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融合表达HBsAg/HBcAg的重组质粒诱导的小鼠免疫应答
目的:探讨融合表达HBsAg/ABcAg的重组质粒的免疫诱生效果方法:从乙肝患者的血清中提取HBV DNA,采用pCR技术扩增HBV的S和C基因并拼接成SC片段.构建融合表达质粒pcDNA3.1-SC,以100μg肌肉接种BALB/c小鼠,2,4 wk后各加强1次.采用ELISA法检测小鼠血清抗-HBs和抗-HBc,LDH释放法检测体外CTL活性.结果:接种后3,5,8,12 wk,小鼠血清抗-HBs阳性率分别达到50%,75%,100%和50%,抗-HBs滴度在第8 wk达到峰值.而抗-HBc阳转率低于25%,抗体高滴度低于1:5.小鼠接种后5 wk时的特异性CTL活性为46.9±1.8%(效/靶比100:1).结论:融合表达质粒pcDNA3.1-SC能够同时诱生针对HBsAg/HBcAg的特异性细胞免疫和体液免疫应答,提示研制乙肝的免疫预防和治疗性基因疫苗的可能性.
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心力衰竭的免疫发病机制与治疗策略
急性心肌梗死(AMI)和急性病毒性心肌炎(AVMC)患者体内存在Th1/Th2/Th17细胞功能失衡;至慢性心力衰竭阶段Treg细胞数目下降、抑制炎症反应功能降低。实验研究证明IL-17促进AVCM小鼠病毒复制和体液免疫应答、加重AMI心肌缺血再灌注损伤;他汀类、β受体阻滞剂和芪苈强心等药物可以改善免疫内环境、升高Treg细胞比例,有利于心肌修复和改善心室重构。以上研究和发现推动我们提出心力衰竭免疫发病机制和治疗策略的全新理念。
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CD4+T淋巴细胞亚群研究进展
在免疫应答期间,外周血T淋巴细胞发育为功能不同的亚群,并通过分泌特殊的细胞因子,影响细胞免疫,调节体液免疫应答.T淋巴细胞按表型不同可分为CD4+和CD8+两大亚群,它们多数表达T细胞受体,但识别的抗原和所受的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的限制性不同.现将近年来关于CD4+T淋巴细胞亚群的研究进展综述如下.一、CD4+T淋巴细胞分类CD4+T淋巴细胞具有高度异质性.根据其表面标志和功能特征可分为若干亚群,各亚群之间相互调节,共同发挥其免疫学功能.其中主要的是CD4+辅助性T细胞(help T cell,Th)亚群,根据其功能和分泌的细胞因子不同,可分为Th1、Th2和Th3亚群.初始CD4+T淋巴细胞接受抗原刺激后首先分化为Th0细胞,Th0细胞继续分化为Th1、Th2和Th33个细胞亚群.Th1细胞分泌白细胞介素(白介素)-2、干扰素(IFN)-α、白介素-12和IFN-γ等细胞因子;Th2细胞则分泌白介素-4、白介素-5、白介素-10和白介素-13等细胞因子:Th3细胞分泌大量的转化生长因子-β(transforming growth factor β,TGF-β).一般情况下,Th1细胞与迟发性过敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)、细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的成熟以及自然杀伤细胞(hature killer,NK)的激活等有关;Th2细胞则与抗体的生成、B细胞的增殖和抗寄生虫感染等有关;Th3细胞分泌的TGF-β主要效应功能是抑制Th1介导的免疫应答和炎症反应[1].
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外周血CD4+CD8+T细胞研究进展
T细胞在免疫应答过程中发挥中枢的作用.CD4+T细胞具有辅助细胞免疫和体液免疫应答的作用,CD8+T细胞则是重要的效应细胞.外周血中95%以上为CD4或CD8单阳性T细胞,CD4+CD8+T细胞(DP)<5%[1].有关DP T细胞的研究近年来发展较快,研究显示,在某些病毒感染中,DP T细胞比例增加,这群细胞参与抗感染适应性免疫应答,具有独特的功能特点.我们就这方面的研究综述如下.
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弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响
弗氏完全佐剂(CFA)是一种常用免疫佐剂,其提高体液免疫应答的作用已被公认,而对细胞免疫应答的影响鲜有报道.作者测定了一些注射佐剂后小鼠的细胞免疫应答指标,同时测定体液免疫指标对CFA剂量作一监测,报告如下.
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转录因子T-bet和支气管哮喘
支气管哮喘是一种以嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞浸润为特征的慢性气道炎症,同时一系列细胞因子对这种气道炎症起到加强或消弱的作用.气道炎症是气道高反应性的基础,也是气道重塑的重要原因.Th淋巴细胞可以分化成Th1、Th2两种细胞亚群,每种细胞亚群均有特异的功能和细胞因子.Th1细胞与细胞免疫有关,介导迟发性超敏反应,保护机体不受细胞内病原体和病毒的侵袭.Th2细胞辅助B细胞功能,介导体液免疫应答,以清除蠕虫和其他细胞外的寄生虫,与移植物耐受、抑制自身免疫疾病有关.IFN-γ是Th1特征性细胞因子,Th1还产生IL-2、TNFβ,IL-4是Th2细胞相应的特征性的细胞因子,另外Th2细胞还分泌IL-5、IL-6、IL-9、IL-13[1,2],但不生成IFN-γ.IL-4促进B细胞分化合成IgE,IL-5是嗜酸粒细胞的存活发育因子[3].对于不同的免疫刺激或细胞因子,这两种Th可增高并形成免疫调控环路,即Th1分泌的细胞因子可抑制Th2细胞的活性,反之亦然.有足够的证据表明,这种调控环路的破坏可能是引起哮喘的关键所在[4,5].
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白介素4在Th细胞信号转导机制中的作用
CD+4Th细胞经激活后分化为功能不同的Th1和Th2两个亚群效应细胞.Th1细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β等,介导细胞免疫应答、迟发性超敏反应和器官特异性自身免疫性疾病.Th2细胞则产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等细胞因子,介导体液免疫应答、过敏性和感染性疾病,在抗胞外病原感染、B细胞增殖分化以及哮喘的发生等方面起着十分重要的作用.
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抗白色念珠菌感染的免疫机制研究
白色念珠菌感染的严重程度与机体免疫系统密切相关.研究发现,白色念珠菌感染人体时,刺激机体产生固有免疫、细胞免疫和体液免疫应答.其中特异性细胞免疫占主导地位.了解认识白色念珠菌感染的免疫应答对诊断、治疗及预防白色念珠菌感染具有重要意义.
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CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导体液免疫应答的作用
目的 研究CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的体液免疫应答的作用.方法 重组RSV疫苗G1F/M2与CpG佐剂混合,鼻腔或腹腔注射免疫BALB/c小鼠3次,后一次免疫2周后取血,分离血清,用间接ELISA检测特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平.结果 鼻腔免疫途径:CpG佐剂组诱导的IgG1均显著低于无佐剂组(t=3.365,P<0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.675,P<0.05),佐剂组IgG1/IgG2a的比值(1.05)明显低于无佐剂组(1.25).腹腔免疫途径:CpG佐剂组的IgG1明显低于无佐剂组(t=6.869,P<0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.893,P<0.05),且前者IgG1/IgG2a的比值(0.97)明显低于后者(1.30).结论 CpG 2006作为G1 F/M2的佐剂,对体液免疫应答无增强作用,但可以调节免疫应答的类型,使Th1型应答升高,Th2型应答降低.
关键词: CpG 2006 佐剂 呼吸道合胞病毒(RSV) 重组蛋白疫苗 体液免疫应答 -
免疫学与儿科临床第五讲 B淋巴细胞功能测定的临床意义
B淋巴细胞(B细胞), 是机体体液免疫的主要细胞.这类细胞以表达和分泌免疫球蛋白为特征.从某种意义上讲, 机体的体液免疫应答过程就是B细胞针对特异抗原而活化、增殖和分化过程.计数B细胞及检测免疫球蛋白, 了解机体体液免疫状况, 对于探讨各种疾病的免疫发病机理及药物治疗效应均有重要的临床意义;检测B细胞发育不同阶段的表面标记, 了解B细胞发育和分化阶段的特性与疾病的关系, 可为临床提供诊治相关疾病的有用资料.
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接种不同种类百白破疫苗后出现硬结反应的预防措施
百日咳、白喉、破伤风混合疫苗简称百白破疫苗.该疫苗是世界卫生组织免疫规划中规定使用的疫苗之一,也是我国扩大国家免疫规划11种儿童常规疫苗之一.接种后使机体产生体液免疫应答,用于预防百日咳、白喉、破伤风三种疾病.我国儿童免疫程序要求:基础免疫自3月龄开始,接种3剂次,每剂次间隔≥28天,加强免疫在18 ~24月龄内完成.无细胞百白破疫苗系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加氢氧化铝佐剂制成,为乳白色悬液,放置后佐剂下沉,摇动后即成均匀悬液,含防腐剂.部分受种者会出现注射局部不易吸收,刺激结缔组织增生,形成硬结,局部肿胀,疼痛,重者可形成溃疡,给小儿造成很大痛苦,给家长带来很多困扰.为避免这些不良反应的发生,对我接种门诊2005-2010年的6年中接种吸附百白破和吸附无细胞百白破疫苗的儿童出现硬结反应进行分析,现报告如下.
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人巨细胞病毒DNA序列多态性及其意义
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属疱疹病毒科(herpesviridae)β亚科,是双链线状DNA病毒,基因组全长大约240kb,约含有200多个开放读码框架(open reading frame,ORF),由长独特序列(unique long,UL),短独特序列(unique short,US)两个片段组成,两片段均被一对方向倒置的重复序列夹在中间,分别为TRL、IRL、IRS、TRS.HCMV在人群中普遍感染,临床表现多种多样,可从终生无症状的潜伏感染到免疫功能低下患者的致死性间质性肺炎.在先天HCMV感染的新生儿中,可引起黄疸性肝炎、先天性巨结肠[1]、小头畸形等各种消化系统和神经系统畸形.导致人巨细胞病毒不同致病性的发病机制目前还不十分清楚,一方面与宿主免疫功能,即有效的细胞及体液免疫应答有关,另一方面,不同临床分离株的遗传变异导致DNA序列多态性,特别是与病毒毒力、组织细胞嗜性和病毒逃避机体免疫攻击能力密切相关的基因的差异,很可能是决定HCMV感染临床表现及预后的内在因素.因此,关于HCMV致病相关基因的多态性及其与发病机制的关系成为国际HCMV活跃的研究领域.
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CpG-ODN疫苗佐剂的研究进展
含胞嘧啶-鸟嘌呤( CpG )二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸链( CpG-ODN)是一种具有巨大开发潜力的佐剂,这是一类合成的、包含有1个或多个非甲基化的CpG基序的单链DNA。研究表明, CpG-ODN能够选择性地增强脊椎动物的细胞和/或体液免疫应答,有效提升多种疫苗的免疫效果[1]。它能直接活化树突状细胞、巨噬细胞和B细胞,增强抗原提呈能力,促进抗体的分泌;间接活化T细胞和NK细胞等免疫效应细胞,增强其功能及细胞因子的分泌,诱导Th1型免疫应答,产生细胞及体液免疫,因此, CpG-ODN是一种理想的疫苗佐剂。目前国外研究CpG-ODN作为感染性疾病和肿瘤疫苗佐剂已进入Ⅰ/Ⅱ期临床试验阶段[2,3],并已证实CpG-ODN是一种高效低毒的新型免疫佐剂。
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滤泡辅助性T细胞与自身免疫性疾病
B细胞产生经过了类别转换的高亲和力抗体对于人体的抗感染免疫和建立长期的体液免疫应答至关重要.但是辅助性T细胞(Th)辅助B细胞产生抗体的具体机制却一直悬而未决,"辅助性T细胞"的本质迄今尚未阐明.由于Th2细胞产生IL-4等细胞因子可诱导B细胞活化、增殖、抗体产生和Ig的类别转换,所以一度被认为是辅助B细胞的主要T细胞亚群[1].2000年,Schaerli等[2]报道了一种定位于淋巴滤泡、具有辅助B细胞功能的T细胞亚群,称为滤泡辅助性T细胞(Follicular helper T cell,Tfh).
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B细胞BCR CDR3受体库的高通量测序分析概况
B细胞是介导机体体液免疫应答的主要细胞群,其识别、结合抗原主要依赖互补决定区(CDR),它决定着抗体的特异性,而互补决定区3(CDR3)比CDR1、CDR2更具多样性[1],通过观察机体B细胞BCR CDR3受体库的多样性、重叠率的大小、CDR3区的基因/氨基酸组成特征、各亚家族的偏向取用等,可以观察生理及病理状态下机体免疫的相关情况.高通量测序能对一个物种的转录组和基因组进行全貌、细致的分析,目前在国外已开展并应用于B细胞BCR CDR3受体库测序.
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Th17细胞--正逐步获得深入研究
1 Th17细胞的发现辅助性CD4+ T细胞对能否激发有效免疫及免疫反应的类型具有重要作用.在Th17之前,20世纪80年代末至90年代中后期陆续发现了包括Th1、Th2、Treg等CD4+T细胞亚群,在理论及实践中解释了许多免疫反应原理[1,2].Th1细胞分泌IFN-γ、IL-12等细胞因子,抗胞内感染、肿瘤,同时也与许多器官特异性自身免疫病发病有关;Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子,促进体液免疫应答、抗寄生虫感染等,同时也参与了哮喘及一些过敏性疾病发病过程;Treg细胞抑制过度的免疫反应,对自身免疫具有保护作用,在维护机体免疫平衡中发挥了重要作用.Th1、Th2、Treg细胞分化分别依赖转录因子T-bet、GATA-3、Forkhead 家族蛋白3(Forkhead box protein 3,Foxp3)[3,4].
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T细胞免疫BALB/c小鼠诱导调节性体液免疫应答的研究
目的:研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性体液免疫应答.方法:用经γ射线照射的体外扩增的活化OVA特异T细胞克隆免疫BALB/c小鼠,FACS法分析血清中抗T细胞抗体水平,免疫共沉淀法分析靶抗原.结果:T细胞免疫能诱导BALB/c小鼠产生抑制T细胞增殖的抗T细胞抗体,这种抗体不是多克隆活化的结果,其靶抗原可能是T细胞上93、87、55和45 kD的蛋白.结论:T细胞免疫能诱导正常小鼠产生调节性体液免疫应答.
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乳腺癌病人抗HER2/neu阳性血清的筛选
HER2/neu是一种原癌原因,编码的p185跨膜糖蛋白具有受体酪氨酸激海性.HER2/neu基因的扩增和/或p185蛋白的过度表达可见于20%~40的乳腺癌病人[1].抗HER2/neu胞外区的抗体可抑制肿瘤细胞的生长,而用于临床乳腺癌的治疗[2,3].本文旨在探索乳腺癌病人体内对HER2/neu蛋白的体液免疫应答,分析其对细胞增殖的影响.
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基因疫苗pcDNA-AChRα211免疫小鼠建立重症肌无力动物模型
目的:用基因疫苗pcDNA-AChRα211免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG).方法:将人乙酰胆碱受体α亚基N 端的主要免疫区(AChRα211)的基因片段插入到穿梭载体pcDNA3.0中,构建基因疫苗pcDNA-AChRα211.大量提纯质粒pcDNA-AChRα211后肌肉注射C57BL/6小鼠. 用ELISA法检测小鼠血清中抗AChRα211的IgG(AChRAb), 并用PCR方法检测外源基因在小鼠各组织器官中的分布情况.结果:双酶切鉴定和序列测定表明构建了含正确目的基因阅读框的重组质粒pcDNA-AChRα211, ELISA分析表明该基因疫苗免疫的C57BL/6小鼠血清中含有AChRAb, 且免疫三个月后在小鼠的肌肉、肝、脾、肾中仍可检测到目的基因AChRα211的存在.结论:重组质粒pcDNA-AChRα211作为基因疫苗能够诱导实验性自身免疫性重症肌无力.