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转化生长因子-β介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路在上皮-间质转化过程中的影响
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一个细胞重新编程的过程,在此过程中细胞失去上皮形态,获得以纺锤形为特征的间质形态,运动性和侵袭能力增强.转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号在EMT过程中发挥着重要的作用.同时,中医药在良性肿瘤恶性转化以及器官纤维化的EMT过程中发挥着很大的作用,但中医药治疗尚处于探索阶段,临床研究目前尚缺乏严谨的设计,检测指标没有统一的标准,阳性对照物较少,研究结果没有说服力,不能更好地向国际医学界推广.这就要求我们在中医药研究过程中更注重科学性,以器官、细胞、分子、基因等作为靶点结合信号通路,充分发挥中医药的特色优势.
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氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及丝裂原活化蛋白激酶-p38信号通路的影响
目的 探讨氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及海马内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、磷酸化p38(p-p38)和p38表达的影响,为抑郁症的分子病理学机制提供线索.方法 40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只.抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性刺激(CUMS)制备抑郁症模型,第5～8周生理盐水组和氟西汀组大鼠分别给予生理盐水和氟西汀灌胃.正常组大鼠不给予任何干预措施.分别于造模前、造模后及干预后评估4组大鼠的行为学变化;后1次行为学评估后,取大鼠海马组织,采用Western blot法检测海马组织中MKP-1、p-p38和p38蛋白表达,并计算p-p38与p38蛋白表达的比值(p-p38/p38).结果 造模前4组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P＜0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P＜0.05),强迫游泳不动时间增加(P＜0.05).造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P＜0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P＜0.05),强迫游泳不动时间增加(P＜0.05).与抑郁症组和生理盐水组比较,干预后氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数升高(P＜0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数增加(P＜0.05),强迫游泳不动时间缩短(P＜0.05).抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达显著高于正常组(P＜0.05),氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1表达显著低于抑郁症组和生理盐水组(P＜0.05),抑郁症组与生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P＞0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).4组大鼠海马组织中p-p38、p38蛋白表达及p-p38/p38比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 MKP-1可能与抑郁症的发病机制有关,MKP-1在抑郁症的发病机制中可能不是通过p38信号通路起作用.氟西汀可能通过下调MKP-1表达而发挥治疗抑郁症的作用.
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丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用
目的 研究丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用.方法 以Annexin Ⅴ异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,以Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及c-Jun N末端激酶(JNK)等蛋白的表达.结果 随着α-毒素作用时间的延长,磷酸化-p38 MAPK和JNK1/2等蛋白的表达逐渐增高,而磷酸化-ERK1/2蛋白的表达不变.用SB203580和SP600125阻断p38 MAPK和JNK1/2后,单核细胞凋亡率明显降低,分别为(17.7±1.8)％和(15.3±1.6)％,与感染60 min时(35.7±3.6)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MAPK信号通路的成员p38 MAPK和JNK1/2在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用.
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二烯丙基二硫化物诱导人肺癌细胞凋亡机制
目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制. 方法用MTT法检测DADS处理24 h后 H1299细胞活性;用蛋白质印迹法测定H1299细胞内磷酸化-p42/44 MAPK的表达.结果 与对照组相比,DADS呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;蛋白质印迹法分析显示,DADS可激活p42/44 MAPK,且磷酸化-p42/44 MAPK的表达呈浓度依赖性增加.结论 DADS能诱导H1299人非小细胞性肺癌细胞发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性诱导磷酸化-p42/44 MAPK表达.
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黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶和白细胞介素-4表达的影响
目的 探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)和白细胞介素-4(IL -4)表达的变化以及黄芪注射液对其影响.方法 应用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入刺激复制大鼠哮喘模型.随机分成3组:正常对照组,哮喘模型组和黄芪干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT - PCR)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液( BALF)中IL -4含量、肺组织IL -4 mRNA和磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果 哮喘模型组大鼠肺组织中IL -4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平及BALF中IL-4含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P＜0.01)；黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与IL -4 mRNA表达、IL -4含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.71,0.73,0.65,P＜0.01).结论 p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达和炎症介质IL -4产生有关.
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p38MAPK信号转导通路在椎间盘退变中的作用
椎间盘退变(Intervertebral Disc Degeneration,IDD)是引起椎间盘突出症、椎管狭窄症等脊柱退行性疾病的主要原因,研究发现引起椎间盘退变的的原因主要包括髓核细胞的凋亡、炎性反应、基质裂解酶的释放等.
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丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK/ERK信号通路促进肝癌细胞增殖
目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码蛋白E1的生物学功能.方法 分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的腺病毒载体Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT-PCR方法在转录水平鉴定HCV E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的表达,用Western 印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达.腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能明显的蛋白.将筛选到的Ad-E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT-PCR检测c-Myc、cyclinD1、c-Jun、c-Fos基因的表达.结果 成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的高滴度腺病毒Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b,并且通过RT-PCR方法在转录水平鉴定了目的 基因的表达,Western 印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蛋白的表达.通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad-E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞 34.38 %处于S期,明显高于Ad-GFP(27.32 %)(P＜0.05)对照组;Ad-E1感染组p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK/ERK下游基因转录水平上调.结论 体外过表达HCV E1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK/ERK信号通路的活化相关.
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人类ZAKβ与YWHAZ蛋白相互作用的初步研究
目的 研究ZAKβ与 YWHAZ蛋白之间的相互作用.方法 以ZAKβ为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人类肝脏cDNA文库,经GST Pull-down、免疫共沉淀和细胞共定位实验分别验证ZAKβ与猎物蛋白在体外和细胞内的相互作用,构建ZAKβ的截短体以确定相互作用的区域,用磷酸化抗体检测ZAKβ在相互作用中的磷酸化作用,并通过流式细胞仪检测这对蛋白相互作用对细胞周期的影响.结果 利用酵母双杂交筛选到一个能与ZAKβ相互作用的蛋白YWHAZ,并在体外和细胞内都验证了这二者的相互作用,发现这两个蛋白都能共定位于293 T细胞的胞质中,确定了ZAKβ的N端1～250氨基酸为与YWHAZ蛋白相互作用的区域.体外实验发现了这二者的相互作用涉及到磷酸化反应,发现这对蛋白的相互作用能提高293T细胞的G2期水平.结论 首次发现并证实了ZAKβ和 YWHAZ之间的相互作用,发现该相互作用涉及到磷酸化过程并能够对细胞周期产生影响.
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MAPK抑制剂在高浓度葡萄糖介导大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用
目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 抑制剂在高浓度葡萄糖(HG)介导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖反应中的作用及其可能的调控机制.方法:将HG处理的血管平滑肌细胞给予MAPK特异性抑制剂PD098059预处理,通过测定3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率,观察其对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响.结果:HG (25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率明显增高;这种作用可被MAPK特异性抑制剂PD098059所抑制.结论:MAPK激活在HG致平滑肌细胞增殖反应中具有明显促进作用,但这种作用可被 MAPK信号途径的特异性抑制剂所抑制.
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MAPK信号转导在糖尿病肾病免疫机制中作用的研究进展
越来越多的研究结果表明2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)的发生与自身免疫机制有关,糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy , DN)发病的免疫机制研究已成为T2DM研究的重点课题之一.丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)家族作为免疫家族中的一员,是DN不同信号通路的交汇点,在其信号转导中扮演重要角色.本文就其目前研究进展综述如下.
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亚高温热疗联合多西紫杉醇对人乳腺癌细胞增殖的影响
目的 观察亚高温热疗联合多西紫杉醇化疗是否具有协同抗肿瘤效应,并探讨其作用机制.方法 首先采用MTT法观察多西紫杉醇对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响,并筛选出有效浓度.将体外培养的MCF-7细胞分为空白对照组、多西紫杉醇组及热疗+多西紫杉醇组,热疗+多西紫杉醇组又根据热疗温度(包括39.0℃、39.5℃、40.0℃、40.5℃、41.0℃)不同细分为5个亚组.各组MCF-7细胞分别经相应干预后,利用流式细胞仪检测上述各组细胞凋亡情况及对细胞生长周期的影响.采用Western blotting技术检测各组细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白、凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白、热休克蛋白70(HSP-70)及多药耐药基因(MDR)产物P糖蛋白(P-gp)表达情况.结果 热疗联合多西紫杉醇干预可促进MCF-7细胞凋亡增加,如41.0℃热疗+多西紫杉醇组凋亡率[(37.12±6.73)％]显著高于多西紫杉醇组凋亡率[(19.16±3.42)％];热疗联合多西紫杉醇干预可诱导MCF-7细胞生长周期停滞在G2/M期,如41.0℃热疗+多西紫杉醇组G2/M期细胞比例[(38.18±4.72)％]显著高于多西紫杉醇组[(26.63±4.08)％].热疗+多西紫杉醇组MAPK通路蛋白表达较多西紫杉醇组显著增强,Bcl-2蛋白表达则明显降低,而Bax蛋白表达有轻微升高.热疗+多西紫杉醇组细胞热休克蛋白70(HSP-70)、P-gp蛋白表达均较多西紫杉醇组明显增强.结论 亚高温热疗联合多西紫杉醇干预能抑制人乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有协同抗肿瘤效应,其治疗机制可能与激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38蛋白有关,另外亚高温热疗联合多西紫杉醇干预能增强MCF-7细胞HSP-70及P-gp蛋白表达,这可能会导致肿瘤细胞化疗耐药性产生.
关键词： 亚高温热疗 多西紫杉醇 人乳腺癌细胞株MCF-7 丝裂原活化蛋白激酶 凋亡 -
辛伐他汀调控DAC-PKC及MAPK信号通路改善2型糖尿病肾病患者肾功能的研究
目的 探讨辛伐他汀对2型糖尿病肾病患者磷脂肌醇信号途径/二酰甘油(protein kinaseC/diacylglycerol,DAG/PKC)信号通路及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响.方法 选择2010年6月到2014年12月在黄石市中心医院住院、并且经肾活检确诊为2型糖尿病肾病的16例患者,住院后给予辛伐他汀治疗3个月,随后抽取患者血液15ml,用全自动生化仪检测肾功能,相关试剂盒检测血脂、白细胞介素1α(interleukin-1α,IL-1α)、IL-6、IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factors α,TNF-α)等,比较治疗前后DAG/PKC信号通路以及MAPK信号通路相关酶蛋白表达.结果 16例患者血尿素氮、血肌酐以及血尿酸三个指标治疗后较治疗前明显降低(P＜0.05),肌酐清除率治疗后明显高于治疗前(P＜0.05),总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇三个指标治疗后明显低于治疗前(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇含量治疗后明显高于治疗前;炎性因子IL-1α、Ⅱ-1β、IL-6以及TNF-a治疗后明显低于治疗前(P＜0.05);PKC-η及PKC-ζ蛋白及mRNA表达,治疗后明显低于治疗前(P＜0.05);MAPK、MKK以及MAKK蛋白和mRNA表达,治疗后明显低于治疗前(P＜0.05).结论 辛伐他汀可明显改善2型糖尿病肾病患者肾功能,其机制可能是通过调控DAC-PKC及MAPK信号通路改善肾功能.
关键词： 辛伐他汀 磷脂肌醇信号途径/二酰甘油 丝裂原活化蛋白激酶 糖尿病肾病 -
扩张型心肌病患者合并恶病质后TLR4/JNK MAPK信号转导通路的变化
目的:探讨TOLL样受体4/c-Jun氨基末端激酶、丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(TLR4/JNKMAPK信号转导通路)是否参与扩张型心肌病(扩心病)后恶病质的发生.方法:入选2013-2015年就诊于包头医学院第一附属医院,确诊为扩张型心肌病,心功能Ⅱ～Ⅳ级(NYHA分级)患者60例.根据6个月体重下降是否＞6％分为心力衰竭(心衰)恶病质(cCHF)组(36例)和心衰非恶病质(ncCHF)组(24例).另入选年龄、性别匹配的健康体检者24例为对照组.于入院第2天清晨,采集空腹静脉血2 ml,离心后取上层血清,酶联免疫吸附法(ELISA法)测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)1、IL-6浓度及TLR4和JNK蛋白含量;另于入院第2天清晨采集恶病质患者静脉血4ml,分离单个核细胞并培养4h,根据是否在培养基中加入JNK特异性抑制剂SP600125分为抑制剂组和无抑制剂组,后者加入等剂量的二甲基亚砜,实时定量PCR法测两组TNF-α、IL-1、IL-6 mRNA的相对表达量.结果:①TNF-α、IL-1和IL-6浓度:cCHF组显著高于ncCHF组和对照组(P＜0.05),且ncCHF组高于对照组(P＜0.05).②TLR4和JNK蛋白含量:cCHF组显著高于ncCHF组和对照组(P＜0.05),且ncCHF组高于对照组(P＜0.05).③TNF-d、IL-1、IL-6 mRNA的相对表达量:抑制剂组TNF-α、IL-1、IL-6mRNA的相对表达量较无抑制剂组降低(P＜0.05).结论:扩心病合并恶病质患者体内TNF-α、IL-1和IL-6浓度升高,TLR4/JNK MAPK信号转导通路可通过影响TNF-α、IL-1和IL-6的转录来参与心衰恶病质的发生.
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熊果酸对高血压大鼠心肌纤维化及p38活化的影响
目的:观察熊果酸(UA)对高血压大鼠心肌纤维化的影响.方法:行腹主动脉结扎构建高血压大鼠心肌纤维化模型,实验大鼠分为假手术组、模型组、UA低、中、高剂量组[分别为10 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)],每日灌胃给药1次.干预2个月后,测定血压、心脏重量指数(HMI)、左室重量指数(LVMI)、心功能指数、心肌细胞横径、Ⅰ型胶原蛋白表达和胶原体积分数.免疫印迹法测定p38磷酸化.免疫沉淀法测定p38活性.结果:UA能显著降低模型组心肌p38磷酸化及活性,下调血压、CHMI、LVMI、心肌细胞横径、Ⅰ型胶原蛋白表达和胶原体积分数,抑制心肌纤维化导致的心功能下降.结论:UA能抑制高血压大鼠心肌纤维化,抑制p38活化是其机制之一.
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甘草酸抗小鼠心肌肥厚及其可能机制的研究
目的 研究甘草酸对压力超负荷诱导的心肌肥厚的作用及其机制.方法 将40只C57BL/6小鼠随机分成假手术+生理盐水组、假手术+甘草酸组、手术+生理盐水组和手术+甘草酸组,每组10只.通过主动脉缩窄术诱导小鼠心肌肥厚,术后分别给以连续4 w生理盐水或甘草酸灌胃治疗.采用超声检测评价小鼠心功能,HE染色和天狼星红染色等组织病理学方法评价心肌肥厚及纤维化程度,Western Blot检测磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和MAPK总蛋白.结果 主动脉缩窄术4 w后,手术+甘草酸组小鼠的心功能相关指标较手术+生理盐水组明显改善,心肌肥厚和纤维化相关组织病理学指标也明显降低,且细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平明显降低.而假手术+生理盐水组与假手术+甘草酸组之间上述各指标均无明显差异.结论 甘草酸具有抗压力超负荷诱导的心肌肥厚和纤维化,其机理可能与抑制ERK1/2信号通路有关.
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和络舒肝胶囊对大鼠肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶的影响
目的:研究激活的肝星状细胞(HSC)丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路中ERK、JNK的活化情况,并探讨和络舒肝胶囊抗肝纤维化的作用机制.方法:用SD大鼠制备肝纤维化模型.造模成功后,药物组大鼠以每天1g/kg的和络舒肝胶囊,分两次灌胃;对照组大鼠灌以等体积生理盐水.连续灌胃30天后,下腔静脉取血离心并分离血清.采用盲法,用上述10%药物血清培养活化的HSCs 24小时后,用Western blot方法检测各组HSCs磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)蛋白表达水平.结果:肝纤维化大鼠经和络舒肝胶囊药物血清干预后(D组),P-ERK、P-JNK蛋白表达水平较肝纤维化模型组(C组)显著降低(P＜0.05);正常大鼠经和络舒肝胶囊药物血清干预后(B组)P-ERK、J-JNK蛋白表达水平与正常大鼠对照组(A组)相比也显著减少(P＜0.05).结论:和络舒肝胶囊通过对活化的HSCs P-ERK和P-JNK表达的影响,阻断MAPK信号通路,抑制HSC分裂和增殖,可能是其抗肝纤维化的重要途径之一.
关键词： 和络舒肝胶囊/药理作用 肝星状细胞 丝裂原活化蛋白激酶 大鼠 -
盐酸戊乙奎醚抑制脂多糖诱导血管内皮细胞表达细胞间黏附分子-1及其机制
目的 探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)抑制脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子(ICAM-1)及其作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株EVC-304,分别用LPS、PHC和LPS+ PHC联合处理.Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ICAM-1的表达;Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的激活；通过抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路后,检测对ICAM-1表达的影响.结果 LPS可以诱导人脐静脉内皮细胞中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)表达增加113％ (P ＜0.05),ICAM-1 mRNA表达增加105％,蛋白表达增加83％(P＜0.05)；联合应用PHC后,LPS诱导的p-p38MAPK表达增加下降36％(P＜0.05);ICAM-1 mRNA表达增加下降40％,蛋白表达增加下降31％(P＜0.05).通过SB203580阻断p38MAPK信号通路后,LPS诱导的ICAM-1 mRNA表达增加下降49％,蛋白表达增加下降39％(P＜0.05).结论 LPS可以诱导血管内皮细胞表达黏附分子ICAM-1,PHC可以抑制这种LPS诱导的ICAM-1表达,PHC可能通过抑制p38MAPK信号通路的激活,从而抑制其下游细胞间黏附分子ICAM-1表达.
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丝裂原活化蛋白激酶信号通路在肝细胞生长因子促进人结肠癌细胞增殖移行中的作用
目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肝细胞生长因子(HGF)促进人结肠癌细胞SW620增殖、移行中的作用.方法 在细胞培养液中加入MAPK通路中丝裂原细胞外激酶(MEK1/2)的拮抗剂U0126(终质量浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L),之后加入终质量浓度为20 μg/L的HGF.用噻唑蓝(MTT)比色法检测SW620细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕试验检测移行.二甲基亚砜(DMSO)组加终质量浓度为0.1％体积浓度的DMSO,加入同体积的培养液作为对照组.结果 (1) U0126与20 μg/L HGF共同作用SW620细胞48 h后,低浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)U0126组、DMSO组与对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),当U0126浓度≥4.0μmol/L时能抑制HGF促SW620增殖,但未表现出浓度依赖性.4.0、8.0 μmol/LU0126组增殖抑制率分别为24.6％和28.4％ (P ＜0.05).(2)2.0、4.0、8.0 μmol/L U0126组G1期细胞数增多,而S期细胞数减少,3组的增殖指数(32.32±6.64、23.87±4.88、20.28±5.22)均低于对照组,P＜0.05),且4.0、8.0μmol/L U0126组与2.0 μmol/L组差异有统计学意义(P＜0.05).(3)加入U0126 24 h后,仅8.0μmol/L组SW620细胞移行受到明显抑制,抑制率为60.9％(P＜0.05),DMSO组、4.0mol/L U0126组与对照组移行距离差异无统计学意义(P ＞0.05)；48、72 h后,8.0 μmol/L和4.0μmol/L U0126组细胞移行均受到抑制(P＜0.05),48 h抑制率分别为46.5％、61.8％,72 h抑制率分别为44.2％、54.3％,但8.0μmol/L组与4μmol/L组细胞移行距离差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK信号通路参与了HGF促人结肠癌细胞SW620增殖和移行的作用.
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ERK1/2-核因子-κB通路介导乙型肝炎病毒x蛋白抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-α表达
目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α的抑制作用,并探讨其中的内在机制.方法 培养人肝癌细胞系HepG2,转染HBx表达质粒,Western blot方法检测PPAR-α、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK,ERK1/2)和IκB蛋白的变化,凝胶迁移率实验检测核转录因子(NF)-κB蛋白的活性改变,分别加入MAPK和NF-κB特异性的抑制剂PD98059与吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),观察PPAR-α蛋白的变化.结果 (1)HBx质粒转染HepG2后,与对照组相比,ERK2表达增加,NF-κB被激活,PPAR-α的表达下调;(2)阻断NF-κB后,NF-κB的活性下降,PPAR-α的表达增加;(3)阻断MAPK后,转染HBx表达质粒,NF-κB的活性下降,PPAR-α的表达增加.结论 HBx抑制细胞核转录因子PPAR-α的表达,可能与ERK1/2-NF-κB激活有关.
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脊髓缺血再灌注损伤中MAPK/ERK、MAPK/JNK和MAPK/p38信号通路的活化
脊髓缺血再灌注损伤是脊柱手术中常见并发症之一,目前对其具体损伤机制尚不明确.丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联是细胞内重要的信号转导系统之一,参与细胞生长、发育、分化和凋亡等过程.
