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棘球蚴TGF-β/Smad和MAPK信号通路的研究进展
由于棘球蚴和宿主的密切接触,在棘球蚴感染过程中,棘球蚴及宿主细胞都可能分泌多种细胞因子,使刺激信号通过细胞表面的受体传递到细胞内,干预宿主的免疫系统,产生免疫耐受从而使棘球蚴能够在宿主体内长期共存.本文就近年来棘球蚴感染过程中转化生长因子-β (TGF-β) /Smad和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路所起的免疫调节作用作一综述.
关键词： TGF-β/Smad 丝裂原活化蛋白激酶 信号通路 棘球蚴 -
棘球蚴MAPK信号转导通路的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)是介导细胞反应的重要信号分子,受到刺激后磷酸化进入核内,激活靶基因.MAPK信号转导通路与多种疾病的发生和发展密切相关.近年来研究发现,该信号通路参与棘球蚴的生长和发育调控.本文就有关棘球蚴MAPK信号转导通路的研究进展作一综述.
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淫羊藿甙促成骨细胞中Cbfa1表达的信号通路机制
目的 观察淫羊藿甙对成骨细胞中核心结合因子α1(cbfa1)蛋白和活性表达的调节,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是否参与此过程.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,经鉴定后用于实验.设立对照组、淫羊藿甙组(10 ng/ml)以及雌二醇组(10-8mol/L),分别用药物干预24 h,抽提核蛋白.利用转录因子活性ELISA法检测成骨细胞cbfa1与DNA结合的活性,Western印迹法检测成骨细胞中cbfa1蛋白的表达.将MAPK信号转导通路抑制剂U0126和SB203580分别与淫羊藿甙或雌二醇共同加入培养液中,培养24 h,同上法检测Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的变化.结果 淫羊藿甙和雌二醇均可以促进成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的提高(P<0.05).加入细胞外信号调节激酶(ERK)途径的抑制剂UO126后,可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).加入p38MAPK途径的抑制剂SB203580后,也可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).结论 淫羊藿甙和雌激素均可上调体外培养大鼠成骨细胞转录因子Cbh1的蛋白表达和结合活性.MAPK信号转导通路抑制剂可以部分阻断淫羊藿甙和雌激素对成骨细胞转录因子Cbh1蛋白表达和活性的上调作用,说明MAPK可能是淫羊藿甙发挥抗骨质疏松作用的信号转导通路之一.
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脂联素对瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达的调节作用及机制
Western印迹方法测定脂联素与瘦素对小鼠巨噬细胞(PM)中p-ERK1/2、p-p38以及p-JNK的表达情况,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定TNF-αmRNA的表达水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中TNF-α蛋白的分泌量.发现脂联素在小鼠PM中通过抑制ERK1/2、p38 MAPK信号转导通路而抑制瘦素诱导的TNF-α表达.
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脂联素调控人成骨细胞OPG/RANKL表达的信号转导机制
目的 研究脂联素调控人成骨细胞护骨素(OPG)和NF-кB受体活化凶子配体(RANKL)表达的作用机制.方法 人成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达以实时PCR检测,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平用Western印迹法检测.廊用小分子RNA干扰技术(siRNA)阻断脂联素受体(AdR)表达,并以p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)干预,以观察脂联素对人成骨细胞OPG/RANKL作用的调节机制.结果 用siRNA沉默AdRl的表达可消除脂联素促进人成骨细胞RANKL表达和抑制OPG表达的作用;脂联素干预前予SB203580阻断p38 MAPK后,也可消除脂联素对成骨细胞RANKL和OPG的作用,而SP600125并无作用.结论 在人成骨细胞中,脂联素通过AdR1/p38 MARK途径促进RANKL表达和抑制OPG的表达.
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牛磺酸通过ERK1/2信号途径促进成骨细胞分化
牛磺酸(taurine)增强成骨样MG63细胞碱性磷酸酶活性,促进骨钙素的分泌和矿化结节的形成.细胞信号转导研究发现牛磺酸诱导成骨细胞细胞外信号调节激酶1/2(ERKl/2)磷酸化,ERKl/2抑制剂PD98059可阻断牛磺酸对成骨细胞的促分化作用.提示牛磺酸通过ERKl/2信号转导途径促进成骨样MG63细胞的分化.
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葡萄酒色斑中GNAQ基因突变的研究进展
鸟嘌呤核苷酸结合蛋白q多肽（Guanine nucleotide binding protein q polypeptide，GNAQ）是GTP结合蛋白异源三聚体的组成部分，能够通过结合细胞表面受体介导下游信号通路。近的研究发现，葡萄酒色斑（Port-wine stains， PWS）中GNAQ p.Arg183点突变，可能介导细胞外信号调节激酶（Extracellular signal-regulated kinase，ERK）信号通路。本文对GNAQ基因突变可能介导的下游信号通路，包括丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、G蛋白信号调节因子5（regulator of G protein signaling 5，RGS5）、蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）和YAP等信号通路进行综述。
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AHR小干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖和体内肿瘤生长的影响
目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)基因表达对肝癌HCCLM3细胞增殖和迁移的影响及其可能的作用机制.方法:将AHR基因特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染人肝癌HCCLM3细胞后,应用实时荧光定量-PCR法检测AHR mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测AHR和应激激活的蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK) /c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和c-Jun 蛋白及其磷酸化水平,CCK-8(cell counting kit-8)法和Transwell法检测AHR-siRNA转染后对HCCLM3细胞增殖和迁移能力的影响.合成AHR基因特异性小发夹RNA (small hairpin RNA,sh RNA),构建稳定干扰AHR基因表达的重组病毒载体pMKO.1/puro-shAHR,并将其感染HCCLM3细胞,感染后的细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况;蛋白质印迹法检测pMKO.1/puro-shAHR感染后HCCLM3细胞及裸鼠皮下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平.结果:AHR-siRNA转染组HCCLM3细胞中AHR mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P＜0.01),细胞的增殖和迁移能力受到抑制(P＜0.01); SAPK/JNK、ERK 1/2和c-Jun 的磷酸化水平降低(P＜0.01).pMKO.1/puro-shAHR感染后的HCCLM3细胞裸鼠皮下移植瘤体积和质量明显低于对照组(pMKO.1/puro-shNC感染HCCLM3细胞)(P＜0.01),pMKO.1/puro-shAHR感染后的HCCLM3 细胞及裸鼠皮下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平降低(P＜0.01).结论:AHR可能通过上调SAPK/JNK、ERK 1/2和c-Jun的磷酸化水平而促进HCCLM3细胞的体外增殖和迁移.
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MAPKs阻断剂U0126对体外培养神经细胞缺氧损伤后细胞损伤和水通道蛋白4表达影响的研究
目的:研究丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂U0126对体外神经细胞缺氧损伤后细胞生长状态及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法:取出生1 d的SD大鼠皮质神经细胞进行缺氧培养致细胞损伤,分为处理组和缺氧组,前者给予U0126,后者给予二甲基亚砜作为对照,检测AQP4的表达情况及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和Ets样因子(ELK1)蛋白磷酸化水平的变化.结果:缺氧损伤后细胞状态不佳,AQP4表达升高.给予U0126后ERK 1/2和ELK 1磷酸化水平降低,细胞状态有所改善,同时AQP 4的表达降低.结论:缺氧损伤后细胞肿胀与AQP4的表达增高有关,U0126可抑制AQP4的表达,减轻细胞损伤.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经损害与脑组织中丝裂原活化蛋白激酶表达的关系
目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脑组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)表达变化及其与神经损害的关系.方法 C57BL/6小鼠随机分为:EAE组(n=12),采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)制备成抗原乳剂免疫小鼠;对照组(n=10),用生理盐水处理小鼠.每日观察两组小鼠的行为学变化,并进行神经功能障碍评分.于高峰期处死小鼠,冰冻处理脑与脊髓,行苏木精-伊红染色观察脊髓组织的炎症细胞浸润,LFB染色观察脊髓组织的髓鞘脱失,蛋白印迹法检测小鼠脑组织中MAPKs表达.分析EAE小鼠神经功能障碍改变与中枢神经组织MAPKs表达量的相关性.结果 EAE组与对照组比较:日均神经行为学评分增加(P＜0.01);脊髓炎症细胞浸润增多(P＜0.001),髓鞘脱失增多(P＜0.001).P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达量均增多(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05).神经功能障碍与P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达呈正相关.结论 EAE高峰期神经损伤程度与中枢神经组织中的P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达增加相平行,提示MOG35-55诱导的EAE中枢神经损伤可能与MAPKs所激活的信号通路有关.
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针刺对缺血性脑损伤大鼠的治疗作用及对GDNF表达水平和MAPKs信号转导通路的调节
目的研究针刺对局灶性缺血脑损伤大鼠GDNF表达水平和对pERK1/2及pElk-1水平的调节作用.方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型,分为针刺组和缺血组,并对前者进行针刺治疗.24 h后进行神经功能评分判断疗效,48 h后进行TTC染色判断梗塞体积,并采用免疫组织化学和Western-blot法定位定量检测脑组织中GDNF表达水平及信号转导通路蛋白ERK1/2和ELK1磷酸化水平的变化.结果针刺可促进缺血性损伤大鼠神经功能的恢复,并减小脑梗塞体积(P<0.05).缺血灶周围区脑组织GDNF、pERK1/2及pElk1的含量均增高.针刺组pERK1/2及pElk1的含量低于缺血组(P<0.01);而GDNF的含量高于缺血组(P<0.01).结论针刺对缺血性脑损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能涉及良性调节MAPK信号通路的反应性,上调GDNF的表达.
关键词： 局灶性脑缺血 丝裂原活化蛋白激酶 胶质细胞源性神经营养因子 针刺 大鼠 -
丝裂原活化蛋白激酶通路在髁突软骨细胞力学信号转导过程中的作用
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)和c-Jun N末端激酶1(JNK1)的表达和分布以及随压力环境的变化过程.方法:体外培养髁突软骨细胞,采用可控液压细胞加载装置,在90kPa压强下分别加载60min、360min,Western印迹杂交法检测ERK1和JNK1蛋白表达水平;免疫组化染色观察加压前后ERK1和JNK1的分布变化.结果:90kPa加压60min及90kPa加压360min后,髁突软骨细胞(MCC)中ERK1含量分别较对照组升高73.21%±1.28%和32.57%±1.43%(P＜0.01),在90kPa压力刺激后60min表达水平高,并伴随向细胞核内的转位;而JNK1的含量分别较对照组升高38.24%±1.38%和83.74%±1.52%(P＜0.01),在90kPa刺激360min后表达水平高,也同时伴有由细胞质向胞核的转位.结论:MAPK途径是髁突软骨细胞力学信号转导过程中的重要通路,适宜的压力刺激可导致ERK和JNK/SAPK表达增强及由细胞质向胞核的转位.
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硫化氢对自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞增生的影响
目的 探讨硫化氢(H2S)对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉平滑肌细胞(ASMC)增生的影响.方法 体外培养SHRASMC,将其分成对照组、10(-5)、10(-4)、和10(-3)mol/L NaHS组,检测经H2S处理后ASMC细胞的增生指数和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果 与对照组相比,10(-5)、10(-4)、和10(-3)mol/L NaHS组增生指数显著降低(P<0.01),MAPK活性明显下降(P<0.05或P<0.01).结论 H2S可抑制SHRASMC增生和MAPK活性,推测可能通过MAPK信号途径介导.
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PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展
2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸.近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用.总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路.
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p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠胃缺血-再灌注损伤中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在小鼠胃缺血一再灌注损伤中的作用.方法 C57BL/6小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和CNI-1493预处理组,CNI-1493预处理组于术前1 h腹腔注射p38 MAPK抑制剂CNI-1493(2 mg/ml)溶液10 ml/kg.通过夹闭小鼠腹腔动脉30 min后松开动脉夹再灌注1 h制作胃缺血-再灌注损伤模型.再灌注1 h后取胃标本,甲醛固定后铺平拍照,计算胃黏膜出血面积百分比.应用蛋白质印迹法检测并比较各组磷酸化及总p38、JNK、ERK,磷酸化NF-κB p65以及分裂型Caspase-3的表达水平.结果 与假手术组比较,模型组胃黏膜出血面积明显增大(P<0.05),p38、JNK以及ERK明显激活(P<0.05),磷酸化NF-κB p65以及促凋亡蛋白激活型Caspase-3表达明显增多(P<0.05).CNI-1493预处理能明显逆转上述改变(P<0.05).结论 MAPK/NF-κB通路活化在胃缺血-再灌注损伤中起到重要作用,p38 MAPK抑制剂CNI-1493能抑制MAPK/NF-κB通路活化、减少凋亡蛋白表达,减轻胃缺血-再灌注引起的黏膜出血.
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塞来昔布通过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖
目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(CXB)能否通过阻断丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖.方法:原代培养多囊肾囊肿衬里上皮细胞,以不同浓度CXB(0、2.5 ×10-6、5×10-6、1×10-5、2×10-5、3×10-5、4×10-5、5×10-5mol/L)处理细胞,采用BrdU法检测细胞增殖状态.ELISA法检测各组血管内皮生长因子(VEGF)的含量.荧光定量PCR技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化MAPK的mRNA含量,Western印迹法检测PCNA、MAPK和磷酸化MAPK的表达.结果:CXB对囊肿衬里上皮细胞的增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性,其中2×10-5mol/L CXB作用24 h的抑制作用强,抑制率为(63.9±1.2)%;CXB可减少囊肿衬里上皮细胞VEGF的分泌,而且抑制作用具有时间、浓度依赖性.CXB剂量依赖性减低PCNA和磷酸化MAPK的mRNA和蛋白表达.结论:CXB明显抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,抑制细胞产生VEGF;其作用与干扰MAPK磷酸化,部分阻断MAPK信号转导通路有关.
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内脏脂肪素对巨噬细胞MMP-9的作用及其机制探讨
目的 研究内脏脂肪素(visfatin)对巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及其机制.方法 体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞.为明确visfatin对MMP-9的作用,细胞分为两组:①巨噬细胞+visfatin 12 h组;②巨噬细胞+visfatin 24 h组,两组的visfatin的质量浓度均为:0(对照组)、50、100、200、400 ng/mL.采用RT-PCR和Western blotting测定MMP-9基因和蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-9的活性.为明确visfatin对MMP-9的作用机制,细胞分为五组:①巨噬细胞未加刺激组(对照组);②巨噬细胞+ MAPK p38、ERK1/2、JNK信号通路抑制剂预处理1 h后加visfatin(200 ng/mL)24 h组;③巨噬细胞+过氧化物酶体增殖剂活化受体(PPARγ)天然及人工配体/ RXR配体预处理1 h后加visfatin(200 ng/mL)24 h组;④巨噬细胞+visfatin(200 ng/mL)24 h组(Vis200组);⑤巨噬细胞+visfatin(200 ng/mL)刺激不同时间组(5、10、15、30、60 min).Western blotting检测MMP-9蛋白和PPARγ蛋白表达及visfatin刺激下巨噬细胞p38、ERK1/2、JNK MAPK磷酸化水平.结果 Visfatin能促进MMP-9基因及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),同时增强了MMP-9的活性(P<0.01).p38 MAPK、ERK1/2 MAPK通路抑制剂及RXR配体抑制visfatin对MMP-9表达具有上调作用;visfatin能促进p38 MAPK和ERK1/2 MAPK的磷酸化,但不影响PPARγ蛋白的表达.结论 Visfatin增加了巨噬细胞炎症因子的表达,该作用与p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信号通路有关;RXR可能参与了该过程.
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镉的生殖毒性与血睾屏障结构和功能的关系
镉是一种主要的重金属污染物,能够通过消化道、呼吸道等途径进入人体并在体内积累,导致多器官损害.其中镉对雄性生殖系统的毒性作用尤为复杂,严重者可导致不育.因此,通过对镉毒性机制的深入探讨,寻找对抗药物的作用靶点,已成为当前该领域研究的热点.该文针对镉对血睾屏障相关连接蛋白的影响以及可能参与其中的信号通路作一综述.
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胞外信号对破骨细胞中丝裂原活化蛋白激酶通路的影响
骨质疏松是以骨量减少和骨的微细结构改变,使骨脆性增加且易于发生骨折的一种全身性内分泌代谢性疾病.破骨细胞(osteoclaso,OC)的骨吸收与(osteoblast,OB)的骨形成的平衡是维持骨不断更新,功能正常和结构完整的关键.任何引起成骨细胞OC生成增多或过度活化的因素均可使OC功能亢进,骨吸收超过骨形成,终导致骨质疏松.抑制骨吸收是防治各种代谢性骨病的目标.
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细胞外信号调节激酶在局灶性脑缺血中的作用
目的研究细胞外信号调节激酶(ERK)在局灶性脑缺血中的作用.方法线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.通过Western blot和免疫组织化学方法研究磷酸化ERK1/2的活性特征.静脉内应用ERK通路阻滞剂U0126,测定缺血小鼠的神经系统损害和脑梗死体积的改变.结果MCAO后30min,磷酸化ERK1/2在局灶缺血小鼠脑组织中显著升高,2 h达到高峰,6 h恢复.免疫组化研究显示磷酸化ERK1/2阳性细胞在梗死基底节和周围皮质大量出现.荧光双染提示磷酸化ERK1/2阳性的细胞为神经元和星形细胞.与对照组相比,注射U0126的脑缺血小鼠神经损伤评分降低44.6%,梗死体积降低54.4%.结论ERK在小鼠局灶性脑缺血中起着重要的作用,阻断ERK通路对缺血性脑损伤有一定保护作用,并可能成为脑缺血治疗的新途径.
