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HSV-1重组糖蛋白G的表达、纯化及活性鉴定
目的 对构建的pGEX-4T- 1/gG-1重组质粒进行诱导表达,并纯化、鉴定表达的目的蛋白.方法 用佳诱导条件对重组质粒进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳检测验证后,对存在于超声离心后上清液中的融合蛋白用亲和层析技术进行纯化,并用ELISA间接法对纯化的GST/gG-1融合蛋白进行灵敏性和特异性等生物活性的初步鉴定.结果目的蛋白经诱导后表达于上清中,初步鉴定纯化的目的蛋白保留了天然蛋白原有的生物活性.结论 GST/gG-1融合蛋 白的获得,为研制以重组蛋白代替传统的全病毒作为检测抗原的新型HSV-1型特异性免疫学检测试剂盒奠定了基础.
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单纯疱疹病毒2型糖蛋白G的表达、纯化及鉴定
目的 对pGEX-4T- 1/gG-2重组质粒进行诱导表达,并纯化、鉴定表达的目的蛋白.方法 用佳诱导条件对重组质粒进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳检测验证后,对存在于超声离心上清液中的融合蛋白用亲和层析技术进行纯化,并用ELISA间接法对纯化的GST/gG-2融合蛋白的灵敏性和特异性等生物活性进行鉴定.结果 目的蛋白经诱导后表达于上清中,经鉴定纯化的目的蛋白保留了天然蛋白原有的生物活性.结论 GST/gG-2融合蛋白的获得,为研制以重组蛋白代替传统的全病毒作为检测抗原的新型HSV-2型特异性免疫学检测试剂盒奠定了基础.
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单纯疱疹病毒1型糖蛋白G表达载体的构建及鉴定
[目的]构建gG-1强抗原决定簇集中区对应基因的重组原核表达载体,并对其进行鉴定.[方法]利用DNAstar 软件分析gG-1强抗原决定簇的集中区,PCR 扩增相应基因片段,将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1/gG-1,并对其进行双酶切和 DNA 测序鉴定.[结果]成功构建了pGEX-4T-1/gG-1重组原核表达载体,且目的基因片段与GenBank中已公布序列一致性较高,阅读框架正确.[结论]pGEX-4T-1/gG-1重组原核表达载体的成功构建,为研制HSV-1型特异性基因工程诊断试剂奠定了基础.
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广州地区女性不同人群HSV-2感染调查及危险因素分析
[目的]调查广州地区女性不同人群单纯疱疹病毒-2 (HSV-2)感染情况及有关危险因素.[方法]由性病艾滋病高危人群干预工作队成员对流动人口、妇科门诊、性工作者等不同人群中的女性进行现场问卷调查,并采集血液标本,ELISA法检测HSV-2抗体、HIV, RPR/TPPA确诊梅毒,宫颈拭子检测沙眼衣原体,淋球菌等.[结果]调查对象HSV-2抗体总体阳性率为24.5%,流动人口、妇科门诊、性工作者女性HSV-2阳性率分别为14.6%、l8.7%、47.5%; HSV-2感染独立危险因素包括有非固定性伴、初次性生活年龄小于20岁以及阴道异常分泌物、每周性生活频率多于3次;年龄26～34岁为HSV-2感染的保护因素.[结论]广州地区女性人群中,性工作者HSV-2感染率高,性工作者是性病行为干预的重点.多个性伴、性生活频率越高、初次性生活年龄越早越有可能感染HSV-2.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D基因的原核表达及鉴定
[目的]构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D原核表达载体并鉴定其表达产物.[方法]用PCR方法特异性扩增HSV-2糖蛋白D基因片断,经双酶切后将其克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT中.将重组表达载体转化大肠杆菌后进行诱导表达,表达产物进行Western-blot鉴定.[结果]重组表达载体诱导表达产物用SDS-PAGE证明含有相对分子质量(Mr)约60 kD的糖蛋白D/GST融合蛋白.Western-blot分析证实纯化之后表达产物在相对分子量为60 kD处有明显的阳性杂交带.[结论]重组原核表达载体诱导表达出的HSV-2糖蛋白D具有较好的抗原性,为以后的HSV-2糖蛋白D基因工程亚单位疫苗研究打下了基础.
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法昔洛韦抗Ⅱ型单纯疱疹病毒药效学研究
我们研究了法昔洛韦在体外和体内对HSV-2的抗病毒作用.结果表明:法昔洛韦在Hep-2细胞上对HSV-2病毒无抑制作用;而在动物实验中,法昔洛韦口服对HSV-2致小鼠阴道炎有明显治疗作用,其效果优于无环鸟苷.
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郑州市1665例育龄妇女TORCH感染情况的调查
目的 探讨郑州市育龄妇女中TORCH的感染现状,为预防TORCH感染和做好优生优育工作提供依据.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2012年6月-2013年5月间来某院进行孕前咨询的育龄妇女1 666名进行TORCH感染的特异性IgM及IgG抗体检测.结果 1666例育龄妇女TORCH IgM抗体阳性99例,总阳性率为5.9％,其中RV IgM抗体阳性率高(3.2％),其次HSV(1.3％).在IgG抗体方面,CMV IgG抗体阳性率高(94.2％),其次为HSV IgG (91.7％),而RV IgG抗体阳性率为47.9％,Tox IgG为0.7％.在育龄人群年龄间TORCH感染分布方面,20～ 29岁组的育龄妇女中TORCH各病原体的IgM抗体阳性率普遍较高;而TORCH各病原体的IgG抗体阳性率随着年龄的增长普遍呈现上升趋势.结论 郑州市育龄妇女人群中存在一定比例的TORCH现状感染及较低RV IgG阳性率,建议育龄妇女孕前应进行TORCH筛查,以便尽早采取相应措施,避免由TORCH感染导致出生缺陷婴儿的发生.
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广藿香油体外抗呼吸道病毒效果研究
目的:研究广藿香油体外抗流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒及单纯疱疹病毒的效果,为抗病毒性感冒新药研发提供依据.方法:建立流感病毒感染MDCK细胞、呼吸道合胞病毒和腺病毒感染Hep-2细胞、柯萨奇病毒感染Hela细胞模型和单纯疱疹病毒感染Vero细胞模型,以细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)法作为观察和检测指标,了解不同浓度药物体外抗病毒效果及药物对细胞的毒性,实验中分别以利巴韦林和阿昔洛韦作为对照药.结果:广藿香油对MDCK、Hep-2、Vero和Hela细胞的TC50浓度均为0.101mg/ml,TC0浓度为0.092mg/ml.广藿香油能明显抑制柯萨奇病毒和腺病毒所致的细胞病变,IC50分别为0.081 mg/ml、0.084mg/ml,治疗指数(TI)分别为1.25、1.20;可抑制流感病毒,IC50为0.088mg/ml,TI为1.15;对呼吸道合胞病毒作用很低,IC50为0.092mg/ml,TI为1.10;对单纯疱疹病毒几乎没有抑制作用.结论:体外抗病毒实验广藿香油显示出抗柯萨奇病毒、抗腺病毒、抗甲型流感病毒和抗呼吸道合胞病毒的作用,但不具有抗单纯疱疹病毒的作用.
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单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究
目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位,寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原.方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C(gC)单克隆抗体(McAb)1A12淘筛噬菌体随机12肽库,经4轮筛选后进行ELISA检测,随机挑取14个阳性克隆进行序列测定,序列比较后得到保守序列,做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较.结果获得保守序列-SG(L)RHII-和其侧翼辅助序列-AK-、-VW-,其与天然相关蛋白HSV gC 114～116位氨基酸十分相似.携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合,并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应.结论所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位,可能是HSV的替代抗原.这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列,为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据,也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能.
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FQ-PCR检测女性生殖道HSVⅡ感染临床分析
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属嗜神经性的DNA病毒,按其抗原性不同分为二类:Ⅰ型(HSV-I)主要侵犯口、咽、扁桃体、皮肤等部位;Ⅱ型(HSV-Ⅱ)主要侵犯生殖器部位,引起人的生殖器疱疹(genital herpes,GH),HSVⅡ是GH的主要病原体,约占生殖器疱疹的85%[1].由于几乎所有的感染是通过性行为感染,并且感染后易反复发作、难以治愈,给患者身心带来很大的痛苦,随着HSV对人类危害被揭示与阐明,对女性生殖器官HSVⅡ感染进行监测,显得很有必要.我们采用.荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative-polymerase chain reaction)对我院妇科门诊735例可疑单纯疱疹病毒感染者的生殖道标本做HSVⅡ-DNA荧光定量PCR检测,以了解哈尔滨地区女性生殖器官HSVⅡ感染的情况,现报告如下.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 单纯疱疹病毒 核酸 -
复发性单纯疱疹病毒HSV-1感染1家系基因突变检测
目的 检测1个面部疱疹反复发作家系基因突变情况.方法 抽取疱疹反复发作患者及其家系成员外周血进行基因组DNA提取,捕获外显子组,采用Hiseq 2500平台进行测序.再将测序结果与NCBI公布的人类基因组信息(版本为HG38)进行比较,用生物信息学工具总结分析发生突变的基因.结果 筛选得到若干发生突变的基因.初步推测泛素特异性肽样酶1(ubiquitin-specific peptidase-likel,USPL1)基因的错义突变很可能影响到干扰素抗病毒信号通路中关键因子STAT1 (signaltransducer and activator of transcription1)的SUMO (small ubiquitin-like modifier)化,抑制了STAT1的功能,终引起HSV-1(herpes simplex virus 1)的反复感染.结论 先证者及其母亲和女儿均为USPL1基因杂合突变型,而其他家庭成员则为野生型.推测该基因可能是抑制复发性单纯疱疹病毒感染的重要基因之一.本研究为单纯疱疹病毒反复感染机制研究提供候选基因和参考思路.
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TH和AADC基因在帕金森氏病模型大鼠纹状体内的共表达
帕金森氏病是临床常见的中枢神经系统退行性变疾病.对该病的治疗除多巴胺类药物之外,还有颅内移植能产生多巴胺类物质的自体或异体组织,但存在移植物存活困难及多巴胺表达水平等问题 .采用外源基因引入法治疗帕金森氏病是当今神经生物学研究热点之一.我们用6-羟多巴 (hydroxydopamine,6-OHDA)立体定位注射毁损大鼠黑质以建立帕金森氏病模型,再用Dr.Geller实验室构建的无辅助病毒的单纯疱疹病毒包装系统 (helper virus-free HSV-1 plasmid vectors )将在多巴胺产生过程中起重要作用的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxy lase,TH)、芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic amino acid d ecarboxylase,AADC)的基因同时引入帕金森氏病模型大鼠纹状体内,并使用神经元特异性启动子以提高长期表达.对照组用PBS代替携基因的病毒载体.免疫组化结果显示:在基因引入后4天和28天,6-OHDA损伤模型大鼠纹状体内均查见TH和 AADC免疫反应阳性神经元.并且,多数大鼠的旋转行为得到了明显改善.结果提示,由 Helper virus-free HSV载体系统携带的外源基因进入纹状体的神经元并表达了TH和AADC酶活性.
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疱疹病毒感染和抗疱疹病毒药物研究进展
人类疱疹病毒感染为多发病和常见病,人群感染血清疱疹病毒抗体阳性率高.现有8种人类疱疹类病毒病毒:单纯疱疹1,2型,水痘-带状疱疹,E-B病毒,巨细胞病毒,疱疹病毒6,7和8型.可侵犯人体多种组织,引起皮肤,粘膜,淋巴,生殖和神经系统或肝,肺等赃器感染.其特点为潜伏性强,常形成隐性或急慢性局部或全身性感染.感染后无症状或发生急,慢性临床症状,症状消失后病毒潜伏于组织,在机体抵抗力低下时复发.如单纯疱疹引起的唇疱疹和疱疹性角膜炎经常复发.有些疱疹类病毒感染有传染性,如单纯疱疹病毒生殖系统感染属性传播疾病,母亲感染后可传染新生儿引起疱疹病毒脑炎,死亡率高达100%.
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单纯疱疹病毒感染与急性心肌梗死、纤维蛋白原、血液流变特性的相关性研究
测定51例急性心肌梗死(AMI)和42例陈旧性心肌梗死(OMI)患者及31例冠脉造影正常者(NC)的HSV-1抗体水平及DNA,同时观测纤维蛋白原(Fg)、血液流变特性指标变化及其与HSV-1感染的相关性.结果显示AMI组HSV-ngG阳性率及水平高于NC组,HSV-1DNA检测结果与之吻合.校正冠心病危险因素前、后,HSV-11gG阳性与AMI均有相关关系.AMI组中HSV-1(+)组IgG、Fg、血浆黏度、低/高切全血比黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数高于,而红细胞变形指数低于HSV-1(一)组;且IgG与Fg、低/高切全血比黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数呈正相关,而与红细胞变形指数呈负相关.表明HSV-1感染与AMI有明显的相关性,与Fg、血液流变特性指标也存在相关性.
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46,XY,t(2;3)伴自然流产一例
患者 男,26岁,汉族,身高1.70 m,体重68 kg,表型及智力正常.婚后3年,其妻自然流产3次,均发生在孕3～5月内.夫妻非近亲结婚,妻孕期无患病及服药史、无有害化学物质及放射线接触史,妻产科检查及实验室弓形虫(Toxoplasma,T)、风疹病毒(rebulla virus,RV)、巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)和单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)抗体检查均未见异常.双方家族中无类似自然流产史患者.
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t(11;12)易位伴习惯性流产一例
患者男,33岁.结婚4年,其妻妊娠5次,均在孕50天自然流产.夫妻表型、智力正常,身体健康,非近亲婚配,其妻自诉孕期无有害物质接触史及感染史.夫妻双方性激素检查均正常,抗精子抗体阴性,Rh血型均为阳性,ABO血型测定:患者为O型,其妻为B型.其妻优生五项(弓形虫,风疹病毒,巨细胞病毒,单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型)检查均正常,卵泡发育检测良好.患者精液分析正常,前列腺液涂片分析正常,弓形虫抗体检测阴性,解脲脲原体培养阴性.细胞遗传学检查:常规外周血淋巴细胞培养,制备,G显带分析,计数50个分裂相,镜下分析10个核型,患者核型为46,XY,t(11;12)(11pter→11q21∷12p13→12pter;11qter→11q21∷12p13→12qter).其妻核型分析正常.
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干扰素栓治疗宫颈糜烂188例分析
宫颈糜烂是已婚妇女常见病、高发病,是诱发宫颈癌的高危因素,与宫颈癌的发生有一定关系.大量流行病学调查资料显示,二者的发生均与单纯疱疹病毒-Ⅱ型(HSV-2)和人乳头状病毒16型(HPV-16)相关[1,2].因此,抗病毒治疗对宫颈糜烂的治疗、预防宫颈癌的发生有着重要意义.目前,治疗宫颈糜烂的方法很多.我院自2002年7月至2003年7月来对门诊诊治的宫颈糜烂患者188例采用α-干扰素栓(奥平栓)治疗,并进行追踪观察、随访,收到明显疗效,现报道如下.
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单纯疱疹病毒感染研究进展
1 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)的特征HSV属于疱疹病毒的一种,病毒的中心为DNA,外有162个壳微粒组成衣壳,呈20面体,周围有含脂质的包膜,病毒颗粒大小为150～200 nm,根据其血清学、流行病学特点分为HSV-1和HSV-2两型.两型比较详见表1.
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多重聚合酶链反应微孔板杂交法在性病病原体检测中的应用
目的 探讨敏感、特异的同时能检测3种性病病原体的方法.方法 采用3种不同的特异性引物与梅毒螺旋体(TP)、单纯疱疹病毒(HSV)和杜克雷杆菌(HD)DNA模板进行单一和多重聚合酶链反应(M-PCR)、微孔板杂交,用不同梯度的DNA模板及其它常见16种泌尿生殖道微生物标本验证其敏感性和特异性.结果 3种不同的特异性引物在单一和M-PCR反应中均能特异地扩增,其扩增产物均能与相对应的特异探针杂交;单一和M-PCR微孔板杂交法均能检测出单个和3种病原体靶基因10个拷贝,而其它常见泌尿生殖道病原微生物交结果均为阴性.结论 M-PCR微孔板杂交法能同时敏感、特异地检测TP、HSV和TP性病病原体.
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我国部分地区献血人群中单纯疱疹病毒感染流行情况
目的 了解中国献血人群中单纯疱疹病毒(HSV)的流行率、病毒载量及抗体检出情况.方法 构建的实时荧光定量PCR体系,检测来自重庆、洛阳、乌鲁木齐、绵阳和柳州等5个采供血机构3 794(人)份献血者血浆标本的HSV DNA,并测定DNA阳性标本的病毒载量;同时随机抽取其中292(人)份标本用ELISA法检测IgG和IgM抗体的感染情况.结果 在本组献血者人群中,发现43份HSV DNA反应性标本,占1.13％(43/3 794),5个采供血机构的检出率分别为重庆1.24％(20/1611)、洛阳0(0/624)、乌鲁木齐3.63％(14/413)、绵阳1.88％ (9/479)和柳州0(0/667);病毒载量(9.15 ×102-9.65 ×104)(中位数3.53×103)cp/mL.292份经ELISA检测的标本中,IgG抗体阳性率16.44％(48/292),IgM抗体阳性率4.45％(13/292),IgG、IgM抗体双阳性率2.40％ (7/292).结论 目前HSV在我国献血人群中存在一定的流行率,但是检测出的HSV DNA阳性标本的病毒载量较低;是否需要对特殊受血者做血液HSV检测值得进一步探讨.
