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得斯芬与扶正解毒抗癌复方对肝癌Bel-7402细胞凋亡的对比观察
[目的]对比观察得斯芬与扶正解毒抗癌复方(中药复方)对Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响.[方法]2种药物分别作用Bel-7402细胞48 h,以EnVision二步法检测细胞Bcl-2、P53蛋白的表达;以流式细胞仪进行凋亡率和细胞周期分析.[结果]50、25/μmol/L得斯芬组与10、2 mg/ml中药复方组P53表达与对照组比较差异有统计学意义(Pμ＜0.05或＜0.01);50、25/μmol/L得斯芬组与10 mg/ml中药复方组在G1峰前出现了明显凋亡峰(Ap峰),凋亡率分别为23.9%、14.7%、5.5%.[结论]得斯芬与扶正解毒抗癌复方可能通过上调P53蛋白的表达、抑制肿瘤细胞DNA合成,使细胞周期停滞在G0/G1期,阻滞细胞进入G2/M期,导致肝癌细胞凋亡.比较结果,得斯芬的抗肝癌效应似乎比扶正解毒抗癌复方更为优越.
关键词： 肝肿瘤 得斯芬 扶正解毒抗癌复方 Bel-7402细胞 凋亡 -
HERG1 K+通道在肝癌细胞系BEL-7402中的表达及其意义
[目的]观察HERG1 K+通道在肝癌细胞系BEL-7402的表达,探索其在肝癌发生与发展中的作用.[方法]RT-PCR方法检测hepg1在肝癌细胞系BEL-7402细胞和正常肝细胞系L-02细胞中表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)研究HERG1 K+通道对BEL-7402细胞和L-02细胞增殖作用:以流式细胞仪检测该通道对肝癌细胞系BEL-7402细胞周期的影响.[结果]HERG1 K+通道在肝癌细胞中表达,而在正常肝细胞中不表达·该通道特异性抑制剂E-4031可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,而对不表达herg1基因的L-02细胞增殖不起作用;E-4031抑制BEL-7402细胞HERG1 K+通道后可导致G1期细胞显著上升.[结论]HERG1 K+通道可能是一个潜在的癌基因,可促进肝癌细胞的增殖;参与调控BEL-7402细胞周期的G1期进程.通过抑制该通道的功能,或下调其表达抑制该肿瘤的发生与发展:HERG1 K+通道可能是肝癌治疗的一个潜在的药物靶点和诊断性生物标志.
关键词： 肝癌 HERG1 K+通道 Bel-7402细胞 增殖 细胞周期 -
脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用
目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法.方法:对比观察脂质体-姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel-7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2的影响.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制作用.原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素诱导Bel-7402细胞凋亡的作用.免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素对Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖有显著抑制作用,P＜0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P＜0.05).10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素处理组Bel-7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel-7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).脂质体-姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义.结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用.脂质体-姜黄素对Bax、Bcl-2的表达无显著影响.
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纳米二氧化钛对人肝癌Bel-7402细胞周期的影响
0 引言近年来,纳米生物材料在医学上的研究和应用开始崭露头脚,有学者认为某些无机纳米粒子在一定的粒径范围内可以抑制癌细胞的生长、增殖[1-4],我们应用FCM分析纳米TiO2对人肝癌细胞系Bel-7402细胞周期的影响,以便深入地探讨其抗癌作用机理.
关键词： 纳米TiO2 肝癌 Bel-7402细胞 -
正丁基-β-D-吡喃果糖苷体外对Bel-7402细胞凋亡的诱导作用
目的:探讨正丁基-β-D-吡喃果糖苷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测正丁基-β-D-吡喃果糖苷对Bel-7402细胞的增殖抑制效应;将6.25,12.5,25 mg·L-1的正丁基-β-D-吡喃果糖苷作用于Bel-7402细胞24 h和48 h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;应用凝胶成像分析仪检测DNA Ladder.结果:正丁基-β-D-吡喃果糖苷在体外对Bel-7402细胞有增殖抑制效应,在正丁基-β-D-吡喃果糖苷作用下,Bel-7402细胞出现显著的细胞凋亡征象;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的正丁基-β-D-吡喃果糖苷与Bel-7402细胞作用24,48 h可明显抑制Bel-7402细胞存活,25 mg·L-1的正丁基-β-D-吡喃果糖苷抑制率达到42.39%;凝胶成像分析仪检测到典型的DNA阶梯状条带.结论:正丁基-β-D-吡喃果糖苷有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,且随着浓度的升高和作用时间的延长,其诱导细胞凋亡作用增强.
关键词： 正丁基-β-D-吡喃果糖苷 流式细胞仪 细胞凋亡 Bel-7402细胞 肝癌 琼脂糖凝胶 -
基因芯片分析筛选BEL-7402与BEL-7402/FU细胞中的差异miRNA表达基因
目的:探讨2种肝癌细胞BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞中差异表达的miRNA并对其基因表达谱进行生物学信息分析.方法:采用TRIzol一步法提取BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子Hy3标记的cDNA探针,与基因芯片杂交;采用Genepix Pro 6.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,然后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因.结果:在333个基因表达谱的筛选中,发现有2个基因表达水平显著上调,331个基因表达水平显著下调.结论:miR-122,miR-195等基因组对表达肝癌细胞耐药基因表达谱有显著的影响,可能参与肝癌耐药的发生、发展.
关键词： 基因芯片 差异表达 Bel-7402细胞 Bel-7402/FU细胞 miRNA -
MiR-503靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性
目的:探讨miR-503是否能通过调控bcl-2的表达增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性.方法:采用实时荧光定量PCR检测肝癌细胞中miR-503和bcl-2 mRNA的表达水平;Western印迹观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;脂质体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402细胞;生物信息学软件预测miR-503潜在靶基因;双荧光素酶活性验证miR-503潜在的靶位点;MTT法检测细胞药物敏感性的改变.结果:相比于HL-7702细胞,miR-503在BEL-7402细胞中表达水平下调,Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503能够与bcl-2靶向结合,下调bcl-2的表达;miR-503转染组的细胞活力较miRNA阴性对照组显著降低.结论:MiR-503可能通过靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的药物敏感性,抑制肝癌细胞增殖.
关键词： miR-503 Bcl-2 Bel-7402细胞 顺铂 -
人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响,并初步研究其机制.方法 将Bel-7402细胞与人参皂苷Rh2(200、100和50μg/mL)共同培养48 h.MTT法检测人参皂苷Rh2对Bel-7402细胞增殖的影响;流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数;TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响;Western blotting法检测Bel-7402细胞中Bcl-2、Bax的蛋白表达.结果 MTT结果显示,人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞的生长;流式细胞检测显示,人参皂苷Rh2能使细胞停滞于G1期;TUNEL结果显示,人参皂苷Rh2能有效诱导Bel-7402细胞凋亡;Western blotting结果显示,人参皂苷Rh2能上调Bel-7402细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达.上述结果均在一定程度上呈量效关系.结论 人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞生长并促进其凋亡,其作用机制可能为上调Bax和下调Bcl-2.
关键词： 人参皂苷rh2 Bel-7402细胞 增殖 凋亡 -
膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究
目的:观察膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究.方法:膈下逐瘀汤配成浓度分别为:膈下逐瘀汤(G1):0.25×10-4g/mL.膈下逐瘀汤(G2):0.5 × 10-4g/mL,膈下逐瘀汤(G3):1.0×10-4g/mL,膈下逐瘀汤(G4.):2.0×10-4g/mL;顺铂配制成浓度分别为:顺铂(S1):0.5μg/mL,顺铂.(S2):1.0μg/mL,顺铂(S3):1.5,μg/mL,顺铂(S4):2.0μg/mL,作用于Bel-7402细胞,用噻唑兰(MTT)比色法检测膈下逐瘀汤各组对Be1-7402细胞生长的影响,并且同顺铂各组相对照,用蛋白印迹试验(Westem blotting analysis)检测不同浓度药物作用48h、72h时磷酸化AKT的表达水平.结果:膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞的增殖及磷酸化AKT的表达均有显著的抑制作用,膈下逐阏汤浓度在2.0×10-4g/mL时其48h细胞生长抑制率介于S1组与S2组之间.结论:膈下逐瘀汤抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制可能是通过抑制了细胞内磷酸化AKT这一途径而起作用.
关键词： 膈下逐瘀汤 肝癌 Bel-7402细胞 磷酸化 Akt -
丁酸钠对人肝癌细胞诱导分化作用的实验研究
目的:探讨丁酸钠对人肝癌细胞的诱导分化作用.方法:用丁酸钠(SB)作用于人肝癌Bel-7402细胞株,观察形态,增殖情况,酶学及生化改变.结果:细胞形态向正常肝细胞转变,增殖速度明显被抑制,其甲胎蛋白(AFP)分泌量明显低于对照组细胞(P＜0.05或P＜0.01),反映肝细胞分化的碱性磷酸酶(AP)的比活性明显高于对照组细胞,(P＜0.05或P＜0.01)而反映肝细胞恶变或损伤的醛缩酶(ALD)比活性明显低于对照组细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论:SB具有诱导人肝癌细胞分化的作用.
关键词： 丁酸盐类 Bel-7402细胞 分化 -
野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制
背景与目的:细胞凋亡的发生机制在肿瘤多药耐药中起重要作用,野生型p53基因是细胞凋亡的激活剂,与肿瘤多药耐药密切相关.本研究旨在探讨野生型p53基因能否实现对肝癌细胞多药耐药的逆转以及逆转的相关机制.方法:构建野生型P53蛋白表达序列的真核表达载体pCR 3.1-p53,用脂质体转染技术建立人肝癌细胞Bel-7402的p53转染细胞株,对转染细胞株进行MTT实验,观察p53基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和对肝癌细胞对长春新碱(vincristine,VCR)药物敏感性的影响,姬姆萨染色法观察细胞形态,免疫组织化学SP法检测细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,逆转录PCR法检测细胞内mdr1、MRP、GSTπ、TopoⅡmRNA的表达.结果:转染p53的Bel-p53细胞生长明显慢于未转染的Bel-7402细胞.转染野生型p53的Bel-p53细胞在VCR浓度为0.01μg/ml,0.1μg/ml,1.0μg/ml,10μg/ml,25 μg/ml时,其药物敏感性增加;VCR作用佳浓度为1.0μg/ml.形态学检查转染细胞,在VCR作用下细胞数明显减少,细胞散在不成片、细胞高度水肿、胞体不规则突起,可见核固缩、核裂解、核溶解.p53基因对Bel-7402细胞的mdr1/P-gp的表达有明显的抑制作用,对TopoⅡα基因的表达有上调作用,对GSTπ、MRP基因表达没有影响.结论:p53基因对肝癌细胞多药耐药有逆转作用,其逆转机制可能与降低mdr1/P-gp的表达、上调TopoⅡα的表达,从而增加细胞内VCR药物浓度和VCR药效有关.
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重组人生长激素对人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响
背景与目的:在原发性肝癌患者围手术期应用重组人生长激素(recombinanthuman growth hormone,rhGH),于改善患者状况同时是否会促进原有肿瘤生长、转移与复发,鲜见相关的研究报道.大多数原发性肝癌能表达生长激素受体(growthhormone receptor,GHR),本研究拟探讨rhGH对表达GHR的人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响.方法:放射配体分析法证实肝癌细胞Bel-7402表达GHR后行裸鼠肝内移植,将32只肝内移植人肝癌细胞Bel-7402的裸小鼠随机分为4组:1组为对照组,实验组则根据rhGH剂量不同分为3组[即0.5 u·(kg·d)-1、1.0 u·(kg·d)-1、2.0 u·(kg·d)-1].在肝脏肿瘤移植术后2周开始动物皮下注射rhGH 2周,实验结束处死动物,检查肿瘤情况;用抗增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)单克隆抗体免疫组化染色检测瘤组织PCNA表达情况.结果:移植瘤组织的重量与体积在rhGH 1.0 u·(kg·d)-1、2.0 u·(kgl·d)-1组与对照组之间比较有显著性差异(P＜0.05),但0.5 u·(kg·d)-1组与对照组无显著性差异(P＞0.05).各实验组肿瘤PCNA标记指数(labeling index,LI)均高于对照组(P＜0.05),各实验组之间相互比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).rhGH用药剂量与LI显著相关(r=0.779,P＜0.001).结论:rhGH能促进裸小鼠肝脏人肝癌细胞Bel-7402移植瘤的生长,其作用有随用药量增加而增强的趋势,两者之间存在一定相关性.
关键词： 重组人生长激素/药物作用 生长激素受体 肝肿瘤/病理学 Bel-7402细胞 移植瘤 裸鼠 -
Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用
背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)发酵液中提取,近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用.本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用.方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50 nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Western blot蛋白电泳测定Caspase-3活性.结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48 h后,Hoechst 33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20 ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生.结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用.
关键词： 雷帕霉素/药理学 肝肿瘤 Bel-7402细胞 凋亡 Caspase-3 -
雷氏大疣蛛蛛毒对人肝癌BEL-7402 细胞增殖的抑制作用及其机制的研究
背景与目的:蜘蛛毒素抗肿瘤的研究迄今还是未知领域.本研究探讨雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)蛛毒对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,进一步探讨其作用机制.方法:采用MTT法测定了雷氏大疣蛛蛛毒(10、20、40、80 靏/ml)对BEL-7402细胞增殖作用的影响;采用[3H]-TdR掺入法检测蛛毒加入前后BEL-7402细胞DNA的变化;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞凋亡率和细胞周期的影响;利用Western blot方法进一步检测雷氏大疣蛛蛛毒对细胞周期相关基因c-myc的变化.结果:雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞增殖有较强的抑制作用(P＜0.05),IC50为20靏/ml,时效和量效关系良好.雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制BEL-7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒作用下的BEL-7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.Western blot方法进一步检测表明雷氏大疣蛛蛛毒作用于BEL-7402细胞72h后,c-myc基因表达减弱.结论:雷氏大疣蛛蛛毒就可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成.其药理作用机制可能是除了诱导凋亡外,主要是使细胞周期相关基因c-myc表达减弱,导致细胞周期的变化.
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新型钌配合物通过内源性线粒体凋亡通路诱导Bel-7402细胞凋亡的机制
目的 研究钌配合物Ru-HMIP对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其机制.方法 MTI法检测RuHMIP对Bel-7402细胞的杀伤作用;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡情况;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);Western blot检测细胞凋亡相关蛋白.结果 RuHMIP对Bel-7402细胞有较强的杀伤效果;其对细胞毒性作用是通过诱导细胞凋亡方式;Ru-HMIP在Bel-7402细胞中产生过量ROS,并且这种作用及其细胞毒性都可被还原剂乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断.Ru-HMIP可以破坏Bel-7402细胞线粒体膜电位;上调Bax,下调Bcl-2,同时激活Caspase-9及Caspase-3.结论 Ru-HMIP可以在体外有效抑制Bel-7402细胞增殖,其作用机制是在细胞内诱发过量ROS,继而通过内源性线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.
关键词： 钌配合物 Bel-7402细胞 ROS 凋亡通路 -
两株肿瘤细胞系HLA-I类分子基因表达水平的鉴定及意义
目的 探讨两株常见肿瘤细胞系Hela细胞和BEL-7402细胞HLA-I类分子基因表达水平及其影响CTL反应性的可能意义.方法 提取肿瘤细胞的基因组DNA,利用PCR反应在基因组水平鉴定HLA-I类分子基因的拷贝数情况;提取细胞总RNA, RT-PCR反应合成cDNA,利用PCR反应鉴定肿瘤细胞HLA-I类分子在RNA水平的表达情况.结果 两株肿瘤细胞的HLA-I类基因在基因组水平的拷贝数无明显下降;在RNA水平上,Hela细胞的HLA-A、HLA-B和HLA-C基因均有表达,表达水平无明显下降,BEL-7402细胞的HLA-A和HLA-C基因有表达,但HLA-C基因表达水平降低,而HLA-B基因未见明显表达. 结论 RNA水平上,部分HLA-I类分子基因表达的降低或缺失推测可能是导致BEL-7402细胞比Hela细胞出现CTL反应性下降的原因之一.
关键词： HLA-I类分子 Hela细胞 Bel-7402细胞 mRNA -
PBMC对B7-2基因修饰的肝癌细胞Bel-7402体外杀伤作用的研究
目的 研究B7-2基因修饰肿瘤后对T细胞活化的影响,探索B7-2在肿瘤免疫治疗中的作用.方法 构建B7-2基因的表达载体,转染Bel-7402细胞,与外周血单核细胞(PBMC)共孵育,利用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞的凋亡.结果 B7-2基因修饰的Bel-7402细胞和PBMC细胞共培养4 h后,凋亡率为12.7%,与对照组(7.5%)比较,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).结论 B7-2基因修饰能够增强肿瘤细胞对淋巴细胞的活化作用,为基于B7-2的抗肿瘤治疗奠定了基础.
关键词： Bel-7402细胞 PBMC 流式细胞术 脂质体 凋亡 -
肝癌细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性与细胞内谷胱甘肽含量的关系
目的:比较肝癌BEL-7402和SMMC-7721细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的敏感性差异,探讨细胞内谷胱甘肽(GSH)含量与其作用的关系.方法:不同浓度As2O3作用BEL-7402和SMMC-7721细胞24～96 h,流式细胞仪检测细胞DNA含量,计算细胞凋亡百分率;GSH检测试剂盒检测细胞内GSH含量.结果:0.25 μmol/L As2O3作用24 h,有效地诱导BEL-7402细胞凋亡;对SMMC-7721细胞来说,需要用1.0 μmol/L As2O3作用24 h才能达到相同的抑制效果.1.0 μmol/L As2O3作用72 h时,BEL-7402细胞的凋亡率为(43.8±0.2)%,SMMC-7721细胞的凋亡率为(12.8±0.2)%,检测BEL-7402细胞内GSH为(18.7±1.4) nmol/mg;SMMC-7721细胞内GSH为(50.8±5.2) nmol/mg,两者比较均有显著差异.结论:肝癌BEL-7402和SMMC-7721细胞对As2O3诱导细胞凋亡的敏感性不同,可能与细胞内GSH含量有关.
关键词： Bel-7402细胞 SMMC-7721细胞 三氧化二砷 细胞凋亡 谷胱甘肽 -
桂皮酸诱导Bel-7402人肝癌细胞凋亡的作用及机制
[目的]通过检测不同浓度的桂皮酸对人肝癌Bel-7402细胞生存率及凋亡的影响,明确中药桂皮酸诱导该肿瘤细胞凋亡的作用和机制.[方法]采用MTT法检测0、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对正常肝细胞CL48及人肝癌细胞Bel-7402生存率的影响;采用PI/Annexin V双染法检测O、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对Bel-7402细胞凋亡作用的影响;应用Western-blot技术检测不同浓度桂皮酸对Bel-7402细胞中Bax、cytochrome c、caspase 8、caspase 9及caspase 3的作用.[结果]MTT结果显示桂皮酸能剂量依赖性地抑制Bel-7402细胞的生长,而对正常肝细胞的生存率无影响,P＜0.05.PI/Annexin V双染法,流式细胞仪检测显示空白对照组细胞凋亡率为(5.43±0.57)％,浓度为1、3、5和10mmol/L的桂皮酸处理组细胞凋亡率分别为(7.37±0.74)％、(13.73±1.5)％、(25.67±2.15)％和(52.23±4.18)％.蛋白质印迹法结果显示,桂皮酸能促进Bel-7402细胞caspase 8、caspase 9及caspase 3的切割;促进Bax蛋白转位至线粒体及cytochrome c的释放.[结论]桂皮酸具有抑制肝癌Bel-7402细胞生长及促进其凋亡的作用,可能是通过促进Bax蛋白转位至线粒体,从而刺激cytochrome c释放至胞浆,激活caspase蛋白导致肿瘤细胞凋亡.
关键词： 桂皮酸 Bel-7402细胞 凋亡 细胞色素C Bax -
肝癌细胞株Bel-7402中侧群细胞的分离和致瘤能力
[目的]分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性.[方法]采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2亚群.实验分组:SP组与NSP组.细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力；RT-PCR法检测SP细胞和NSP细胞的CD133、三磷酸腺苷结合盒转动蛋白G2(ABCG2)表达；流式细胞术分析细胞凋亡率；无血清培养法检测SP细胞及NSP细胞成球率;非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性.[结果]Bel-7402细胞中分选出的SP细胞比例为(2.4±0.0)％.生长曲线表明SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P＜0.05).SP、NSP细胞的克隆形成率分别为(20.5±2.6)％、(5.1±0.9)％,两者差异明显(P＜0.05).SP细胞ABCG2 mRNA和CD133 mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的3.03倍(P＜0.01)和1.98倍(P＜0.01).SP细胞凋亡率为(0.89±0.23)％,低于NSP细胞(P＜0.05).在无血清培养基中,SP细胞成球率为(14.1±1.9)％,高于NSP细胞(P＜0.05).1×103、104、105数量的SP细胞形成皮下移植瘤(P＞ 0.05,P＜0.05,P＜ 0.05),而1×105 NSP细胞则还不能成瘤.[结论]肝癌Bel-7402细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞.
关键词： 肝癌 侧群细胞 肿瘤干细胞 Bel-7402细胞
