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丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用
目的:研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据.方法:选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平.选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+ SP600125组、LDM+ SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况.结果:细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组(P＜0.05)；各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显；但LDM+ SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低(P＜0.05),而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强(P＜0.05).结论:LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡.
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丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在动脉粥样硬化中的意义
动脉粥样硬化是多种心脑血管疾病共同的主要病理基础,严重危害人类的健康.尽管目前AS的发病机制尚不完全清楚,但一般认为其发病的机制与氧化应激、炎性反应、剪切力、高糖等相关,其中炎性反应和氧化应激在AS病变进展中是两个重要的因素.研究表明,MAPKs信号转导通路在细胞内具有生物进化的高度保守性,在低等原核细胞和高等哺乳类细胞内,目前均已发现存在着多条并行的MAPKs信号通路,不同的细胞外刺激可使用不同的MAPKs信号通路,通过其相互调控而介导不同的细胞生物学反应.那么MAPK信号通路与AS是否存在相应的关系,而在AS中又起到什么样的作用与意义,本文就JAK-STAT信号通道在动脉粥样硬化中的研究进展做一个简单综述.
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重组人白介素-12对辐射损伤脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STATS、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶表达的影响
目的 探讨重组人白介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)对辐射损伤新生儿脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STAT5、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)表达的影响.方法 收集16份新生儿脐带血,分离单个核细胞,经终浓度分别为0.01、0.1和1 ng/ml的rhIL-12处理24 h后,用直线加速器以4GyX射线单次照射24 h,用流式细胞仪分析CD34+造血于细胞的凋亡率;并观察CD34+造血干细胞经1 ng/ml rhIL-12体外活化15和30 min后,细胞内STAT5、STAT4和MAPK蛋白的表达水平.结果 rhIL-12对辐射损伤引起的新生儿脐带血CD34+造血干细胞凋亡具有明显的下调作用(P＜0.01),且呈剂量依赖性(P＜0.01);rhIL-12与新生儿脐带血CD34+造血干细胞共同孵育15和30 min,均可显著上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平(P＜0.01或＜0.001),下调STAT4蛋白的表达水平(P＜ 0.05或＜0.01),且均呈时间依赖性(P＜0.001或＜0.05).结论 rhIL-12对辐射损伤的新生儿脐带血造血干细胞具有抗凋亡作用,并能上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平.
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补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞MEK表达的影响
目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再障患者(CAA)骨髓单个核细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MEK)表达的影响及其作用机制.方法:采用蛋白质印迹(Western-blot)方法检测CAA患者、正常人骨髓基质细胞MEK表达水平.结果:CAA患者骨髓单个核细胞的MEK表达水平均低于正常组(P＜0.05),经补髓生血颗粒治疗后,MEK表达水平有所上升,与治疗前相比具有显著性差异(P<0.05).结论:CAA患者骨髓基质细胞MEK呈低水平表达,它有可能参与了CAA的发病机制过程;中药补髓生血颗粒可能是通过调节MEK的表达水平而促进MEK抗凋亡作用,从而影响骨髓造血信号转导调控,促进骨髓造血功能.
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MAPK通路在宫颈癌中的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路对细胞的增殖、分化、凋亡发挥着重要作用,许多研究已证明MAPK信号转导通路的异常激活与多种恶性肿瘤的增殖、侵袭、转移等都密切相关.宫颈癌是女性生殖系统较为多见的肿瘤之一,现有的治疗方法主要包括手术、放疗及化疗,但其仍存在许多不足之处.因此,本文综述了MAPK信号转导通路在宫颈癌中的研究进展,力求为宫颈癌新的治疗靶点提供新的理论基础.
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大黄素对HT-29细胞MAPKs信号通路活化及IL-8分泌的影响
目的:研究大黄素对IFN-和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的ERK、JNK和p38 MARK和IL-8表达的影响.方法:人结肠癌细胞株HT-29细胞与40 ng/mL的IFN-共培养12 h,再加入100 ng/mL LPS刺激15 min,用大黄素预处理进行干预.ELISA检测HT-29细胞内的ERK、JNK和p38 MARK含量和细胞上清IL-8含量.结果:IFN-γ和LPS刺激后HT-29细胞的ERK、YNK和p38MARK磷酸化水平和IL-8分泌明显升高.大黄素对p38和JNK磷酸化有明显的抑制作用,而对ERK磷酸化则没有明显抑制作用;大黄素能显著降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系.结论:大黄素能有效抑制IFN-γ-LPS所引起的HT-29细胞p38和JNK的磷酸化,并显著降低IL-8分泌.
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创伤患者p38MAPK活化和炎症因子表达的变化
目的 探讨不同创伤程度患者体内p38MAPK活化和炎症因子表达的变化及其意义.方法 不同创伤程度患者在创伤后6 h内和第1、3和7天分别采集外周血,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测白细胞中p38MAPK的活化(磷酸化)水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血液中TNFα和IL-6水平.结果 创伤6 h内患者血液中p38MAPK的活化水平与正常人比较显著增加且达到高峰(P<0.01),并持续活化至第7天(P<0.05);创伤患者体内的TNFα和IL-6水平也显著增强(P<0.05),且都在创伤后第1天达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降,在创伤后第7天逐渐恢复至正常水平(P>0.05);p38MAPK的活化程度及TNFα、IL-6水平都随创伤程度的增加而升高(P<0.05),p38MAPK的活化水平与TNFα、IL-6水平呈正相关(P<0.05),TNFα水平与IL-6水平也呈正相关(P<0.05).结论 创伤患者体内的p38MAPK信号通路被激活,p38MAPK活化引起炎症因子表达升高,表明p38MAPK信号通路在创伤后的炎症反应中发挥重要作用.
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p38-MAPK与脓毒症诱导的心肌功能障碍
脓毒性心肌病是脓毒症和脓毒性休克的严重并发症,多种分子机制参与了脓毒症诱导的心肌功能障碍(sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD).丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导途径是体内重要的信号转导通路.MAPK家族中的p38-MAPK参与了SIMD分子信号及凋亡机制.探讨p38-MAPK的分子结构,p38-MAPK信号转导通路的特点,以及p38-MAPK在SIMD发病机制中的作用.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶 脓毒症 信号转导 凋亡 脓毒症诱导的心肌功能障碍 -
PKC/MAPK/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达IL-1β中的作用
目的 研究PKC/MAPK/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞(peripheral blood monouclear cells, PBMCs)白细胞介素-1β(IL-1β)表达中的作用,探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础.方法 采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,分为低氧组和Chelerythrine+低氧组.Chelerythrine+低氧组于低氧前予10 μmol/L Chelerythrine预处理.然后两组细胞均于低氧条件下(3% O2, 5% CO2, 92% N2)培养0、1、3、6、9、12、24 h后,收集细胞及培养液上清,分别采用PKC、MAPK活性检测试剂盒、电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)检测PKC、MAPK、NF-κB活性及IL-1β表达量.结果 低氧1～9 h,PKC、MAPK活性,NF-κB结合活性及IL-1β表达量显著高于正常对照组(P<0.01).低氧后1～24 h,PKC、MAPK活性、NF-κB结合活性与IL-1β mRNA表达水平间呈显著正相关(P<0.01～0.05).10 μmol/L Chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、MAPK、NF-κB活性升高和IL-1β表达.结论 低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、MAPK活性及NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子IL-1β,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory dysfunction, ARDS)时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用
目的 主要从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活及失活的角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大反应中的作用.方法 培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用Western blot测定磷酸化MApK蛋白(p44MAPK、p42MAPK)表达.结果 ①AngⅡ(1μmol/L)处理24 h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量明显增加,STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量的增加.②用AngⅡ(1μmol/L)处理心肌细胞5 min,磷酸化MAPK蛋白(p44MAPK、p42MAPK)表达即开始增加,10 min左右时明显.以AngⅡ(1μmol/L)处理心肌细胞10 min,磷酸化MAPK蛋白(p44MAPK、p42MAPK)表达为标准,预先以STS(2、10、50 μmol/L)处理心肌细胞30 min,发现STS可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达.③预先以不同浓度STS处理心肌细胞30 min,发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性.结论 STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚,其机制与抑制磷酸化MAPK表达有关.
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不同碘水平对哺乳期大鼠乳腺组织摄碘丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 观察不同碘营养水平对哺乳期大鼠乳腺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激酶(mitogen extracellular kinase,MEK)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及钠碘转运体(Na+-I Symporter,NIS)的表达及血清雌二醇(estradiol,E2)水平的影响,探讨在差异性碘饮食中哺乳期乳腺MEK-ERK信号通路的摄碘机制.方法 Wistar大鼠130只(雌鼠100只、雄鼠30只),按体质量采用随机数字表法将雌鼠分为5组:①A组(低碘1组):低碘饲料(碘含量为16.15 μg/kg)+不加碘的去离子水;②B组(低碘2组):低碘饲料+碘含量为5.00 μg/L的去离子水;③C组(适碘组):普通饲料(碘含量为350.00 μg/kg)+碘含量为50.00 μg/L的去离子水;④D组(高碘1组):普通饲料+碘含量为3 000.00 μg/L的去离子水;⑤E组(高碘2组):普通饲料+碘含量为10 000.00 μg/L的去离子水.每组20只大鼠,饲养90 d后,将5组雌鼠与雄鼠合笼,交配后,将雄鼠取出,每只雌鼠单独喂养;在生育第10天,将母鼠处死,收集血液离心后获取血清,采用放射免疫法检测E2水平;取出乳腺组织,应用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测MEK、ERK及NIS mRNA和蛋白的表达.结果 哺乳期大鼠E2水平组间比较差异有统计学意义(F=12.765,P＜0.05).其中A组[(1.22±0.46)ng/L]明显高于C组[(0.77±0.38)ng/L],D组[(0.41±0.21)ng/L]、E组[(0.36±0.15)ng/L]均低于C组,差异均有统计学意义(P＜ 0.01或＜0.05).哺乳期大鼠乳腺NIS、MEK、ERK mRNA表达组间比较差异均有统计学意义(F=14.916、10.757、45.172,P均＜0.05).其中A组(0.75±0.40)、B组(0.89±0.51)NIS mRNA表达明显高于C组(0.53±0.31,P＜ 0.05或＜0.01),E组(0.30±0.24)NIS mRNA表达明显低于C组(P＜0.05);A组(1.61±0.48)、B组(1.46±0.67)MEK mRNA表达明显高于C组(0.85±0.51,P均＜0.01);A组(1.45±0.31)ERK mRNA表达明显高于C组(1.06±0.21,P＜0.01),D组(0.72±0.15)、E组(0.53±0.14)ERK mRNA表达明显低于C组(P均＜0.01).哺乳期大鼠乳腺NIS、MEK、总ERK、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达组间比较差异均有统计学意义(F=4.510、8.953、16.154、6.683,P均＜0.05).其中A组(1.67±0.97) NIS蛋白表达明显高于C组(0.87±0.43,P＜0.05);B组(1.17±0.35)MEK蛋白表达明显高于C组(0.74±0.15,P＜0.05),E组(0.54±0.12)MEK表达明显低于C组(P＜0.05);A组(1.27±0.19)总ERK蛋白表达明显高于C组(0.90±0.24,P＜0.05),E组(0.58±0.12)总ERK蛋白表达明显低于C组(P＜0.05);E组(0.55±0.19)p-ERK蛋白表达明显低于C组(0.86±0.20,P＜0.05).结论 哺乳期大鼠血清E2水平随着碘摄入水平的增加而降低,MEK、ERK的表达随之下降,进而使NIS的表达也相应下调.
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神经型尼古丁受体α3亚单位及丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达
目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位(α3nAChR)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠(NaF)处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA(0.04±0.03)和蛋白(12.0±2.5)表达明显低于对照组(1.00±0.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05).筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率(0.53±0.15)明显低于0.000 mmol/L组(1.05±0.05,P＜0.05),而其他染氟剂量组未见明显改变(P均＞0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h(188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组(t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组(154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52)和8、12、24、36、48 h对照组(133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且8、12、24、36、48 h α3nAChR沉默组明显低于对照组(t=-428、-5.02、-2.89、-8.33、-6.18,P均＜0.05).24、36、48 h对照组磷酸化p38激酶表达(120.33±4.51、122.00±7.55、119.67±7.57)明显高于0h(100.00±0.00,P均＜0.05),且高于同时间点α3nAChR沉默组(93.33±9.61、94.00±5.01、98.33±5.69,t=-4.01、-6.73、-5.59,P均＜0.05).两组细胞中总ERK1/2、总JNK、总p38激酶表达随染氟时间延长未见明显改变(P均＞ 0.05).结论 在过量氟暴露条件下,ERK1/2信号通路的激活不完全依赖于α3nAChR的表达;而JNK和p38两条通路的激活在一定程度上依赖于α3nAChR.
关键词： 神经型尼古丁受体 丝裂原活化蛋白激酶 人神经母细胞瘤细胞系 -
p38MAPK对MMPs介导的EAN模型动物免疫损伤调控的研究进展
急性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经炎即吉兰-巴雷综合征(GBS)是以周围神经和脊神经根,脱髓鞘和小血管周围淋巴细胞及巨噬细胞的炎性反应为病理特点的自身免疫性疾病,通常也会累及脑神经,主要临床表现为四肢对称性弛缓性瘫痪.
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微囊藻毒素-LR对原代大鼠肝细胞p-JNK1/2、 p-P44/42、p-P38蛋白水平的影响
[目的]研究低剂量微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)染毒原代大鼠肝细胞对细胞内磷酸化的c-jun氨基末端激酶(p-JNK1/2)、磷酸化的细胞外信号激酶(p-P44/42)、磷酸化的P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)蛋白水平的影响. [方法]采用改良胶原酶灌流法建立的原代大鼠肝细胞培养模型,以MC-LR终浓度1×10-9、1×10-10、1×10-11、1×10-12 mol/L 4个剂量染毒细胞,分别培养至3、6、12、24h4个时间点后裂解细胞获取总蛋白,用Western法检测分析丝裂原蛋白激酶家族(MAPKs)磷酸化蛋白p-JNK1/2、p-P44/42、p-P38水平. [结果]染毒原代大鼠肝细胞3、6h后p-JNK1/2、p-P44/42、p-P38蛋白表达水平随染毒剂量降低而上升,在1×10-10或1×10-11 mol/L剂量组蛋白水平达到峰值后随染毒剂量降低而蛋白水平增幅减小；染毒至12h除p-P38各剂量组蛋白水平升高外,其余目标蛋白各剂量组与对照组相比差异无统计学意义；染毒24h各目标蛋白各剂量组与对照组相比差异无统计学意义. [结论]低剂量微囊藻毒素可促进原代大鼠肝细胞p-JNK1/2、p-P44/42、p-P38水平升高且具有时间效应关系.
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中医手法对兔膝骨关节炎软骨退变及MAPK信号转导通路的影响
目的 观察中医手法对实验性兔膝骨关节炎软骨退变的干预作用,并从细胞信号转导角度探讨其作用机制.方法 24只新西兰大白兔随机分为3组,即正常组、模型组和手法组,除正常组外,其余两组动物均采用手术方法建立膝骨关节炎模型.造模4周后对手法组给予髌骨按揉、关节被动屈伸等形式的手法治疗.干预8周后处死动物,暴露膝关节行形态学观察,并取股骨髁部做病理切片,行HE染色,镜下观察其组织病理学特征并进行Mankin's评分,比较各组关节软骨退变情况.应用RT-PCR方法分别检测滑膜组织中IL-1β、iNOS、MMP-13和软骨组织中P38、ERK1/2的mRNA表达水平.应用Western blot方法检测软骨组织内MMP-13及磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达.比较各组实验数据并进行统计学分析.结果 手法组关节软骨退变程度较模型组明显减轻,Mankin's评分分值显著低于模型组(P＜0.05).手法组软骨P38、ERK1/2及滑膜组织IL-1β、iNOS、MMP-13的mRNA表达水平较模型组显著下调(P＜0.05).模型组和手法组的MMP-13、p-ERK1/2的蛋白表达较正常关节软骨明显增强,而手法组MMP-13、p-ERK1/2的蛋白活化程度与模型组比较明显受到抑制.结论 中医手法能够有效抑制膝骨关节炎的软骨退变程度,影响炎症介质和细胞因子的表达,其机制可能是通过抑制软骨MAPK信号转导通路发挥作用.
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MAPK信号通路参与调控大鼠腹腔巨噬细胞表达CRH
为了解终末巨噬细胞表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的胞内信号转导机制,明确丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔表达CRH的关系.我们利用体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-PCR及ELISA方法观察MAPK信号通路中关键激酶特异性阻断剂(PD98059、SB203580、SP600125)对LPS诱导的CRH表达的影响.结果显示,LPS促进了大鼠腹腔巨噬细胞表达CRH,MAPK三条主要信号通路中关键激酶特异性阻断剂均剂量依赖性地抑制了LPS诱导的CRH表达.因此,我们认为LPS可以促进终末巨噬细胞表达CRH,而MAPK信号通路参与了该过程.
关键词： 巨噬细胞 促肾上腺皮质激素释放激素 脂多糖 丝裂原活化蛋白激酶 -
MAPK/FOXA2介导香烟烟雾提取物对支气管上皮细胞分化的影响
目的:探讨吸烟对支气管上皮细胞分化的影响及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/叉头框转录因子 A2(FOXA2)信号通路在此过程中发挥的作用.方法:培养BEAS-2B细胞,分为空白对照组、香烟烟雾提取物(CSE)处理组、CSE+ERK抑制剂U0126处理组、CSE+JNK抑制剂SP600125处理组、CSE+p38抑制剂SB203580处理组.ELISA测定各组磷酸化的ERK1/2、JNK、p38蛋白的水平;实时荧光定量PCR检测FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的mRNA水平;用Western印迹检测FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的蛋白水平.结果:与空白对照组相比,用CSE的细胞中磷酸化的ERK1/2、JNK、p38蛋白水平明显升高(P<0.05),而FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);CSE处理同时采用ERK、JNK或 p38抑制剂处理显著改善上述基因及蛋白表达的变化(P<0.05).结论:吸烟可影响支气管上皮细胞分化,而MAPK/FOXA2信号通路在此过程中发挥重要调节作用.
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丝裂原活化蛋白激酶与核因子-κB在碳酰氯吸入性肺损伤中的作用
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶[mitogen activated protein kinases,MAPKs;包括细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、蛋白激酶p38和c-氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)]与核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在碳酰氯吸入性肺损伤中的作用及相互关系.方法:选取40只雄性Wistar大鼠,体质量220～280 g,随机分为空气对照组、碳酰氯吸入组、PD98059(ERK1/2特异性阻断剂)干预组、SB203580(p38特异性阻断剂)干预组和SP600125(JNK特异性阻断剂)干预组,每组8只.空气对照组吸入空气,碳酰氯吸入组与3个干预组均吸入相同浓度的碳酰氯(8.33 L/mg).3个干预组均在吸入碳酰氯前给予PD98059、SB203580和SP600125.HE染色后光镜下观察肺组织病理学改变;分别采用免疫组织化学法及蛋白质印迹(Western blotting)法检测各组肺组织中NF-κB p65蛋白的表达.结果:与空气对照组比较,碳酰氯吸入组出现肺损伤的典型病理学特征,SP600125和SB203580干预组肺损伤有不同程度好转.免疫组织化学法及Western blotting法结果显示,与空气对照组比较,碳酰氯吸入组NF-κB p65蛋白表达明显增强(P＜0.01);与碳酰氯吸入组比较,SP600125干预组、SB203580干预组NF-κB p65蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:碳酰氯吸入可激活MAPKs信号通路,可能通过上调NF-κB表达而发挥作用.
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MAPK信号转导通路与急性胰腺炎
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路是细胞外信号引起细胞核反应的共同通路，在应激反应、炎症、心肌肥大、缺血再灌注损伤、免疫调控等领域发挥着极其重要的作用。本文简要介绍MAPK信号转导通路的组成、生物学效应及其在急性胰腺炎发病机制中的作用，旨在为急性胰腺炎的防治研究提供新的思路。
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泡球蚴囊液对大鼠肝星状细胞MAPK信号通路5个相关基因的影响
目的 探讨泡球蚴囊液对大鼠肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路5个相关基因的影响. 方法 采用大鼠肝星状细胞株HSC-T6与不同蛋白浓度的泡球蚴囊液(0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.9、1.7、3.4、6.8和13.5 mg/ml)共培养24 h后收集细胞,同时收集对照组(未加泡球蚴囊液干预)细胞,显微镜下观察HSC-T6细胞的形态变化.利用荧光实时定量PCR检测大鼠肝星状细胞的细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和丝裂原活化蛋白激酶(p38)的表达情况. 结果 蛋白浓度为13.5 mg/ml泡球蚴囊液与HSC-T6细胞共培养24 h后,大部分细胞发生固缩,呈脱落前兆.6.8 mg/ml囊液组部分细胞固缩,呈脱落前兆;而部分HSC-T6细胞收缩,呈长梭形,细胞生长出许多细长的伪足,是正常状态的2倍以上.3.4 mg/ml囊液组部分细胞呈收缩的长梭形,生长出许多细长的伪足,但大部分细胞仍呈现为贴壁的胞体较大的不规则多边形,且伸出较短的伪足与其他细胞连接成片状.＜1.7 mg/ml囊液组与对照组细胞形态上无差异.实时荧光定量PCR检测显示,泡球蚴囊液浓度＞0.4 mg/ml时,ERK1/2、JNK1/2和p38 mRNA水平显著增加;囊液浓度为6.8 mg/ml时,ERK1/2、JNK1/2和p38 mRNA较对照组高表达(P＜0.05). 结论 浓度为6.8 mg/ml的泡球蚴囊液可显著影响大鼠肝星状细胞ERK1/2、JNK1/2和p38 mRNA水平.
