新疆维吾尔族人群雄激素受体基因CAG重复多态性与良性前列腺增生的关系

目的初步探讨雄激素受体(AR)基因CAG重复多态性与良性前列腺增生(BPH)的关系.方法收集80例维吾尔族BPH患者和40例健康者外周血标本,应用PCR和直接测序法行AR基因CAG重复长度测定.分析评价CAG重复长度与BPH的关系.结果BPH组CAG重复次数范围13～30,平均22.78.对照组CAG重复次数范围14～29,平均22.38.两组比较差异无显著性意义(P＞O.05).CAG重复长度＜22和≥22比较,其OR值为1.06(95%CI 0.46～2.48,P＞0.05).CAG重复长度与BPH患者年龄(γ=-0.06,P＞0.05)、国际前列腺症状评分(IPSS)(γ=0.11,P＞0.05)无相关性,而与前列腺的体积相关(γ=-0.26,P＜0.05).在BPH患者,前列腺体积随着CAG重复次数的增加而减小,差异有显著性意义(趋势检验P＜0.05),CAG重复长度≤20与≥25相比,前列腺体积差异有显著性意义(P=0.05).结论AR基因CAG重复长度与BPH腺体的增长有关.

再次TURP患者前列腺组织微血管密度、血管内皮生长因子和雄激素受体的表达及意义

目的 探讨再次TURP患者前列腺组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)和雄激素受体(AR)表达的临床意义.方法 再次TURP手术患者50例.选取2次手术标本(再次TURP组),50例首次手术患者标本作为对照组.采用免疫组织化学S-P法检测标本组织中CD_(34)、VEGF、AR的表达,通过血管内皮特异的CD_(34)染色计数MVD值.统计学比较3组标本MVD、VEGF、AR的表达水平.结果 再次TURP组1、2次手术标本和对照组标本MVD值分别为35.83±20.92、32.16±16.65和20.56±6.99,VEGF阳性表达率分别为82.0%(41例)、84.0%(42例)和60.0%(30例),AR阳性表达率分别为84.0%(42例)、88.0%(44例)和64.0%(32例),再次TURP组首次标本MVD值、AR及VEGF阳性表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);再次TURP组2次手术标本间各指标差异无统计学意义(P>0.05). 结论 BPH患者前列腺组织中高MVD值及AR、VEGF高表达是导致TURP术后复发及再次手术的重要原因之一.

雄激素受体反义RNA抑制前列腺癌细胞对激素的增殖反应

目的观察前列腺癌细胞LNCaP整合雄激素受体(AR)反义RNA后对雄激素、雌激素和孕激素的增殖反应性变化.方法分别用含不同浓度雄激素、雌激素和孕激素的培养基培养前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPas-AR(基因组DNA中整合了AR反义RNA逆转录病毒载体的LNCaP细胞)和LNCaPNeo(基因组DNA中整合了空逆转录病毒载体的LNCaP细胞),观察其生长情况,台盼蓝染色并细胞计数.结果在1 nmol/L合成雄激素R1881、10 nmol/L17β-雌二醇或1 nmol/L孕酮作用下,LNCaPas-AR细胞计数分别为(2.6±0.2)×105、(2.6±0.2)×105、(2.5±0.1)×105/ml,与LNCaPNeo和LNCaP相比,生长显著受抑制(P＜0.05),LNCaPNeo与LNCaP细胞增殖差异无显著性意义(P＞0.05).显微镜下见LNCaP和LNCaPNeo细胞生长状态良好,而LNCaPas-AR细胞稀疏且有较多细胞死亡.结论AR反义RNA可改变前列腺癌细胞LNCaP的雄激素非依赖性特征,可同时抑制其对雄激素、雌激素及孕激素的增殖反应.

MAPK途径磷酸化激活人前列腺癌雄激素受体的研究

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)激活人激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞雄激素受体及其可能的信号转导途径.方法 将人雄激素受体和雄激素受体激活报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)转染至人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M,不同浓度的GM-CSF以及特异性Erk1/2磷酸化阻断剂PD98059作用后检测雄激素受体报告基因CAT表达量的变化和促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)途径Erk1/2分子磷酸化的改变.结果 20～100 nmol/L的GM-CSF均能激活PC-3M细胞的外源性雄激素受体,CAT的相应表达量为(0.58±0.16)～(3.80±0.89)ng/mg,CAT表达量与培养基中的GM-CSF浓度成正相关;同时检测到PC-3M细胞中Erk1/2分子磷酸化程度与培养基中的GM-CSF浓度相关,在终浓度50 mmol/L的PD98059阻断Erk1/2分子磷酸化后CAT表达量显著下降.结论 GM-CSF能独立激活前列腺癌PC-3M细胞中的雄激素受体,Erk1/2分子磷酸化可能是GM-CSF旁路激活人前列腺癌细胞雄激素受体的机制.

雄激素受体剪接突变体7和雄激素受体表达量的比值在预测前列腺癌内分泌治疗预后中的作用

目的 分析雄激素受体(androgen receptor,AR)和雄激素受体剪接突变体7(androgen receptor splice variant-7,AR-V7)表达量的比值(AR-V7/AR)预测前列腺癌内分泌治疗预后的作用.方法 采用免疫组化染色法检测2010年1月至2015年12月我院行内分泌治疗的136例前列腺癌患者的活检穿刺标本,以HS评分评估其表达量.患者年龄53 ～96岁,中位年龄71岁.确诊时中位tPSA为110.00 ng/ml(2.61 ～4 003.40 ng/ml),中位fPSA为14.62 ng/ml(0.12～640.19 ng/ml),中位PSA密度为1.15 ng/(ml·cm3) [0.02～ 62.63 ng/(ml·cm3)].Gleason评分≥8分88例(64.7％),7分39例(28.7％),＜7分9例(6.6％);T3期57例(41.9％),T4期54例(39.7％),Tx期25例(18.4％);N0期46例(33.8％),N1期62例(45.6％),Nx期28例(20.6％);M0期30例(22.1％),M1期97例(71.3％),Mx期9例(6.6％).利用Cox模型分析患者各临床因素对前列腺癌内分泌治疗预后的影响,采用Kaplan-Meier法分析AR-V7/AR对前列腺癌内分泌治疗预后的预测作用.结果 本组136例中79例(58.1％)AR表达阳性,其中26例(19.1％) AR-V7表达阳性.Spearman相关性分析结果显示,AR与AR-V7的表达无相关性(r=0.042,P=0.629).本组136例中位随访时间为44个月(15 ～71个月).中位疾病无进展生存时间(PFS)为19个月(5～59个月);中位总生存时间(OS)为31个月(12 ～61个月).AR-V7阳性患者较阴性患者有较短的中位PFS(10.8个月与25.0个月,P＜0.001)和中位OS(20.3个月与42.8个月,P＜0.001);高AR-V7/AR值患者较低AR-V7/AR值患者有较短的中位PFS(12.0个月与24.8个月,P＜0.001)和中位OS(22.5个月与42.8个月,P＜0.001).在Cox单因素回归分析中,确诊时Gleason评分、前列腺癌T分期、tPSA、PSA密度、AR-V7/AR值可预测内分泌治疗的预后.在Cox多因素回归分析中,T4期(HR=2.597,95％ CI 1.351 ～4.995,P=0.004)和高AR-V7/AR值(HR=5.788,95％ CI2.530～13.242,P＜0.001)是前列腺癌内分泌治疗预后不良的独立危险因素.结论 高AR-V7/AR值是预测前列腺癌内分泌治疗预后不良的独立危险因素.AR-V7阳性、高AR-V7/AR值患者的中位PFS和OS均明显缩短.

雄激素非依赖型前列腺癌中雄激素受体特征改变的研究进展

前列腺癌在欧美国家高龄男性中发病率较高,在我国的发病率近年来也有明显的上升趋势.雄激素在前列腺癌细胞的生长、转移中起决定性作用,雄激素只有和雄激素受体( androgen receptor,AR)相结合才能发挥作用.在前列腺癌发病前期,肿瘤细胞多为雄激素依赖型,去势治疗有一定疗效.但随着治疗时间延长,部分患者可转变为雄激素非依赖前列腺癌( androgen-independent prostate cancer,AIPC).研究AIPC中AR的相关改变可以帮助我们进一步探索AIPC的成因,为临床治疗提供思路.现就AIPC中与AR相关改变综述如下.

雄激素受体旁路途径在激素抵抗性前列腺癌发生中的作用及意义

激素抵抗性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer,HRPC)治疗是泌尿外科难题之一.近来多个HRPC实验模型中发现雄激素受体(androgen receptor,AR)是惟一持续上调的基因,表明其在HRPC发生中起关键作用[1-2],但在HRPC发生过程中细胞还可以利用AR旁路生存途径[3].AR途径和旁路途径常可在HRPC中共同存在.现对雄激素受体旁路途径在HRPC发生中的作用及临床意义作一综述.

雄激素受体信号通路研究进展

雄激素在男性的一生中都具有非常重要的生理作用.雄激素的作用由雄激素受体(AR)介导.研究表明,AR信号通路的异常与前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)、肯尼迪病(Kennedydisease)、男性不孕、雄激素不敏感综合征(AIS)以及男性乳癌等疾病的发生、发展有密切关系[1],因此,AR信号通路的分子组成、数量、结构、功能以及与其它信号通路的联系一直是泌尿外科领域的研究热点.

雄激素非依赖性前列腺癌分子机理研究进展

前列腺癌分激素依赖和激素非依赖2类.激素非依赖性前列腺癌治疗非常困难.目前,有很多学说解释其发生机理,我们对近年雄激素受体(AR)机理综述如下.

神经内分泌前列腺癌的研究现状

近年来，前列腺癌（ prostate cancer， PCa）发病率上升趋势显著，中国虽然发病率远低于欧美国家，但是其增长远比欧美发达国家更为迅速［1］。由于前列腺癌的治疗效果较好使得患者生存期延长，同时由于医生对肿瘤认识和研究的深入，针对前列腺癌恶性亚型的诊治越来越受到关注。高度恶性的前列腺癌有一类是对激素治疗发生抵抗后产生的神经内分泌前列腺癌（neuroendocrine prostate cancer，NEPC），亦是一类相对罕见的去势抵抗性前列腺癌（ castration resistant prostate cancer， CRPC ）亚型。临床上常见于抗雄治疗（ androgen deprivation therapy， ADT）和使用强效雄激素受体（ androgen receptor， AR）抑制剂发生抵抗后的患者。这类患者易发生激素治疗诱发的神经内分泌前列腺癌（ treatment－emergent NEPC， t－NEPC），且多数患者在诊断后1～2年内即死亡，疾病进展速度远快于单纯CRPC。

人类雄激素受体亚型研究进展

长期以来,人们都认为雄激素受体(AR)为单一基因编码的单一蛋白,而近年来研究已经证实多种动物体内,甚至人体内都存在不同的AR亚型,亚型之间的功能及分布存在明显差异[1-3].本文就此方面的进展作一综述.

p53、C-erbB-2、AR在前列腺癌组织中的表达及意义

我们应用免疫组织化学和图像分析技术对前列腺癌组织p53、C-erbB-2表达产物及雄激素受体(AR)相对含量进行了测定,探讨其在前列腺癌(PCa)发生发展中的意义.报告如下.材料与方法选取临床资料较完整的PCa石蜡包埋标本40例.年龄54～79岁,平均73岁.随访时间7～74个月,平均38个月.病理诊断均为前列腺腺癌.按Gleason分级标准:Ⅰ级2例、Ⅱ级12例、Ⅲ级14例、Ⅳ级12例.按Jeweit分期标准:A期3例、B期11例、C期8例、D期18例.p53、C-erbB-2单克隆抗体为DaKo公司产品,AR多克隆抗体为Santa Cruz公司产品.CMIAS真彩色图像分析仪为日本产品.

前列腺癌的预防及诊断治疗

目前采用5α还原酶抑制剂预防前列腺癌(PCa)未获成功.近年来的研究认为晚期PCa的特征为雄激素受体(AR)增多,转录功能加强,并非失去了对雄激素(AN)的依赖性,而是对激素过度敏感,故治疗的关键在于减少AR含量,降低其转录功能[1-3].

前列腺中Ⅱ型5-α还原酶和雄激素受体的基因多态性与前列腺体积增大的关系

前列腺癌向激素非依赖型转化时激素受体基因甲基化的作用

目的探讨晚期前列腺癌转为雄激素非依赖型时,雄激素受体(AR)基因启动子区域甲基化的作用.方法采用Southern杂交、PCR特异的甲基化反应、甲基化敏感的单链结构分析等技术检测大鼠激素非依赖型前列腺癌和细胞株(PLS 10、20和30)的AR基因启动子区域甲基化状态.结果Northern杂交技术检测的大鼠激素非依赖型前列腺癌和细胞株中均无AR mRNA表达.RT-PCR结果显示,PLS 10和30细胞株中有AR mRNA表达,而PLS 20细胞株中无AR mRNA表达.Southern杂交分析AR基因启动子区域甲基化状态,PLS 10细胞株中EcoRⅠ/HpaⅡ消化的DNA出现1.0和0.7kb条带;PLS 20细胞株出现1.5、1.2和0.7kb条带;PLS 30出现1.3、1.2、1.0和0.7kbDNA条带,PLS 20细胞株CpGs甲基化状态明显高于细胞株PLS 10和30.用去甲基化剂5-aza-2-脱氧胞苷(5AC)处理后PLS20细胞恢复AR mRNA表达.CpGs位于转录起始位点上游-1和-9核苷酸.大鼠前列腺和精囊癌中均检测到CpG位点甲基化状态.结论雄激素非依赖型前列腺癌中,AR基因启动子区域异常高甲基化在AR表达中起关键作用,而AR表达丧失可导致激素非依赖型前列腺癌的发生.

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能工能及63表达的改变

目的 研究雄激素受体(AR)敲除小鼠睾丸生精功能的变化及曲细精管的p63表达.方法 采用Cre-lox方法筛选出8只AR敲除小鼠,8只AR未被敲除的Wistar雄性小鼠作为对照,Makler评分测定睾丸曲细精管的生精功能,免疫组织化学方法检测小鼠睾丸曲细精管p63的表达.结果敲除组小鼠曲细精管内径为(60.0±2.5)μm,未敲除组为(92.0±2.0)μm,2组管周膜厚度分别为(4.0+0.7)和(2.8±0.9)pm,细胞层次分别为(2.0±0.3)和(4.05±0.2)层,生殖细胞成熟障碍评分分别为(3.05±1.2)和(5.0±0.5)分,Makler评分分别为(8.05±0.3)和(16.0±0.5)分,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).AR敲除组小鼠p63表达显著低于正常Wistar组,且表达定位于精原细胞及精母细胞阶段.结论 AR敲除小鼠睾丸生精功能受损,p63表达下降主要影响生殖细胞的早期分化.

雄激素受体基因(CAG)n重复多态性长度对接受初始内分泌治疗的转移性前列腺癌患者预后的影响

目的 探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)基因(CAG)n重复多态性长度与接受初始内分泌治疗的转移性前列腺癌患者预后的关系. 方法 收集2006年1月至2012年1月接受初始内分泌治疗的转移性前列腺癌患者53例,诊断年龄45～ 87岁,中位年龄65岁.用PCR和直接测序方法对前列腺癌患者外周血标本进行(CAG)n重复多态性长度测定,结合临床资料分析(CAG)n重复多态性长度与生化无进展生存时间(biochemical progression free survival,bPFS)及总生存时间(overall survival,OS)的关系. 结果 (CAG)n重复多态性长度为14～32,中位长度为21.按(CAG)n中位长度分为(CAG)n≤21组33例和(CAG)n≥22组20例.中位随访36个月.Kaplan-Meier分析显示,与(CAG)n≥22组比较,(CAG)n≤21组患者的bPFS及OS均缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).(CAG)n重复多态性长度是影响转移性前列腺癌患者接受初始内分泌治疗的bPFS(HR 2.820,95％CI 1.466～ 5.427,P=0.002)和OS(HR 5.245,95％CI 1.293～21.273,P=0.020)的独立预后因素. 结论 AR基因(CAG)n重复多态性长度可能影响转移性前列腺癌患者接受初始内分泌治疗的疗效;(CAG)n重复多态性长度≤21预示肿瘤预后不良.

MCCC2在前列腺癌细胞系中的表达及其对前列腺癌转移影响的初步研究

目的 分析比较MCCC2基因在不同类型前列腺癌细胞系中的表达差异,通过构建前列腺癌MCCC2基因稳定表达细胞株研究其表达对前列腺癌细胞迁移能力的影响,初步证实MCCC2基因在前列腺癌进展转移中的意义.方法 利用RT-PCR方法检测MCCC2基因在局限性和转移性前列腺癌细胞中的表达情况,分析其表达与前列腺癌进展转移的关系;以前列腺癌细胞基因组cDNA为模板,通过PCR扩增MCCC2基因,重组构建含有Flag标签的pCDNA3.1(+)-Flag-MCCC2质粒,包装慢病毒,转染前列腺癌细胞,通过荧光显微镜、RT-PCR和Western Blot等方法鉴定MCCC2基因在细胞内的表达情况;利用Transwell及划痕实验研究MCCC2基因对前列腺癌细胞迁移能力的改变.结果 较局限性前列腺癌细胞22Rv1,MCCC2基因mRNA在转移性前列腺癌细胞LNCaP、PC3及DU145中的表达显著升高.同时,激素非依赖性前列腺癌细胞中MCCC2 mRNA表达比激素依赖性前列腺癌细胞明显增强.进而,我们成功构建和包装了表达MCCC2基因的pCDNA3.1 (+)-Flag-MCCC2重组质粒及慢病毒,并转染前列腺癌细胞,筛选出稳定表达株;并且,通过Transwell和划痕实验证实MCCC2基因表达与前列腺癌细胞的迁移能力呈正性关联.结论 局限性和转移性前列腺癌细胞、激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞中MCCC2基因的表达存在明显差异,提示MCCC2可能在前列腺癌的进展转移过程中发挥重要作用;成功构建了MCCC2基因稳定表达的前列腺癌细胞株,并初步证实其过表达可以促进前列腺癌细胞的迁移能力,为进一步研究MCCC2基因在前列腺癌进展、转移等过程中的具体作用奠定了实验基础.

PEG-PLGA纳米粒子介导反基因寡核苷酸体外抗前列腺癌作用研究

目的 验证包载反雄激素受体基因三螺旋形成寡核苷酸(TFO)的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)纳米粒子(TFO-NPs)对前列腺癌细胞的生长抑制作用.方法 采用改良自乳化溶剂挥发法制备TFO-NPs并进行体外物化表征.将TFO-NPs、脂质体包载的TFO(TFO-Lip)和裸TFO分别转染体外培养的LNCaP细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot方法检测AR基因表达.结果 TFO-NPs平均粒径128 nm,载药量为1.02%,包封率为72.28%,在体外具有缓释作用.LNCaP细胞对TFO-NPs和TFO-Lip的摄取率显著高于裸TFO.TFO-NPs和TFO-Lip对LNCaP细胞的抑制率分别为(54.5%±6.2%)和(50.6%±6.1%)显著高于裸TFO,(7.8%±0.8%)(均P＜0.05).TFO-NPs和TFO-Lip处理组LNCaP细胞的雄激素受体表达水平显著低于裸TFO处理组.TFO-NPs和TFO-Lip处理组的转染效率、细胞抑制率和雄激素受体表达水平差异均无显著性.结论 成功制备了TFO-NPs,为反基因治疗前列腺癌的研究提供了有效基因载体.

肝组织内性甾体激素受体与慢性乙型肝炎肝组织病理状态的相关性

目的：探讨肝组织内性雄激素受体（AR）mRNA和雌激素受体-α（ERα）mRNA表达水平对慢性乙型肝炎（CHB）肝组织病理学状态的影响。方法收集135例CHB患者，其中HBeAg阳性患者80例，HBeAg阴性患者55例。肝组织内AR mRNA和ERαmRNA采用反转录定量PCR检测。结果HBeAg阳性患者的平均年龄在肝组织不同炎症分级和纤维化分期之间的差异均具有统计学意义（P均＜0.01）；肝组织内平均AR mRNA和ERαmRNA含量在肝组织不同炎症分级和纤维化分期之间的差异均有统计学意义（P均＜0.01）。HBeAg阴性患者的平均年龄在肝组织不同炎症分级之间的差异无统计学意义（P均＞0.05），在不同纤维化分期之间的差异具有统计学意义（P均＜0.01）；肝组织内平均AR mRNA和ERα mRNA含量在不同炎症分级和纤维化分期之间的差异均有统计学意义（P均＜0.05）。根据有序Logistic回归分析结果，HBeAg阳性患者，只有肝组织内AR mRNA含量有预测肝组织炎症分级和纤维化分期的意义（P均＜0.01）；HBeAg阴性患者，仅肝组织内AR mRNA含量有预测肝组织炎症分级的意义（P均＜0.01）。结论肝组织内AR mRNA含量是影响CHB肝组织病理学状态的一个独立因素。