1077人接种纯化精制狂犬疫苗后抗体检测分析

1999年8月至2000年7月应用纯化精制狂犬疫苗.为了解该疫苗接种后抗体产生情况,评价免疫效果及不同人群抗体产生水平,对本市犬伤后来本站接种精制狂犬疫苗者,进行免前后血清抗体检测,现将结果报告如下.

脑膜炎球菌病的预防和控制(二)

四价脑膜炎球菌多糖疫苗疫苗组成成分MPSV4是一种目前在美国使用的四价脑膜炎球菌多糖疫苗(Menomune-A,C,Y,W-135).每剂疫苗由四种(A,C,Y,W-135)纯化细菌荚膜多糖组成(每剂50 u g).目前在美国使用的MPSV4(Menomune)分每瓶1个剂量(0.5 ml)和10个剂量(5 ml)两种;每瓶50个剂量的已不再使用.

重组人表皮生长因子的应用

表皮生长因子是50年代由Cohen和Montaleini在研究鼠神经生长因子时发现的肽生长因子.随后,在1975年由Cohen[1]和Gregory[2]各自独立地从人尿中又分离、纯化出了人表皮生长因子(CHEGF).1979年,Carpenter等报道了EGF的氨基酸组成.

三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的研究

目的研究猪苓多糖的纯化方法.方法采用三种不同型号大孔吸附树脂,以猪苓多糖含量为考察指标,研究不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的影响.结果三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖均有显著纯化作用,以AB-8型大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化效果好.结论 选用AB-8型大孔吸附树脂对猪苓多糖进行纯化.

刺五加多糖的研究现状及进展

近年来,国内外对植物多糖的研究越来越深入,逐渐发现多糖不仅具有许多方面的生物活性,而且低毒甚至无毒,成为医学界的热门研究领域.由于相关学科如分子生物学等的相互渗透,对多糖的提取分离及药理作用取得了很大进展.刺五加多糖是从刺五加的根及根茎中提取分离出的一类生物活性多糖,本文通过对刺五加多糖在提取分离、纯化、结构分析及药理作用等几方面的研究发展做一综述,为以后对多糖的更深入研究奠定基础.

连续硅胶柱色谱法快速纯化紫杉醇

采用连续中压硅胶柱色谱法纯化紫杉醇.优化的工艺条件为:以中压玻璃柱为色谱柱,120～160 μm层析硅胶为填料,1％紫杉醇负载量为2g/100g硅胶,样品二氯甲烷溶解上样,二氯甲烷:乙腈(7:3)洗脱,洗脱流速为60 mL/min.一次柱色谱过程即可得到纯度大于90％紫杉醇,回收率75％以上,甲醇:水3:1(v/v)重结晶后得纯度99％紫杉醇产品,低纯度组分作为层析原料再次纯化.使用后的层析柱用二氯甲烷:乙腈(1:1)再生,二氯甲烷平衡,平衡后的层析柱重复使用,使用5次柱分离效率仍不降低.与传统方法相比溶剂用量少、层析填料价格低、生产周期短、分离效果好,易于实现连续工业化清洁生产.

rhEPO蛋白亲和层析条件的探索

亲和层析已经广泛应用于生物分子的分离和纯化,对那些分离流程长、难度大、浓度低、杂质多,采用常规方法难以进行分离的生物分子来说,亲和层析显示出其独特的优越性.本文采用亲和层析法对含rhEPO蛋白的细胞上清液进行初步纯化,旨在探索其佳洗脱条件.

食品检测第一步检测样品前处理

实验室分析是食品安全检测的重要手段之一,而样品前处理是影响分析结果可靠性的关键环节,如何从大批样品中采集一定分量且具有代表性的样品?无论是化学分析实验还是生物检测实验,样品的分离、纯化都是必不可少的前处理步骤,样品前处理的好坏直接影响后的结果.

玉米苞叶黄酮的纯化和抗氧化活性研究

本文以探究玉米苞叶黄酮的纯化和抗氧化活性为目的,分别用AB-8大孔树脂、D101大孔树脂、聚酰胺树脂对玉米苞叶粗黄酮进行纯化.得到三种纯化黄酮后,采用总还原力法测定粗黄酮、AB-8大孔树脂纯化后黄酮、D101大孔树脂纯化后黄酮、聚酰胺纯化后黄酮的抗氧化能力,用维生素C作为阳性对照.得到结果:玉米苞叶黄酮具有一定的总还原力,且随着黄酮质量浓度和纯化效果的逐渐增加,呈良好量效关系.后得到结论:纯化后黄酮的总还原力优于粗黄酮,且聚酰胺纯化>AB-8纯化>D101纯化.

鹿血亚铁血红素肽的纯化及影响因子分析

以鹿血制备亚铁血红素肽并采用超滤法纯化，由单因素实验和三元二次回归正交组合设计优化得到佳实验方案：流速为26.5×10-3 L/min，pH为7.5，温度为20℃。优条件下得到原血中亚铁含量为175μg/mL。三个影响因子的重要性关系从大到小依次为溶液pH、流速、温度。

脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化

目的 在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质.方法 PCR扩增Hlrg Cdna编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导.表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化.结果 经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%.表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯.加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞.结论 在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础.

江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及生物性质

目的从江浙蝮蛇毒中分离纯化出纤溶酶并测定其生物化学性质. 方法采用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换层析柱和HiPrep Sephacryl S 100凝胶过滤层析柱来分离纯化蛇毒纤溶酶,然后用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE以及HPLC鉴定其纯度.

原代培养人肝细胞的简易高效法

二步胶原酶灌注术分离大鼠肝细胞已比较成熟,但是用大鼠肝细胞所得的实验结果还需外推于人,而人的整肝或肝叶的获取来源极其有限,不宜在一般实验室推广[1].人肝癌细胞、传代肝细胞株等体外虽然容易增殖,但其生物学特性已发生显著变化,因此,原代人肝细胞是公认用来研究药物代谢、酶诱导、移植术、病毒性肝炎和肝细胞再生的体外细胞体系[2].从小量正常肝组织(1～2 g)分离的肝细胞在临床来源广泛,能在体外增殖并存活大约15 d,具有分化功能,可基本满足实验需求.我们建立了操作简便、成本低廉和不需复杂设备的方法,易于在国内推广.

新生鼠星形胶质细胞分离培养方法

胶质细胞是中枢神经系统内数量大的一大类细胞,约占细胞总量的90%,而星形胶质细胞(astrocyte,AS)又是其中的主要组成部分.AS数量多,分布广,功能广泛,除了分泌神经元必需的营养因子,起到对神经元的支持营养作用外,还参与血脑屏障的组成,直接抵制外来物质对脑实质的损伤作用.

卫星发射中心场区内环境氡水平监测与评价/青蒿酯钠对膦氧氮丙啶的抗诱变作用/膦氧氮丙啶对昆明种仔鼠生长发育的影响/三乙胺在地面水中的高容许浓度/大鼠睾丸小分子镉结合蛋白的纯化及性质/氮丙啶类化合物TMD亚急性毒性及致突变作用

大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1)的非融合原核表达及纯化

目的 大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1转录因子)基因是应用于转基因小麦中增强其耐旱、盐碱的基因,本研究拟探索获得与天然蛋白GmDREB1一致的蛋白表达纯化方法,以获得足量的蛋白纯品,为该外源蛋白的安全性评价奠定基础.方法 将GmDREB1基因克隆到原核表达载体pBV220中,构建重组表达载体pBV220-GmDREB1,转化E.coli DH5a进行诱导表达,通过优化GmDREB1基因密码子、改善诱导表达条件及选择合适的表达载体等实现目的蛋白的高效表达,对表达产物进行阳离子交换和分子筛等层析纯化,对获得的纯化蛋白进行序列、活性及免疫原性等测定.结果 含序列优化目的基因的重组载体pBV220-GmDREB1转化E.coliDH5a后,经42℃诱导表达2小时,获得了以可溶性为主的GmDREB1蛋白,经层析纯化获得了与天然目的蛋白一致的蛋白纯品.结论 利用本研究方法可得到在N端序列、活性及免疫原性等方面与天然GmDREB1蛋白一致的目的蛋白.

转sck基因水稻中标记基因表达蛋白HPT食用安全性的初步研究

目的针对抗虫转sck基因水稻中标记基因表达蛋白HPT的食用安全性开展初步研究,主要包括该蛋白在大米中的定性、定量研究、可能的膳食摄入量估计及其潜在致敏性评估等.方法将HPT的编码序列插入带有组氨酸标签(His-tag)的原核表达载体PBV222中进行融合表达,通过脲变性和镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白.用纯化后的6His-HPT蛋白免疫家兔和小鼠,分别制备相应的抗HPT多克隆和单克隆抗体,进一步将这两种抗体组成双抗夹心酶联免疫检测体系,用于检测HPT在转sck基因水稻中的表达水平.在致敏性评估方面,首先将HPT序列与已知的致敏原数据库进行比较,再利用模拟的胃肠液环境进行体外消化稳定性实验.结果重组体经表达纯化后获得了高纯度(95%)的6His-HPT融合蛋白,免疫动物后获得了高效价的抗HPT多克隆及单克隆抗体,经免疫印迹检测证明所制备的抗体可与转基因水稻中及纯化出的HPT蛋白形成特异结合带.由这两种抗体组成的双抗夹心酶联免疫检测体系用于检测HPT抗原时的灵敏度为30ng/ml,可检测出转sck基因水稻叶片中HPT蛋白的表达量约为80～150ng/ml;而在相应的转基因大米中未能检出.HPT序列经与已知的致敏原数据库进行比较未见同源性,但在体外消化稳定性实验中,HPT蛋白在模拟的胃肠液环境中均迅速降解.结论就目前的检测水平来看,转sck基因大米中所含的HPT蛋白水平极低,且对消化环境不稳定,推测该标记基因表达蛋白不易引起可观察到的食用安全性问题.但利用表达的HPT蛋白直接进行动物急性毒性及致敏性实验的工作仍有待进行,有关的结果将进一步报道.

利用胶质细胞滋养层进行分离式原代神经元培养

为使原代培养神经元能长期健康地生长发育,并且易于分离、纯化,本文利用胶质细胞滋养层进行胶质细胞与神经元分离式培养.结果表明,此方法可靠易行,所培养的神经元具有纯度高、健康及存活期长的优点,能满足很多相关研究的需要.

生活污水中反硝化细菌的分离及其营养盐的去除性能研究

目的 分离、筛选去除营养盐的高效菌,并研究其生长特性和除污性能.方法 采用富集培养、硅胶平板分离的方法,经过多次分离纯化,得到一纯反硝化菌株,并研究了其反硝化强度和生长规律.将分离纯化的反硝化细菌富集培养后进行除污试验,探讨其不同浓度的除污效果.结果 筛选的菌株具有一定的脱氮除磷能力,反硝化强度为63.21％,通过对该菌株在培养过程中光密度的测定,进一步研究了生长规律:在2～5天,活菌数迅速提高,处于对数生长期,在5～7天,处于稳定期.利用不同投加量的反硝化细菌对生活污水进行处理,当投加量为100mg/L时,处理效果好,总氮(TN)、总磷(TP)的去除率大可达76.2％、93.8％.结论 从生活污水沉积物中分离出的反硝化菌株具有较好的脱氮除磷效果,为富营养化水体的脱氮除磷性能和相关污水的生物处理提供了微生物基础.

一种磁珠纯化分选系统的结构与原理

本文介绍了一种磁珠纯化分选系统内部的结构设计.该系统不仅可以用于细菌的分选,还能够用于基因、蛋白、细胞等物质的纯化分选,应用范围极广.该系统满足了自动化、通量高、工作体积范围大的研究和实验要求.