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坏死性自身免疫性肌病的生物学标志物研究进展
坏死性自身免疫性肌病（necrotizing autoimmune myopathy ，NAM ）是一种新近被认识的免疫介导的肌病。近期关于NAM的免疫学标志物有了进一步的研究发现，对这些标志物的认识可帮助临床医生更进一步准确诊断NAM 及判断预后。为此，本文就NAM的免疫学标志物研究进展进行综述。
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膜攻击复合物在特发性炎性肌肉病的表达研究
目的 总结膜攻击复合物在不同类型特发性炎性肌肉病的表达规律.方法 收集2011-2014年在北京大学第一医院收集的57例皮肌炎、37例多发性肌炎、9例散发性包涵体肌炎及15例抗信号识别颗粒(SRP)抗体免疫性坏死性肌病患者的肌肉活体组织标本,对其肌纤维和肌内衣毛细血管膜攻击复合物的表达率进行检测,采用x2检验或Fisher精确概率法进行统计学分析.结果 皮肌炎、多发性肌炎、散发性包涵体肌炎及抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌肉膜攻击复合物表达总阳性率分别为75.4％(43/57)、86.5％(32/37)、4/9和13/15.肌纤维膜攻击复合物表达阳性率分别为50.9％(29/57)、81.1％(30/37)、3/9和13/15,肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达阳性率分别为49.1％ (28/57)、24.3％(9/37)、1/9和6/15.散发性包涵体肌炎的肌纤维和肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达均低于其他类型炎性肌肉病,多发性肌炎和抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌纤维膜攻击复合物表达阳性率差异无统计学意义,但均显著高于皮肌炎和散发性包涵体肌炎,皮肌炎和抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达阳性率差异无统计学意义(x2=0.397,P=0.574),但均高于多发性肌炎和散发性包涵体肌炎.所有类型特发性炎性肌肉病的膜攻击复合物均存在区域性分布特点,其中11.6％ (5/43)的皮肌炎患者出现束周分布.结论 膜攻击复合物在各种类型特发性炎性肌肉病的表达存在差异,抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的膜攻击复合物表达兼具皮肌炎和多发性肌炎的特点.
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来氟米特治疗特发性膜性肾病对尿C5b-9和Podocalyxin含量的影响
目的 观察来氟米特治疗特发性膜性肾病的临床疗效和安全性,以及对尿C5b-9和Podocalyxin含量的影响.方法 将特发性膜性肾病患者20例随机分为来氟米特治疗组(LEF组,n=10)和卡托普利对照组(CAP组,n=10),分别给予来氟米特和卡托普利治疗12月,观察各组的疗效、不良反应以及对尿C5b-9和Podocalyxin含量的影响.结果 LEF组缓解率为70%(3例完全缓解,4例部分缓解);CAP组缓解率20%(均为部分缓解).LEF组从治疗第3个月起尿蛋白显著降低,血清白蛋白显著升高;CAP组至治疗12个月尿蛋白显著低于治疗前,血清白蛋白无明显改变;治疗第3个月起LEF组尿蛋白显著低于CAP组,血清白蛋白显著高于CAP组.尿C5b-9、PCX含量LEF组治疗后显著降低,而CAP组治疗前后无变化.结论 LEF治疗特发性膜性肾病有较高的临床缓解率,且能抑制C5b-9产生,减少足细胞损伤.
关键词： 特发性膜性肾病 来氟米特 膜攻击复合物 podocalyxin -
人类补体C8结构与功能研究进展
人类补体C8是组成膜攻击复合物(MAC)的五种成分之一.C8α、C8β与C6、C7、C9具有较强的同源性,而C8γ则属于分泌性蛋白家族成员,具有与小的疏水性配体结合的能力.形成膜攻击复合物的其他补体成分与C8的结合位点大多位于α、β的MACPF结构域.目前,大多数关于补体成分的研究主要集中于补体C3,鉴于补体C8在形成MAC中的重要性,在此就C8的结构与功能予以综述.
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膜攻击复合物C5b-9的研究现状
C5b-9也称膜攻击复合物,是补体系统经经典、旁路和凝集素三条途径激活后形成的共同末端效应产物.近年来,国内外许多研究发现沉积于细胞表面的C5b-9能刺激多种细胞的多种生物学活性改变,包括产生炎性介质、细胞因子,并诱导膜蛋白表达等,C5b-9的这种细胞刺激效应在多种疾病的发病机制和病程进展中发挥作用,尤其是亚溶解型C5b-9,在炎症、神经系统疾病、肾脏病和动脉粥样硬化等疾病中具有致病等多重作用.
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重视膜性肾病的病因诊断
膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是一个病理诊断名词,病变的主要特点是免疫复合物在肾小球基底膜外侧上皮细胞下沉积,引起肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚,可形成"钉突",是成年人肾病综合征常见的病因.从病因上可分为特发性MN(idiopathymN)、家族性MN、继发性MN(secondarymN)三大类.特发性MN病因不明,约占MN的2/3;家族性MN仅有很少的报道,并未明确致病基因;另有约1/3的患者发病与系统性疾病、感染、药物、肿瘤等有关称为继发性MN.MN发病机制目前仍未完全阐明,普遍认为主要由免疫机制介导,循环或原位免疫复合物在肾小球上皮下沉积,继而激活补体,形成C5b9膜攻击复合物而引起蛋白尿.
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狼疮肾炎患者血清H因子水平膜攻击复合物变化及其意义
目的 探讨膜攻击复合物(MAC)和H因子在LN中的临床意义.方法 应用ELISA检测30例LN患者与25名健康对照组血清中MAC和H因子的浓度,并分析比较其在LN患者血清中的变化及相关实验室指标的关系.采用t检验、x2检验和Spearman相关性分析进行统计学分析.结果 ①LN患者血清MAC的浓度高于健康对照组[(74± 100) μg/ml与(18±8)μg/ml,Z=2.777,P＜0.05];活动组MAC浓度高于非活动组[(92±53) μg/ml与(32±23) μg/ml,t=3.661,P＜0.05];②LN患者血清H因子的浓度低于健康对照组[(311±146) ng/ml与(412±76) ng/ml,Z=-3.139,P＜0.05];活动组H因子低于非活动组[(282±11) ng/ml与(330±20) ng/ml,t=-8.333,P＜0.05];③LN患者血清MAC水平与补体C3呈负相关(r=-0.603,P＜0.05),与抗dsDNA抗体、尿蛋白定量(24 h)、英国SLE评估小组(BILAG)积分、SLEDAI积分呈正相关(r值分别为0.481,0.694,0.709,0.613,P均＜0.05);④LN患者血清H因子水平与补体C3呈正相关(r=0.568,P＜0.05),与抗dsDNA抗体、尿蛋白定量(24 h)、BILAG积分、SLEDAI积分呈负相关(r值分别为-0.443,-0.485,-0.639,-0.597,P均＜0.05).⑤LN患者活动组18例肾活检肾脏病理结果病变以肾小管上皮细胞变性及肾小球细胞增生为主;非活动组11例肾活检病理结果病变以系膜细胞增生为主.结论 血清MAC升高、H因子减少通过补体经典途径、旁路途径加速LN的发展,同时与LN全身活动性及肾脏病理改变密切相关,可作为生物标志物反映LN活动性,也对肾脏病理活动性病变的生物学诊断价值提供了新的线索.
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采用ELISA法检测肾小球疾病血浆SC5b-9浓度及其临床意义
末端补体复合物(terminalcomplement complex,TCC)是补体系统活化后C5-C9形成的,结合在细胞膜上的称为膜攻击复合物(MAC),而存在于血浆中的为SC5b-9.近年来国内外研究发现,未端补体复合物SCSb-9与自身免疫疾病密切相关[1].白于补体系统在肾病患者免疫学研究中所处的地位重要,故此,我科于1997年12月～1999年1月应用ELISA方法测定103例患者血浆SCSb-9的浓度,旨在探讨其在肾小球疾病中的辅助诊断价值.现将结果分析如下.
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特发性膜性肾病与M型磷脂酶A2受体
膜性肾病是导致成人患者原发性肾病综合征的常见原因.其中特发性膜性肾病约为80%.膜性肾病的发病系循环中的自身抗体识别肾小球足细胞的靶抗原,抗原抗体结合后,在上皮下形成免疫复合物,激活补体形成膜攻击复合物,导致基底膜和肾小球滤过屏障受损,出现蛋白尿[1,2].近半个世纪以来,人们针对特发性膜性肾病的靶抗原作了大量研究,并取得了实质性进展,其中,M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R)是近年来研究的热点,现就PLA2R与特发性膜性肾病之间的关系综述如下.
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足细胞与膜性肾病
膜性肾病以肾小球基底膜上皮细胞下弥漫性的免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚为特点，对本病发病机制的研究主要是基于动物实验，即对海曼肾炎动物模型这种类似人类膜性肾病的动物模型的研究。在这种模型中，免疫复合物在基底膜上皮细胞下形成，导致补体途径活化进而形成C5b-9膜攻击复合物，终导致补体介导的足细胞损伤。
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RGC-32研究进展
RGC-32(response gene to complement-32)为重要的补体应答基因,同时也参与了其他生物学功能.近来研究发现许多因子如膜攻击复合物、皮质激素、生长因子、黄体生成素及转化生长因子β等均可诱导RGC-32表达,并在细胞增殖分化、炎症反应、肿瘤转移等过程中起关键作用,从而参与人类许多疾病的发生发展过程.但RGC-32确切的细胞生物学功能、亚细胞定位、基因调控机制等尚有待阐明.
关键词： RGC-32 膜攻击复合物 细胞增殖分化 转化生长因子β 肾小管上皮-间质转化 -
肾病综合征患儿补体调节蛋白CR1基因组密度多态分布的临床探讨
肾病综合征(NS)是儿科常见病,其发病除与机体细胞免疫紊乱有关外,亦与免疫复合物(IC)激活补体产生膜攻击复合物,造成细胞溶解,促进细胞因子释放,从而介导肾脏损伤有关.近发现体内补体激活受补体调节蛋白的调控.为此我们检测了22例NS患儿补体调节蛋白CR1基因组密度多态分布,以探讨其临床意义.
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亚溶量C5b-9与足细胞损伤及其信号传导的研究进展
膜性肾病的发病机制与亚溶量C5b-9(SC5b-9)诱导足细胞损伤有关.SC5b-9刺激足细胞产生的氧化剂、蛋白酶、前列腺素类、细胞外基质及各种细胞因子对足细胞有损伤作用.SC5b-9对足细胞的作用主要表现为引起足细胞凋亡、足细胞脱落以及对细胞周期的影响.MAPK通路在SC5b-9导致足细胞损伤中起到重要的作用.
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CD59分子及其在转基因动物中功能表达
体内存在多种可溶性以及膜结合的补体调节蛋白(complement regular protein,CRP),它们以特定方式与不同的补体成份相互作用,使补体的激活与抑制处于精细的平衡状态.在生理条件下,抑制补体的激活可抑制对自身细胞的破坏,维护内皮的完整性.膜反应性溶解抑制物(membrane inhibitor of reactive lysis,MIRL或CD59)是体内一种重要的CRP.它可以阻碍C7、C8与C5b-6复合物结合,从而抑制膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)的形成[1～3].
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雷公藤甲素干预C5b-9诱导足细胞损伤的体外研究
目的:体外观察雷公藤甲素对膜攻击复合物C5b-9介导的足细胞损伤的影响,探讨雷公藤甲素治疗膜性肾病的疗效机制. 方法:以纯化的C5b6及C7～C9体外组装C5b-9,建立足细胞亚溶破模型.免疫荧光染色分析C5b-9对足细胞骨架相关蛋白F-actin表达和分布的影响;在观察雷公藤甲素对C5b-9导致的足细胞损伤的治疗机制研究中,免疫荧光观察和流式细胞仪定量分析雷公藤甲素对C5b-9在足细胞膜上组装和活性的影响.并进一步在C5b-9组装完成后加入雷公藤甲素,观察雷公藤甲素对C5b-9诱导的足细胞内活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.流式细胞仪分析荧光探针CM-H2DCFDA标记的细胞内ROS,MAPK信号通路的活性采用Western blot检测p-38,ERK 1/2和JNK MAPK磷酸化水平,以及MAPK信号通路选择性阻断剂SB202190,U0126和SP600125对C5b-9作用的影响. 结果:免疫荧光和LDH释放试验显示C5b-9在足细胞膜组装成功,亚溶解剂量C5b-9对足细胞膜完整性没有明显影响,但可呈时间依赖性的破坏足细胞骨架结构,表现为细胞骨架的极性消失,排列紊乱,部分足细胞F-actin的丝状结构完全消失.C5b-9可诱导足细胞内ROS的明显增加,激活p-38 MAPK信号通路,但C5b-9对ERK MAPK和JNK MAPK信号通路没有明显的影响.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、p-38 MAPK通路特异性抑制剂SB202190均能够拮抗C5b-9对足细胞的损伤,而ERK MAPK和JNK MAPK通路抑制剂U0126和sp600125对C5b-9诱导的足细胞损伤没有明显的保护作用.雷公藤甲素(10ng/ml)对C5b-9复合物在足细胞膜上组装量和活性没有明显的影响.当C5b-9在足细胞膜上组装完成后加入雷公藤甲素,雷公藤甲素对C5b-9诱导的细胞内ROS的产生没有明显的抑制作用,但能够有效遏制p-38 MAPK信号通路的活化,p-38 MAPK的磷酸化水平显著降低. 结论:雷公藤甲素的疗效机制除了免疫抑制和抗炎作用外,还可通过抑制C5b-9激活的细胞内p-38 MAPK信号通路发挥直接的足细胞保护作用.雷公藤甲素对足细胞的上述作用可能部分参与了其对膜性肾病的疗效.
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纤维蛋白胶凝素-3研究进展
补体系统在体内参于机体抗微生物防御反应,亦介导免疫病理的损伤性反应,具有重要的生物学作用.根据其激活过程起始顺序的不同分为三条途径:①经典途径:由抗原一抗体复合物结合Clq启动;②凝集素途径(lectin pathway):由炎症期产生的蛋白与病原体结合启动激活,又称甘露糖结合凝集素(MBL)途径;③旁路途径:由病原微生物等直接提供补体激活级联反应得以进行的接触表面.三条途径中直接针对激活的重要步骤是C3的裂解,依次产生C3/C5转换酶,并随后进人共同的末路途径,形成膜攻击复合物(MAC)C5b-9并产生溶解细胞效应.
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肺部疾病中血浆SC5b-9检测的临床意义
SC5b-9是存在于血浆中的膜攻击复合物,在其浓度异常升高时,表现出细胞毒性[1].我们对40例健康人,96例肺部疾病患者血浆中含有S蛋白的补体5b-9复合物(SC5b-9)浓度,进行了检测,并对其临床意义进行探讨.
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激光诱导小鼠脉络膜新生血管中膜攻击物与血管生长因子的表达
目的 观察激光诱导小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)中膜攻击物与血管生长因子的表达.方法 雄性C57BL/6小鼠66只,随机分为对照组与眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,cw)预处理组,每组各33只.用氪红激光诱导小鼠CNV动物模型；免疫组织化学检测激光诱导后24h视网膜色素上皮-脉络膜-巩膜复合体补体膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)的表达；RT-PCR分析激光诱导后1d、3d、5d、7d血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA表达；Western blot检测激光诱导后3 d VEGF蛋白的表达.结果 CVF预处理组:激光诱导后24 h,未见MAC阳性染色；激光诱导后3d、5d、7d与激光诱导后1d相比未见VEGF mRNA表达增加；激光7d未见CNV形成.对照组:激光诱导后24 h MAC呈阳性染色；激光诱导后3d、5d、7d与激光诱导后1d相比VEGF mRNA分别增加380％、276％、98％(均为P＜0.01)；激光后3d,对照组较CVF预处理VEGF蛋白高表达.结论 CNV形成与补体MAC形成、VEGF表达上调相关联；MAC沉积导致VEGF表达增加；VEGF表达上调是CNV形成的主要原因.
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特发性膜性肾病发病机制的研究现状
特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)系针对肾小球脏层上皮细胞膜抗原成分、由自身抗体介导、补体参与的器官特异性自身免疫病[1].近年人们对膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的发病机制的研究取得了实质性进展[2].这些研究包括靶抗原如中性肽链内切酶(neutral peptide chain enzymes,NPE)[3]、抗M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R)[4]、醛糖还原酶(aldose reductase,AR)和超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,SOD2)[5]的认识,体液免疫介导的膜攻击复合物C5b-9致足细胞的损伤,其发病原因仍未明.本文就其研究现状介绍如下.
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Ⅱ型登革病毒非结构蛋白1多克隆抗体制备和免疫特征分析
目的 制备抗Ⅱ型登革病毒(dengue virus type 2,DENV2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)多克隆抗体,分析该抗体的免疫特性. 方法 采用NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血分离血清,纯化获得抗NS1抗体.酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗NS1抗体与NS1蛋白和DENV2结合特性.免疫荧光法测定抗NS1抗体与人微血管内皮细胞株1(human microvascular endothelial cell 1,HMEC-1)的交叉反应性.ELISA法分析抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养体系中活化补体的含量. 结果 抗NS1抗体能与NS1和DENV2特异性结合,抗体高滴度分别为1:1 280和1:540.抗NS1抗体能与HMEC-1细胞交叉结合,抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养上清液中C3a、C4a、CSa和sC5b-9含量均显著高于HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P＜0.05),以及PBS、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P＜0.05).结论 抗DENV2 NS1抗体能交叉结合于血管内皮细胞并激活补体系统,可能在登革出血热的免疫病理机制中起重要作用.
