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IRIVs:具有免疫增强作用的重组流感病毒体
具有免疫增强作用的重组流感病毒体(immunopotentiating reconstituted influenza virosomes,IRIVs)作为一种脂质体运载体系,已获准用于人体,它能安全有效地运送和特异性地靶向抗原,其中包括灭活的病毒蛋白、合成肽、DNA和RNA等现代疫苗,从而诱导细胞免疫或体液免疫应答[1].
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机体抗流感病毒免疫防御机制研究进展
流行性感冒是由流感病毒(Influenza virus)引起的严重危害人类健康的一种急性呼吸道传染病,在世界各国广泛流行.此类病毒经过呼吸道进入人体后,感染宿主细胞,诱导机体免疫应答,病程呈自限性.对流感病毒的发病机理以及引起机体免疫系统的变化及免疫应答的深入了解,将有助于了解流感病毒的致病机制,以采取更有效的治疗措施.本文将就流感病毒的发病机理、天然免疫应答、细胞免疫应答及体液免疫应答等方面进行综述.
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结核病DNA疫苗的现状与未来
1990年Wolff等[1]在一次基因治疗的实验研究中意外地发现不加任何处理的基因也可在骨骼肌细胞中表达蛋白至少2月,从而产生了核酸疫苗或基因疫苗、基因免疫、核酸免疫的全新概念,开创了免疫学和疫苗学的新领域.核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗,由能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因和真核表达载体构建而成,它被注入机体后,通过宿主细胞的转录系统表达蛋白抗原,诱导宿主产生细胞免疫应答和体液免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.DNA疫苗可诱导全面的免疫反应,尤其是特异性CTL识别、杀伤、破坏被感染的细胞及清除细胞内的病原体,这对于清除寄生于巨噬细胞内的结核分支杆菌非常有意义.1996年以来WHO将结核病核酸疫苗研究列为资助的项目之一.本文概述了结核病DNA疫苗研究的现状,及其在结核病预防和治疗方面需进一步研究的问题和应用前景.
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白色念珠菌感染免疫应答的研究进展
白色念珠菌的致病是其与机体免疫系统相互作用的结果.研究发现,白色念珠菌感染人体时,刺激机体产生固有免疫及特异性细胞免疫和体液免疫应答.其中特异性细胞免疫占主导地位.了解认识白色念珠菌感染的免疫应答对诊断、预防及治疗白色念珠菌感染具有重要意义.
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伯氏疟原虫感染早期的根治性治疗对再感染体液免疫应答的影响
为探讨疟疾感染早期根治性治疗对再感染体液免疫应答的影响,用伯氏疟原虫感染DBA/2小鼠,感染后3天进行根治性治疗,并于初次感染后90天再进行感染.通过薄血膜吉姆萨染色法计数红细胞感染率,流式细胞术检测再感染前(0天)和再感染后(1、3、5天)不同时间点脾细胞中活化性B细胞百分率,ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a和总IgE水平.结果发现,同源疟原虫再感染后,根治性治疗小鼠仅出现短暂的低水平原虫血症,再感染后第3天活化性B细胞开始明显升高;同时IgG、IgG1和IgG2a也出现有意义的升高,但再感染前,这些小鼠血清IgG、IgG1和IgG2a均明显高于未感染的正常小鼠,IgG2a在每一检测点均显著高于IgG1,血清中总IgE水平于再感染后第1天即出现明显升高.此结果提示,疟疾感染早期的根治性治疗并不影响宿主在再感染时产生有效的体液免疫应答,一些记忆性B细胞和长效浆细胞的存在可能是抵御再感染的关键因素,特异性IgG,尤其是IgG2a的作用或许尤为重要.
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和缓艾美耳球虫激发宿主免疫应答的初步研究
和缓艾美耳球虫 Eimeria mitis是7种鸡球虫中致病力弱的虫种,对于其免疫原性的认识至今仍有争论。本研究以和缓艾美耳球虫涿州株为研究对象,以初次免疫及二次免疫后鸡的卵囊排出量为标准评估了其免疫原性。同时利用ELISA检测了免疫后鸡群血清中球虫特异性IgY抗体的水平,并通过ELISPOT技术分析了二免后鸡群外周血单核淋巴细胞( PBMC)中分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量。结果显示,二次免疫后,鸡的卵囊排出量显著低于初次免疫,免疫组的血清特异性IgY抗体水平较低,而分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量较高。这些结果表明和缓艾美耳球虫涿州株具备良好免疫原性,且其激发宿主产生的保护性免疫以细胞免疫应答为主,有作为疫苗株的潜力。
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一氧化氮调节BAFF表达和T细胞非依赖的抗体应答
已知天然免疫细胞产生的一氧化氮( NO)在T细胞免疫应答起着重要的调节作用,但它在B细胞体液免疫应答中的作用还不清楚。已有的研究提示,诱导性一氧化氮合酶( NOS2/iNOS)是正常的IgA抗体应答所必需的,然而,NOS2却能抑制病毒特异性的IgG2a的抗体应答反应。本文的研究人员利用NOS2敲除小鼠研究了T细胞依赖和T细胞非依赖的抗体应答中NO在其中的作用。
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细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95疫苗诱导小鼠体液免疫应答的动态观察
目的 观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)- Eg95疫苗免疫小鼠体液免疫应答的动态变化.方法 将疫苗分别采用经口灌胃和鼻内接种法免疫BALB/c鼠,分别于免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、1 6、18和20周采血,分离血清,用ELISA法测定IgG及其亚类和IgE水平.结果 经口灌胃免疫组小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8、6、6、6、6和10周达高水平;鼻内接种组小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8、8、10、8、6和10周达高水平.结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95疫苗可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答.
关键词: 细粒棘球绦虫 重组Bb-Eg95疫苗 体液免疫应答 -
HCV第一高变区的免疫学研究进展
HCV属黄热病毒科,感染人体后可引起机体免疫应答发生异常,导致组织损伤,形成慢性持续性感染,并能进一步发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌.目前全世界约有1.7亿HCV感染者,约有75%左右的急性丙型肝炎患者转为慢性感染,其中10%~20%慢性丙型肝炎患者发展为肝硬化,1%-5%发展为肝癌[1].丙型肝炎在治疗和预防方面具有很强的局限性,这主要是由于HCV的高度变异性,其中位于E2 NS1区N端第27位氨基酸的变异性大,通常称之为第一高变区(hypervariable region 1,HVR1).研究证明HVR1中含有优势表位[2],其高度变异性也将对机体产生的针对HCV的细胞和体液免疫应答造成障碍.现本文就近年来有关HCV-HVR1的免疫学研究进展做一综述.
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SFTS病毒非结构蛋白重组质粒的构建及其体液免疫原性研究
目的 研究SFTS病毒(SFTS virus,SFTSV)的非结构蛋白(Nonstructural proteins,NSs)重组质粒的体液免疫原性.方法 利用聚合酶链反应法(Polymerase chain reaction,PCR)构建真核表达质粒pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-NSs-Flag;引入Nhe Ⅰ酶切位点及tPA(Tissue plasminogen activator,tPA)信号肽,构建质粒pJW4303-tPA-NSs-opt.将质粒转染至HEK 293T细胞,蛋白质印迹法(Western blot,WB)验证NSs表达.NSs相关质粒免疫BALB/c小鼠,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测SFTSV NSs特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组NSs质粒,WB验证了NSs可在HEK293T细胞内表达.pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-tPA-NSs-opt重组质粒均可诱导小鼠体内产生特异性IgG,其中单优化型质粒pJW4303-NSs-opt的免疫原性较好,在第6、8周的IgG水平显著高于野生型NSs质粒,差异具有统计学意义.结论 本研究构建的SFTSV的NSs重组优化型质粒具有良好体液免疫原性,其中单优化型效果佳.
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HPV16 L1-E7c嵌合基因的重组杆状病毒在昆虫细胞中表达及免疫小鼠的效应研究
目前,关于人乳头瘤病毒疫苗的研究主要集中在嵌合型病毒样颗粒(cVLP)上.本研究制备了昆虫细胞表达的HPV16 L1-E7c CVLP,并将该蛋白疫苗接种动物,探讨其诱发体液免疫应答和细胞因子的效应.
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铜绿假单胞菌B细胞表位-MyD88表达质粒的构建及其相关研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白F(OprF)的主动免疫能诱发机体产生特异性体液免疫应答,发挥局部保护作用.然而OprF的完整蛋白对机体具有潜在的危害性.现有研究表明OprF蛋白含有大量的B细胞表位,因此,应用OprF优势抗原表位设计的疫苗,既能诱导机体产生抗Pa的中和抗体,又能克服非抗原决定簇成分潜在的毒副作用.考虑到表位蛋白的免疫原性较弱,不足以引发良好的免疫应答,故利用新型免疫佐剂MyD88来调节机体.
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实时荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法的建立与初步应用
结核分枝杆菌不产外毒素和侵袭性酶,而结核分枝杆菌分泌的蛋白及菌体蛋白在宿主抗结核分枝杆菌的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用.结核分枝杆菌mRNA的半衰期很短(3~5 min),是结核分枝杆菌活菌诊断及检测药物敏感性很好的分子标志.因此通过检测临床上分离的结核分枝杆菌的mRNA可以快速判断是否为致病性结核杆菌及结核分枝杆菌是否为活菌.
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丙型肝炎病毒E2蛋白HVR1在体液免疫应答中的作用
丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝硬化、肝癌的高危险因素,目前尚无HCV疫苗上市.HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体,是重要的候选疫苗成分.E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1(hypervariable region 1,HVR1)含有多个线性中和抗体表位,变异频率极高[1],增加了HCV疫苗研制的难度.近年发现,除了HVR1含有中和抗体表位外,E2蛋白还存在其他的保守空间构象和线性中和抗体表位[2].
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两株登革2型病毒NS1基因真核重组质粒免疫BALB/c小鼠产生特异性抗体水平的比较
目的 利用登革2型病毒(dengue type 2 virus,DENV2)M株和NGC株NS1基因部分扇列PcDNA3.1重组质粒初次和加强免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠体液免疫应答的差异.方法 分别构建两株DENV2 NS1基因部分序列(1-413 bp)的PcDNA3.1真核重组质粒和pET28a(+)质粒,进行原核蛋白的表达、鉴定、纯化和定量;并用pcDNA3.1重组质粒免疫BALB/c小鼠,初次免疫及第7天、14天分别加强免疫1次,共免疫3次.收集初次免疫后第7、14、28和56天外周血标本,间接ELISA法测定小鼠血清特异性IgM/IgG类抗体水平,细胞病变抑制法检测特异保护性抗体水平.结果 构建了pET28a(+)-NS1m/pET28a(+)-NS1n原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,NS1基因部分序列获得表达,其相对分子质量均约22.3×103;Western blot表明该目的 蛋白可与抗His标签单克隆抗体结合;经Ni柱亲和层析法得到纯度达92%的表达蛋白,对C6/36细胞有毒性,并可用于ELASA检测.不同DENV2毒株NS1基因部分序列的pcDNA3.1重组质粒初次和加强免疫BALB/c小鼠诱导特异性IgM、IgG类和中和抗体的产生存在差异,M株重组质粒加强免疫小鼠后特异性抗体效价水平较高并持续较长时间.结论 DENV2两毒株NS1基因部分序列重组质粒免疫小鼠后诱生的特异性抗体类别、水平存在差异.
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HIV感染者B淋巴细胞功能损伤机制的研究进展
1983年的一项研究首次揭示了AIDS病人的B细胞出现高活化和功能损伤等异常现象[1],提示HIV感染不仅导致细胞免疫的功能缺陷,而且也能引起体液免疫的功能损伤.HIV感染诱导的B细胞变化主要表现在两方面:一方面是亚群上的变化,体现在未成熟/过渡型B细胞亚群、活化B细胞和浆细胞亚群、以及组织样记忆B细胞亚群增加,而初始和CD27+记忆B细胞亚群减少[2-4];另一方面是功能上的变化,包括高度异常活化、易于凋亡、HIV特异性或非特异性抗体反应性低[5-7]等.B细胞功能损伤使得体液免疫应答缺陷,HIV病毒不能得到有效控制,同时,还会增加机会感染和二次感染的易感性.因此,深入理解HIV感染过程中B细胞功能损伤的机制,不仅能通过改善体液免疫来减少机会感染和二次感染的发生,也为基于抗体的疫苗研究提供了依据.
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变异链球菌表面蛋白质抗原真核表达质粒的构建及免疫动物的研究
变异链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是龋病主要致病菌,S.mutans的表面蛋白质抗原PAc是其主要毒力因子之一,参与了唾液介导的S.mutans在牙面的粘附。S.mutans PAc分子的氨基端不仅富集免疫显性T、B细胞表位,而且含有唾液糖蛋白结合区,因此氨基端是理想的表位多肽防龋疫苗选择区。此外,Streptococcus sobrinus(S.sobrinus)的PAg分子与S.mutans PAc分子的氨基端具有保守的B细胞表位,以PAc分子该区段制备的多肽疫苗可激发宿主对S.sobrinus的交叉保护性反应。因而,初次以变异链球菌表面蛋白质抗原PAc氨基端的编码基因构建真核表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察所诱导的体液免疫应答,为基因疫苗防龋的动物实验提供资料。
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检测Th1/Th2亚群的临床意义
辅助T细胞(Th)1/Th2亚群的区分大大提高了人们对细胞因子网络的认识,以表达白细胞介素(IL)-2和γ干扰素(IFNγ)为主的Th1群细胞,可以增强杀伤细胞的细胞毒性作用,激发迟发型超敏反应,介导细胞免疫应答;以表达IL-4、IL-6、IL-10为主的Th2型细胞,促进抗体的产生,介导体液免疫应答.机体Th1/Th2平衡状态失调后,与肿瘤免疫逃逸,细菌、病毒等微生物感染有一定关系,并参与变态反应性疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的发生.与传统的临床检验项目不同,检测Th1/Th2相关细胞因子的意义,并不着重于辅助疾病的诊断,而更注重分析疾病发生发展的状况,为临床调整Th1/Th2失衡,提供正确的治疗措施.
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应用含CpG基序的寡脱氧核苷酸增强HBsAg诱导健康小鼠抗-HBs产生的实验研究
目的探讨人工合成的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导普通小鼠产生体液免疫应答的影响.方法以血源HBsAg为接种疫苗,人工合成含CpG基序的硫代磷酸寡脱氧核苷酸作为佐剂,以BALB/c小鼠作为实验动物进行免疫接种;采用ELISA方法检测抗HBs,判断免疫小鼠的体液免疫功能.结果联合CpG ODN组在抗HBs转化率、出现时间、滴度峰值方面优于单用HBsAg组,CpG ODN的佐剂效果接近完全弗氏佐剂,而单用CpG ODN则不能诱导抗HBs的产生.结论CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/C小鼠产生体液免疫应答.
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乙型肝炎病毒核心DNA疫苗研究进展
第一代乙型肝炎疫苗是从乙型肝炎表面抗原(HBsAg)无症状携带者血清中分离HBsAg颗粒,经灭活后制成的乙型肝炎血源疫苗;第二代乙型肝炎疫苗即为HBsAg基因重组疫苗,该疫苗可诱导体液免疫应答产生中和抗体,但不能诱导细胞免疫应答,主要用于预防,而不是用于治疗.目前,国内外正在研究和开发第三代乙型肝炎疫苗,即乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗(也称核酸疫苗),目的是既可用于预防,又可用于慢性乙型肝炎的治疗.