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E1A激活基因阻遏子基因过表达改善小鼠心肌梗死后心脏功能
目的:E1A激活基因阻遏子(CREG)是近确定的分泌型糖蛋白,在分化成熟的组织和血管中广泛表达,而在未分化组织细胞如胚胎干细胞(ESC)和畸胎瘤细胞中呈低表达。我们的系列研究发现,CREG可促进损伤血管内皮细胞的快速修复、维持血管平滑肌细胞分化稳态及存活,并抑制间充质干细胞在缺氧和低糖状态下的凋亡。还观察到,腺病毒介导的CREG基因转染以及外源重组CREG蛋白干预均可增强ESC向心肌细胞分化,提示CREG对心脏发生具有促进作用。本研究中,我们观察了过表达CREG的ESC移植对治疗小鼠心肌梗死后心脏功能的影响。
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肝细胞生长因子基因转染后对内皮祖细胞增殖、迁移、分泌一氧化氮及血管再生的影响
目的:本研究拟用肝细胞生长因子(HGF)基因修饰内皮祖细胞(EPCs),以观察其对EPCs增殖、迁移、分泌一氧化氮(NO)及生血管能力的影响.方法:采用梯度离心法分离并培养大鼠骨髓EPCs,荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-Ⅰ)结合荧光双染法鉴定大鼠EPCs.细胞分为HGF转染组、阴性对照组及空白对照组,HGF组用脂质体介导法导入pIRES2-EGFP-HGF质粒,阴性对照组导入pIRES2-EGFP质粒,空白对照组不导入质粒,然后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的合成及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测细胞HGF mRNA的表达来鉴定转染的EPCs.用四唑盐(MTT)法、改良的Bodyen小室及硝酸盐还原法观察细胞增殖、移行及分泌NO能力;体外成管试验用于分析细胞生血管的能力.结果:原代细胞培养4天后发现可成梭形贴壁细胞,7天后细胞成集落状,原代细胞培养21天左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列,细胞DiI-LDL摄取试验阳性,FITC-UEA-Ⅰ染色阳性.转染18h后HGF转染组及阴性对照组细胞绿色荧光蛋白检测呈阳性,转染率为40%,而空白组则呈阴性.RT-PCR结果显示,HGF转染组细胞内mRNA的表达显著高于对照组,而空白对照及阴性对照组HGF mRNA表达无显著性差异.HGF转染组细胞增殖、移行能力及分泌NO量均显著高于对照组.在ECMatrix培养基上培养12h,HGF转染组体外成管评分显著高于对照组.结论:HGF基因修饰能够显著提高EPCs增殖、移行、分泌NO及生血管能力,改善EPCs的生物学功能.
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腺病毒介导p27基因转染对离体血管平滑肌细胞增殖的影响
关键词: 腺病毒 基因转染 离体 血管平滑肌细胞增殖 Adenovirus Vector -
血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染表达促进血管平滑肌细胞凋亡
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基因疗法在肺动脉高压治疗中的研究进展
基因治疗肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)指选择合适载体,通过可行转移途径将目的基因转染到患者肺内,转录表达血管活性产物,达到治疗PH的目的.现将目前此方面研究综述如下.
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抗氧化酶基因转染治疗心血管疾病的研究进展
氧化应激损伤是多种心血管疾病的主要发病机制,运用抗氧化剂或氧自由基清除剂的抗氧化应激作用能够预防和治疗多种心血管疾病.随着基因技术的发展,理论上通过抗氧化剂基因转染高表达抗氧化剂产物来清除氧自由基可能会取得更优越的效果,且这种方法已在多种动物模型中实验成功.我们主要就抗氧化剂基因转染在防治心血管疾病方面的研究进展作一综述.
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基因转染β肾上腺素能受体激酶抑制剂对支气管哮喘小鼠β2肾上腺素能受体和环腺苷酸的影响
目的研究基因转染β肾上腺素能受体激酶抑制剂(βARKct)对应用β2肾上腺素能受体(β2AR)激动剂后支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺部β2AR和环腺苷酸(cAMP)的作用,并探讨不同基因转染途径对两者的影响.方法 (1)以10%卵清蛋白致敏并激发BALB/c小鼠建立哮喘模型,并设正常小鼠为正常对照组(A组).将哮喘小鼠分为7组,每组5只,分别给予生理盐水(哮喘对照组,B组)肌肉注射、沙丁胺醇肌肉注射(C、D、E、F、G组),以建立长期应用β2AR激动剂的哮喘动物模型.(2)构建带有βARKct基因表达质粒,通过小鼠尾静脉注射和气管内滴入的转染途径进行基因转染.D组给予静脉注射转染βARKct、E组给予静脉注射转染空载质粒、F组给予气管滴注转染βARKct、G组给予气管滴注转染空载质粒. (3)用Western-blot检测基因的表达.放射免疫法检测小鼠肺部的β2AR和cAMP的水平.结果 (1)基因转染βARKct在小鼠肺部有表达,且F组的基因表达量高于D组.(2)A组β2AR和cAMP分别为(109±11)fmol/mg、 (3.50±0.50) pmol/L;B组β2AR和cAMP分别为(81±3)fmol/mg、(1.50±0.20)pmol/L,与A组比较差异有显著性(P均<0.05);C组β2AR和cAMP分别为(63±3)fmol/mg、(0.90±0.10)pmol/L,与A组比较差异有显著性(P均<0.01).(3)基因转染βARKct后D组β2AR和cAMP分别为(86±11)fmol/mg、(2.01±0.10)pmol/L,与C组比较差异有显著性(P均<0.05);F组β2AR和cAMP分别为 (107±13)fmol/mg、(3.30±0.20)pmol/L,与C组比较差异有显著性(P均<0.05);F组β2AR和cAMP与D组比较(P均<0.05);E组β2AR和cAMP分别为(70±11)fmol/mg、(1.30±0.10)pmol/L,G组β2AR和cAMP分别为(67±4)fmol/mg、(1.30±0.40)pmol/L,E、G组与C组比较差异无显著性(P均>0.05).结论 B组小鼠和应用β2AR激动剂的C组小鼠β2AR和cAMP均有下降,但后者下降更为显著.基因转染βARKct可抑制使用β2AR激动剂后哮喘小鼠肺部β2AR和cAMP的下降,转染途径的不同可影响其抑制作用.基因转染βARKct为研究哮喘病的治疗提出了一条新的途径.
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脂质体介导干扰素γ基因转染及其抗成纤维细胞增殖作用
干扰素γ(IFN-γ)不仅作为强有力的免疫调节剂被广泛地用于肿瘤、病毒性肝炎、类风湿关节炎等疾病的治疗,且在治疗特发性肺纤维化(IPF)的初步研究中也显示了一定的潜在价值.
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腺病毒介导谷胱甘肽过氧化物酶基因转染对血管内皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响
COPD的发病机制尚未完全清楚.过去30余年,COPD被认为是由于吸烟、环境污染、细菌产物等引起肺部炎症反应,造成蛋白酶和抗蛋白酶系统失衡,终导致肺泡破坏引起肺气肿[1].
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腺病毒介导p27基因转染对离体血管平滑肌细胞增殖的影响
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BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞表型转化的影响
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BTEB2反义基因转染对大鼠颈动脉球囊损伤后内皮修复的影响
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腺病毒介导eNOS基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响
本研究利用基因重组技术构建携带人eNOS基因的复制缺陷腺病毒,转染培养的血管平滑肌细胞(VSMCs),探讨其对VSMCs增殖、迁移和凋亡的影响.
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腺病毒介导TIMP-4基因转染对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响
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BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制
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腺病毒介导TIMP-4基因转染对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响
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壳聚糖涂层支架携带人ICE基因转染犬冠状动脉的可行性研究
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重组诱导型一氧化氮合酶在V79细胞中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨成纤维细胞基因转染后产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入V79成纤维细胞中,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量.将含有一氧化氮的细胞转染上清液加到培养的血管平滑肌细胞中,观察对平滑肌细胞生长状态的影响,用流式细胞仪分析细胞周期的变化.
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重组人诱导型一氧化氮合酶转染平滑肌细胞及对其增殖的影响
目的探讨血管平滑肌细胞基因转染后对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量;观察对平滑肌细胞生长状态的影响,用流式细胞仪分析细胞周期的变化.
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磁探针标记人内皮型一氧化氮合酶基因修饰的内皮祖细胞及其体外磁共振成像实验研究
目的 人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因体外修饰兔外周血来源的内皮祖细胞(EPC)后,应用纳米磁探针三氧化二铁(Fe2O3)-精氨酸(arginine)复合物体外标记基因修饰的EPC,磁共振(MR)进行标记细胞成像.方法 制备Fe2O3-arginine复合物.分离兔外周血单个核细胞,贴壁法筛选出EPC,传代培养,用脂质体LipofectamineTM2000体外转染heNOS基因至EPC,转染后48 h对基因修饰EPC进行磁探针标记,普鲁士蓝染色显示细胞内铁,Western blot检测heNOS基因表达情况,四氮噻唑蓝(MTT)比色试验评价磁探针标记基因修饰EPC后对细胞生长状况的影响,流式细胞分析检测标记、未标记细胞的凋亡,应用磁共振的T1WI、T2WI、T2*WI3个序列进行细胞群成像.结果 普鲁士蓝染色可见铁颗粒位于细胞质内,标记率与标记的未修饰基因组EPC相似,都接近100%.MTT比色试验示Fe2O3-arginine标记后3、4、5天,标记的基因修饰细胞组、未修饰基因细胞组的吸光度值与未标记者比较,差异无统计学意义.流式细胞分析结果 显示Fe2O3-arginine标记后细胞凋亡与未标记细胞间差异无统计学意义.磁共振成像显示标记的基因修饰细胞群信号强度的变化与标记的未修饰基因细胞相似,两者之间差异无统计学意义,且两者均较未标记细胞群信号低,以T2*WI的信号强度变化率大,标记后7 d的信号强度变化率均较标记后1 d者下降.结论 使用脂质体可以成功地将外源heNOS基因转染进兔外周血EPC中并在某中有效表达,Fe2O3-arginine可以有效标记heNOS基因修饰的EPC,其对细胞的活力、增殖等生物学特性无明显影响.临床应用型1.5T MR可在体外进行标记细胞群成像,间接反映干细胞的数量和分裂增殖状态.