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肾病综合征出血热疾病进程中不同类型特异性抗体检测及其意义
目的 研究肾病综合征出血热疾病进程中不同类型特异性抗体的产生情况,为临床提供实验诊断依据.方法 在肾病综合征出血热(HFRS)疾病的急性进展期和恢复期分别应用胶体金技术检测汉坦病毒IgG和IgM抗体,用ELISA方法检测IgA抗体,统计分析不同疾病进程中各抗体阳性率的差异性.结果 在HFRS急性进展期可产生高滴度特异性抗体lgM、lgA;而恢复期特异性抗体lgM、lgA滴度下降,特异性抗体lgG滴度升高,两组比较有显著差异(P＜0.01).结论 根据三种类型抗体的变化规律,及时检测特异性抗体,有助于了解病情,有利于判断疾病的发展进程,为治疗提供实验诊断依据.
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸与氢氧化铝联合佐剂对HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响
目的 研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)与氢氧化铝联合佐剂对HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将NAD与氢氧化铝按不同剂量联合后,与不同剂量的HBsAg混合,分别经肌肉注射免疫ICR小鼠1针或2针(间隔2周),每只注射0.2ml,并设阴性对照组(生理盐水)、单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组和单纯NAD对照组,共23组,每组6只.分别于末次免疫后2、4、6、8、10、12周采血,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG水平;试验期内,观察小鼠是否发生异常状况;14周后,取佳剂量免疫组及阴性对照组小鼠心、肝、脾、肺组织做组织切片,进行病理分析.结果 阴性对照组在各时间点均未检测到抗HBsAg IgG抗体,除联合佐剂12组外,其余各组血清抗HBsAg IgG抗体水平均在末次免疫后第6周达峰值,随着时间的延长,抗体水平呈下降趋势;联合佐剂14组(HBsAg 2 μg+氢氧化铝100 μg+NAD 2.5μg)产生的抗体水平高,且持续时间较长,其对HBsAg的体液免疫增强效应显著优于单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组及单纯NAD佐剂对照组(P＜0.05).试验期内,各组小鼠均未出现异常反应;佳剂量免疫组(14组)及阴性对照组组织切片观察结果显示,均为发生病变.结论 NAD与氢氧化铝联合佐剂能显著增强HBsAg诱导的小鼠特异性体液免疫应答,在免疫剂量范围内,联合佐剂安全性良好.
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丙型肝炎病毒NS3基因疫苗质粒的构建、表达及其体液免疫应答
目的 构建基于Ii分子的丙型肝炎病毒(HCV)内源性靶向基因疫苗质粒,并检测其在真核细胞中的表达及免疫小鼠诱导的体液免疫应答.方法 通过3轮PCR,以HCV-NS3的Th1表位(1248～1261aa)取代Ii链CLIP片段编码基因,构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,转染COS-7细胞,RT-PCR法检测其在mRNA水平的表达;用内源性靶向基因疫苗pHCV-NS3-Th1和非靶向基因疫苗pHCV-NS3经股四头肌肌肉免疫BALB/c小鼠,以生理盐水、pCI-neo和pCI-neo-Ii作为对照,检测小鼠的体液免疫应答水平.结果 转染细胞中,内源性靶向基因疫苗质粒在mRNA水平获得表达;对BALB/c小鼠的免疫结果显示,只有pHCV-NS3组小鼠可以检测到针对HCV-NS3的特异性抗体,抗体滴度可达1∶1 024.结论 已成功构建了基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,其能够在真核细胞中表达,但不能刺激小鼠产生HCV-NS3特异性抗体.
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氢氧化锌胶体与三磷酸腺苷二钠联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用
目的 制备氢氧化锌[Zn(OH)2]胶体,并检测其单独或与三磷酸腺苷二钠(Disodium adenosine tripho-sphate,简称ATP)联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用.方法 采用葡萄糖酸锌作为锌源,与NaOH反应制备Zn(OH)2胶体溶液,对其进行纯化及检测,并进行小鼠急性毒性试验;将不同剂量的Zn(OH)2胶体单独或与不同剂量的ATP联用,与狂犬病疫苗(0.25 IU)混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组和抗原对照组,每组8只,Zn(OH)2和Zn(OH)2+ ATP和生理盐水对照组采用单次免疫,抗原对照组分别免疫1、2、3、5次,分别于初次免疫后4、8、12、16周采血,分离血清,检测血清中抗狂犬病病毒特异性IgG抗体水平.结果 所制备Zn(OH)2胶体溶液大吸收波长为213nm,可观察到明显的丁达尔现象,浓度为6 mg/ml,经光学色差显微镜及扫描电镜观察合格,小鼠急性毒性试验未观察到急性毒副作用.大部分佐剂组抗体水平高于抗原单次免疫组,但均未达到抗原5次免疫组水平;0.27和0.21 mg Zn(OH)2组在初次免疫后8周内有高水平抗体产生;0.27 mg Zn(OH)2组在初次免疫后16周出现抗体水平反弹性升高;0.18 mg Zn(OH)2+1.0 mg ATP组和0.18 mg Zn(OH)2+0.5 mg ATP组在初次免疫后4周内产生的抗体水平较高,之后逐渐下降;2次和3次免疫抗原对照组在初次免疫后8周内,其抗体水平不及佐剂组.结论 所制备的Zn(OH)2胶体佐剂单独或与ATP联用均可增强狂犬病疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答,且安全性良好,有望应用于疫苗生产.
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C3d分子多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用
目的 研究C3d分子对多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用.方法 通过PCR方法合成多表位HME基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pcDNA3.1-3C3d,构建多表位DNA疫苗pcDNA3.1-HME和pcDNA3.1-HME-3C3d,经肌肉注射免疫小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平.结果 经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,且pcDNA3.1-HME-3C3d免疫组小鼠的抗体水平明显高于pcDNA3.1-HME免疫组.结论 C3d可增强多表位DNA疫苗的体液免疫应答水平.
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淋病奈瑟菌表面蛋白A基因真核表达质粒诱导的小鼠特异性体液免疫应答
目的 观察淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因真核表达质粒不同免疫途径诱导的小鼠特异性体液免疫应答效果.方法 将NspA基因真核表达质粒pcNspA通过肌肉、滴鼻和阴道3种途径免疫BALB/c小鼠,分别于0、2、3、4周各免疫1次,末次免疫后2周,收集各组小鼠血清、支气管肺泡洗液和阴道洗液,采用间接ELISA方法检测特异性抗体效价;并检测抗体介导的补体溶菌活性.结果 滴鼻免疫和肌肉免疫pcNspA质粒均可诱导小鼠体内产生较高水平的特异性IgG和IgA抗体,而且滴鼻免疫组在支气管肺泡洗液和阴道洗液中均可检测到特异性sIgA抗体,而阴道免疫组仅在阴道局部检测到较低水平的特异性sIgA抗体;滴鼻免疫组小鼠血清具有溶菌活性.结论 淋病奈瑟菌NspA基因真核表达质粒可诱导小鼠体内产生特异性抗体,并具有抗菌活性;滴鼻免疫可能是其更有效的免疫途径.
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氢氧化锌对IPV-HBV联合疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的增强作用
目的 探讨氢氧化锌[Zn(OH)2]对IPV-HBV联合疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将ICR小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Zn(OH)2(0.5 mg)组、IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Al(OH)3(0.5 mg)组和IPV-HBV组,经大腿肌肉内侧免疫2次,间隔4周.分别于初次免疫后第4、8、12、16、20和24周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中各抗原的特异性IgG抗体水平.结果 各实验组相对于对照组,在初次免疫后4周时均产生针对各抗原的特异性IgG抗体；8周时达高,并能持续较长时间.IPV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各1×107 pfu)-HBV(2 μg)+ Zn(OH)2组产生的特异性IgG抗体水平均显著高于其他各组(P＜0.05或P＜0.01).结论 Zn(OH)2能明显增强IPV-HBV联合疫苗诱导的小鼠体液免疫应答,其免疫佐剂效应优于Al(OH)3佐剂.
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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答
目的 检测结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平.方法 将BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,分别进行免疫,免疫8周后处死小鼠,分离血清,ELISA间接法测定血清特异性抗PPD IgG抗体的水平,流式细胞分析仪检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化.脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数,ELJSA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平.结果 H37Ra免疫小鼠血清中抗PPD IgG抗体、脾脏CD3+T细胞和CD4+T细胞的百分率、脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组,但与BCG组差异无显著意义.各组间脾脏CD8+T细胞、CD4+T/CD8+T比值差异均无显著意义.结论 H37Ra免疫小鼠后,可以产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答,有望成为结核疫苗的候选抗原.
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乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答
目的 探讨乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答效果.方法 用壳聚精制备乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗,经腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgC抗体水平.结果 3种途径免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,鼻腔免疫效果好;多表位噬菌体微球疫苗的抗体水平明显高于多表位噬菌体疫苗.结论 壳聚糖微球疫苗投递系统可以提高多表位噬菌体疫苗的体液免疫效果.鼻腔免疫是多表位噬菌体微球疫苗的佳免疫途径.
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多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答
目的 研究多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答.方法 制备多表位DNA壳聚糖微球疫苗pcD-NA3.1-HME-3C3d,经鼻腔免疫小鼠,蛋白检测微孔试剂盒检测小鼠特异性IgG抗体水平.结果 经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,DNA壳聚糖微球疫苗的抗体水平明显高于DNA疫苗.结论 壳聚糖微球疫苗投递系统可提高多表位DNA疫苗的免疫应答效果.
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甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)诱导小鼠体液及细胞免疫应答
目的评估甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫学效果.方法用甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠后,用ELISA法检测血清中抗-HAV IgG、TNF-α、IFN-γ和IL-2;用流式细胞仪对全血中T细胞亚群分类;3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖.结果减毒活疫苗组在初免后诱导的体液和细胞免疫水平均低于灭活疫苗组,加强免疫后,与灭活疫苗相当.灭活疫苗组IFN-γ的峰值出现时间较减毒活疫苗组晚,但水平较高.结论两种疫苗均可诱导体液和细胞免疫应答,减毒活疫苗进行加强免疫后可诱导更好的系统免疫应答.
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重组(酵母)乙型肝炎疫苗接种母鸡的体液免疫应答
近年来,对鸡抗体研究较多,现已证明用病原体免疫母鸡可诱发机体产生特异性抗体,但用重组酵母乙肝疫苗刺激母鸡诱发免疫应答的研究还未见报道.为此本实验采用重组酵母乙肝疫苗免疫母鸡,观察其血清特异性抗体变化及其诱发体液免疫应答水平及免疫应答持久性.
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发热伴血小板减少综合征患者血清中核蛋白抗体的动态变化
目的:观察新发传染病发热伴血小板减少综合征(SFTS)的病原体新型布尼亚病毒(SFTSV)核蛋白(NP)IgM和IgG型抗体在SFTS患者外周血中的变化规律,为疾病的早期诊断和发病机制的认识提供依据.方法:用ELISA方法检测28例SFTS患者不同病程阶段血清中NP特异性IgM、IgG抗体.结果:①28例SFTS患者中,IgM阳性检出率为89.3 ％(25/28),IgG阳性检出率为85.7 ％(24/28).②IgM和IgG均在发病5天后开始出现,随着病程延长血清中抗体水平逐渐上升,其峰值出现在发病2周左右.③死亡组患者的抗体检出时间迟于痊愈组患者,且抗体水平低下.结论:①在SFTSV感染早期,SFTS患者血清中NP特异性抗体IgG和IgM的变化趋势一致,NP特异性抗体IgG和IgM一样是SFTS早期诊断的重要指标.②因疾病严重而死亡的患者,抗体出现延迟、抗体水平低下可能与患者细胞免疫系统严重受损及多脏器功能障碍有关,致使机体体液免疫应答减退或应答无能.③抗体出现延迟且抗体水平低下可能是病情严重患者预后不良的预测指标.
关键词： 新型布尼亚病毒 发热伴血小板减少综合征 核蛋白 体液免疫应答 -
人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的研究进展
人乳头瘤病毒16型(HPV16)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了预防性疫苗的研究进展.目前通过分子生物学方法在体外表达HPV16病毒样颗粒(VLPs)成为预防性疫苗研究的热点.研究表明VLPs可诱导机体产生抗病毒攻击的细胞免疫和体液免疫应答,从而为预防性基因工程亚单位疫苗的研究提供了重要科学依据.
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结核分枝杆菌海藻糖磷酸磷酸酶诱导小鼠体液和细胞免疫应答
目的 研究结核分枝杆菌(M.tuberculosis)海藻糖磷酸磷酸酶(TPP)诱导小鼠体液和细胞免疫.方法 差速离心分离结核分枝杆菌H37Rv和卡介苗(BCG)的各细胞组分,通过Western杂交检测抗原TPP在结核分枝杆菌H37Rv和BCG中的亚细胞定位情况.分别用5×106 CFU的BCG和50μg的TPP蛋白免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗TPP的IgGl和IgG2a抗体效价.取免疫小鼠的脾细胞,体外抗原刺激,用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测γ干扰素(IFN-γ)分泌细胞.结果 TPP亚细胞定位于结核分枝杆菌H37Rv和BCG的胞壁和细胞膜组分.TPP蛋白免疫后小鼠产生的TPP特异性IgG1和IgG2a抗体效价明显高于BCG免疫小鼠,并且IgG2a的抗体效价高于IgG1.体外抗原刺激TPP蛋白和BCG免疫小鼠的脾细胞,都能诱导较高的IFN-γ分泌.结论 结核分枝杆菌细胞壁蛋白TPP能诱导小鼠Ⅰ型辅助性T细胞介导的免疫反应,可作为抗结核疫苗的候选抗原.
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编码膜结合IL-4或IL-12的质粒可明显增强癌胚抗原DNA疫苗的活性
DNA疫苗可诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和体液免疫应答,是抗肿瘤和预防传染病的一种行之有效的方法.已有实验证明,细胞因子具有增强DNA疫苗免疫应答的佐剂作用,但循环性细胞因子会引起一些不良生理反应,所以此项研究试图利用膜结合表达的方式将细胞因子固定在注射部位,达到既能产生免疫佐剂作用,又不引起明显的不良反应.
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ISCOMATRIXTM佐剂:细胞和体液免疫应答的有效诱导剂
ISCOMATRIXTM佐剂能诱导广泛而有效的体液和细胞免疫应答.其成分清楚,生产工艺简单易行.本文概述了ISCOMATRIXTM佐剂疫苗诱导免疫应答的能力和作用机理.
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高脂饮食减弱胶原诱导性关节炎小鼠体液免疫应答的初步研究
探讨高脂饮食(high fat diet,HFD)诱导肥胖对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠体液免疫应答的影响及机制.通过给予C57BL/6小鼠喂饲高脂肪成分饲料(40％)构建小鼠肥胖模型,在此基础上构建小鼠CIA模型.通过临床积分、病理组织染色评估CIA小鼠疾病活动度;应用microCT分析骨质骨量情况;ELISA检测血清炎性因子和免疫球蛋白水平;流式细胞术分析T、B淋巴细胞亚群.进一步采用腹腔注射T细胞依赖性抗原4-羟基-3-硝基苯基乙酰基(NP)嵌合的钥孔嘁血蓝素(NP-KLH)及非T细胞依赖性抗原NP-Ficoll来评估HFD小鼠对抗原的免疫应答能力.结果显示,短期HFD促进CIA小鼠体质量增加,血清中瘦素和IL-6升高,并显著降低CIA小鼠关节炎的发病率,减轻关节滑膜区炎性细胞浸润程度和关节、胫骨的骨质破坏.HFD显著下调CIA小鼠的血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2b和IgG3)和B细胞亚群(B220+ IgM+ IgD-和B220+ CD5+ CD11 b+B细胞)的产生.此外,HFD显著减弱了小鼠对免疫原的应答,特别是对T细胞依赖性抗原及免疫球蛋白的产生能力.因此短期HFD可通过降低B细胞的数量、减弱机体对抗原的免疫应答能力而降低CIA的发生和发展.由此饮食可能是调控慢性炎症状态和体液免疫应答的重要影响因素.
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麻疹、免疫失忆与疫苗接种的延伸利益
麻疹感染可引起强烈的病毒特异性细胞和体液免疫应答,使机体清除病毒以及获得终身免疫,并可导致一过性淋巴细胞减少以及淋巴结中淋巴细胞的耗竭.这些效应导致的免疫抑制既往被认为是暂时的.
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程序性死亡受体-1／程序性死亡配体-1信号途径与结核病免疫机制的研究进展
结核病是由结核分枝杆菌感染引起的具有重大公共卫生威胁的传染性疾病。我国是全球22个结核病高负担国家之一，目前新发病人数约为100万／年，占全球发病的12％，位居全球第二位［1］。结核分枝杆菌为胞内寄生菌，以 CD4＋和 CD8＋ T 淋巴细胞介导的细胞免疫为主要应答模式，CD4＋T 淋巴细胞通过分泌多种 Th1型细胞因子，调节免疫细胞的增殖、分化和辅助体液免疫应答；CD8＋ T 淋巴细胞通过分泌穿孔素和颗粒酶等杀伤靶细胞，从而发挥细胞毒效应。目前越来越多数据显示，结核分枝杆菌感染后以 CD4＋ T 淋巴细胞介导的 Th1型免疫应答起主要作用［2-3］。T 淋巴细胞的活化和增殖需要双重信号，除需要主要组织相容性复合体（MHC）提供第一信号外，多种协同刺激分子受体，如 CD28、程序性死亡受体（PD）-1、细胞毒 T 淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）还与其配体结合，提供正性或负性第二信号，在 T淋巴细胞免疫应答的起始、效应和终止等不同阶段可发挥重要的调控作用，并在生理状况下保持相对平衡［4］。PD-1／程序性死亡配体（PD-L）1是 CD28／B7超家族新成员，可介导负性调节信号［5］，能有效抑制 T、B 淋巴细胞的生物学功能，在机体免疫应答中发挥至关重要的作用。现就近年来关于协同刺激分子 PD-1／PD-L1与结核病的免疫学机制做一综述。
