首页 > 文献资料
-
肾病综合征患儿补体调节蛋白CR1基因组密度多态分布的临床探讨
肾病综合征(NS)是儿科常见病,其发病除与机体细胞免疫紊乱有关外,亦与免疫复合物(IC)激活补体产生膜攻击复合物,造成细胞溶解,促进细胞因子释放,从而介导肾脏损伤有关.近发现体内补体激活受补体调节蛋白的调控.为此我们检测了22例NS患儿补体调节蛋白CR1基因组密度多态分布,以探讨其临床意义.
-
阿托伐他汀对高脂血症患者白细胞补体调节蛋白表达的影响
目的观察阿托伐他汀对高脂血症患者白细胞补体调节蛋白表达的影响.方法高脂血症患者25例采用阿托伐他汀治疗8～12 w,应用流式细胞仪测定治疗前后外周血白细胞补体调节蛋白CD55、CD59的表达.结果高脂血症患者CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度低于对照组[(2.03±0.30) vs(2.27±0.42),P＜0.05],白细胞CD59表达水平与对照组无显著差异;治疗8～12 w,CD59阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞平均荧光强度均显著升高[(4.34±1.14) vs(3.69±0.74),(4.51±1.33) vs(3.89±0.88),(5.65±1.68) vs(4.65±0.98);P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01],治疗前后白细胞CD55表达水平无明显变化.结论高脂血症患者淋巴细胞CD55表达水平较正常人降低,CD59与正常人无明显差别,阿托伐他汀治疗可上调CD59表达,但对CD55表达无明显影响.
-
microRNA-143阻遏乳腺癌细胞免疫抑制的作用及其机制
目的 探讨microRNA-143(miR-143)阻遏乳腺癌细胞免疫抑制的作用及其分子机制.方法 采用MTT法检测乳腺细胞HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT549补体依赖的细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity,CDC);在脂质体介导下,将miR-143、miR-143对照物(scramble)和miR-143抑制剂(inhibitor)分别转染MCF-7细胞,将miR-143 scramble和miR-143 inhibitor分别转染HBL-100细胞,采用MTT法检测CDC,RT-PCR法检测细胞中补体调节蛋白CD46基因mRNA的转录水平,Western blot法检测CD46蛋白的表达水平.结果 乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT-549的A570值与正常乳腺细胞HBL-100相比,均明显升高(P＜0.01);与miR-143 scramble转染的MCF-7细胞的A570值相比,miR-143转染组的A570值明显下降(P＜0.001),与miR-143 scramble转染的HBL-100细胞的A570值相比,miR-143 inhibitor转染的HBL-100细胞的A570值明显上升(P＜0.001);与HBL-100细胞相比,CD46蛋白在MCF-7、MDA-MB-231和BT-549细胞中表达均上调,且与抑制CDC的作用呈正相关;在HBL-100细胞中过表达miR-143 inhibitor能上调CD46蛋白的表达水平,而不影响CD46基因mRNA的转录水平;在MCF-7细胞中过表达miR-143能明显抑制CD46蛋白的表达水平.结论 CD46在乳腺癌细胞中的上调导致了癌细胞对CDC的抵抗作用,是产生免疫抑制的机制之一;miR-143通过抑制CD46蛋白的表达水平,使细胞对CDC的作用更为敏感,提高了补体系统对乳腺癌细胞的杀伤作用,降低了其免疫抑制能力.
-
肿瘤细胞对血清补体杀伤耐受的机制研究
目的:探讨肿瘤细胞耐受血清补体杀伤的分子机制.方法:将表达不同血型抗原的肿瘤细胞与添加同血型血清的培养基孵育,获得耐受血清杀伤的肿瘤细胞.无血清悬浮培养肿瘤干细胞,对耐受血清杀伤的肿瘤细胞和肿瘤干细胞分别提取mRNA,进行反转录PCR,检测肿瘤干细胞干性标志物和补体调节蛋白的表达情况;干扰补体调节蛋白,检测肿瘤细胞对血清补体的杀伤情况.结果:对分别表达血型抗原A、B和H的HT-29、KATOⅢ、MCF7肿瘤细胞均获得耐受血清杀伤的耐受细胞,耐受细胞高表达三种膜性补体调节蛋白CD46、CD55和CD59,以及部分肿瘤干细胞干性标志物;spheroid悬浮球肿瘤干细胞高表达上述三种膜性补体调节蛋白,特别是CD46;在肿瘤细胞中腺病毒干扰Cd46的表达,可显著增强血清补体对肿瘤细胞的杀伤率.结论:补体调节蛋白CD46分子可通过增强肿瘤细胞的干性而介导肿瘤细胞对血清补体的杀伤耐受.
-
基于人DAF框架的酵母展示肽库的构建与鉴定
以hDAF cDNA为模板,用随机引物分别通过大引物PCR和交叠PCR方法引入突变,酶切后克隆到酵母表面展示载体pYD1,构建DAF-pYD1重组质粒,转化酵母细胞,PCR鉴定随机性,流式细胞仪分析DAF的表达.结果表明,随机性达到理论要求,通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有DAF分子的表达.以上结果表明,成功构建了基于DAF框架的酵母表面展示肽库,为进一步筛选DAF的突变体库奠定了基础.
-
它莫西芬对绒毛膜癌细胞株JAR补体调节蛋白表达的影响
为探索抗肿瘤药物Tamoxifen对绒毛膜癌细胞株JAR表面补体调节蛋白表达的影响,实验以绒毛膜癌细胞株JAR为研究对象,用流式细胞术和RT-PCR分别检测Tamoxifen作用前后JAR细胞补体调节蛋白在蛋白质和mRNA水平的表达.结果显示:在10-6M Tamoxifen作用3 d后,JAR细胞补体调节蛋白DAF和CD59的蛋白质表达水平明显降低,而MCP无明显改变;在10-6M Tamoxifen作用24 h后,JAR细胞DAF和CD59 mRNA表达水平分别降低88%和60%.提示Tamoxifen可能通过降低DAF和CD59的表达,提高肿瘤细胞对宿主补体攻击的敏感性.
-
变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中补体调节蛋白C1-INH和CD46的表达
目的:检测补体调节蛋白C1-INH和CD46在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中的表达水平,探讨其参与变应性鼻炎病理过程的可能机制.方法:9只SD大鼠以0.1%卵清蛋白辅以氢氧化铝佐剂进行基础致敏,继之鼻部激发建立大鼠变应性鼻炎模型(AR组),另9只以生理盐水代替0.1%卵清蛋白作为对照组(N组).取大鼠呼吸区鼻黏膜,采用Western印迹法检测组织中补体调节蛋白C1-INH和CD46的表达含量,进行对比.结果:Western印迹结果显示两组大鼠C1-INH 和CD46均阳性表达,而AR组大鼠鼻黏膜中C1-INH表达低于N组(P＜0.05),CD46表达则高于N组,差异显著(P＜0.01).结论:补体调节蛋白CD46和C1-INH可能参与了变应性鼻炎的病理过程,其调控作用可能与补体激活的经典途径有关.
-
CD59分子及其在转基因动物中功能表达
体内存在多种可溶性以及膜结合的补体调节蛋白(complement regular protein,CRP),它们以特定方式与不同的补体成份相互作用,使补体的激活与抑制处于精细的平衡状态.在生理条件下,抑制补体的激活可抑制对自身细胞的破坏,维护内皮的完整性.膜反应性溶解抑制物(membrane inhibitor of reactive lysis,MIRL或CD59)是体内一种重要的CRP.它可以阻碍C7、C8与C5b-6复合物结合,从而抑制膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)的形成[1～3].
-
转hMCP/hCD59双基因小鼠的构建、传代及功能测试
目的 比较转染两个补体调节蛋白(CRP)基因与转染单一CRP基因对异种细胞的保护作用.方法 采用双基因混合注射的方法,将人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)两种基因导入521枚KM小鼠的受精卵原核.结果 得到原代转hCD59基因小鼠14只,转hMCP基因小鼠12只,hCD59/hMCP双基因共整合的小鼠7只,转基因效率5%.通过5只G0代转双基因小鼠和非转基因小鼠的繁殖,得到F1转hMCP小鼠14只,转hCD59小鼠16只,转双基因小鼠10只,F1双基因占33.3%.用10%新鲜人血浆体外灌注小鼠离体心脏,转双基因组心脏搏动时间(138±25 min)明显长于单基因组(hCD59组78±27 min,hMCP组43±21 min)和非转基因对照组(20±12 min).结论 转染两个CRP基因比转染单一CRP基因对异种细胞有更好的保护作用.
-
再障和溶贫患者CD59抗原的表达及其意义
目的探讨补体调节蛋白(CRP)-CD59在再生障碍性贫血(AA)以及溶血性贫血患者外周血血细胞中的变化,并分析其在这两类疾病中的临床意义.方法用异硫氰酸酯(FITC)标记单抗CD59,应用流式细胞术分析21例再障患者、4例阵发性血红蛋白尿症(PNH)患者、5例非-PNH的溶血性贫血患者的红细胞和中性粒细胞膜CD59的表达情况.结果正常人红细胞和中性粒细胞中CD59+细胞的平均比例分别为98.5%和99.3%,非-PNH患者分别为99.9%和99.6%,而PNH患者分别为78.9%和77.4%.结论CD59对于PNH的诊断和鉴别诊断,特别是对症状不典型的PNH以及AA-PNH综合征的诊断具有重要意义.
-
血脂平冲剂对HLP大鼠补体调节蛋白CD55、CD59表达的影响
目的:揭示血脂平冲剂对实验性高脂血症大鼠CD55、CD59表达的影响.方法:将60只昆明种雄性SD大鼠随机分为六组:空白对照组、病理模型组、西药组、血脂平冲剂大剂量组、血脂平冲剂中剂量组、血脂平冲剂小剂量组.测定各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平.流式细胞仪测定各组大鼠白细胞CD55、CD59表达的变化.结果:血脂平冲剂组大鼠TC、TG、LDL-C水平明显低于模型组(P<0.05).白细胞CD55、CD59的表达明显上调,且具有明显的量效关系.结论:血脂平冲剂具有明显的降脂作用,其机制可能与其促进CD55、CD59的表达上调有关.
-
补体调节蛋白与IgA肾病
补体调节蛋白是一组以可溶性或膜结合形式存在于体内的活性蛋白质,它参与调解补体活化过程,包括补体调节蛋白CRl (CD35)、H因子、C4bp、S蛋白、膜辅助蛋白(MCP)、Crry、衰变加速因子(DAF),通过不同结合位点,影响了C3转化酶、C5转化酶及膜攻击复合物(MAC)的活性,IgAN是一种以免疫损伤机制为主的肾小球疾病,有证据显示补体参与其发生发展,而补体调节蛋白在IgA肾病的发生发展中的作用尚属罕见报道,探讨其在IgA肾病发生发展中的作用将对为揭示其发病机制提供新思维.
-
转人CRP基因在异种移植中的研究
目的研究转人补体调节蛋白（CRP）DAF、MCP和CD59基因对抑制人补体激活从而克服超急性排斥反应的作用。方法利用显微注射建立转人衰变加速因子（h DAF)小鼠和猪的模型和转染h MCP及h CD59真核表达质粒的猪内皮细胞（EC），研究小鼠和猪EC表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白（CRP）对异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果（1）转人DAF基因小鼠心脏用新鲜人血连续体外灌注，转基因组心脏搏动时间（174.6?min）比对照组（106.5?min）明显延长。(2) 转h DAF基因猪心脏异位移植给猕猴，移植心长存活90?h，受者死亡前移植心仍有功能，移植心病理检查未见超急性排斥反应病理改变。(3) 转DAF基因猪EC死亡率在不同浓度血清时均明显低于对照组。在转h DAF基因猪EC上再分别转染h MCP及h CD59真核表达质粒，转h DAF＋h MCP或h DAF＋h CD59在不同血清浓度时EC死亡率均较单纯h DAF组明显下降（P＜0.05）。结论转人DAF及MCP、CD59补体调节蛋白基因能克服人对异种器官或组织的超急性排斥反应。
-
异种移植血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠的建立
目的建立用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠.方法采用受精卵显微注射技术,将含有人ICAM-2启动子、人CD59基因第1个内含子、人CD59cDNA、BGH polyA终止信号的外源基因导入小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩.聚合酶链反应(PCR)及Southern blot确定外源基因整合阳性转基因小鼠.流式细胞术用于外源基因蛋白质水平表达检测.免疫组织化学方法观察人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官表达分布情况.结果产仔130只,9只外源基因整合阳性,整合率6%(9/130).6只获得蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人CD59在人白细胞表达强度的80%至95%,转基因效率5%(6/130).免疫组织化学检测显示人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏组织有较强表达,且表达限于血管内皮细胞.结论成功地建立了用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠.
-
补体调节蛋白及其在肾脏疾病中的应用
补体调节蛋白分为可溶性和膜结合蛋白两大类,它们在各种异常补体激活导致的肾脏损害中起重要作用.分子生物学技术的发展,使通过基因操作,有目的地改变补体调节蛋白的结构与功能成为可能,并在肾脏疾病,特别是肾小球疾病、肾移植排异反应等方面展示出良好的前景.
-
异种移植中转基因动物策略研究进展
近年来,在同种移植研究的基础上,异种移植的研究也进行了大量的工作,突出的成绩表现在异种移植免疫障碍阶段的划分和定义,即超急排斥反应、急性血管排斥(有时也称延迟排斥)、细胞排斥或慢性排斥、生理功能及其它.根据异种移植免疫学理论,利用转基因技术,建立转基因动物克服超急免疫排斥是异种移植研究的又一进步,显示转基因动物具有很大的发展前景,使异种移植走进临床成为可能.本文将就近年异种移植免疫学理论及根据其机制、利用转基因动物克服免疫排斥研究状况作一综述.
-
血脂平冲剂对HLP大鼠补体调节蛋白CD55、CD59表达的影响
目的:揭示血脂平冲剂对实验性高脂血症大鼠CD55、CD59表达的影响.方法:将60只昆明种雄性SD大鼠随机分为空白对照组、病理模型组、西约组、血脂平冲剂大剂量组、血脂平冲剂中剂量组、血脂平冲剂小剂量组.测定血脂平冲剂对SD大鼠总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的影响.测定血脂平冲剂对SD大鼠CD55、CD59表达的影响.结果:血脂平冲剂能显著降低SD大鼠TC、TG、LDL-C水平,能使CD55、CD59表达明显上调,且具有明显的量效关系.结论:血脂平冲剂可影响CD55、CD59的表达,有显著的降脂效果,干预动脉粥样硬化的发生.
-
MHBst167基因转染对肾小管上皮细胞膜结合型补体调节蛋白表达的影响
补体激活导致肾组织免疫损伤是肾脏疾病的重要发病机制,而肾脏固有细胞可表达一系列补体调节蛋白对其激活进行限制.肾脏是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要靶脏器之一,其中肾小管上皮细胞尤易被感染.病毒感染与宿主细胞应答间的关系极为复杂,HBV-DNA与宿主DNA整合的过程中可发生基因重排,编码HBx、LHBs和MHBs1等反式激活因子,进而活化多种转录因子和原癌基因启动子,参与感染后的炎性反应[1].
-
补体调节蛋白CD46、CD55及CD59在肿瘤免疫治疗中的研究进展
以往对肿瘤逃避补体攻击的免疫机制并不是非常清楚,因而对肿瘤的传统免疫治疗,尤其是体液免疫治疗,往往效果并不理想.随着免疫学的发展,经研究发现不同的肿瘤细胞表面往往高表达补体调节蛋白(CD46/MCP,CD55/DAF,CD59/potectin)中的一类或几类分子,由于补体调节蛋白的高表达,从而抑制机体的补体系统对肿瘤细胞的攻击,使肿瘤逃避机体免疫防御.近年来随着对补体调节蛋白在肿瘤中表达及机制的进一步研究,针对补体调节蛋白的单克隆抗体及细胞因子的免疫治疗开始应用于动物实验和临床实验,取得了一定成功.本文阐述补体调节蛋白在肿瘤免疫治疗的研究中所取得的一些认识和进展.
-
嵌合体外周血细胞异源性补体调节蛋白检测的意义
目的 通过流式细胞术检测人源性补体调节蛋白(hCD55和hCD59)在人脐血干细胞嵌合体大鼠外周血细胞中的分布,分析探讨嵌合体供者诱导异种移植免疫耐受的町能机制.方法 采用宫内胎鼠移植加新生鼠肝内注射人脐血干细胞的方法,制作人脐血干细胞嵌合体大鼠模型.4周后利用流式细胞三色标记法,对hCD45/SSC设门时,不同区域内hCD55和hCD59抗原阳性细胞的分布进行分析.利用补体依赖性淋巴细胞毒性反应,评估嵌合体淋巴细胞的免疫适应性.结果 hCD45/SSC设门时,在hCD45阳性细胞区域中,hCD55和hCD59阳性率分别高达(53.69±18.23)%和(31.8±27.5)%,但仅占全细胞总数的(2.0±1.32)%和(0.76±0.56)%,与全细胞Ⅸ域中hCD55和hCD59阳性细胞的百分率(4.11%±2.83)%和(2.82±1.38%)相比,差异具有显著性意义(t=2.71,P=0.043;t=3.64,P=0.015).嵌合体大鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应为(22.32±15.10)%,低于非嵌合体组大鼠的(57.29±22.65)%,差异具有非常显著性意义(t=4.16.P＜0.001).相关分析显示,嵌合体大鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应与外周血hCD55阳性细胞百分率呈负相关(r=0.679,P=0.031);外周血hCD55阳性细胞百分率和hCD45阳性细胞百分率呈正相关(r=0.658,P=0.038).结论 人脐血干细胞嵌合体内人源性细胞能够表达人补体调节蛋白.人造血细胞嵌合体淋巴细胞具有抵抗人补体对细胞融解、破坏的作用.随着嵌合体嵌合比例的增加,人源性补体调节蛋白表达增多,嵌合体外周血淋巴细胞抵抗人补体的融解、破坏作用增强.嵌合体内异种补体调节蛋白的存在,可能是造血细胞嵌合体供者诱导异种移植免疫耐受的基础.
