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H2S对ATP诱导小胶质细胞活化的影响
目的:研究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放的调节,并探讨小胶质细胞条件培养基对神经元样细胞凋亡的影响.方法:选定的大鼠小胶质细胞随机分4组:(1)正常对照组:常规培养;(2)ATP组:细胞接种24h后用ATp处理;(3)NaHS(sodium hydrosulfide,H2S供体)+ATP组:ATP处理前用NaHS预孵育30 min,且NaHS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(异喹啉衍生物,嘌呤受体拮抗剂)+ ATP组:ATP处理前用KN-62预孵育30 min.用ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-6的变化,用Western Blot检测各组丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)P38和JNK表达水平.用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)研究条件培养基对神经元的影响,其方法与上述大鼠小胶质细胞处理相同.用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态变化及凋亡情况,用MTT法检测各组细胞活力.结果:当ATP浓度3 mmol/L时,大鼠小胶质细胞释放TNF-α和IL-6水平增加(P＜0.05),同时上调大鼠小胶质细胞p-P38、p-JNK蛋白表达水平(P＜0.05).当ATP浓度5mmol/L时,小胶质细胞活化后的条件培养基可以使SH-SY5Y细胞形态发生改变,其细胞活力降低(P＜0.05).ATP引起的上述变化可以通过NaHS预处理而逆转(P＜0.05),其作用与P2X7R阻断剂KN-62相类似.结论:H2S可下调被ATP诱导的p-P38和p-JNK MAPK蛋白表达,减少TNF-α和IL-6等炎性因子的释放,从而对神经元产生保护作用.
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ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用
目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用.方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组.采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-Ⅱ的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达.结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P ＜0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Bec1in-1和LC3表达均低于SAH组(P＜0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P＜0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P＜0.05).结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要.
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MAPK信号通路在创伤性脑损伤中的作用
目的 通过建立小鼠创伤性脑损伤(TBI)模型,研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路中的细胞外调节蛋白激酶1/2(ERKl/2)通路、JNK通路和p38通路的激活及在TBI中的作用及机制.方法 建立小鼠TBI模型,通过Western blot检测ERK1/2、JNK和p38的相对磷酸化水平,确定TBI后MAPK通路的激活情况；分别加入ERK1/2通路抑制剂(PD98059,500 μmol/L)、JNK通路抑制剂(SP600125,500 μmol/L)和p38通路抑制剂(SB203580,500 μmol/L),通过脑干湿重检测、神经功能学评分和TUNEL染色评估不同抑制剂对TBI的作用,并通过Westem blot检测ERK1/2、JNK和p38的相对磷酸化水平,明确ERK1/2通路、JNK通路和p38通路之间的相互调节作用.结果 TBI可分别引起ERK1/2通路、JNK通路和p38通路的激活；抑制ERK通路和JNK通路可减轻TBI引起的脑水肿、神经功能损伤和细胞凋亡,而抑制p38通路则加重TBI引起的脑水肿、神经功能损伤和细胞凋亡；抑制JNK通路可减少ERK1/2的相对磷酸化水平,而抑制p38通路可增加ERK1/2的相对磷酸化水平.结论 TBI后,ERK1/2通路和JNK通路的激活发挥促进损伤形成的作用,而p38通路的激活则起到神经保护的作用；ERK1/2通路的激活受到JNK通路的促进和p38通路的抑制,表明MAPK通路之间存在相互调节.
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曲克芦丁对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用
目的 研究曲克芦丁对中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用及机制.方法 将培养的HaCaT细胞分为空白对照组、UVB组、曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组.其中UVB组、曲克芦丁+UVB组予50mJ/cm2的UVB照射,曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组分别加入不同浓度的曲克芦丁干预.用CCK-8法检测细胞增殖能力.Hoechst染色法检测细胞凋亡.Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白p-P38,p-JNK,p-ERK,以及激活蛋白-1(AP-1)的组件c-Fos,c-Jun的表达情况.结果 CCK-8法提示,5～ 10μmol/L的曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有较好的保护作用(P＜0.05).Hoechst染色显示,UVB组凋亡细胞较空白对照组增多,曲克芦丁+UVB组凋亡细胞较UVB组减少.Western blot法提示UVB照射后HaCaT细胞p-P38,p-ERK,p-JNK,p-c-Jun及c-Fos水平升高,曲克芦丁+UVB组有不同程度下降.结论 曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有一定的保护作用.
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肉桂醛对UVA照射后体外成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和MAPK信号的影响
目的 探讨肉桂醛对UVA照射后体外皮肤成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的影响.方法 皮肤成纤维细胞在体外培养后,在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20和40μM)肉桂醛,24h后MTT法检测细胞活性.皮肤成纤维细胞经肉桂醛预处理24h后再予UVA照射,Western blot法检测MMP-1,MMP-3,ERK,JNK,p38磷酸化蛋白水平.结果 0～40μM肉桂醛对成纤维细胞的活性无明显影响(P均＞0.05).肉桂醛能抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白ERK,JNK,p38的活化,其也能抑制成纤维细胞表达MMP-1和MMP-3,且各浓度间作用差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 肉桂醛可能通过抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白的活化来抑制MMP-1和MMP-3的表达,减少胶原降解,延缓皮肤光老化.
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MAPK信号通路与眼部损伤研究进展
丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)信号转导通路家族是一条重要的信号转导通路，在细胞内广泛存在，可对细胞外的多种信号或刺激，如渗透压的改变、缺血再灌注、炎症反应等作出特定的生理反应，即介导细胞的分裂，分化或凋亡。 MAPK通路所介导的生理反应对眼部创伤及其修复具有重要意义，家族中的多条通路能相互协作并对不同甚至相同的刺激作出不同的响应，因此在进行相关研究时需要对此加以重视。
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p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与角膜新生血管
炎症是促进角膜新生血管生长的重要因素.p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路通过调控IL-1β,IL- 6和TNF-α等的表达,从而在炎症反应中发挥重要作用.p38抑制剂不仅抑制炎性介质的表达,而且阻断其功能,因此在抑制炎症反应中具有重大作用.从p38信号转导角度研究角膜新生血管的形成机制,是角膜新生血管机制研究的新方向.
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P38 MAPK在角膜创伤愈合过程中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)级联是细胞内重要的信号传导系统.细胞通过这一信号传导系统将细胞外信号传递到细胞核内,介导细胞产生反应,调节细胞生长、增殖、分化和凋亡等生理过程及创伤愈合和炎症反应等病理过程.近年来发现一类新的MAPK通路-p38 MAPK信号通路,对其结构和功能以及在角膜创伤愈合修复和炎症反应中的作用已有了进一步的了解,在信号通路水平调控p38 MAPK的表达和活性,可能成为临床角膜创伤治疗的新途径.
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p42/p44 MAPK通路在高糖诱导的 hRPE 细胞 VEGF 表达中的作用
目的：探讨 p42/p44丝裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导通路在高糖诱导的人视网膜色素上皮( human retinal pigment epithelium, hRPE)细胞血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)表达中的作用。
方法：采用hRPE细胞株,将细胞分为正常对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖对照组(15,20,30 mmol/L 葡萄糖)、PD98059处理组(20μmol/L p42/p44 MAPK 高效选择性抑制剂PD98059处理hRPE细胞)和溶剂二甲基亚砜对照组( dimethyl sulfoxide, DMSO 组)。应用逆转录 PCR ( RT-PCR )技术检测 VEGF 及色素上皮细胞衍生因子( pigment epithelium derived factor, PEDF) mRNA的表达。应用酶联免疫吸附测定( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达
结果：高糖作用下 VEGF mRNA 和蛋白表达显著增高, PD98059处理组 VEGF mRNA 和蛋白表达受到抑制,且VEGF mRNA/PEDF mRNA比值较高糖组显著降低。
结论：p42/p44 MAPK信号转导通路可能参与了高糖引起的hRPE细胞VEGF的表达。 -
慢性寒冷应激诱导大鼠肝脏损伤及其机制
目的:研究寒冷应激对大鼠肝脏损伤的诱导作用及其分子机制.方法:将雄性SD大鼠置于(-15±1)℃自动控温低温实验舱内每日进行冷暴露6 h,按照寒冷应激暴露时间的不同分为1,3,5,7,10,14 d组.取各组大鼠肝脏组织石蜡切片,采用HE染色观察不同寒冷暴露时间下对大鼠肝脏的损伤程度.采用Western Blot方法检测大鼠肝脏组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号分子的表达及磷酸化水平.结果:寒冷应激对大鼠肝脏可产生明显的损伤作用,冷应激7 d时肝脏损伤有暂时性恢复,但随后再次加重.寒冷应激后肝组织JNK1/2(P-JNK1/2)磷酸化水平显著增高,而且这种增高与肝组织细胞损伤程度存在显著的相关性,但ERK1/2的表达及磷酸化水平没有明显的改变.结论:寒冷应激可以引起大鼠肝脏的损伤,肝脏组织JNK1/2的磷酸化水平的增高可能是其重要分子机制之一.
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MAPK通路在G蛋白偶联受体40介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在G蛋白偶联受体40(GPR40)介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用.方法:利用小RNA干扰(siRNA)技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察对细胞脂性凋亡(棕榈酸、油酸干预)的影响.采用Hoechst33342染色、TUNNEL及流式细胞仪检测细胞凋亡.Western Blot检测棕榈酸、油酸孵育NIT-1细胞各时间点及GPR40 siRNA转染NIT-1细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平.并予相应激酶阻断剂预处理后观察细胞脂性凋亡变化.结果:棕榈酸孵育后空转组,对照siRNA转染和GPR40 siRNA转染细胞凋亡率差异无统计学意义.予棕榈酸和油酸共孵育,GPRdO siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞;油酸孵育使ERK1/2呈时间依赖性地激活(磷酸化),ERK的特异性抑制剂预处理NIT-1细胞后,继予棕榈酸和油酸共孵育,NIT-1细胞凋亡率较对照组明显升高.油酸刺激GPR40 siRNA转染细胞的ERK磷酸化水平较空转组明显下降.结论:棕榈酸诱导NIT-1细胞脂性凋亡不依赖GPR40,而不饱和脂肪酸油酸对NIT-1细胞脂性凋亡的保护作用至少部分通过GPR40介导.其可能的假设机制为不饱和脂肪酸通过受体GPR40,激活ERK-MAPK通路,导致抗凋亡效应产生.
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MAPK级联信号通路与血管性痴呆的相关性研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联信号通路是介导细胞反应的重要信号系统,是细胞外信号从细胞表面传导到细胞内部的重要传递途径,在细胞增殖、分化、凋亡过程中发挥重要作用.血管性痴呆是脑血管病引起的获得性智能损害综合征,学习和记忆障碍是其主要表现.长时程增强(LTP)被认为是与学习、记忆密切相关的神经突触可塑性的生物学基础.MAPK的上游调节物质和下游作用分子在神经元中广泛存在,MAPK级联信号通路通过磷酸化神经元参与LTP诱导与维持的多种受体和酶,影响神经突触可塑性.因此,MAPK级联信号通路可能从分子水平上参与了血管性痴呆的发病机制.
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p38 MAPK介导炎症在糖尿病肾病中作用研究进展
糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,是导致慢性肾衰的主要病因,p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK) 是MAPK信号通路中重要的信号转导分子,是细胞信号传递的交汇点或共同通路,p38 MAPK信号转导通路可通过调节炎性因子的表达,活化环腺苷酸反应原件结合蛋白等转录因子,加重肾脏的炎症和纤维化进程,从而加速糖尿病肾病进程,以p38 MAPK为治疗靶点研制出来的p38 MAPK 抑制剂有望成为治疗DN的新型药物制剂.
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沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡机制的研究进展
沙眼衣原体是一类具有独特发育周期的革兰阴性病原体,能够引起人类多种疾病.沙眼衣原体感染的宿主细胞能够抵抗多种凋亡刺激,并且通过抑制宿主细胞凋亡从而完成自身的复制与发育.其抗凋亡机制可能与其参与调节宿主细胞MAPK信号途径、抑制线粒体细胞色素c的释放、上调凋亡抑制蛋白IAPs和降解促凋亡蛋白等多种机制有关.新研究发现沙眼衣原体可以通过HDM2/MDM2与p53相互作用,促进p53蛋白水解,抑制细胞凋亡,从而导致持续性感染.
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三阴性乳腺癌组织中MAPK蛋白的表达及临床意义
目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达及其临床意义.方法 收集TNBC患者石蜡组织标本40例和癌旁正常乳腺石蜡组织标本20例,同时通过随机区组设计从191例non-TNBC中选取40例石蜡组织标本与TNBC组配对.采用免疫组织化学SP法检测MAPK蛋白在TNBC组织、non-TNBC组织和癌旁组织中的表达,分析MAPK表达与TNBC临床病理特征、复发转移及预后之间的关系.为明确MAPK蛋白是否为TNBC特异的预后指标,进一步比较其表达在TNBC与non-TNBC患者复发转移及预后方面的差异.结果 40例TNBC组织中MAPK阳性表达率(45.0％)明显高于癌旁组织(15.0％),差异有统计学意义(P＜0.05);但与non-TNBC(阳性表达率45.0％)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).MAPK在TNBC组织中的表达与患者年龄、月经状况、肿瘤家族史、民族、病理类型及分级、肿瘤大小、腋淋巴结转移、临床分期均无相关性(P＞0.05),而与复发转移(复发转移组阳性表达68.4％,无复发转移组23.80％)有相关性(P＜0.05).MAPK阴性表达组5年总生存率(77.3％)明显高于阳性表达组(44.4％),差异有统计学意义(P＜0.05).Logistic多因素分析,MAPK的表达与TNM分期同样是TNBC患者预后的独立危险因素(P＜0.05),但与non-TNBC患者比较MAPK表达在复发转移及5年生存率方面,2组差异并无统计学意义(其复发转移组阳性表达率在TNBC与non-TNBC组分别为52.0％和48.0％,5年生存率分别为44.4％和38.9％ (P ＞0.05).结论 MAPK可能参与了乳腺癌的发生发展,有可能成为TNBC预后不良的非特异性指标.
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COMMD7基因通过细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖的研究
目的 采用RNA干扰沉默COMMD7基因,观察人肝癌细胞HepG2的变化,探讨其相关作用机制.方法 设计COMMD7基因的干扰RNA片段(shRNA),构建COMMD7-shRNA质粒.将肝癌细胞HepG2分为3组:空白组不做转染,control-shRNA组转染空载体,COMMD7-shRNA组转染阳性载体.转染结束后在荧光显微镜下观察细胞形态.采用Western blot检测COMMD7蛋白的表达.采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡.采用Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的下游分子ERK1/2和MEK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平.符合正态分布的计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 荧光显微镜下转染成功的细胞为椭圆形或梭形,呈绿色荧光.Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中COMMD7蛋白的相对表达量分别为0.90±0.18、1.03±0.05和0.23 ±0.03,3组比较,差异有统计学意义(F=152.08,P＜0.05);COMMD7-shRNA组COMMD7蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=20.74,21.16,P＜0.05).CCK-8检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力分别为1.193±0.024、1.225±0.034和1.147 ±0.021,3组比较,差异有统计学意义(F=6.90,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=3.53,3.69,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率分别为6.1％±0.3％、7.8％±0.5％和20.9％±1.4％,3组比较,差异有统计学意义(F=270.80,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率高于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=21.77,19.36,P＜0.05).Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量分别为0.932±0.046、0.945±0.017和0.553±0.052,磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量分别为0.452±0.031、0.468±0.027和0.263±0.022,3组比较,差异均有统计学意义(F =93.61,49.16,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=11.94,12.17,P＜0.05);磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量也低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=9.33,8.65,P＜0.05).结论 COMMD7基因可通过活化ERK/MAPK信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖,其作用机制可能是促进了ERK/MAPK信号通路中ERK1/2、MEK1/2的磷酸化.
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阿伦膦酸钠对去势大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响
目的 探讨阿伦膦酸钠(Alendronate,Aln)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,并阐明丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在该过程中的作用. 方法 BMSCs取自9个月龄去势SD大鼠,分别暴露于0.01,0.1,1,10 μmol/L Aln.成脂诱导2周后进行油红O染色和镜下计数分析,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(PPARγ2)表达;使用MAPK通路特异性抑制剂并诱导2周后再观察PPARγ2表达情况,Western blot观察Aln对MAPK通路表达的影响. 结果 BMSCs成脂诱导2周后,油红O染色阳性细胞数随着药物浓度的增高而显著减少(P<0.01).PPARγ2表达随着药物浓度的增高而显著降低.分别使用ERK1/2、JNK抑制剂PD98059和SP600125并诱导2周后,PPARγ2表达上调;使用p38抑制剂SB203580并诱导2周后,PPARγ2表达下调.Western blot结果显示,Aln在5,15,30 min时上调P-ERK1/2和P-JNK的表达,分别使用抑制剂后,表达下调. 结论 Aln通过激活ERK1/2和JNK信号通路,而不是p38,发挥抑制去势大鼠来源的BMSCs成脂分化作用,其效应具有浓度依赖性.
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丝裂原活化蛋白激酶对大鼠成骨细胞TRPV6表达的影响
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶对大鼠成骨细胞瞬时性受体电位香草精受体6(transient receptor poten-tial vanilloid receptor 6,TRPV6)表达的影响.方法 采用Wistar大鼠乳鼠,连续酶消化法提取成骨细胞并培养.根据组织形态学、改良Kaplow氏成骨细胞碱性磷酸酶染色、矿化结节茜素红染等方法进行鉴定.实验分组:a)正常对照组;b)PD组(PD98059 5 μmol/L;PD98059 10μmol/L;PD98059 20 μmol/L);c)SB组(SB203580 5μmol/L;SB20358010 μmol/L;SB203580 20μmol/L);d)PD+SB组(PD98059 5 μmol/L+SB203580 5/μmol/L;PD98059 10 μmol/L+SB203580 10 μmol/L;PD98059 20 μmol/L+SB203580 20 μmol/L).细胞计数法、MTT法检测细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞TRPV6 mRNA.所得数据用x±s表示,采用t检验进行统计学分析.结果 随着PD98059和/或SB203580浓度的增加,细胞增殖活性有下降的趋势,二者联合作用时细胞活性低于二者单独作用.细胞计数法检测显示,PD98059与SB203580联合作用时,三种组合中细胞数均显著低于空白对照组,P<0.01;同时也明显低于二者单独作用组细胞数量.碱性磷酸酶染色显示,联合用药组较单独用药细胞数明显减少,细胞体积变小,突起狭长,ALP染色阳性颗粒减少,随药物作用浓度增加上述变化更加显著.茜素红染色显示,钙结节与对照组比较数量少、体积小;10、20μmol/L联合作用组,细胞数减少更加明显,无钙结节形成.SB203580与PD98059二者联合应用显著抑制TR-PV6 mRNA的表达,5 mmol/L联合作用组即可明显抑制,随着作用浓度增加TRPV6 mRNA的表达量逐渐减少.结论 p44/42途径阻断剂PD98059能抑制成骨细胞增殖,明显降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达,减少钙结节形成.p38途径阻断剂SB203580能抑制成骨细胞增殖,明显降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达,减少钙结节形成.PD98059与SB203580在抑制成骨细胞增殖、降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达、减少钙结节形成的作用方面存在协同作用.
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钠氢交换蛋白1抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用及其机制
目的 观察钠氢交换蛋白I(NHE1)抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用,并初步探讨其可能机制. 方法 取SD大鼠90只,按照随机数字表法分为对照组、单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组,每组30只.单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组大鼠背部建立20％ TBSAⅢ度烫伤(下称烧伤)模型后,背部创面中心注射2×105 CFU/mL的铜绿假单胞菌ATCC 27853菌液50 μL.烧伤脓毒症模型建立成功后,NHE1抑制剂组大鼠迅速腹腔注射0.1 mmol/L NHE1抑制剂卡立泊来德0.4 mg/kg,单纯脓毒症组大鼠注射同体积的生理盐水.对照组大鼠除不制作烧伤创面和接种细菌外,其余操作与单纯脓毒症组大鼠相同.烧伤脓毒症大鼠在伤后12 h剖腹,于回肠远端注射0.1 mol/L异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖200 mL,30 min后左心室采血,切取回肠末端组织.荧光分光光度计检测大鼠血清FITC-葡聚糖含量(样本数为10),HE染色观察肠道组织形态(样本数为10),ELISA法检测血清和肠道组织IL-6和TNF-α含量(样本数均为20),比色法检测血清和肠道组织髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为20),蛋白质印迹法检测肠道组织NF-κB-p65蛋白表达及MAPK信号通路相关蛋白p38MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)以及c-Jun氨基末端激酶1/2(JNKl/2)磷酸化水平(样本数为4).对照组大鼠于相同时相点同前采集标本进行相关检测.对数据行单因素方差分析、SNK检验. 结果 (1)单纯脓毒症组大鼠血清FITC-葡聚糖含量较对照组明显升高(P＜0.01),NHE1抑制剂组大鼠血清FITC-葡聚糖含量则较单纯脓毒症组显著降低(P＜0.01).与对照组比较,单纯脓毒症组大鼠肠黏膜可见大量炎性细胞浸润、黏膜溃疡以及黏膜坏死;NHE1抑制剂组大鼠肠道损伤情况较单纯脓毒症组有显著好转.(2)单纯脓毒症组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(387±42)、(164.7±10.1)ng/mL及(7.5±1.5)U/mL,显著高于对照组的(75±17)、(13.1 ±6.5)ng/mL和(2.3±0.7) U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(176±37)、(64.9±9.3) ng/mL和(5.9±0.8) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(3)单纯脓毒症组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(190±13)、(172.8±29.7) ng/mL及(8.7±1.5)U/mL,显著高于对照组的(20±3)、(11.9±2.3)ng/mL和(2.9±0.3)U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(35±6)、(45.2 ±6.1)ng/mL和(5.3±0.6) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(4)单纯脓毒症组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平显著高于对照组(P值均小于0.01),NHE1抑制剂组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK磷酸化水平明显低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01),3组大鼠肠道组织JNK1/2磷酸化水平无明显差异(P值均大于0.05). 结论 抑制NHE1可显著减轻烧伤脓毒症诱导的大鼠肠道损伤,其机制可能为通过调控NF-κB及p38MAPK信号通路,抑制肠道炎症反应.
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胸部爆炸伤后原发和继发性肺损伤机制研究
目的 研究原发损伤和继发因素在胸部爆炸伤后肺损伤中的作用.方法 运用已建立的家兔胸部爆炸伤模型,检测伤后肺功能改变,观察肺损伤伤情,检测支气管肺泡灌洗液IL-6、IL-8和TNF-α含量.应用原位杂交方法检测肺组织NFκBP65和P38MAPK mRNA的表达,并与伤后肺损伤程度、细胞因子改变进行相关性分析.结果 胸部爆炸伤后,100%家兔发生肺冲击伤,60.0%为极重度/重度伤,56.7%出现肺脏破片伤,周围肺组织可见明显撕裂、出血,胸部X线表现为两肺纹理增粗、模糊,伤后早期即出现呼吸频率明显增加,PaO2、P(A-a)O2、SaO2均明显下降,肺含水量增加.随伤后时间的延长,PaO2和SaO2进行性降低,P(A-a)O2及肺含水量进行性升高.伤后IL-6、IL-8和TNF-α含量均有不同程度的升高(P＜0.05或P＜0.01),各时相点组肺组织NFκBP65、P38MAPK mRNA均有阳性表达,NFκBP65、P38MAPK mRNA表达情况与PaO2、P(A-a)O2、IL-6和TNFα水平呈正相关(P＜0.05).结论 胸部爆炸伤时的冲击波和高能破片可致肺原发损伤,同时增加肺组织内P38 MAPK和NFκB P65的表达,促进炎性介质IL-6、IL8和TNFα的生成,加重胸部爆炸伤后继发肺功能损害.
