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UPLC-MS/MS快速测定茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸的含量
目的:建立一种测定茯苓药材中茯苓酸和去氢土莫酸含量的UPLC-MS/MS方法.方法:采用ZORBAX Eclipseplus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相乙腈-1.0 mmol·L-1乙酸铵(80∶20),流速0.3 mL· min-1,柱温40℃,进样量5.0 μL.ESI离子源,负离子模式,多反应监测模式(MRM),检测离子对分别为茯苓酸m/z 527.40/465.30,去氢土莫酸m/z483.20/421.20.结果:茯苓酸和去氢土莫酸分别在26.2～524 μg·L-1(r=0.999 8)和24.2 ～488 μg·L-1(r=0.999 9)线性良好,分析时间为6 min,平均回收率分别为101.4％ (RSD 1.2％)和99.8％ (RSD 1.2％).结论:该方法准确、快速、可靠、灵敏,可作为茯苓酸和去氢土莫酸的一种快速定量分析方法.
关键词： 超高效液相色谱-质谱联用 茯苓 茯苓酸 去氢土莫酸 -
大鼠口服不同形式茯苓三萜类成分提取物后有效成分的药代动力学分析
目的:建立UPLC-Q-TOF/MS测定大鼠口服茯苓三萜类成分提取物粉末及软胶囊内容物后土莫酸及去氢土莫酸的血浆药物浓度,研究这2个成分的体内药代动力学过程,比较二者在粉末与软胶囊内容物中的药代动力学差异.方法:血浆样品采用乙酸乙酯提取,以甘草次酸为内标物,流动相0.1％甲酸水溶液(A)-0.1％甲酸乙腈溶液(B)梯度洗脱(0 ～3 min,50％ ～70％ B;3 ～3.5 min,70％～100％ B;3.5 ～4.5 min,100％ B),正离子模式,毛细管电压3 kV,锥孔电压40 V,离子源温度120℃,脱溶剂温度500℃,脱溶剂气流速800 L·h-1.结果:软胶囊内容物中土莫酸和去氢土莫酸药峰浓度(Cmax)及药时曲线下面积(AUC0-t)均大于粉末.软胶囊内容物中土莫酸的达峰时间(Tmax)大于粉末,而去氢土莫酸的Tmax则小于粉末,结论:植物油的加入促进了土莫酸和去氢土莫酸的吸收,推测由于土莫酸和去氢土莫酸的化学结构不同,剂型变化后会引起吸收速率的改变.
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茯苓发酵菌丝体中3种主要三萜酸类成分积累动态研究
目的:考察茯苓发酵菌丝体中3种主要三萜酸类成分动态积累变化.方法:建立茯苓菌的液体培养方法,采用RP-HPLC测定茯苓发酵菌丝体中去氢土莫酸(DTA),3-表去氢土莫酸(eDTA)和猪苓酸C(PAC)3种主要三萜酸类成分的含量,色谱条件如下:PLATISIL ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相乙腈-0.5％磷酸水(80:20)；流速1.0 mL·min-1;检测波长242 nm.结果:在培养后的第8天,生物量达到大值,但是3种主要三萜酸类成分(DTA,eDTA,PAC)的含量在培养周期内呈持续上升趋势,第17天测得3种成分质量分数分别为1.2％ (DTA),0.4％ (eDTA),1.0％ (PAC),均显著高于栽培茯苓中对应成分[0.2％(DTA),0.12％ (eDTA),0.16％ (PAC)].另外,3种成分含量比例的线性回归分析结果表明,DTA与eDTA和PAC的含量比例呈显著负相关,相关系数(R2)分别为0.858 7,0.971 7.该结果表明DTA为茯苓中三萜酸类成分生合成途径中的重要中间体.结论:发酵培养17 d的茯苓菌丝体中DTA,eDTA,PAC含量之和为栽培茯苓中含量的5.55倍,说明在本发酵培养条件下,发酵培养生产茯苓中三萜酸类有效成分技术可行.
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去氢土莫酸在大鼠体外肝微粒体体系中的生物转化研究
目的:研究中药茯苓中主要化学成分之一的去氢土莫酸在大鼠肝微粒体中的生物转化.方法:用大鼠肝微粒体体外温孵法进行去氢土莫酸的生物转化,优化了温孵体系;高效液相色谱法检测和制备原形化合物去氢土莫酸及其生物转化产物,核磁共振波谱法和质谱法确定生物转化产物的结构.结果:去氢土莫酸在苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶作用下,产生2个转化产物,分别为土莫酸和去氢茯苓酸.结论:去氢土莫酸可被苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶转化为土莫酸和去氢茯苓酸.
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HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量
目的:建立HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量.方法:采用Hypersil C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱;流动相A采用乙腈-甲醇(1:1),流动相B采用0.05％磷酸溶液,进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长分别为244 nm(去氢土莫酸和茯苓酸)和230 nm(三白草酮和里卡灵A).结果:去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A分别在5.400～108.0μg·mL-1(r=0.9995)、6.050～121.0μg·mL-1(r=0.9992)、11.94～238.8μg·mL-1(r=0.9997)、4.510～90.20μg·mL-1(r=0.9994)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.23％、99.13％、97.99％、96.93％,RSD(n=6)分别为1.02％、0.76％、1.22％、0.88％.结论:本文建立的波长切换HPLC梯度洗脱法可实现同时测定去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A4种成分,方法操作简便,可作为三白草肝炎糖浆的质量控制方法.
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HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸
目的 建立一种测定茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸的方法,并比较不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸量的差异.方法 应用HPLC法测定猪苓酸C、去氢土莫酸的量,色谱柱为Ailtima-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水-磷酸(70 : 29.85 : 0.15);体积流量为1 mL/min;检测波长为244 nm;进样量为20 μL;柱温为30℃.结果 测得8个产地茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量分别为0.188 6～0.575 6、0.113 7～0.216 7 mg/g,其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸C、去氢土莫酸量高,四川次之,其他几个产地的量相对较低;猪苓酸C定量测定的线性范围为0.179 2～2.240 0 μg(r2=0.999 9).平均加样回收率为98.88%,RSD为1.77%;去氢土莫酸测定的线性范围为0.137 2～1.715 0(r2=1),平均加样回收率为97.76%,RSD为0.62%.结论 所建立的色谱方法可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量,重现性好;各产地茯苓中的猪苓酸C、去氢土莫酸的量差别较大,有必要建立猪苓酸C、去氢土莫酸的定量控制方法.
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分子印迹技术定向分离桂枝茯苓胶囊中活性成分去氢土莫酸
目的 建立利用分子印迹技术从桂枝茯苓胶囊提取物中定向分离制备去氢土莫酸的方法.方法 以去氢土莫酸为分子模板,采用溶胶-凝胶法制备了去氢土莫酸分子印迹聚合物,并对其吸附性能进行研究.以此聚合物为填料,从桂枝茯苓胶囊提取物中一步分离制备得到去氢土莫酸,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构.结果 经Scatchard分析,去氢土莫酸分子印迹聚合物大表观结合位点数(Qmax)为9.10 mg/g.经HPLC检测去氢土莫酸质量分数为90.76％.结论 该方法可用于从桂枝茯苓胶囊提取物中靶向分离制备去氢土莫酸,有利于减少提取过程中有机溶剂的使用,操作简单,为其高效分离纯化提供新的方法.
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桂枝茯苓胶囊中三萜类成分UPLC指纹图谱研究
目的 建立桂枝茯苓胶囊(GFC)三萜类成分UPLC指纹图谱方法,为评价GFC的质量提供新方法.方法 采用Agilent Zorbox Eclipse Plus HD C18(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min,柱温30℃,检测波长为210 nm.采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认.结果 得到分离度和重复性良好的GFC三萜类成分指纹图谱,确定了20个共有峰,其中1～7、10、12、14～17号峰共13个共有峰来自于茯苓,8、11号峰来自于桂枝,9号峰来自于白芍和牡丹皮,13号峰来自于桃仁、白芍、牡丹皮和桂枝.10批成品指纹图谱相似度在0.90以上.UPLC-Q-TOF/MS共鉴定出15个成分,分别为常春藤皂苷(1)、去氢土莫酸(2)、土莫酸(3)、猪苓酸C(4)、3-表去氢土莫酸(6)、茯苓酸D(7)、α-亚麻酸(9)、去氢茯苓酸(10)、齐墩果酸(11)、茯苓酸(12)、亚油酸(13)、棕榈油酸甲酯(15)、棕榈酸(16)、棕榈酸乙酯(17)、胡萝卜苷(18).结论 建立的UPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性,适用于GFC的质量控制.
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HPLC法同时测定桂枝茯苓胶囊中4种茯苓三萜酸成分
目的 建立HPLC法同时测定桂枝茯苓胶囊(GFC)中4种茯苓三萜酸成分(去氢土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢茯苓酸、去氢茯苓酸)的方法.方法 色谱柱为Diamonsic C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液;梯度洗脱:0～70min,50％～85％乙腈;70～80min,85％～100％乙腈;80～90 min,100％乙腈;检测波长242 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温40℃.结果 去氢上莫酸、猪苓酸C、3-表去氢茯苓酸、去氢茯苓酸在HPLC中达到基线分离,线性范围分别为0.408～2.04 (r=0.999 9)、0.192～0.96 (r=0.999 5)、0.078～0.39 (r=0.999 5)、0.075 6～0.378 (r=0.999 5)μg/mL;平均加样回收率分别为97.5％、98.5％、97.2％、102.3％,RSD分别为1.4％、1.6％、1.2％、1.8％;测定了6批GFC,结果显示去氢土莫酸平均量为0.070 mg/粒,猪苓酸C平均量为0.015 mg/粒,3-表去氢茯苓酸平均量为0.030 mg/粒,去氢茯苓酸平均量为0.061 mg/粒.结论 该方法可行、重现性好,可用于GFC的质量控制.
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HPLC法测定八珍液中地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸
目的 建立HPLC同时测定八珍液中的地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸的方法.方法 Kromasil C18色谱柱(200mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:203 nm(0～34 min,检测地黄苷A和地黄苷D)、210 nm(34～65 min,检测去氢土莫酸和茯苓酸);体积流量1.0mL/min.结果 地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸分别在5.76～115.20、4.05～81.00、6.10～122.00、6.35～127.00 μg/mL线性关系良好;平均回收率分别为98.90％、99.08％、98.71％、97.95％,RSD值分别为1.49％、1.19％、1.63％、0.92％.结论 该方法操作简便,准确,重复性好,可作为八珍液的质量控制方法.
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HPLC法测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷
目的建立同时测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷4个成分的高效液相色谱测定方法.方法采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:0~18 min, 241 nm(去氢土莫酸);18~50 min,210 nm(茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷);体积流量为1.0 mL/min;柱温25℃;进样量20 μL.结果去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷分别在3.35~67.00μg/mL、3.50~70.00μg/mL、3.07~61.40μg/mL、3.25~65.00μg/mL线性良好,r值均大于0.999 0,平均回收率分别为96.72%、97.87%、98.21%、98.09%,RSD值分别为1.08%、0.95%、0.64%、1.22%(n=6).结论 该方法简便,结果准确,可用于八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷的质量控制.
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HPLC法测定参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ
目的：建立梯度洗脱联合波长切换高效液相色谱（HPLC）法对参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ同时进行测定。方法采用Venusil MP C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈–0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；检测波长：210 nm（0～19 min，检测去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸）、220 nm（19～35 min，检测白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ）；体积流量：0.8 mL/min；柱温：30℃；进样量为10μL。结果去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯III、白术内酯I质量浓度分别在4.62～92.40μg/mL（r＝0.9997）、3.80～76.00μg/mL（r＝0.9999）、5.76～115.20μg/mL（r＝0.9999）、3.95～79.00μg/mL（r＝0.9998）、5.05～101.00μg/mL（r＝0.9996）与峰面积关系良好；回收率分别为99.24%、97.75%、98.66%、98.49%、99.10%，RSD值分别为1.23%、1.79%、1.66%、0.80%、1.25%。结论建立的方法操作简便、结果可靠，可用于参苓健体粉的质量控制。
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HPLC法测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸
目的 建立HPLC波长切换法同时测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸的方法.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;0～24.0 min在248 nm波长下检测猪苓酮B和猪苓酮A,24.0～50.0 min在210nm波长下检测去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量为10 μL.结果 猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸分别在5.79～115.80、1.66～33.20、3.28～65.60、7.07～141.40、1.46～29.20、0.88～17.60 μg/mL与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为98.75％、97.60％、98.23％、99.49％、97.10％、96.81％,RSD值分别为0.75％、1.66％、1.44％、0.90％、1.15％、1.38％.结论 本方法简便、准确、重复性好,为威喜丸的质量控制提供了实验依据.
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HPLC波长切换法同时测定琥珀多寐丸中6个成分的含量
目的 建立同时测定琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸含量的方法.方法 采用波长切换检测的高效液相色谱法,色谱柱采用依利特C18色谱柱,流动相为乙腈(A)-体积分数为0.1％的磷酸溶液(B)系统,进行梯度洗脱;0～36 min检测波长为320 nm(检测远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖),36 ～75m in检测波长为210nm(检测细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸、茯苓酸);流速为1.3mL·min-1;柱温为30℃.结果 在优化的色谱条件下,远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸分别在6.46 ～ 129.20 mg·L-1 (r =0.999 2)、6.13 ～122.60 mg·L-1 (r=0.999 5)、13.17 ～263.40 mg·L-1(r =0.999 9)、14.15～283.00mg·L-1(r=0.999 6)、5.35 ～ 107.00 mg·L-1(r =0.999 7)、4.50 ～ 90.00 mg·L-1(r=0.999 3)内浓度与峰面积呈良好的线性关系;6种成分的平均加样回收率(n=6)分别为97.69％、96.87％、100.04％、97.74％、97.67％、99.16％,RSD分别为1.35％、0.96％、0.59％、0.93％、1.02％、1.10％.结论 该检测方法可用于琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸的含量分析.
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HPLC梯度洗脱法测定咳喘顺丸金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量
目的:建立咳喘顺丸中金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量的测定方法.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);体积流量:0.8 mL/min;流动相A为甲醇-乙腈(3∶2),流动相B为0.1％磷酸溶液;检测波长λ1=350nm(检测金丝桃苷和槲皮苷),检测波长λ2=210 nm(检测去氢土莫酸和茯苓酸).结果:金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸分别在0.0612 ～1.2240(r=0.9997)、0.0978～1.9560 μg(r =0.9992)、0.0148～0.2960 μg(r =0.9996)、0.0216～0.4320 μg(r =0.9995)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.81％、98.36％、96.79％、97.16％,RSD(n =6)分别为1.20％、1.62％、1.03％、1.12％.结论:该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为咳喘顺丸的含量控制方法.
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HPLC-DAD法同时测定消积化虫散中6种成分
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)法同时测定消积化虫散(白术、茯苓、使君子仁等)中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸的含有量.方法 分析采用依利特C18色谱柱;流动相为乙腈-甲醇(1∶1)(A)-0.05％磷酸溶液(B),梯度洗脱;体积流量1.1 mL/min;柱温25℃;检测波长210 nm(去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸)、220 nm(白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ)、276 nm(白术内酯Ⅱ).结果 6个成分均呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)为96.8％ ～ 99.4％,RSD值为0.66％ ～ 1.48％.结论 该方法简便、准确、快速,可用于消积化虫散的质量控制.
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HPLC法同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸
目的 建立高效液相同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢上莫酸、猪苓酸C和茯苓酸成分的分析方法.方法 补益资生丸甲醇提取,分析采用Hypersil C18色谱柱;以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量1.2 mL/min;白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的检测波长为220 nm,去氢土莫酸、猪苓酸C检测波长为241 nm,茯苓酸为210 nm.结果 白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸质量浓度分别在4.12～82.40 μg/mL (r=0.999 8)、6.55～ 131.00μg/mL(r=0.999 4)、4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 9)、5.35 ～ 107.00μg/mL(r=0.999 2)、4.40～88.00μg/mL (r=0.9997)时与其峰面积线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为99.0％、97.6％、99.1％、97.0％、97.9％,RSD分别为1.2％、1.6％、1.2％、0.91％、1.5％.结论 暂定本品标准为每丸中含白术内酯Ⅲ不得低于0.26 mg,白术内酯Ⅰ不得低于0.15 mg,去氢土莫酸不得低于0.40 mg,猪苓酸C不得低于0.14 mg,茯苓酸不得低于0.20 mg.
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茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸含量的高效液相色谱波长切换法同时测定
目的 建立茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸含量的测定方法.方法 采用紫外波长转换检测的RP-HPLC法.色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液(75:25),检测波长为0～5 min,241 nm(去氢土莫酸),5～ 16 min,210 nm(茯苓酸),流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃.结果 去氢土莫酸和茯苓酸分别在25.5 ～255.0 μg· ml-1(r =0.9999)和11.16～111.6 μg· ml-1(r =0.9999),浓度与峰面积呈良好的线性关系;方法回收率分别为100.4％(RSD =2.8％)、99.1％(RSD=2.9％).结论 HPLC法快速、准确、选择性好、灵敏度高,适合茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸的含量测定.
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正交法研究苓桂术甘汤的醇提工艺
目的:为苓桂术甘汤醇提工艺提供依据.方法:采用正交设计对醇提工艺优化,测定了不同工艺提取物中去氢土莫酸、肉桂酸和甘草酸的含量及浸膏得率.结果:佳工艺为溶剂量10倍量,提取3次,提取时间60 min.结论:该方法可用于确定苓桂术甘汤醇提工艺的条件.
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HPLC法同时测定小儿消积化虫散中6种成分的含量
目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定小儿消积化虫散中天名精内酯酮、莪术二酮、莪术醇、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速为0.9 ml·min-1,柱温为30℃,进样体积为10μl.结果:天名精内酯酮、莪术二酮、莪术醇、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸分别在1.19～29.75,2.46～61.50,1.52～38.00,3.09～77.25,0.87～21.75,3.78～94.50μg·ml-1范围内线性关系良好,r均≥0.9992;平均加样回收率分别为97.76％,98.07％,98.70％,99.49％,96.98％和100.07％,RSD分别为1.31％,1.06％,1.26％,0.75％,1.41％和0.62％(n=6).结论:本文所建立的方法操作简便、数据准确、重复性好,能够同时对小儿消积化虫散中6种成分进行含量测定,为提高和完善小儿消积化虫散的质量控制标准提供了有效的方法.
