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呼吸道合胞病毒激活靶细胞NF-κB的机制及途径研究进展
NF-κB是一个重要的转录调节因子,调控许多生物活性介质基因的转录和表达.静息时,NF-κB与IκB结合以非活性异寡聚体的形式存在于胞浆中,胞外刺激通过不同的信号转导途径激活NF-κB.本文主要介绍了呼吸道合胞病毒作用于靶细胞通过蛋白激酶C、磷脂酰肌醇激酶3、丝裂原活化蛋白激酶及蛋白磷酸酶2A等介导的信号级联反应活化NF-κB的机制及途径的研究进展.
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山楂叶原花青素对血管内皮细胞钙活化作用的研究
山楂叶具有活血化瘀,理气通脉,化浊降脂的功效.原花青素是其主要活性成分之一,具有调节血管活性的重要作用.以往研究表明,原花青素的调节作用与其诱导血管内皮细胞分泌一氧化氮有关,且这一作用还依赖于细胞外钙的存在,提示血管内皮细胞内部钙离子的浓度变化可能在此过程中发挥关键作用.然而,迄今为止,对于这一问题还缺乏研究.该实验探讨山楂叶原花青素(hawthorn leaf procyanidins,HLP)对血管内皮细胞钙浓度的影响,从而推测HLP血管活性的可能机制.体外培养人脐静脉内皮细胞;使用Fura-2作为探针,HLP加入细胞孵育液,以活细胞工作站观察胞内钙离子浓度30 min.6.25 ~ 50 mg· L-1 HLP浓度依赖地升高细胞内钙离子浓度,其中25,50 mg·L-1HLP组较正常组,差异明显.使用无钙孵育液、在孵育液内加入钙螯合剂EGTA或使用钠钙交换体的抑制剂,均可以显著抑制HLP的作用;而抑制胞内钙库释放钙离子,也可显著抑制HLP的作用.综上,该实验首次观察了HLP对血管内皮细胞钙离子浓度的影响;结果提示,HLP具有血管内皮细胞钙活化的作用,这可能是其血管活性作用的机制之一;这一钙活化作用与HLP促进血管内皮细胞胞外钙内流和胞内钙释放有关,而前者又可能与激活胞膜上钠钙交换体的逆向转运有关.
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急性 Aβ处理诱导原代培养大鼠海马颗粒神经元NMDA受体亚单位的选择性改变
可溶性Aβ寡聚体被认为是引起AD早期阶段突触功能失常的主要因素。不同的NMDA受体亚单位均与Aβ诱导的突触毒性有密切关系。在目前的研究中,我们发现Aβ选择性的诱导了NR2 B亚单位蛋白水平的下降,但是NR1,NR2A及SAP102的蛋白表达并没有显著改变。这些结果提示NR2B在Aβ急性处理后导致的早期突触毒性作用中变化更引人关注。而且,我们还惊奇的发现, Aβ诱导了突触内NR2 A和SAP102的puncta密度明显减少,这进一步提示Aβ急性处理后突触内外NMDA受体亚单位发生了复杂的改变。我们的研究结果表明在AD早期阶段,Aβ对于不同的NMDA受体亚单位及突触相关蛋白的产生了极其复杂的效应。这也在某种程度上解释了为什么临床上难于寻找适合的与AD早期NMDA受体功能异常相关的阻止突触功能失常和突触缺失的药物。
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血管生成素样蛋白4及其在肾损伤中的研究进展
血管生成素样蛋白(angiopoietin-like,Angptl)是由Kim等于2000年首先发现的具有多功能的信号蛋白,与人血管生成素结构上具有相似性,但不能与酪氨酸受体结合。 Angptl4是Angptl家族重要成员之一,又被称为禁食诱导脂肪因子( fasting induced adipose factor ,FIFA)、过氧化物酶体增殖物激活型受体( peroxi-some proliferator-activated receptors , PPAR )调节靶标等, Angptl4以寡聚体、糖基化及各种亚型的形式存在,经细胞分泌后可直接进入血循环,在糖脂代谢、动脉粥样硬化、调节血管发生、细胞分化等方面具有重要作用。近年来研究发现,Angptl4也参与肾脏疾病的发生发展。本文就Angptl 4的研究进展及其在肾脏损害中的作用作一综述。
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可溶性人B7-1分子酶联免疫试剂盒研制及初步应用
B7-1分子属免疫球蛋白超家族成员,以寡聚体形式表达于大多数APC表面,如巨噬细胞、树突状细胞及活化的T、B淋巴细胞~([1]).
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血清酶的多种形式及在医学检验中的应用
酶在血液中的存在形式除了同工酶之外,还以酶的多种形式存在.如酶原、糖基化、磷酸化、酶分子寡聚体、与免疫球蛋白结合、与脂蛋白结合、与其他蛋白质结合以及酶亚型等等形式.
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增龄对大鼠腹主动脉壁连接蛋白mRNA表达的影响
连接蛋白(connexin,Cx)是一类多基因家族表达的保守蛋白[1].6个Cx单体在细胞膜上环绕排列形成具有6角形中空结构的寡聚体蛋白,称连接子.相邻细胞膜上的两个连接子呈30度角倾斜排列组成缝隙连接(gap junction)[1,2].缝隙连接是广泛存在于各种生物体内各个组织器官中的结构.目前在血管壁已确定的连接蛋白有:Cx37、40、43及45[1].大量临床资料表明,动脉粥样硬化、肿瘤及高血压等的发病率均随年龄增长而增高,其发生机制均涉及缝隙连接的作用[3,4].因此,了解Cx在不同阶段的变化具有重要的生理及病理意义.我们于2005年5~11月测定不同周龄大鼠主动脉壁Cx37、40、43及45 mRNA的表达状况,旨在反映增龄对Cx表达的影响.
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鼠伤寒沙门菌小分子热休克蛋白AgsA的N与C末端在溶液中暴露比较
目的 探讨鼠伤寒沙门菌小分子热休克蛋白AgsA的N末端在其寡聚体中所处的位置,为临床治疗提供参考依据.方法 通过分别在小分子热休克蛋白AgsA的N、C末端添加多聚组氨酸标签(His-tag),检测二者与镍螯合琼脂糖凝胶(Ni-NTA Agarose)的结合能力,比较目标蛋白的N、C末端在溶液中的暴露情况.结果 His-tag的添加既不影响AgsA蛋白的寡聚状态,也不影响其类分子伴侣活性;通过比较分别在N、C末端添加His-tag的AgsA蛋白与Ni-NTA Agarose的结合能力,发现AgsA蛋白的C末端在溶液中的暴露情况远大于其N末端.结论 AgsA-N-His6与Ni-NTA Agarose的结合能力远远小于AgsA-C-His6,暗示了AgsA蛋白的N末端被包裹在其寡聚体内部.
关键词: 小分子热休克蛋白AgsA 类分子伴侣活性 寡聚体 -
阿片受体寡聚化的研究进展
阿片受体寡聚化包括同源寡聚化和异源寡聚化,寡聚化的受体具有不同的结构和功能,产生新颖的信号转导单元,增加了受体调控的精确性和复杂性。本文综述了近年来阿片受体寡聚化的研究进展。
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β-淀粉样蛋白寡聚体脑内注射动物模型在阿尔茨海默病研究中的应用
脑内β-淀粉样蛋白(amyloid-β peptide,Aβ)的异常沉积在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病进程中起重要作用.Aβ寡聚体脑内注射动物模型不仅为深入探索Aβ在AD中的作用机制提供了方法,而且也可用来筛选靶向于Aβ寡聚体的候选药物.迄今为止,已有大量文献报道利用该动物模型进行抗AD药物的活性评价和作用机制研究.本文拟对脑内注射可溶性Aβ寡聚体的研究进展进行总结,主要包括实验动物、Aβ的种类及其寡聚体的体外制备方法、注射部位和剂量、造模时长和行为学变化,以及该动物模型相关的病理学机制等,为该模型的合理应用提供参考.
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不同添加剂对重组人α干扰素溶液稳定性的影响
目的:考察不同添加剂对重组人α干扰素稳定性的影响.方法:取无菌过滤的重组干扰素纯品,分别加入不同浓度和种类的添加剂,37℃存放30 d后通过高效凝胶过滤色谱监测溶液中单体、二聚体及可溶寡聚体的含量变化,同时通过抗病毒能力考察存放过程中的生物活性变化情况.结果: pH 7.0时干扰素稳定性强,碱性条件下加剧寡聚体形成.存放过程中添加海藻糖或甘露醇以及低浓度的聚山梨酯(<0.01%)可提高其储存稳定性.结论:可用海藻糖或甘露醇取代白蛋白作为干扰素液态存放的稳定剂.
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阿片受体二聚化研究:药物靶标发现新策略
以往认为阿片受体以单聚体与G蛋白发生相互作用,其比例是按1:1偶联.然而,近年来随着G蛋白偶联受体克隆的成功及其特异性抗体的出现,关于阿片受体二聚化出现了大量报道,用Western印迹法分析异源细胞表达系统,已证明有免疫反应性复合体,而这些复合体相当于阿片受体(μ,κ,δ)单体、二聚体、高级寡聚体[1].
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帕金森病患者血清对α-突触核蛋白寡聚体形成的促进作用
目的 研究帕金森病(PD)患者血清对外源性α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)寡聚体形成的影响,初步分析血清促进α-Syn寡聚体形成的机制.方法 将重组人α-Syn加入PD患者和对照组血清中,37℃振荡孵育,用免疫印迹方法鉴定α-Syn寡聚体的形成情况,用ELISA分析α-Syn寡聚体的形成量.结果 α-Syn在血清中振荡孵育后主要形成二聚体和十四聚体.与对照组血清相比较,PD患者血清具有促进α-Syn寡聚体形成的作用.在血清中加入还原性谷胱甘肽可明显减弱PD患者血清促进α-Syn寡聚体形成的作用.结论 PD患者血清促进α-Syn寡聚体的形成,其机制可能与α-Syn的氧化修饰有关.
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一种检测帕金森患者血浆促进α-突触核蛋白寡聚体形成能力的方法
目的 建立一种检测帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者血浆促进外源性α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)寡聚体形成的方法.方法 利用本室自制的鼠抗人α-Syn单克隆抗体建立检测α-Syn寡聚体的酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent,ELISA)方法.将不同质量浓度(200、100、50、25、12.5 μmol/L)重组人α-Syn在正常人和PD患者血浆中分别振荡孵育(37 ℃、280 r/min)24、48、72、96 h.用所建立的ELISA法检测振荡后血浆中的α-Syn寡聚体含量.结果 所建立ELISA方法可以特异性检测α-Syn寡聚体,不识别α-Syn单体.重组人α-Syn在质量浓度为100 μmol/L、血浆稀释3倍以下、振荡孵育48 h条件下可以在PD患者血浆中形成较多的寡聚体,并与对照血浆中形成的α-Syn寡聚体含量对比差异大.结论 成功建立了一种检测PD患者血浆促进α-Syn寡聚体形成能力的方法,该方法可以用于诊断PD患者血浆的潜在病理变化.
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帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白寡聚体形成
目的 研究帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者血浆对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)寡聚体形成的影响.方法 将重组人α-Syn加入PD和对照血浆中,37 ℃振荡孵育144 h,免疫印迹方法鉴定α-Syn寡聚体形成情况,ELISA方法分析α-Syn寡聚体形成的相对质量浓度.结果 α-Syn在 PD患者血浆中形成寡聚体含量明显高于对照组.结论 PD患者血浆可促进α-Syn寡聚体形成.
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α-突触核蛋白寡聚体抑制大鼠原代培养神经元突起早期生长
目的 观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其形成的寡聚体对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,探讨其寡聚化对神经元的毒性及其在帕金森病发病机制中的作用.方法 制备α-Syn的寡聚体,向分组培养的大鼠脑皮质神经元培养基中添加,培养1、2和4h后固定,观察对神经元突起生长的影响.神经元的突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法实验进行鉴定.结果 添加α-Syn寡聚体组的神经元培养至1、2和4h时,其突起的平均长度均小于对照组和添加α-Syn单体组(P<0.05).增加α-Syn寡聚体浓度,随浓度增高神经元突起的平均长度与对照组差异越大(P<0.01).Western blotting法和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn寡聚体可以从培养基进入到神经元内.结论 α-Syn寡聚体在原代神经元生长初期对其突起生长具有抑制作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关.
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中性内肽酶和阿尔茨海默病的基因联系
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是导致痴呆的常见的进行性神经退行性疾病.淀粉样肽(amvloid β peptide,Aβ)在脑中沉积形成老年斑是AD的神经病理学标志之一,Aβ产生与清除的动态平衡是决定老年斑形成的重要因素.生理情况下有多种降解酶可以降解Aβ,使其产生和清除达到平衡.其中中性内肽酶(Neprilvsin,NEP)是主要的Aβ降解酶[1],可降解单聚体和(或)寡聚体形式的Aβ[2,3].在大脑中,老年斑的增加与NEP mRNA表达水平降低有关[4].
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生后发育过程中大鼠下丘脑NMDA受体各亚单位mRNA基因表达
中枢NMDA受体通道具有一种独特的门控方式,既受配基门控又受电压门控,而这种独特的门控通道又必须由各种亚单位形成的多样化的异寡聚体才具有一定的活性和功能.从胚胎形成到生后发育,中枢NMDA受体各亚单位及其所组成的异寡聚体具有各自不同的时空特性,其功能以及药理学特性也随发育过程而变化.本研究应用RT-PCR技术,研究在生后发育过程中听觉中枢神经系统下丘NMDA受体NR1、NR2A、NR2B和NR2CmRNA基因的表达,以期为在分子水平上揭示其在生后发育过程中的规律.
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软骨发育不全综合征
软骨发育不全综合征(CHD)属于骨-软骨发育不全综合征中的一种.本综合征的病因很多,如从发病的分子机制上看,可分为下列9种类型:(1)胶原蛋白病.(2)成纤维细胞生长因子(FGF)及FGF受体(FGFR)病.(3)软骨寡聚体基质蛋白病.
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Alzheimer病治疗药的开发方向
现在处于临床试验阶段的Alzheimer病治疗药大多是调节神经传导的药物;而根据"Aβ假说"进行的新药研究也在不断进展,这些药物通过减少易沉积的Aβ42数量、抑制Aβ沉积来发挥治疗作用.为了减少Aβ数量,能抑制其产生、促进其清除的药物和治疗方法正处于临床试验中,结果值得期待.抑制Aβ产生,主要开发分泌酶(此酶能切断Aβ前体)抑制剂;促进Aβ清除,主要开发疫苗和抗体.在抑制Aβ沉积方面,发现某些化合物能抑制Aβ沉积或抑制Aβ和基底膜的淀粉样物质结合.近,有报道称Aβ分泌依赖于神经活化状态,今后可能以神经功能和Aβ病理联系为目标开发新药.
关键词: Alzheimer病 Aβ 寡聚体 神经传导 新药开发