管癌是消化系统常见肿瘤,近年来随着表观遗传学研究的深入,人们开始逐渐认识到表观遗传学变化与恶性肿瘤的形成和发展密切相关,越来越多的研究集中在靶向治疗的表观遗传修饰剂上,如DNA甲基转移酶酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶等,本综述通过食管癌标本和与之相关的前期病变中微小RNA、DNA甲基化和组蛋白修饰的改变,来展示食管癌表观遗传变化的进展.
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血液标志物辅助诊断抑郁症的研究进展
抑郁症是一种以情绪异常低落和兴趣减退为主要临床症状的精神疾患,现已成为全球性的精神卫生问题.抑郁症的主观诊断依赖于患者自主反馈症状和医生解读症状的能力,这往往导致诊断结果不够准确.而基于实验室诊断的血液标志物技术可以为临床医生提供更科学、客观、快速的诊断结果.因此,本文就血液标志物辅助诊断抑郁症的有关报道进行小结.
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胶质瘤中的表观遗传学:一场基因革命
一直以来异常的表观遗传学现象以及其在基因组和肿瘤进程、预后中的角色都是癌症研究的新兴领域之一.在人类常见的原发性脑瘤胶质瘤中,特别是高度恶性的胶质母细胞瘤,异常的DNA甲基化、组蛋白甲基化以及mRNA表达都会从根本上颠覆我们对于异质性肿瘤的认识.本文针对胶质瘤表观遗传学在胶质瘤诊断和预后中的价值进行探讨,为理解胶质瘤发生发展的分子机制以及寻找新的更有效的药物靶点提供理论基础.
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前列腺癌DNA甲基化研究进展
前列腺癌(Prostate cancer,PCa)是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,PSA检查目前依然是PCa筛查的"金标准",但存在一些缺点. 研究发现,PCa的发生和发展常伴随着DNA甲基化的改变, 有学者认为DNA甲基化标志物可能是PCa新的肿瘤标志物. DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶(DNMTs)作用下,甲基基团(CH3-)共价结合到 CpG结构的胞嘧啶第5位碳原子上的过程,常发生在基因启动子CpG岛区域,是重要的表观遗传学标志[1].目前PCa的DNA甲基化研究已获得了很多重大突破,现综述如下.
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5-脱氧杂氮胞苷调控p16基因表达对人宫颈癌HeLa细胞增殖及调亡的影响
目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(5- Aza - CdR)对人宫颈癌HeLa细胞增殖和调亡的作用及其可能机制.方法:应用不同浓度的5 -Aza -CdR处理HeLa细胞,甲基化特异PCR(MSP)法检测处理前后p16基因甲基化状态,应用RT- PCR方法检测p16基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:人宫颈癌HeLa细胞p16基因启动子区呈高甲基化状态,经过5- Aza - CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加.结论:5 - Aza - CdR能够逆转p16基因甲基化状态,调控p16基因表达,并有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和诱导细胞调亡.
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5－脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞E-Cadherin表达增强
目的：研究5-脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞株SMMC-7721中E-Cadherin基因表达的影响及其机理。方法：肝癌细胞株SMMC-7721用5-脱氧杂氮胞苷处理，处理前后采用流式细胞仪检测E-Cadherin基因的蛋白表达，观察克隆形成及裸鼠致瘤性的变化。结果：经5-脱氧杂氮胞苷处理后，肝癌细胞株SMMC-7721中E-Cadherin蛋白表达增加了43.1％，克隆小而少，裸鼠致瘤性降低。结论：E-Cadherin基因蛋白表达增高可能与DNA甲基转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷抑制了E-Cadherin启动子区域的高甲基化有关，并在一定程度上恢复了其抑癌功能。
关键词： 肝癌 E-cadherin基因 5-脱氧杂氮胞苷 甲基化 -
胃癌组织血管内皮生长因子C启动子甲基化状态检测及意义
目的 探讨胃癌组织血管内皮生长因子C (VEGF-C)启动子序列的甲基化状态及其在胃癌发生发展过程中VEGF-C甲基化状态的改变.方法 胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、MGC-803及MKN-45,正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎及胃癌组织,RT-PCR、Western blot检测胃癌细胞株中VEGF-CmRNA与蛋白表达;亚硫酸氢盐-基因组测序法检测胃癌细胞株、正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎及胃癌组织VEGF-C甲基化状态.结果 胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、MGC-803及MKN-45中VEGF-C启动子序列的38个CpG岛未发现明显的甲基化位点;BGC-823、SGC-7901、MGC-803细胞株中VEGF-C mRNA呈阳性表达,BGC-823、SGC-7901、MGC-803及MKN-45蛋白呈阳性表达;正常胃黏膜发现VEGF-C启动子序列的甲基化状态,慢性萎缩性胃炎组织中VEGF-C启动子序列的甲基化程度降低,胃癌组织发现VEGF-C启动子序列高度去甲基化.甲基化率的比较,正常胃黏膜组织-萎缩性胃炎组织:x2=205.5,P＜0.001;正常胃黏膜组织胃癌组织:x2=262.6,P＜0.001;胃癌组织萎缩性胃炎组织:x2=7.219,P=0.007.结论 VEGF-C的甲基化状态与胃癌的发生发展密切相关,调节VEGF-C的甲基化状态对抑制胃癌发生发展有重要作用.
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胃癌hMLH1基因启动子CpG岛甲基化
目的 采用特异性甲基化聚合酶链式反应方法检测hMLH1基因启动子CpG岛甲基化水平.方法 对2株胃癌细胞株31例胃癌组织及23例癌旁组织的hMLH1基因启动子CpG岛甲基化水平进行检测.结果 对照组织检测到CpG岛甲基化,胃癌细胞株均检测到CpG岛甲基化,11例胃癌组织检测到CpG岛甲基化,7例癌旁组织检测到CpG岛甲基化.胃癌组织hMLH1基因CpG岛甲基化与分化程度及淋巴结转移之间无相关关系.结论 胃癌存在hMLH1基因启动子CpG岛甲基化,并且可能是胃癌发生的早期分子事件.
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肝细胞性肝癌中E2F8基因受表观遗传学调控的特征
目的 研究在肝细胞性肝癌中表观遗传性调控E2F8基因表达的特征,包括E2F8基因启动子区域甲基化状态、靶向调控E2F8基因的微小RNA(microRNA)在肝细胞性肝癌中的表达谱.方法 分析E2F8基因启动子区域DNA序列的CpG位点分布特征,亚硫酸氢盐修饰DNA后,测序检测肝细胞性肝癌患者的癌组织与癌旁组织中E2F8基因转录起始点处DNA甲基化修饰状态的差异；利用3种不同方法预测靶向结合E2F8基因mRNA的3’-非翻译区域(3’-UTR)的microRNAs,结合肝细胞性肝癌microRNAs芯片表达数据,初步推测肝细胞性肝癌中异常表达microRNAs调控E2F8基因表达的可能性.结果 在E2F8高表达的肝细胞性肝癌病例中,癌组织中E2F8基因转录起始位点附近的DNA甲基化程度显著低于癌旁组织中(P＜0.05)；采用3种不同的方法独立预测靶向调控E2F8的microRNAs,其中7个microRNAs在3种方法中的靶基因均为E2F8,12个microRNAs在两种方法中的靶基因为E2F8.分析肝细胞性肝癌microRNAs表达芯片数据,发现与正常肝脏相比,miR-23b、miR-340、miR-448、miR-499-3p、miR-520d-5p在肝细胞性肝癌组织中的表达量显著下调.结论 肝细胞性肝癌中的异常表观遗传学事件可引起E2F8基因的表达上调.
