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福建省临床分离非结核分枝杆菌菌种分布研究
目的：分析我院临床分离非结核分枝杆菌（NTM）菌株，探讨福建省NTM临床分离率和菌种分布情况。方法对我院2009－2012年临床分离6362株分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群（MTBC）与NTM鉴别，对鉴定为NTM菌株应用hsp65‐和rpoB‐PCR‐RFLP进行菌种鉴定。结果6362株临床分离分枝杆菌共鉴别出649株NTM。鉴别出的649株NTM菌株，经hsp65‐和rpoB‐PCR‐RFLP鉴定，菌种分布达24个种，其中菌株数量前3位菌种为：胞内分枝杆菌（M．intracellulare）302株（46．5％），鸟分枝杆菌（M．avium）138株（21．3％），脓肿分枝杆菌（M．abscessus）81株（12．5％）。结论2009－2012年福建省NTM临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10．2％，NTM种类多，以鸟‐胞内分枝杆菌复合群（MAC）为福建省NTM的主要流行菌种，占总数的67．8％。
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一株马鼻疽诺卡菌临床分离株的鉴定
目的 应用基因测序分析进行诺卡菌(Nocardia farcinica)鉴定.方法 将临床分离菌株BJ7菌株与诺卡菌标准参照菌株AY756551和结核分枝杆菌H37Rv接种L-J、PNB/TCH鉴别培养基.用生长良好的培养物提取全基因组DNA.设计引物,对rpoB、16S rDNA基因片段进行PCR扩增,对其PCR产物进行测序和网上同源性比对.结果 PNB/TCH鉴别培养基鉴定BJ7为非结核分枝杆菌,进化树中BJ7 16S rDNA序列亲缘关系与诺卡菌标准参照菌株AY756551比较相近,且16S rDNA和rpoB DNA序列与马鼻疽诺卡菌同源性极高,分别达到100%和99%.结论 从结核病患者分离的菌株BJ7为马鼻疽诺卡菌.DNA测序分析能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌.
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西安市结核病的病原学调查
目的 调查西安市结核病的分枝杆菌菌种类型及其分布.方法 采用抽样调查方法收集结核病患者的痰标本及其背景资料,用痰涂片、痰培养以及PCR方法检测,用鉴别培养基对分离菌株进行菌种鉴定. 结果 共收集574例拟诊结核病病例,实验室检测1 602份痰标本.采用痰涂片、痰培养和PCR 3种方法联合应用,阳性者260例,分枝杆菌检测阳性率 45.30%.137例分枝杆菌培养阳性者中,结核分枝杆菌复合体占73.72%,其中结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别为67.88%和5.84%;11.68%为非结核分枝杆菌,14.60%为混合感染,其中11.68%为结核分枝杆菌与牛分枝杆菌, 2.92%为结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌混合感染.结论 西安市结核病的致病菌复杂,包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核分枝杆菌,尤其是非结核分枝杆菌混合感染应予以高度重视.
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44株甘肃疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定
目的 对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacteria,NTM),采用rpoB-PRA和PCR产物DNA测序等分子生物学方法进行细菌种的鉴定.结果 共对44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行了鉴定.经rpoB-PRA、rpoB和hsp65基因DNA测序分析,其中非结核分枝杆菌13株(29.55%),包括龟分枝杆菌(M.chelonae)5株,戈登分枝杆菌(M.gordonae)4株,胞内分枝杆菌(M.intracellulare)2株,赛特分枝杆菌(M.setense)1株,耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)1株;诺卡菌(Nocardia)31株(70.45%),其中鼻疽诺卡菌(N.farcinica)30株,卡尔涅亚诺卡菌(N.carnea)1株.结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌,应开展进一步菌种鉴定,以便于临床正确诊断和合理治疗.
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hsp65 and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定
目的 探讨和评价hsp65 and rpoB PCR-RFIP用于龟／脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定.方法 收集经PNB/TCH鉴别培养基表型鉴定和16s rRNA基因测序鉴定为龟／脓肿分枝杆菌复合群的临床分离菌株,用hsp65 and rpoB PCR-RFLP进行种／亚种鉴定.结果 经表型鉴定为非结核分枝杆菌的27株临床菌株,16s rRNA基因测序分析与龟／脓肿分枝杆菌的同源性达到99.7％.经hsp65 PCR-RFLP and rpoB PCR-RFLP鉴定18株为脓肿分枝杆菌(M:abscessus),4株为溃疡分枝杆菌(M.absecces),另5株表现为独特的指纹特征,可能是一个新的亚种.结论 能够快速进行龟／脓肿分枝杆菌复合群种／亚种的鉴定.
关键词： 非结核分枝杆菌 龟/脓肿分枝杆菌复合群 PCR-RFLP -
新报道非结核分枝杆菌临床分离株
本文综述了近5年来新报道的24种非结核分枝杆菌所致疾病及分离、鉴定情况,其中5种分别属于快生长分枝杆菌中的2个群,3种属于未分群的快生长分枝杆菌;7种分别属于慢生长分枝杆菌中的4个群,5种属于未分群的慢生长分枝杆菌;另外4种为新命名非结核分枝杆菌.本综述为非结核分枝杆菌病的临床诊断及防控提供了参考.
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43株甘肃临床分离非结核分枝杆菌分类鉴定
目的 了解甘肃当前临床流行的非结核分枝杆菌(NTM)的病原谱特点及其主要NTM种类,为指导临床诊疗、有效防治NTM肺病提供参考依据.方法 收集2012年～2014年来源于甘肃省不同地区的875株临床分离分枝杆菌菌株,经PNB/TCH方法初步鉴定为疑似NTM菌株,采用16S rRNA基因测序技术进行菌种鉴定.结果 875株分枝杆菌临床分离菌株中分离出疑似NTM菌株46株.经16S rRNA基因序列分析鉴定,43株为NTM,3株为诺卡氏菌.43株NTM菌株分别为胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、塞内加尔分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登氏分枝杆菌、楚尔盖分枝杆菌、罕见分枝杆菌、偶然分枝杆菌和脓肿分枝杆菌.其中,胞内分枝杆菌有31株,占总NTM菌株数的72.09％.结论 甘肃省非结核分枝杆菌群以胞内分枝杆菌为主,应用16S rRNA基因序列分析鉴定方法能准确鉴定出NTM菌种,为临床诊治提供依据.
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西安市非结核分枝杆菌感染现状调查分析
目的 了解西安市结核病患者中非结核分枝杆菌感染情况.方法 收集西安市胸科医院检验科分离培养的分枝杆菌临床菌株,利用两步PCR方法及PCR产物直接测序的方法进行菌种鉴定.结果 经鉴定发现,收集的202株分枝杆菌中有195株为结核分枝杆菌,3株为牛结核分枝杆菌,2份为鸟分枝杆菌,1份为堪萨斯分枝杆菌,1份为灰色链霉菌,非结核分枝杆菌感染率为1.5％(3/201).结论 西安市尚存在一定比例非结核分枝杆菌感染,进一步菌种鉴定有利于临床正确诊断和合理用药治疗.
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23株非结核分枝杆菌药物敏感性试验分析
目的 对自贡市临床分离鉴定的23株非结核分枝杆菌分别进行26种抗生素的药物敏感试验,了解非结核分枝杆菌对不同抗生素的耐药性,为非结核分枝杆菌病临床治疗提供依据.方法 采用微孔板阿尔玛蓝测定法(microplate Alamarblue assay,MABA)测试每种药物对每株非结核分枝杆菌的低抑菌浓度(MIC值),通过MIC值判断该菌对此种抗生素是否耐药.结果 非结核分枝杆菌对大部分抗结核药物耐药,并且对部分药物的耐药存在种间差异.其中脓肿分枝杆菌耐药率达84.6％,鸟分枝杆菌与胞内分枝杆菌分别达53.8％与52.3％,堪萨斯分枝杆菌耐药率低为38％.结论 对临床非结核分枝杆菌肺病,快速菌株鉴定及药敏试验是治疗的关键.
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手部非结核分枝杆菌感染14例分析
目的 探讨手部非结核分枝杆菌感染的治疗方法.方法 回顾性分析我院2000-2016年住院治疗的14例手部非结核分枝杆菌感染资料.患者入院后予积极清创换药处理,予异烟肼及左氧氟沙星静脉冲击治疗7～10天后行清创术,术中尽量将炎性肉芽组织及不健康的滑膜清除干净,术后积极换药,继续予异烟肼及左氧氟沙星静滴到术后2周,出院后继续口服异烟肼及左氧氟沙星.结果 所有患者手部感染创面均愈合后出院,出院后继续服用敏感抗生素至术后8周,随访6个月无复发,手指屈伸功能及灵活性均较术前改善.结论 手部非结核分枝杆菌感染通过抗感染药物治疗及多次彻底清创治疗,结合术后康复锻炼,基本可取得满意的临床效果.
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213例抗酸杆菌菌种鉴定及药敏试验的临床研究
目的 探讨常州地区抗酸杆菌的菌种分布及其药敏情况,为临床诊断及治疗提供科学依据.方法 选取常州第三人民医院于2015年5月～2016年7月期间收集抗酸杆菌培养阳性菌株213例,用L-J培养基进行菌种鉴定;采用绝对浓度法对6种抗结核药物异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、左氧氟沙星、丁胺卡那进行药敏试验.结果 213例抗酸杆菌中结核分枝杆菌(MTB)占87.32％(186/213),非结核分枝杆菌(NTM)占12.68％(27/213).MTB对6种药物全部敏感者达62.90％(117/186),单一耐药18.82％(35/186),耐多药10.22％(19/186),泛耐药4.84％(9/186),耐左氧氟沙星22.04％(41/186).16例有药敏结果的NTM分别为25％(4/16)、0(0),43.75％(7/16),50.00％(8/16),56.25％(9/16).NTM耐药率明显高于MTB(P<0.05).MTB、NTM对6种药物均存在低浓度耐药而高浓度敏感现象,发生频率为(4.98％ ～17.89％)和(16.77％ ～49.90％).结论 常州地区的结核病耐药率较高,NTM耐药率显著高于MTB,应当重视抗酸杆菌菌种的鉴定和药敏检测,这对于临床研究和应用十分必要.
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分枝杆菌快速变色液体培养基系统的临床应用评价
目的评价一种快速检测分枝杆菌的培养、鉴定和药敏系统.方法采用分枝杆菌快速变色液体培养基系统检测200份标本,并与改良L-J培养基法进行比较.结果快速变色液体培养基系统阳性率(37.5%)明显高于改良L-J培养基(17%).变色液体培养基和改良L-J培养基涂阳平均检出时间分别为8天和19天,涂阴平均检出时间分别为13天和26天;污染率分别为3%和2.5%.与异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇一致率分别为87%、61%、93%和92%.且MTBC和MOTT的鉴定和MTBC的药敏只需要2～6天.结论这种新型变色液体培养基系统具有快速、操作简便、实用等特点,培养分枝杆菌阳性率高,鉴定和药敏系统快速准确,且可进行多种抗结核药物药敏检测和药物小抑菌浓度测定,值得临床推广应用.
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结核分枝杆菌mpt64基因突变研究
目的：分析结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）mpt64基因突变情况。方法提取MTB标准株H37Rv和45株MTB临床株的DNA，扩增mpt64基因并进行序列分析。结果 MTB标准株H37Rv和44株MTB临床株的mpt64基因无突变，1株MTB临床分离株的mpt64基因存在63个碱基的缺失突变。结论结核分枝杆菌mpt64基因突变频率低。
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非结核分枝杆菌临床株rpoB基因多态性分析
目的：分析常见非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria，NTM)临床株 rpoB 基因的多态性。方法提取NTM 标准菌株和临床菌株的 DNA，扩增其 rpoB 基因部分序列并进行多态性分析。结果10种共27株 NTM 临床株中有8种共14株的 rpoB 基因存在多态性位点，其中脓肿分枝杆菌和耻垢分枝杆菌中均发现3个多态性位点。结论NTM 临床菌株的 rpoB 基因存在多态性，是否会影响其在 NTM 分子鉴定中的应用仍需进一步研究。
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34例非结核分枝杆菌肺病临床分析
目的 通过对非结核分枝杆菌(NTM)肺病病例的回顾性分析,探讨非结核分枝杆菌肺病的临床特征.方法 对本院2005年1月～2008年10月住院34例非结核分枝杆菌肺病的临床资料进行回顾分析.结果 363例分支杆菌培养检出34例非结核分枝杆菌,检出率为9.37%,临床特征有咳嗽、咳痰34例(100%),消瘦17例(50%),气促12例(35.3%),咯血11例(32.4%),胸膜炎8例(23.5%),乏力6例(17.6%),发热4例(11.8%),盗汗3例(8.8%);痰涂片抗酸杆菌阳性8例(23.5%).胸部影像学:3个肺野23例(67.6%),其中两侧全肺野10例(29.4%),空洞12例(35.3%).耐药情况:34例患者的耐药率为100.0%,其中异烟肼(INH)高28例(82.4%).结论 非结核分枝杆菌肺病临床表现与肺结核相似,肺部病灶以多肺野为主,两上肺空洞多见,进展缓慢,耐药率高.
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112例非结核分枝杆菌药敏耐药分析
目的 了解分析本院非结核分枝杆菌耐药情况,对2006-2010年非结核分枝杆菌耐药情况进行评价.方法 采用绝对浓度法对10种抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)、力克肺疾(PNA)、阿米卡星(AMK)、左氧氟沙星(LOFL)、卷曲霉素(CPM)、环丙沙星(CIP)和对氨基水扬酸(PAS)进行药敏试验.结果 2935例标本中鉴定出112例(3.82%)非典型结核分枝杆菌,总耐药率为100%.结论 本院的非结核分支杆菌耐药情况应该引起高度重视.
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荧光定量PCR仪在检测结核菌方面的作用
从痰等临床标本直接诊断结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌也称直接扩增试验(Direct Amplification test,DAT),主要是利用PCR技术特异性地扩增核酸片断达到鉴定结核分枝杆菌的目的.
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肺外结核样感染病原体的分离和耐药性分析
肺外结核样感染主要为泌尿系结核、淋巴结结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、骨结核等,病原体较为复杂,除结核分枝杆菌外还包含有非结核分枝杆菌,因此对此类疾病进行分枝杆菌菌属的分离鉴定和耐药性测定,对指导临床正确诊治此类疾病具有重要的价值,作者对本院2000年至2005年间采集的肺外结核样感染的标本,进行了分枝杆菌属细菌的分离和初步鉴定,并进行了耐药性测定.
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全髋关节置换术后偶发分枝杆菌感染1例报告
患者女性,70岁.平素身体健康,无免疫性疾病及应用激素病史,入院前可适当做轻工作.2001年12月23日因左股骨头无菌性环死在硬膜外麻醉下行人工全髋关节置换术,手术过程顺利,安装美国WREGHT公司非骨水泥关节,手术用时100min,出血约400ml,术后应用头孢他啶预防感染,4g/d,切口一期愈合.术后2周出院,开始扶拐,不负重行走,无痛.术后3周开始每日低热,体温由37.2℃逐渐升至术后4周的38.2℃,并出现短时间寒战,术后28d到医院检查,左髋有肿胀、压痛、关节旋转痛.化验:血沉96mm/h,CRP 140μ/L.关节穿刺抽出10ml淡黄色、稍混浊关节液,分别送2家医院细菌培养及涂片染色,均发现有抗酸染色阳性杆菌存在,诊断左髋关节置换术后感染,术后第40d行关节清创引流术.手术见关节周围软组织肿胀,关节腔内约有20ml黄色、稍混浊的关节液.假体端有少量炎性肉芽样组织包裹,予以反复彻底清创,清创后对脱出的股骨头及髋臼分别检查见关节无松动迹象,未予翻修关节.置二套引流管做闭式灌洗引流,结束手术.术后前3d静脉应用的抗菌素为头孢他啶4g/d,左旋氧氟沙星0.2g/d,灌洗液应用庆大霉素、环丙沙星交替.术后第1d关节液细菌培养回报,确认为非结核分枝杆菌,细菌药敏对泰能及喹诺酮类药的左旋氧氟沙星敏感,则改静脉应用泰能,1.0g/d,术后1周改用左旋氧氟沙星,用药至术后1个月,冲洗液应用左旋氧氟沙星,术后第1周引流液培养阳性2次,第2周二次培养阴性,左髋局部肿胀消退,术后15d停止创口闭式灌洗引流,继续交替静脉应用抗生素至术后8周,改口服抗生素至术后4个月,至停药时病人血沉降至38mm/h,CRP 8μ/L,现术后已达15个月,于清创后6个月弃拐行走,早期有臀肌无力步态,轻度疼痛.术后10个月恢复轻工作,轻度跛行步态,仍有微痛不适,关节活动范围达160°.X线片见关节置换侧骨盆及股骨轻度骨质疏松,关节无松动表现.血沉＜20mm/h,CRP＜10μ.
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慢生型分枝杆菌体外抗菌药物敏感性试验研究
目的:测定临床慢生型分枝杆菌对抗菌药物的敏感性.方法:采用美国临床和实验室标准协会M24-A液基微量稀释法,测定慢生型非结核分枝杆菌对8种抗菌药物的敏感性.结果:3株临床海鱼分枝杆菌的MIC值范围:阿米卡星均为1 μg/mL;多西环素1～8 μg/mL;克拉霉素0.5～2 μg/mL;利福平0.25～0.5 μg/mL;磺胺甲基异恶唑4～32 μg/mL.1株临床胞内分枝杆菌对克拉霉素敏感,MIC≤0.25 μg/mL.3株临床瘰疠分枝杆菌的MIC值:阿米卡星2～8 μg/mL;多西环素≥32 μg/mL;克拉霉素0.25～2 μg/mL;利福平0.25～4 μg/mL;磺胺甲基异恶唑≤1～4 μg/mL;乙胺丁醇2～32 μg/mL;异烟肼0.5～2 μg/mL;链霉素4～8 μg/mL.结论:临床慢生型非结核分枝杆菌对8种常用抗菌药物的敏感性存在差异.
关键词： 非结核分枝杆菌 CLSI M24-A 敏感性试验
