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杭州市2013年沙门菌流行特征及分子分型研究
沙门菌是全球范围内造成食源性疾病的主要致病菌[1].脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法是国际上广泛用于食源性疾病暴发预警和溯源的重要手段[2].本研究通过对2013年杭州市食源性沙门菌分离株进行血清分型及PFGE指纹图谱分析,了解沙门菌流行特征和分型情况.
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自急性腹泻患者粪便中检出阿蒙德奈斯沙门菌
为了掌握大同铁路地区腹泻病原谱,1998年7月,我们对医院肠道门诊进行了腹泻病原菌调查,在100例急性腹泻患者粪便标本中检出一株阿蒙德奈斯沙门菌,现将该菌鉴定结果报道如下.
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PCR-RDB方法检测空肠、结肠弯曲菌和沙门菌的应用研究
空肠弯曲菌(空弯菌)已成为发达国家重要的腹泻病原菌.腹泻患者中沙门菌、空弯菌、结肠弯曲菌(结弯菌)的检出率较高.
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一株沙门菌(4,?:Z:?)的分离鉴定及生物学特性分析
2005年5月份,笔者在腹泻患者的粪便中检出一株抗原式为(4,?:Z:?)沙门菌,经多次传代、隔水煮沸及多种方法多次诱导,均未能检出其它O和H抗原.现报告如下.
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广东省2008-2009年沙门菌监测
目的 了解广东省腹泻患者中沙门菌的感染及沙门菌暴发的情况以及沙门菌株的血清型别、耐药性和分子特征.方法 对纳入研究的腹泻病患者进行沙门菌的检测,对日常监测中分离到的菌株和暴发监测收集到的菌株进行血清分型、药物敏感试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 2008年共检测1922份粪便标本,分离到7l株沙门菌,阳性率为3.7%;2009年检测2110份粪便标本,分离到85株沙门菌,阳性检出率为4.0%;156株菌共分37种血清型,鼠伤寒和肠炎沙门菌居多;监测到10起由沙门菌污染引起的食物中毒事件,其中有4起由肠炎沙门菌引起,有3起由鼠伤寒沙门菌引起;发现1起疑似肠炎沙门菌暴发,并开展流行病学调查,结果提示4名病例中有2名病例是感染同一来源的肠炎沙门菌;229株沙门菌对头孢类和喹诺酮类抗菌药物敏感率达80%以上,59.3%是多重耐药沙门菌.结论 在广东省引起感染性腹泻和食物中毒的沙门菌主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌.
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广东省2007-2016年人源沙门菌流行现状及病原学特征
目的 了解广东省人源沙门菌1,4,[5],12:i:-的流行现状、耐药性与分子特征.方法 对2007-2016年广东省沙门菌腹泻病例监测检出的人源沙门菌1,4,[5],12:i:-进行药物敏感试验、PCR检测和PFGE分型.结果 2007-2016年广东省共检出人源沙门菌1,4,[5],12:i:-2 960株,检出率逐年增多,至2015年成为广东省人源沙门菌中主要的血清型.病例中男女性别比为1.58∶1,发病年龄以婴幼儿为主.沙门菌1,4,[5],12:i:-除对亚胺培南100％敏感外,对其他17种抗生素均有不同程度的耐药.2011-2016年对头孢他啶、头孢噻肟和环丙沙星的耐药率呈上升趋势.多重耐药现象严重,具有ASSuT多重耐药的有70.62％(435/616),具有ACSuGSTTm多重耐药的有27.11％(167/616).第Ⅱ相鞭毛蛋白不表达主要(75.53％)是缺失fljA、fljB和hin基因,但保留了iroB、STM2740、STM2757基因,共有8种不同的缺失方式.2 347株菌有934种PFGE谱型别,表现出较大的指纹图谱多态性,主要的优势PFGE谱型为JPXX01.GD0226型(97株菌,4.13％).168株沙门菌1,4,[5],12:i:-的PFGE图谱与鼠伤寒沙门菌PFGE图谱一致.结论 沙门菌1,4,[5],12:i:-已成为广东省人源沙门菌中主要的血清型,且多重耐药现象严重,第Ⅱ相鞭毛蛋白不表达主要由缺失fljAgjB和hin基因引起,其PFGE型别多样,呈遗传多态性.
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黑龙江省4个市肉鸡生产链中沙门菌分子分型研究
目的 了解黑龙江省4个市肉鸡生产链中沙门菌分子分型的情况.方法 参照美国CDC PulseNet实验方法,对2012年黑龙江省4个市肉鸡生产链环节中(孵化、养殖、屠宰和配送分销)分离到的沙门菌进行PFGE分型,利用BioNumerics软件对分离菌株的指纹图谱进行聚类分析并初步建立数据库.结果 4个环节中屠宰环节的污染为严重(13.84％).150株肠炎沙门菌和65株印第安纳沙门菌分别有89个和55个带型,带型存在多样性.肠炎沙门菌在不同环节或是不同地区具有相同的带型;印第安纳沙门菌在所有不同环节和地区没有相同的带型.HLJ2的肉鸡肠炎沙门菌污染已溯源到孵化环节的种鸡.结论 黑龙江省4个市肠炎沙门菌和印第安纳沙门菌的带型有地区差异,不同环节的优势带型各不相同.屠宰加工过程存在交叉污染,部分地区污染源可追溯到孵化环节.
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河南省外环境中沙门菌流行特征和分子分型研究
目的 了解河南省外环境中沙门菌的分布,探讨外环境沙门菌的不同型别分布和同源关系.方法 采集动物粪便、生熟肉制品和厨具等各类标本4 488份,进行沙门菌分离培养、生化鉴定及血清学分型;对其中部分优势血清型菌株进行PFGE分子分型研究.结果 从18种标本中共分离出324株沙门菌,分离率为7.21％;分离株分属于39种血清型,优势血清型是肠炎沙门菌(24.07％,78/324)和德尔比沙门菌(20.37％,66/324).46株肠炎沙门菌经Xba I酶切后共分为12种带型,其宿主多来自于鸡宿主源;30株德尔比沙门菌Xba Ⅰ酶切后共分为17种带型,其宿主多来自于猪宿主源.结论 河南省外环境沙门菌血清型分布呈多样性,不同来源的沙门菌的血清型有一定的差异;同一克隆菌株在相同地区内流行.
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沙门菌脉冲场凝胶电泳分型与血清型的对应关系
目的 分析沙门菌脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)与血清分型之间的对应关系.方法 选择中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulseNet China沙门菌监测数据中鼠伤寒(Typhimurium)、肠炎(Enteritidis)、德尔卑(Derby)、阿贡纳(Agona)及山夫登堡(Senftenberg)前五位常见血清型菌株共1230株,进行PFGE聚类分析,以血清分型作为参照进行比对.确定这5种血清型PFGE优势带型的共有条带.结果 1230株菌株中,1149株经PFGE预测的血清型与实际血清型一致,PFGE预测血清型的准确率为93.4％.5种血清型经PFGE预测的血清型阳性预测值多在90.0％以上、阴性预测值均在95.0％以上.结论 PFGE聚类对5种常见血清型沙门菌血清分型具有较好的提示及验证作用.
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基于微球液态阵列分子技术的沙门菌血清分型研究
目的 了解基于微球液态阵列分子技术对广东省腹泻病例沙门菌分离株的分型效果.方法 在微球液态阵列分子平台上应用SSA试剂盒对沙门菌人源株进行分子血清分型.结果 2010-2014年广东省人源沙门菌4 942株分为189种血清型,前100种血清型占所有菌株的98.08％(4 847/4942),其中98％可用SSA试剂盒完整分型;采用SSA试剂盒检测198株菌O抗原,可检出181株;用SSA检测H抗原的结果(98.32％,528/537)与传统血清凝集试验结果相符;flj 基因的符合率为93.09％(175/188),fljB基因假阴性率为7.35％(9/134),假阳性率为7.41％(4/54);sdf基因和Vi基因符合率均为100％;用SSA试剂盒检测12株血清不能分型的沙门菌,有11株能成功分型.结论 SSA试剂盒能对96％以上的广东省人源沙门菌株进行分子血清分型,其结果与传统方法符合率超过98％.基于微球液态阵列分子技术的血清分型法比传统方法更具有高通量且快速的特点.
关键词： 沙门菌 血清分型 基于微球的液态阵列分子技术 -
广东省食物中毒暴发疫情中沙门菌和金黄色葡萄球菌自动化核糖体基因分型研究
目的 为了解广东省常见食源性致病菌沙门菌和金黄色葡萄球菌（金葡菌）的遗传物质多态性特征，探索其鉴定及溯源方法。方法运用自动化核糖体基因分型系统，用EcoRⅠ酶或PvuⅡ酶，对广东省分离的沙门菌和金葡菌进行分子分型研究。应用BioNumerics软件比对不同来源、时间和地点的分离株，分析菌株间的相关性。结果使用PvuⅡ酶对32株沙门菌酶切，分为19个核糖体型，使用EcoRⅠ酶对14株沙门菌酶切，分为2个核糖体型。使用EcoRⅠ酶对49株金葡菌酶切，分为31个核糖体型，表现出较大的遗传多样性。结论 自动化核糖体基因分型能有效鉴定沙门菌和金葡菌。沙门菌血清分型与Ribotyping分型无高度相关性，但两者结合，能更有效鉴定菌株间的亲缘关系，确定食物中毒的来源和传染途径。
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多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌
目的 建立改良分子信标-多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法,应用于食源性致病菌的快速诊断.方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因,分别设计一对引物和改良分子信标探针,用同色荧光标记,用于同体系检测沙门菌.志贺菌根据ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,加入沙门菌检测体系中,建立三重实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测.结果 改良分子信标-多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl,菌液灵敏度为32～64 CFU/ml或1～2 CFU/PCR反应体系,无交叉反应.该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰.对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测,569份沙门菌实时PCR阳性,其中551份沙门菌培养阳性;42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌培养阳性.从样品处理到检测结果仅需时间2 h至1 d.结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断,伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.
关键词： 沙门菌 志贺菌 多重实时聚合酶链反应 同步检测 -
黄金海岸沙门菌引起食物中毒的调查
1998年7月,从广州市海珠区某制衣厂食物中毒病人粪便中分离出14株黄金海岸沙门菌,此菌型在国内首次检出.
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北京昌平地区1990～1999年腹泻病原菌监测
为了解北京昌平地区腹泻病原菌分布及构成特点，探讨其流行规律，制定可行的防治措施，于1990～1999年6～8月采集昌平区医院肠道门诊腹泻病人大便标本2 226份进行病原菌检测及细菌耐药性调查，结果总结如下。 1.材料和方法： (1)标本来源：昌平区医院肠道门诊1990～1999年6～8月就诊腹泻病人大便。 (2)检测内容：所有标本均检测霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌、病原性大肠杆菌(EPEC、EIEC、ETEC)，部分标本还检测了肠出血性大肠杆菌(EHEC)及其他引起腹泻的细菌。 (3)分离和鉴定方法：粪便标本直接接种SS、Mac、SIB、弧菌琼脂分离，按常规方法进行鉴定，1998年后用API细菌鉴定系统鉴定。 (4)诊断血清：沙门菌、志贺菌、病原性大肠杆菌血清购自成都生物制品研究所，API试条及配套试剂购自法国梅里埃公司，药敏试验培基及纸片购自中国药品生物制品检定所，标准菌株由北京市卫生防疫站提供。以上全部诊断试剂及培基均在有效期内使用。
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食源性微生物危险性评估
早在20世纪初,奶源性结核病和沙门菌病的爆发就已经被人类所认识,并运用巴氏消毒法进行了安全性的控制与预防.20世纪末期,尽管食品科技取得了显著的进展,但世界上却爆发了多起由病原微生物引起的重大食品安全事件.大肠埃希菌O157∶H7于1982年首次报道,但由于缺乏有效、敏感的检测方法,限制了其宿主及污染源的尽早阐明,导致出血性大肠埃希菌O157∶H7在日本等国家的中毒爆发.沙门菌、李斯特菌、葡萄球菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、禽流感病毒、口蹄疫病毒等微生物污染的大流行,使国际组织和各国政府对食品安全给予了高度的重视.2002年世界卫生组织(WHO)再次公告,食源性疾病和食品污染是一个巨大的、不断扩大的世界性公共卫生问题.每年发生的食源性疾病达到数十亿例,发达的工业化国家每年也至少有三分之一的人群患食源性疾病,其中约有170万15岁以下儿童因食源性微生物污染引起的腹泻而死亡.
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一起由肠炎沙门菌所致食源性疾病暴发疫情的病原学研究
目的 对一起食源性疾病暴发疫情进行病原学分子流行病学调查和细菌学检测,以便明确病因,进行有效的预防控制.方法 2010年5月12日,徐州市第二人民医院和徐州市儿童医院接收135名由于胃肠道感染就诊的某幼儿园儿童病例,采集患儿粪便标本34份和呕吐物标本4份,采用real-time PCR快速检测、常规病原学分离培养、噬菌体裂解试验、ATB细菌半自动鉴定系统等方法进行病原学的检测及鉴定.对分离菌株进行PFGE分型,并与当地散发沙门菌感染病例的PFGE图谱进行聚类分析.结果 该幼儿园21个班级中有20个班级有学生发病,班级分布无明显聚集性.在135例患儿中,男性76例(56.3％),女性59例(43.7％),患儿主要症状为发热(38℃以上)、腹痛、腹泻伴呕吐.经过real-time PCR快速检测与病原分离培养鉴定后,在34份粪便标本中共检出19株肠炎沙门菌,检出率为56％；4份呕吐物未检出致病菌.19株肠炎沙门菌的血清学分型、生化性状、药物敏感性、噬菌体裂解模式均相同.PFGE图谱带型完全一致(相似度为100％),并且与当地散发病例PFGE图谱不同.结论 综合流行病学调查、临床资料和实验室病原学检测及分子分型,证实本起疫情系一起由同一来源的肠炎沙门菌引起的食源性疾病暴发疫情.
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直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用
目的通过比较试验,得到准确、快速的沙门菌检测方法.方法 228株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后,采用在聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)同时检测,并将2种快速检测方法进行比较研究.结果 PCR法的敏感性优于直接ELISA法,2种方法的检测符合率达99%以上.直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的1 546份人粪便样品进行检测,同时以国家标准方法为参照,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.14%,PCR法的敏感性和特异性均为100%.结论优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;血清型的确定用国家标准方法.
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2011-2013年河南省肠炎沙门菌耐药与分子分型研究
目的：分析2011—2013年河南省肠炎沙门菌临床分离株的耐药状况与分子分型。方法收集2011年3月至2013年12月分离于河南省7个腹泻病多病原监测哨点医院的120株肠炎沙门菌，根据国际细菌性传染病分子分型监测网络公布的非伤寒沙门菌PFGE分型方法与美国临床与实验室标准协会沙门菌纸片法（Kirby-Bauer, K-B）药敏测试方案，对120株肠炎沙门菌进行8类抗生素的药敏测试与PFGE分子分型分析。结果120株肠炎沙门菌中，77株分离自男性，43株分离自女性；从0～5岁低龄儿童中共分离78株（65.0%），其中6月龄至2岁婴幼儿57株（47.5%）；分离时间集中于每年的5—10月份，其中3—4月份11株（9.2%），5—7月份48株（40.0%），8—10月份54株（45.0%），其余月份7株（5.8%），具有较典型的夏秋季节特征。120株肠炎沙门菌对氨苄西林的耐药率为50.0%（60株）；对头孢他啶的耐药率为14.2%（17株），对头孢噻肟的耐药率为18.3%（22株）；对头孢吡肟的耐药率为5.8%（7株）；对萘啶酸的耐药率为61.7%（74株）；对环丙沙星的耐药率为8.3%（10株），对诺氟沙星的耐药率为5.8%（7株）；对庆大霉素的耐药率为42.5%（51株），对链霉素的耐药率为21.7%（26株）；对氯霉素类抗生素的耐药率为30.0%（36株）；对甲氧苄氨嘧啶的耐药率为11.7%（14株），对复方磺胺甲唑的耐药率为71.7%（86株）；对四环素的耐药率为47.5%（57株）。120株肠炎沙门菌均对2种以上抗生素耐药，其中耐3～4种的为28株（23.3%），耐5～6种的为38株（31.7%），耐7～8种的为39株（32.5%）。经XbaⅠ酶切和PFGE电泳后，120株肠炎沙门菌共分为44种带型（EN1～EN44），各带型包含菌株数为1～35株不等，带型相似度在54.3%～100.0%之间，EN14、EN19分别包含35和29株菌，为该血清型主要优势带型。结论河南省临床分离的肠炎沙门菌耐药状况比较严重，PFGE带型具有优势带型特点的同时又与其对应的耐药谱具有一定的关联性与聚集性。
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肠炎沙门菌可变数目串联重复序列位点用于多位点可变数目串联重复序列分型分析的评价
目的 评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列(VNTR)位点用于多位点可变数目串联重复序列(MLVA)分型的可行性.方法 选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带的位点进行104株肠炎沙门茵的MLVA分型分析.对这些菌株同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,比较MLVA分型方法与PFGE分型方法对菌株分型能力的强弱.结果 初筛得到7个VNTR位点用于扩大菌株的分析,这些位点将104株菌分为16个MLVA型别,D值为0.7222,这些菌株同时被分为22个PFGE型别,D值为0.7974.对两种方法各自所分的大组包含的菌株进行比较,发现PFGE具有更强的分辨能力;从频数分布看,PFGE方法分型结果比较分散,MLVA分型较为集中.结论 用于国际肠炎沙门菌分型具有扩增多态性的VNTR位点在国内分离株中并不都具有多态性结果,在MLVA方法学建立中应选择更多的VNTR位点进行广泛的筛选才有利于国际实验室间的方法的统一.
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一起由肠炎沙门菌所致食源性疾病暴发疫情的病原学研究及溯源分析
沙门菌是引起我国食源性疾病的主要致病菌,感染后能够产生发热、腹泻、腹痛,甚至伤寒、败血症等症状.近年来在美国发生了多起轰动全球的沙门菌感染事件[1-2].2013年9月28日,北京市3个区域的3所学校相继发生由肠炎沙门菌污染食物所致食源性疾病暴发疫情.因报告时间相近、临床症状相似,初步怀疑该起事件具有共同的食品污染来源,现将调查及分析结果报道如下.
