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siRNA敲减整合素连接激酶影响人阴茎海绵体平滑肌细胞功能的体外研究
目的 探讨整合素连接激酶( ILK)基因对人海绵体平滑肌细胞收缩和舒张功能的影响.方法 人海绵体平滑肌细胞为实验对象,分为非沉默组、非处理对照组和ILK小干扰RNA(siRNA)实验组,采用siRNA干扰技术下调细胞中ILK的表达,伸展实验和基质胶黏附实验分别检测ILK基因敲减前后海绵体平滑肌细胞伸展和黏附能力变化,Transwell小室观察ILK表达对海绵体平滑肌细胞迁移能力的影响,荧光标记的鬼笔环肽染色海绵体平滑肌细胞观察ILK基因敲减前后细胞 骨架的变化.结果 黏附实验中,非沉默siRNA组、非处理对照组和实验组siRNA干扰的平滑肌细胞吸光度(A)值分别为0.184±0.034、0.179±0.028和0.092±0.010;迁移实验中,3组穿过Matrigel胶包被的Transwell小室的平滑肌细胞A值分别为0.184±0.017、0.188 ±0.013和0.106±0.003,实验组与非沉默siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.05);非处理对照组平滑肌细胞应力纤维错综分布于细胞周边与胞质内,而实验组的细胞应力纤维仅分布于细胞边缘.结论 ILK下调降低人海绵体平滑肌细胞的黏附、伸展、迁移能力,并通过影响细胞骨架重构参与调节平滑肌收缩与舒张状态,提示ILK基因有可能成为勃起功能障碍基因治疗的有效靶点.
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RNA干扰对转染Livin基因的膀胱癌细胞凋亡诱导的影响
我们采用RNA干扰(RNAi)技术阻抑Livin基因表达[1],观察其对丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡的影响.材料与方法选用人膀胱癌T24细胞株;siRNA由上海吉玛公司合成,正义链:5′-GGGACCACGUGGAUGGGC-AdTdT-3′,反义链:5′-UGCCCAUCCACGUGGUCCCdAdG-3′.
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G9a特异性siRNA表达载体的构建及在QBC939细胞中对G9a基因表达的影响
目的 构建特异性组蛋白甲基转移酶Gga基因的siRNA表达载体并检测QBC939细胞对G9a表达的抑制作用.方法 设计、合成Gga特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencer neoTM 2.1-U6载体中,构建Gga特异性siRNA的表达载体,EcoR I+BamH I和EcoR I+Hind Ⅲ双酶切及测序鉴定重组体,并转染QBC939细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量RT.PCR方法和Western印迹法检测Gga mRNA和蛋白的表达水平.结果 双酶切与测序鉴定证实成功构建了G9a.siRNA表达载体,转染人胆管癌细胞株QBC939后,在mRNA和蛋白表达水平对G9a的抑制率分别为55.2%和54.8%.结论 运用pSilencer neoTa 2.1-126载体构建的G9a.siRNA表达载体可有效抑制Gga在胆管癌细胞株QBC939中的表达.
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A20的基因表达在肝癌细胞对TRAIL耐受中的作用研究
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体( tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)以其高选择性的诱导癌肿细胞凋亡并且规避对正常细胞的杀伤作用引起了广泛关注,但几乎所有的肝癌细胞系均对TRAIL表现出不同程度的耐药性[1].我们在前期实验中发现肿瘤坏死因子阿尔法诱导蛋白3(tumor necrosis factorαinducing protein 3,A20)泛素化受体相互作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)可能是造成肝癌细胞对TRAIL耐受的机制之一[2].我们用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默A20联合TRAIL处理肝癌细胞系HepG2和Hep3B,探讨TRAIL诱导肝癌细胞的凋亡能力及其泛素化调节RIP的机制.
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siRNA干扰EV71病毒VP1基因抑制细胞凋亡的实验研究
目的 探讨VP1基因小干扰RNA(siRNA)对肠道病毒71型(EV71)诱导细胞凋亡的影响.方法 设计、合成靶向EV71病毒VP1基因的siRNA,验证干扰效果;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)干扰后接种EV71病毒,通过细胞存活率测定、病毒滴度检测验证沉默VP1基因对病毒感染的抑制作用;Vero细胞干扰后接种EV71病毒,通过流式细胞术检测细胞周期改变及细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,验证细胞凋亡的改变;通过蛋白印迹检测凋亡蛋白,探讨引起凋亡改变的相关通路.结果 合成的siRNA干扰效率为73.3％,干扰并接种EV71病毒后,细胞存活率从38.6％增高至76.1％、上清病毒滴度从6.1降低至3.2;VP1干扰组细胞Sub-G1期阻滞从(31.8±4.0)％减轻为(16.9±2.2)％,早期凋亡细胞数从43.01％降低为16.00％,AKT、p38蛋白上调减弱.结论 运用siRNA干扰EV71病毒VP1基因表达可通过AKT及p38信号通路抑制细胞凋亡进而抑制病毒感染.
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RNA干扰对卵巢癌细胞OVCAR-3 VEGF表达的抑制作用
目的 探讨siRNA介导的RNA干扰技术在卵巢癌基因治疗的可行性和特异性.方法 选用阳离子脂质体作为转染试剂,将针对人VEGF基因的小干扰RNA重组质粒转染人类卵巢癌细胞株OVCAR-3,在体外诱导RNAi.通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),ELASA,Western blotting等检测siRNA治疗组和对照组VEGF基因表达的变化.结果 体外实验结果+显示靶向VEGF基因siRNA使卵巢癌OVCAR-3细胞VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05). 结论 siRNA介导的RNA干扰在体外能成功下调靶基因VEGF的表达,抑制OVCAR-3细胞增殖,具有潜在的肿瘤基因治疗的功能.
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靶向ERRαsiRNA对不同类型子宫内膜癌细胞凋亡的影响
目的 探究siRNA作用于不同类型子宫内膜癌细胞雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-relatedreceptor α,ERRα)的表达及细胞的凋亡情况.方法 siRNA处理RL952、AN3-CA、HEC-1A和HEC-1B细胞,以RL952、AN3-CA为Ⅰ型子宫内膜癌体外模型,HEC-1A、HEC-1B为Ⅱ型子宫内膜癌体外模型;采用荧光定量PCR法检测ERRα mRNA的表达,Western blot法检测ERRα蛋白的表达,流式细胞仪分别检测siRNA干扰后4株子宫内膜癌细胞的凋亡情况.结果 siRNA组较对照组ERRαmRNA表达水平显著下降(RL952:0.701 ±0.017 vs.1.165±0.019;AN3-CA:0.899±0.019 vs.1.362±0.007;HEC-1A:0.093±0.004 vs.0541±0.038;HEC-1B:0.158±0.004 vs.0.356±0.001;P均＜0.05).各株细胞siRNA组与对照组ERRαmRNA的表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ERRα mRNA表达分别减少了39.77％、34.01％、82.82％和55.78％.Western blot结果显示,4株细胞RNA干扰后ERRα蛋白表达与mRNA表达趋势一致.4株细胞凋亡率:RL952为(30.000±1056)％vs.(10572±1.027)％;AN3-CA为(32.931±1.613)％vs.(10.274±0.882)％;HEC-1A为(17272±0.950)％vs.(8.704±0.608)％;HEC-1B为(18.703±1.877)％vs.(3.801±0.265)％,siRNA干扰4株细胞后凋亡率与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA能够有效抑制子宫内膜癌中ERRα的表达,ERRα低表达可能与子宫内膜癌细胞的凋亡增加密切相关.
关键词： 雌激素受体相关受体α siRNA 凋亡 子宫内膜癌细胞 -
Rab25 siRNA抑制人卵巢癌细胞粘附侵袭的实验研究
目的 通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25 基因沉默对卵巢癌A2780细胞的生物学效应,探讨Rab25基因沉默对卵巢癌侵袭及转移能力的影响.方法 根据基因库上的Rab25mRNA序列,构建针对Rab25的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达,利用粘附实验和transwell小室实验检测其对细胞的粘附力及侵袭能力的影响.结果 成功构建Rab25的siRNA重组质粒,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,并且与对照相比,Rab25 siRNA可显著影响卵巢癌细胞的侵袭粘附能力(P＜0.01).结论 成功构建Rab25 siRNA显著抑制肿瘤细胞的侵袭粘附能力,对Rab25的研究有望为卵巢癌的基因治疗开辟新途径.
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靶向MDR1基因的小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤多药耐药的抑制作用
化疗是治疗晚期卵巢上皮性癌(卵巢癌)的重要手段,但多药耐药的产生常使化疗不能达到理想的效果,而多药耐药基因--MDR1基因编码的P糖蛋白(P-gP)的过度表达是导致肿瘤细胞耐药的直接原因.已有研究表明,小分子干扰RNA(siRNA)可诱导序列特异性基因沉默[1].
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Survivin siRNA对肝癌种植瘤survivin基因表达及生长的影响
目的 观察Survivin siRNA对裸鼠肝癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响.方法 利用肝癌细胞株构建动物模型,将脂质体包裹的Survivin siRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内,以无关siRNA为对照组,观察动物及瘤体的变化,RT-PCR法检测瘤组织survivin mRNA水平,Western blot法检测瘤组织survivin蛋白表达情况.结果 Survivin siRNA注射组(SU-IV组)在注射后10d肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有显著性(P＜0.05).SU-IV组survivin mRNA及蛋白表达水平均低于对照组(P ＜0.001).结论 Survivin siRNA能抑制裸鼠肝癌种植瘤的生长,注射后瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达下调.
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Survivin siRNA纳米脂质体体内抗结肠癌活性研究
目的 观察Survivin siRNA纳米脂质体对裸鼠结肠癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响.方法 利用结肠癌细胞LOVO细胞株构建动物模型,将脂质体包裹的Survivin siRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内,以无关siRNA为对照组,观察动物及瘤体的变化,RT-PCR法检测瘤组织Survivin mRNA水平,Western blot法检测瘤组织survivin蛋白表达情况.结果 Survivin siRNA注射组(SU-Ⅳ组)在注射10剂后肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有显著性(P＜0.05).SU-Ⅳ组Survivin mRNA及蛋白表达水平低于对照组(P ＜0.O01).结论 Srvivin siRNA纳米脂质体能抑制裸鼠结肠癌种植瘤的生长,注射Survivin siRNA纳米脂质体后肿瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达下调.
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SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株生物学特性的影响及其机制研究
目的 探讨SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡及迁移的影响及其潜在的作用机制.方法 采用SOX9 siRNA转染EJ细胞,抑制SOX9基因的表达,并以非特异性siRNA转染EJ细胞为对照.采用Edu细胞荧光染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞增殖的影响,Hoechst 33342细胞染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞凋亡的影响,划痕愈合实验检测SOX9基因沉默对EJ细胞迁移的影响,蛋白质免疫印迹(Western Blot)实验检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白的表达水平.结果 对照组的SOX9 mRNA表达水平为(100.0±0.5)%,明显高于SOX9沉默组的(14.2±1.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).转染72 h后,对照组细胞在450 nm激发光下的OD值为(4.0±0.3),明显高于SOX9沉默组的(2.3±0.2),差异有统计学意义(P﹤0.01).Edu细胞荧光染色结果显示,转染48 h后,对照组的细胞相对增殖率为(100.0±2.3)%,明显高于SOX9沉默组的(42.2±3.2)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).Hoechst 33342免疫荧光染色结果表明,对照组的细胞凋亡率为(7.2±1.2)%,明显低于SOX9沉默组的(33.2±2.4)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).划痕愈合实验表明,对照组的相对划痕愈合比例为(100.0± 1.9)%,明显高于SOX9沉默组的(56.6±4.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).SOX9 siRNA转染EJ细胞1 h后,采用Western Blot检测PTEN、AKT及p-AKT蛋白的表达水平.结果显示,SOX9沉默组的PTEN蛋白表达水平高于对照组,p-AKT蛋白表达水平低于对照组.结论 沉默SOX9基因能够明显抑制膀胱癌EJ细胞株的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,PTEN/AKT信号通路的激活可能与之有关.
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IDO-siRNA对胃癌细胞株MGC803中IDO与IL-6水平的影响
目的：本实验以吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）为切入点，对比分析IDO-siRNA干扰前后胃癌细胞株MGC803中IDO及IL-6表达水平变化，研究IDO在胃癌及抑郁中发生、发展的作用，探讨胃癌促发抑郁的可能分子机制。方法采用siRNA干扰技术转染胃癌细胞株MGC803，免疫细胞化学法及RT-PCR法观察IDO蛋白及基因水平的变化，ELISA法检测转染siRNA前后胃癌细胞株上清液中IL-6表达水平，研究IDO对胃癌细胞株以及抑郁相关细胞因子的影响。结果胃癌细胞MGC803经转染IDO-siRNA后IDO的表达经免疫细胞化学及RT-PCR法的检测均明显下降（P﹤0.05）；转染IDO-siRNA 24 h后胃癌细胞MGC803的细胞上清液中IL-6的表达较未转染前明显降低，差异有统计学意义（P﹤0.01）。结论 IDO在胃癌细胞株MGC803中高表达；IDO-siRNA可抑制胃癌细胞株MGC803中IDO的表达；胃癌细胞株MGC803经IDO-siRNA干扰后分泌的细胞因子IL-6的表达减弱，表明IDO与IL-6的表达存在关联，IL-6可能在胃癌及抑郁的发生发展中起一定的作用。
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小分子干扰RNA抑制TNC基因的表达并逆转卵巢癌紫杉醇耐药
目的 研究小分子干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)对卵巢癌紫杉醇耐药细胞TNC基因表达的影响,探讨TNC基因在紫杉醇耐药中的功能.方法 用脂质体转染剂LipofectamineTM2000将针对TNC基因特异性合成的siRNA转染SKOV3/TAX30细胞,分别在转染后24、48、72 h收集细胞,检测各组细胞TNC mRNA和TNC蛋白的表达水平.siRNA转染SKOV3/TAX30细胞后,采用MTT法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50).Western Blot检测SKOV3/TAX30及SKOV3/TAX300两种耐药细胞Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D、E-cadherin蛋白的表达.结果 siRNA转染SKOV3/TAX30细胞24、48、72 h后,TNC mRNA和TNC蛋白表达水平均下降,SKOV3/TAX30细胞对紫杉醇药物的IC50下降.TNC表达升高的耐药细胞中,Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调.结论 针对TNC基因特异性合成的siRNA可激发RNAi介导的TNC沉默,并且逆转了紫杉醇化疗耐药,TNC表达上调与紫杉醇耐药相关,TNC可能通过Wnt信号通路的激活参与了化疗耐药.
关键词： siRNA 卵巢癌 耐药 Tenascin-C -
RNA干涉在肿瘤研究中的应用进展
RNA 干涉(RNA interference,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA(d ouble-stranded RNA,dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制,近来研究发现,21～25nt大小的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)可在哺乳动物细胞中介导高度序列特异性的基因沉默,并且具有高效性和序列特异性,已经成为功能基因组研究的有力工具,并且有可能在某些疾病如肿瘤等的基因治疗中发挥重要作用.
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非小细胞肺癌患者血清MMP-9表达及siRNA靶向抑制A549细胞侵袭与转移的研究
目的:探讨非小细胞肺癌患者血清中MMP-9表达与肿瘤转移的关系；MMP-9 siRNA对肺腺癌细胞系A549中MMP-9表达及细胞侵袭与转移抑制作用的影响.方法:ELISA法检测32例非小细胞肺癌(NSCLC)患者及20名健康者空腹血清MMP-9浓度,同时设计合成针对MMP-9的特异性siRNA,采用oligofectamine转染A549细胞,RT-PCR法检测转染细胞后MMP-9 mRNA的表达,Transwell实验检测细胞侵袭情况.结果:NSCLC患者血清中MMP-9浓度[(63.44±7.84) ng/mL]比正常对照组[(21.57±3.29)ng/mL]明显升高(P＜0.01),且浓度随病理分期增加而增强[Ⅰ/Ⅱ:(45.40±5.30)ng/mL,Ⅲ/Ⅳ:(89.80±5.02)ng/mL,P＜0.01],发生淋巴结转移的患者血清MMP-9浓度[(82.26±5.09) ng/mL]明显高于未发生淋巴结转移[(35.92±4.68)ng/mL]的患者P＜0.01；RT-PCR法显示,转染MMP-9 siRNA后,细胞中MMP-9 mRNA表达较阴性对照组和空白组明显降低,P＜0.05.RNA干扰MMP-9基因后A549细胞的侵袭能力也有明显下降,P＜0.01.结论:MMP-9可作为NSCLC患者有无发生浸润转移的良好预测指标,靶向MMP-9的siRNA不仅能特异性的降低MMP-9 mRNA及蛋白的表达,且能抑制人A549细胞的侵袭和迁移.
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CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA)纳米粒递送HIF-1α siRNA联合顺铂对鼻咽癌裸鼠移植瘤影响研究
目的 乏氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)增强抗肿瘤药物敏感性研究在国内外已有诸多报道.本研究拟探讨纳米聚合物壳聚糖-聚乙二醇1 000维生素E琥珀酸酯-聚乙内酯-聚乙醇酸[d-α-tocopheryl polyethylene glycol 1 000 succinate-b-poly(ε-caprolactone-ran-glycolide),CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA),简称CNP]包载HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合顺铂(cisplatin,DPP)对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 皮下接种CNE-2细胞建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,应用随机数字表法分磷酸盐缓冲液组(Control)、单纯纳米粒组(CNP,200 μg/kg)、单纯顺铂组(DPP,100 μg/kg)、单纯纳米粒联合顺铂组(CNP 200 μg/kg+DPP 100 μg/kg)、载HIF-1α siRNA纳米粒组(CNP-siRNA,200 μg/kg)和载HIF-1α siRNA纳米粒联合顺铂组(CNP-siRNA 200μg/kg+DPP 100μg/kg)6组.每组5只,腹腔注射3d1次,共7次.干预过程中3d测量1次肿瘤体积,治疗22d后拉颈处死裸鼠,称取瘤质量,计算抑瘤率;利用蛋白质印迹与RT-PCR检测移植瘤中HIF-1α和多重耐药基因-1/P糖蛋白(multidurg resistance gene 1/P-glycoprotein,MDR-1/P-gp)基因蛋白表达水平,HE染色观察各组肿瘤组织病理形态改变.结果 与Control组相比,CNP组抑瘤率为18.32％,DPP组为37.59％,CNP-siRNA组为43.32％,CNP+ DPP组为47.64％,CNP-siRNA+ DPP组为70.21％.其中CNP-siRNA+DPP组抑瘤效果为显著,与其他治疗组相比,差异有统计学意义,F=253.511,P＜0.001.在HIF-1α mRNA表达上,与Control组相比,CNP组mRNA表达量为0.89±0.04,DPP组为0.99±0.02,CNP-siRNA组为0.95±0.02,CNP+ DPP组为0.35±0.04,CNP-siRNA+DPP组为0.15±0.07.CNP-siRNA+ DPP组mRNA抑制效果为显著,与其他组相比,差异有统计学意义,F=351.194,P＜0.001.蛋白质印迹结果亦显示,CNP-siRNA+ DPP组中HIF-1α蛋白条带宽度明显低于其余各实验组,MDR-1/P-gp表达水平表现出与HIF-1α基因蛋白表达相似的实验结果.HE结果表明,CNP-siRNA+ DPP组能够显著促进肿瘤细胞坏死及凋亡.结论利用CNP纳米聚合物递送HIF-1α siRNA联合DDP能够有效下调肿瘤细胞HIF-1α及MDR 1/P-gp基因蛋白表达,抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞坏死凋亡.新型纳米聚合物CNP作为递送siRNA的有效载体,在肿瘤基因靶向治疗中具有较高的应用前景.
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RNA干扰对白血病细胞增殖与凋亡机制的探讨
目的 尾侧同源盒基因(caudal tupe homeobox gene 2,CDX2)是早期胚胎生长发育过程中重要的调节因子,近年来有研究证实CDX2基因在造血细胞增殖分化过程中亦发挥重要作用.本研究采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默白血病K562细胞中CDX2的表达,探讨该基因沉默前后对白血病细胞增殖和凋亡的影响,为白血病的临床治疗提供理论依据.方法 设计合成针对目的基因CDX2不同编码区的3个小干扰RNA序列(CDX2-siRNA-1443,CDX2-siRNA-2009,CDX2-siRNA-921)及阴性对照序列(CDX2-siRNA-NC),将各组siRNA分别转染K562细胞,同时设未转染K562细胞组作为对照,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测CDX2 mRNA和蛋白的表达量变化,筛选对目的基因CDX2沉默效率高的siRNA序列,用于下一步实验.MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测转染前后细胞增殖和凋亡变化.结果 RT-PCR结果显示,与未转染K562细胞组相比,3组CDX2-siRNA均能有效沉默K562细胞内CDX2 mRNA表达,其中CDX2-siRNA-921对CDX2 mRNA沉默效率高(66.2％),差别有统计学意义,P＜0.05.蛋白质印迹法结果显示,CDX2-siRNA-921组CDX2蛋白相对表达量与未转染K562细胞组相比降低明显(68.0％,P＜0.01),该结果与RT-PCR结果相符.MTT法显示,转染CDX2-siRNA-921组细胞存活率明显低于未转染K562细胞组,而转染CDX2-siRNA-NC组细胞存活率无明显变化,提示转染CDX2-siRNA-921能够明显抑制细胞增殖.流式细胞术结果显示,与CDX2-siRNA-NC组和正常细胞组相比,转染CDX2-siRNA-921组细胞凋亡率显著增加.结论 CDX2 siRNA能够有效抑制白血病细胞K562中CDX2的表达,使细胞增殖减弱、凋亡增加,有望为白血病临床治疗提供新的基因靶点和治疗方法.
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siRNA干扰XIAP基因对卵巢癌SKOV-3细胞生物学功能影响的研究
目的:采用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV-3细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的表达,观察其对卵巢癌细胞增殖能力和凋亡的影响.方法:将XIAP siRNA转染SKOV-3细胞,MTT检测细胞增殖抑制情况,Annexin-V检测细胞凋亡率的变化,FCM法检测细胞周期变化.结果:XIAP siRNA转染后能明显抑制XIAP蛋白的表达,与其他组相比差异有统计学意义,F=63.782,P<0.05;特异性干涉组细胞的增殖能力明显低于空白对照组及非特异性干涉组,F=53.412,P<0.05;XIAP-siRNA转染组的细胞凋亡率为((31.54±0.62)%],与非特异性干涉组[(5.34±0.38)%]和空白对照组[(6.73±0.46)%]相比,差异有统计学意义,F=102.32,P<0.01.SKOV-3细胞明显阻滞在G0/G1期,与其他组相比,差异有统计学意义,P<0.01.结论:干扰XIAP基因可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,诱导其凋亡.
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Bcl-2siRNA对胃癌细胞凋亡及其紫杉醇敏感性影响研究
目的:研究特异性siRNA对胃癌细胞的抑制作用,以及探讨采用RNA干扰技术下调Bcl-2基因能否增强SGC-7901胃癌细胞对紫杉醇的敏感性.方法:通过脂质体HiperFect将Bcl-2 siRNA转染入胃癌细胞SGC-7901;采用RT-PCR和蛋白印迹法检测Bcl-2 siRNA转染前后胃癌细胞Bcl-2基因表达的变化;用Annexin Ⅴ法及细胞周期分析法检测细胞凋亡;用MTS法观察细胞对药物紫杉醇敏感性的影响.结果:Bcl-2 siRNA组较空白对照组明显抑制Bcl-2mRNA的表达水平,抑制率为(87.6±5.3)％,P=0.001;Bcl-2 siRNA组较空白对照组明显下调Bcl-2蛋白表达水平,抑制率为(85.7±3.6)％,P=0.003.Bcl-2 siRNA组、紫杉醇组和紫杉醇+Bcl-2 siRNA细胞总凋亡率分别为49.00％、46.10％和66.00％,联合用药组细胞凋亡率强.Bcl-2 siRNA+紫杉醇联合用药对SGC-7901细胞周期分析结果显示,联合用药组凋亡率为48.00％,Bcl-2 siRNA组和紫杉醇组分别为9.03％和21.50％.Bcl-2 siRNA组、阴性对照组和空白对照组的IC50分别(7.25士0.22)、(54.45±0.82)和(68.9±0.91)μg/L,Bcl-2 siRNA转染胃癌细胞SGC-7901对药物紫杉醇更敏感,其IC50值比阴性siRNA转染组降低86.7％,即对紫杉醇敏感性增加7.25倍.结论:靶向Bcl-2 siRNA可明显下调靶基因Bcl-2表达,促进SGC-7901细胞凋亡并能提高细胞对紫杉醇敏感性,为胃癌治疗提供新的策略.
