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严重烧伤早期心肌线粒体磷脂变化及其机制
目的探讨严重烧伤早期心肌线粒体磷脂变化及其发生机制，并分析其在线粒体功能损害中的作用。方法健康成年Wistar大鼠48只，随机分为正常对照组(8只)和烧伤组(40只)。烧伤组采用30%TBSA Ⅲ度烧伤大鼠模型。取正常及伤后1，3，6，12，24 h大鼠心肌分离线粒体，抽提并测定线粒体磷脂，同时检测线粒体Ca2+浓度(［Ca2+］m) 、线粒体磷脂酶A2(mtPLA2)以及质子腺苷三磷酸酶(F0F1-ATPase)、细胞色素c氧化酶活性。结果 (1)伤后3，6，12，24 h心肌线粒体总磷脂与磷脂酰乙醇胺明显降低，伤后6，12 h磷脂酰胆碱显著下降，但伤后6 h鞘磷脂明显升高。(2)伤后3，6，12，24 h大鼠心肌mtPLA2活性与［Ca2+］m均明显升高，且伤后mtPLA2活性与［Ca2+］m呈显著正相关(r=0.927 1，P<0.01)。(3)伤后1 h线粒体F0F1-ATPase活性明显升高，但伤后3，6，12，24 h线粒体F0F1-ATPase及细胞色素c氧化酶活性均显著降低。结论严重烧伤早期心肌线粒体总磷脂降低，同时磷脂组成发生改变，导致线粒体细胞色素c氧化酶、F0F1-ATPase活性降低。磷脂变化可能与［Ca2+］m升高激活mtPLA2有关。
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过氧化亚硝酸根参与重症休克血管反应性低下的发生
目的 从血管平滑肌膜电位和细胞内钙离子变化,探讨一氧化氮(NO)引起重症休克血管反应性下降的机制. 方法 复制大鼠失血性休克模型,测定脊斜肌微动脉对去甲肾上腺素(NE)的反应性.休克至血管反应性下降时分离肠系膜细动脉平滑肌细胞(ASMC),用荧光探针和激光共聚焦显微镜测定NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)对ASMC膜电位和游离钙离子浓度的影响,用超氧阴离子清除剂Tiron、鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ、钙激活钾通道(Kca)抑制剂蝎毒(ChTX)、ATP敏感钾通道(KATP)抑制剂优降糖(GLY)预处理细胞后观察上述影响的变化. 结果 SNAP使ASMC超极化,预加Tiron完全阻断该效应;分别加ODQ、ChTX、GLY和三者合用预处理细胞,可部分阻断SNAP的作用.SNAP还可使ASMC内游离钙浓度下降,Tiron能阻断该作用. 结论 大量NO与超氧阴离子(O)形成的过氧化亚硝酸根(OONO-)引起血管平滑肌细胞超极化,带来平滑肌细胞内钙离子浓度下降,它是休克后期血管反应性下降的重要原因.OONO-可通过KATP、Kca、cGMP等途径引起血管平滑肌超极化.
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节段性骨缺损修复过程中几种微量元素含量的研究
目的 探讨节段性骨缺损修复过程中,微量元素钙、锌、镁、铜含量变化的规律.方法 取7只雄性新西兰大白兔尺桡骨制成长1.5 cm脱钙骨基质、深低温冷冻骨、深低温冷冻脱钙骨基质84枚,之后进行不同的构建后分别移植于40只同种大白兔双侧桡骨相同长度骨缺损处(随机分为四组,80肢共8组,其中10肢不移植任何材料作为空白对照组),于术后1、2、4、8、12周各组分别杀死2只,于移植区取材进行X线、组织学切片、微量元素测定等检查,并对结果行统计学分析.结果 a)除空白对照组骨缺损未愈合外,其余各组均骨性愈合.b)骨缺损修复后第2周末,缺损区钙、镁、锌达峰值,到第4周末钙、镁降至谷底,而锌仍维持峰值.然后三者共同上升,至第8周末均达第2个峰值,之后钙、镁轻度下降,而锌轻度上升.c)铜在骨缺损修复的头4周内一直稳定在低水平,之后开始轻度上升,8周末开始明显上升,至第12周末达其峰值.结论 a)钙作为评价成骨活性大小的指标,取材应有时间限制;b)骨锌、镁值可能是有用的评价骨缺损修复材料成骨活性的指标;它们值低,成骨活性高,值高则成骨活性低;c)骨铜值不宜作为评价骨缺损修复材料成骨活性的指标.
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钙对HaCaT细胞整合素β1启动子活性和表达及细胞迁移的影响
目的 了解钙离子对人永生化KC株HaCaT细胞整合素β1启动子活性、蛋白表达及细胞迁移的影响.方法 (1)体外培养HaCaT细胞(12孔板),按随机数字表法分为5组,每组18孔.分别用pGL3启动子(阳性对照组)、pGL3空载体(阴性对照组)及pGL3-1756 bp(全长启动子组)、pGL3-1442 bp(远端启动子组)、pGL3-261 bp(近端启动子组)报告质粒转染HaCaT细胞,转染分别在含0.00、0.03、0.09、0.30、0.80、1.20 mmol/L钙离子的无血清RPMI 1640培养液中进行(每组每种浓度3孔).24 h后用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对活性.(2)取本室构建的稳定转染小干扰RNA-整合素β1载体(简称稳定转染)的HaCaT细胞,常规培养后按随机数字表法将细胞分为6部分,用前述6种浓度钙离子处理,每种浓度3个样本.采用蛋白质印迹法检测整合素β1蛋白表达水平.(3)于6孔板中培养正常HaCaT细胞和稳定转染的HaCaT细胞,每种细胞18孔.按常规进行划痕处理后,用含前述6种浓度钙离子的培养液(按随机数字表法划分.每种浓度3孔细胞)培养12 h.观察并检测细胞迁移率.(4)对各实验结果进行单因素方差分析和独立样本t检验.结果 (1)全长启动子组细胞在钙离子浓度由0.00 mmol/L升至0.09、0.30 mmol/L时,荧光素酶相对活性由0.16±0.09升至0.39±0.09、0.35±0.05(t值分别为3.143、3.140,P值均小于0.05);当钙离子浓度升至0.80、1.20 mmol/L时,荧光素酶活性下降.远端启动子组细胞荧光素酶相对活性随钙离子浓度变化的趋势与全长启动子组相似,但在0.09、0.30 mmol/L时,该酶活性分别为0.56±0.32和0.64±0.06,明显高于全长启动子组(t值分别为0.887、6.122,P值均小于0.05).各种浓度钙离子对近端启动子组荧光素酶相对活性无明显影响.(2)当钙离子浓度为0.00 mmol/L时,稳定转染的HaCaT细胞整合素β1蛋白表达量为0.53±0.10.当钙离子浓度为0.03、0.09、0.30、0.80、1.20 mmol/L时,整合素β1表达量分别为0.58±0.09、1.40±0.29、1.41±0.09、0.99±0.10、1.16±0.15,与0.00 mmol/L时比较均明显升高(t值分别为0.687、4.880、11.210、5.578、6.199,P值均小于0.05).(3)与钙离子浓度为0.00 mmol/L比较,当钙离子浓度为0.09、0.30 mmol/L时,正常HaCaT细胞迁移率明显增高;0.80、1.20 mmol/L时,迁移率明显降低.稳定转染的HaCaT细胞经各种浓度钙离子处理后,细胞迁移率无明显改变.结论 整合素β1远端启动子是调节人表皮细胞整合素β1转录的主要区域,钙离子对整合素β1启动子活性、蛋白表达和细胞迁移具有调节作用.
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含钙镁生物敷料对氢氟酸烧伤的疗效
目的 观察大鼠及人氢氟酸烧伤后局部应用"含钙镁生物敷料"(吸附钙、镁离子液后与戊二醛交联的绵羊真皮)的疗效,为临床治疗氢氟酸烧伤寻找更好的方法.方法 将Wistar大鼠分成对照组(24只)、不治疗组(32只)、湿敷A组(32只)、生物敷料A组(32只).后3组大鼠制成3 cm×3 cm的氢氟酸Ⅲ度烧伤模型,设伤后4、8、24、72 h为观察时相点(每时相点8只).生物敷料A组伤后应用"含钙镁生物敷料"覆盖创面并定期更换,湿敷A组、不治疗组、对照组则分别代以"湿敷液"或等渗盐水纱布湿敷.计算各组大鼠死亡率、进行组织病理学观察、测定血钙浓度.将46例氢氟酸烧伤患者分为湿敷B组与生物敷料B组,两组创面参照动物实验进行对比用药并观察疗效.结果 对照组、不治疗组、湿敷A组、生物敷料A组大鼠的死亡率分别为0、31.2%、15.6%、6.2%.不治疗组大鼠伤后创面进行性加深,生物敷料A组与湿敷A组相对而言局部损伤略轻.对照组大鼠各时相点血钙浓度均高于其余3组,生物敷料A组各时相点均高于不治疗组与湿敷A组.伤后8、24 h,生物敷料A组血钙浓度分别为(2.215±0.008)、(2.216±0.008)mmol/L,不治疗组为(1.813±0.017)、(1.912±0.013)mmol/L,湿敷A组为(2.015±0.006)、(2.018±0.010)mmol/L,生物敷料A组与后两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).生物敷料B组患者创面用药的镇痛效果及后期愈合情况明显优于湿敷B组.结论 "含钙镁生物敷料"可用于氢氟酸烧伤后的急救和局部创面的后续治疗.
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缓激肽对人角质形成细胞增殖凋亡及分化影响的实验研究
目的观察缓激肽(BK)对体外培养的人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响并探讨其机制. 方法以1×10-4～1×10-9 mol/L BK作用于体外培养的HKC,采用噻唑蓝法、台盼蓝染色法观察到1×10-4 mol/L BK抑制作用强,以此浓度BK进行余下实验.当HKC达对数生长期后,一部分加入1×10-4mol/L BK作为实验组,另一部分不加BK作为对照组,分别培养24、48 h后采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况及细胞周期,用链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10(K10)及内披蛋白的表达情况.用含1×10-4mol/L BK的无血清培养基KC-SFM培养HKC作为实验组,对照组细胞仅加KC-SFM,分别用激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针Fluo-3/AM 技术检测细胞内游离Ca2+浓度即[Ca2+]i的变化. 结果与对照组比较,实验组G0/G1期细胞比例相对上升34.57%,S期相对下降58.91%,其细胞早期凋亡率为15.34%,明显高于对照组(5.60%,P<0.05).实验组HKC K10阳性细胞百分比为2.20%,明显低于对照组(6.89%,P<0.05).BK作用3 min后实验组HKC [Ca2+]i较对照组上升163.0%,之后开始下降,5 min后接近对照组.结论高浓度BK可抑制HKC周期进程、明显促进其凋亡及诱导[Ca2+]i升高,这可能是其使HKC体外生长受抑的部分机制.BK还可抑制表皮再生和HKC分化.
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家兔氢氟酸烧伤后早期不同处理方式的比较
目的观察家兔氢氟酸烧伤后早期用不同方式处理的效果. 方法 33只家兔均用550 g/L氢氟酸造成5%TBSA烧伤创面,随机分为3组.A组13只,静脉输注等渗盐水5 ml*kg-1*h-1;B组10只,给予等渗盐水的同时在不同时相点静脉注射50 g/L葡萄糖酸钙,每次20 mg/kg;C组10只,处理方法同B组并于伤后0.5 h手术切痂.各组兔均于伤前及伤后不同时相点抽静脉血检测血氟、血钙,统计其死亡率. 结果 (1) A、B组家兔伤后1.0 h血氟浓度达峰值,分别为(8.37±2.62)、(8.59±2.25)mg/L,B组是伤前值的107倍.24.0 h后B组低于A组(P﹤0.05).C组伤后1.0 h血氟浓度明显下降为(6.20±0.23)mg/L,与A、B组比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)各组家兔血钙浓度伤后呈下降趋势,8.0或12.0 h为低谷.与伤前值比较,12.0 h时A组下降了46%,B组下降32%,C组下降26%,C组与A、B组比较,差异有统计学意义(P<0.01).24.0 h后各组血钙浓度开始回升.(3)A、B、C组家兔72 h内死亡率分别为30.8%、12.5%、0.0%.结论家兔氢氟酸烧伤后早期采用补钙+切痂术,可以迅速降低体内血氟浓度,逆转氟中毒致死性低钙血症及多系统毒性损伤.
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烫伤大鼠心肌收缩功能与细胞内游离钙的研究
目的观察烧伤后心肌功能与心肌细胞胞浆游离钙浓度之间的关系.方法成年SD大鼠Ⅲ度烫伤,面积43%TRSA.另设对照组(假烫组).大鼠烫伤24 h后,对心脏进行离体Langendorff灌注.通过导管连接心功能记录仪,持续监测左心室收缩压力的动态变化(left ventricular develop pressure.LVDP).于灌注液中加入TF-BAPTA前后,检测心脏的19F和31P磁共振波谱图.结果与对照组相比,烫伤大鼠心脏的LVDP降低了40%(P<0.01),心肌细胞胞浆游离钙浓度高出对照组4倍(P<0.01).心肌细胞摄人TF-BAPTA后,心脏LVDP仅降低15%～20%,PCr/Pi比值下降,但ATP无变化.结论体表烧伤使心脏的收缩功能受抑制,这种功能抑制与心肌细胞胞浆游离钙浓度增高同时存在.
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甘氨酸对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用及机制
目的探讨甘氨酸对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用及机制.方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,用生化分析仪检测缺氧后6 h及甘氨酸处理后心肌细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;用免疫组织化学方法观察常氧及缺氧心肌细胞甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)的表达;激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙及心肌细胞膜电位的变化.结果缺氧后6 h心肌细胞培养液中CK、LDH值[(393.8±5.3)、(1 564±41)U/L)]均升高,甘氨酸处理后CK、LDH值[(56.3±2.7)、(716±18)U/L]均明显下降(P＜0.01).常氧及缺氧心肌细胞GlyRα1均呈阳性表达.常氧心肌细胞钙离子平均荧光强度为27±8,缺氧后6 h增加为139±29(P＜0.01);而甘氨酸处理后细胞钙离子平均荧光强度为51±11,与缺氧后6 h比较明显减少(P＜0.01),与常氧下比较却明显增加(P＜0.01).常氧心肌细胞膜电位为177±20,缺氧后6 h膜电位发生去极化(62±9,P＜0.01);而加入甘氨酸后心肌细胞膜电位为123±16,较缺氧后6 h时的去极化程度明显减轻(P＜0.01).结论甘氨酸对缺氧心肌细胞有保护作用,其可能的机制是甘氨酸与其受体结合后,减轻了心肌细胞膜去极化,从而减少了细胞膜电压依赖性钙通道开放,使钙离子内流减少.
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HPLC法测定八维钙锌片中烟酰胺、维生素B1、B2、B6的含量
目的:建立RP-HPLC法测定八维钙锌片中烟酰胺、维生素B1、B2、B6的含量.方法:采用Phenomenex C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为庚烷磺酸钠溶液(取庚烷磺酸钠0.6 g,加冰醋酸6 mL与三乙胺1 mL,加水至1000 mL,用2 mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH至3.80)-甲醇(80:20);紫外检测波长为280 nm;流速为1 mL·min-1.结果:烟酰胺的线性范围为26.463～423.40μg·mL-1(r=0.9999),平均回收率为100.8%,RSD为1.4%(n=9);维生素B1的线性范围为3.90～62.4μg·mL-1(r=0.9999),平均回收率为100.9%,RSD为1.3%(n=9);维生素B2的线性范围为4.64～74.24μg·mL-1(r=0.9999),平均回收率为99.7%,RSD为1.8%(n=9);维生素B6的线性范围为4.95～79.28μg·mL-1(r=0.9999),平均回收率为100.3%,RSD为2.8%(n=9).结论:本方法操作简便,结果准确、可靠,可同时测定八维钙锌片中烟酰胺、维生素B1、B2、B6的含量.
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原子吸收法测定1,2-二甲基-3-羟基-4-吡啶酮对铝中毒小鼠模型脑组织中钙、锌、镁含量的影响
目的:通过原子吸收光谱法观察1,2-二甲基-3-羟基-4-吡啶酮(DHPO)在排铝的同时对小鼠脑组织中钙、锌、镁等元素含量的影响.方法:建立铝中毒小鼠模型,然后给予不同剂量的DHPO 30 d,处死小鼠,取其脑组织,用火焰原子吸收法测量其钙、锌、镁的含量.结果:DHPO高、中、低三个剂量组和模型组比较,脑组织中钙、锌、镁的含量均无显著性差异.结论:DHPO在排铝时不影响小鼠脑组织中钙、锌、镁的排出.
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空气-乙炔火焰原子吸收光谱法测定抗风湿类蒙药中8种微量元素
目的:测定抗风湿8种蒙药额日敦-乌日勒、额勒吉根-楚斯-25、嘎日迪-15、那如-3、森登-4、查千古古勒-10、五味润僵汤、巴斯布如-5汤中8种微量元素K、Na、Cu、Fe、Zn、Ca、Mg、Mn的含量.方法:采用空气-乙炔火焰原子吸收光谱法测定药品中微量元素.用标准加入法进行回收率测定.结果:8种抗风湿蒙药中的微量元素含量存在一定差异.8种蒙药中K、Na、Ca、Mg、Fe元素的含量均高,Mn和Zn的含量较低,Cu元素的含量低;Ca元素在额日敦-乌日勒中的含量明显高于其他7种蒙药.同种元素在不同蒙药中的含量明显不同.K元素在查千古古勒-10中的含量高,在嘎日迪-15中的含量低.Na元素在额勒吉根-楚斯-25中的含量高,在那如-3中低.Ca元素在那如-3中含量低.Mg元素在查千古古勒-10的含量高,而在森登-4中的含量较低.Fe元素的含量在嘎日迪-15中高,森登-4中低.Mn元素在额日敦-乌日勒中的含量高,在五味润僵汤中的含量低.Zn在嘎日迪-15中的含量高,在额日敦-乌日勒中低.结论:不同抗风湿蒙药中微量元素含量的差异与不同抗风湿蒙药的不同治疗作用有一定关联,分析结果对进一步阐明微量元素在抗风湿蒙药中的生物活性及作用机理提供实验依据.
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ICP-AES法测定肠内营养乳剂(TPF-D)中4种元素的含量
目的:建立肠内营养乳剂(TPF-D)中钙、钾、镁、钠4种元素含量测定的新方法.方法:采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES),供试品经盐酸溶解处理后测定,钙、钾、镁、钠的发射谱线分别为422.7、766.5、285.2、589.6 nm.结果:钙浓度在0.4～1.6μg·mL-1、钾浓度在1～4μg·mL-1、镁浓度在0.15 ～0.6 μg·mL-1、钠浓度在0.6 ～2.4 μg·mL-1的范围内,与发射强度均呈良好的线性关系,加样回收率分别为100.8％、98.6％、101.5％、98.4％,低定量浓度分别为0.003、0.002、0.001、0.002 μg·mL-1.经与原标准中的火焰原子吸收法比较,准确度和精密度均能满足实验的要求,4种元素的含量测定结果基本一致.结论:该ICP-AES方法经方法学验证可用于同类营养制剂中钙、钾、镁、钠含量的测定.
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脑创伤患者脑脊液中钙、镁的变化及意义
通过测定56例脑创伤脑脊液中钙、镁的含量,并与正常对照组22例进行比较,发现脑创伤患者脑脊液中钙、镁浓度均下降,且其下降程度与创伤程度有关.
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钙失敏在家兔内毒素休克血管低反应性中的作用
目的 观察血管平滑肌钙失敏在内毒素休克血管低反应性中的作用.方法 取正常和内毒素休克家兔肠系膜上动脉(SMA),采用离体血管环张力测定技术.以SMA血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力反映血管反应性,用去极化状态下(120mmol/L K+)血管环对梯度浓度钙的收缩力反映血管的钙敏感性.观察内毒素休克低反应性血管钙敏感性变化及钙敏感性调节剂精氨酸血管加压素(arginine vasopression,AVP)和胰岛素(insulin)对血管反应性的调节作用.结果 家兔脂多糖(LPS)(1mg/kg)静注后, 早期(即LPS后30分钟和1小时)SMA血管环对NE和钙的反应性升高,量-效曲线左移,大收缩力(Emax)升高(LPS 1小时后P<0.05或P<0.01);随着时间的延长,SMA血管环对NE和钙的反应性逐渐下降,到LPS后6小时明显降低,其量-效曲线明显右移,Emax明显降低(P<0.01).具有钙敏感性增强作用的AVP(1×10-9mmol/L)可明显升高LPS后6小时SMA血管环对NE和钙的反应性(P<0.05或P<0.01);而具有钙敏感性抑制作用的胰岛素则可降低LPS后1小时血管环对NE和钙的反应性(P<0.05或P<0.01).结论 内毒素休克血管平滑肌细胞存在钙敏感性降低,血管平滑肌细胞钙敏感性降低在内毒素休克血管低反应性的发生中起重要作用.
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脂多糖对离体大鼠胰腺腺泡细胞钙稳态的影响
目的:研究脂多糖(LPS)对胰腺腺泡细胞钙稳态的影响,及胞浆内钙超载时钙离子的来源,以探讨LPS致胰腺腺泡细胞损伤的机制.方法:胶原酶法分离胰腺腺泡细胞,F1 uo-3/AM负载后,在无钙或含生理钙离子浓度的培养液中加入不同浓度LPS,采用激光共聚焦显微镜观察单个胰腺腺泡细胞[Ca2+]I.另外采用MTT法检测LPS作用的不同时间点胰腺腺泡细胞的活性.结果:LPS可致胰腺腺泡细胞损伤、细胞内[Ca2+]I显著升高,且呈浓度依赖性(P＜0.05);在含1mmol/L依他酸的培养液中,LPS致腺泡细胞损伤程度明显减轻(P＜0.05)、仅引起胰腺腺泡细胞[Ca2+]I缓慢、微弱的升高,而再次恢复培养液中Ca2+至生理浓度,引发快速、幅度更高而持久的[Ca2+]I变化.腺泡细胞内[Ca2+]I的变化明显先于腺泡细胞的损伤.结论:LPS导致胰腺腺泡细胞内钙超载,主要源于胞外Ca2+内流.钙超载作为早期的病理事件参与腺泡细胞损伤的发生,钙稳态失衡是LPS致胰腺细胞损伤的主要因素之一.
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胞内钙动员在硝普钠增加豚鼠胃窦环行肌细胞钙激活钾电流中的作用
目的:研究胞内钙动员在硝普钠(SNP)增加豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钙敏感性钾电流[IK(Ca)]中的作用.方法:采用传统全细胞膜片箝技术,并用胶原酶急性分离单细胞.用硝普钠作为一氧化氮供体.结果:SNP100 μmol/L明显增加钙敏感性钾电流,同时也可以显著地增加瞬间外向性钾电流(STOC).SNP引发Ik(Ca)增加效应不能被胞外无钙液(含依他酸10 μmol/L)和L-型钙通道阻断剂尼卡地平5μmol/LL所阻断.SNP100μmol/L可以明显地抑制钙电流.SNP引发STOC增加效应可以明显地被三磷酸肌醇受体特异性阻断剂肝素3 g/L所阻断,却不能被兰尼碱10μmo1/L所阻断.亚甲基蓝1 μmol/L,特异性胞内鸟苷酸环化酶抑制剂,也可以显著地抑制上述效应.结论:SNP引发钙敏感性钾电流的增加可能是胞内第二信使cGMP通过激活胞内三磷酸肌醇诱导的钙释放的途径而实现的,而胞外钙离子不参与这一过程.
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CD40-CD40配体相互作用对培养的人单核细胞二酰基甘油-蛋白激酶C信号通路及胞内Ca2+的影响
目的:探讨CD40-CD40配体(CD40L)相互作用是否能激活人外周血单核细胞(PBMC)内二酰基甘油(DAG)-蛋白激酶C(PKC)信号通路.方法:细胞内DAG含量采用放射酶标记、薄层层析和放射自显影方法检测.细胞PKC活性及胞内游离钙分别采用[γ-32P]ATP磷酸转移法和Fluo-3荧光负载流式细胞术检测.结果:CD40L以剂量依赖方式刺激人外周血单核细胞合成DAG，并具有双时限性变化，第一峰值在20 s，第二峰值在10 min时出现.然后DAG水平缓慢下降，至少持续20-30 min.单核细胞蛋白激酶C总活性受CD40L刺激后明显增加，峰值在12 min，持续20 min以上.并且这种作用主要是胞浆PKC活性向胞膜PKC活性转位所致.CD40L能刺激胞内游离Ca2+出现短暂的快速升高，继之为持续阶段.移去细胞外Ca2+，胞内快速阶段无影响，而持续阶段明显受到抑制.抗CD40抗体能显著抑制CD40L引起的胞内DAG-PKC信号通路激活及[Ca2+]i的动态变化.结论:CD40-CD40L相互作用能激活人外周血单核细胞[Ca2+]i动态变化及二酰基甘油-蛋白激酶C信号通路.
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(-)表没食子儿茶素没食子酸酯增强阿糖胞苷对HL-60细胞的抗肿瘤活性
目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)增强阿糖胞苷(AraC)对人白血病HL-60细胞的抗肿瘤活性.方法:采用生长曲线法、MTT法测定细胞增殖;以流式细胞光度仪分析联合用药对细胞周期和细胞凋亡的影响;以对消实验研究EGCG能否逆转脱氧胞苷(dCdR)的补救作用;以Western blot和细胞内钙测定探讨EGCG和AraC联合作用的分子机制.结果:合并EGCG能增强AraC对HL-60细胞的增殖抑制作用,倍增时间从48 h延长到70 h,生长饱和密度从5.78减少到5.54;合并EGCG后,AraC抑制HL-60细胞的增殖,IC50从(0.34±0.29)μmol/L减少到(0.11±0.09)μmol/(P＜0.05).AraC可使HL-60细胞阻滞于G1期,S期细胞减少,低浓度的EGCG对细胞周期几乎无影响,但增强了AraC的细胞周期阻滞作用及细胞凋亡作用;对消实验表明单用AraC的IC50为0.03μmol/L,加上dCdR后IC50为0.02 mmol/L,而在给予EGCG后IC50减少到4.8 μmol/L;EGCG可增强AraC引起的bcl-2蛋白表达的下调,进一步升高AraC引起的肿瘤细胞内Ca2+浓度的增加.结论:AraC合并应用EGCG可增强对人白血病HL-60细胞的抗肿瘤活性.
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灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激的保护作用
目的:研究灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激的保护作用.方法:采用与黄嘌呤(0.3 mmol/L)和黄嘌呤氧化酶(0.02 U)体系在37℃下孵育30 min,建立大鼠脑突触体超氧阴离子氧化损伤模型.通过测定脂质过氧化产物丙二醛评价脂质过氧化程度.通过脂溶性荧光探针DPH的各向异性判断突触体膜的流动性.胞内钙离子的测定采用荧光光度法,以Fura 2-AM为荧光探针.测定ATP酶解释放的无机磷确定Na+/K+-ATP酶的活性.结果:超氧阴离子使大鼠脑突触体的脂质过氧化产物丙二醛及胞内钙离子浓度显著上升,突触体的膜流动性和Na+/K+-ATP酶的活性则显著下降,预先加入灯盏花乙素(25 100 μmol/L)则能显著缓解超氧阴离子引起的氧化性损伤,表现为丙二醛的水平和胞内钙离子浓度下降,膜流动性增加及Na+/K+-ATP酶活性的恢复.结论:灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激具有良好的保护作用.
