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沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡及Bcl-2、BaX、P53和Caspase-3蛋白表达的影响
目的:研究沥水调脂胶囊抑制内皮细胞凋亡的机制,以氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,观察Bcl 2、Bax、P53和Caspase-3蛋白表达.方法:用流式细胞术检测细胞凋亡并进行周期分析;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测 Bcl-2、Bax、P53和Caspase-3蛋白表达水平.结果:沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用,在此过程中沥水调脂胶囊上调了Bcl-2蛋白表达水平,对Bax蛋白表达未见明显影响,同时下调了P53和Caspase-3蛋白表达水平.结论:推测沥水调脂胶囊可能是通过上调Bcl-2蛋白表达、下调P53和Caspase-3蛋白表达抑制内皮细胞凋亡的.
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LOX-1对氧化低密度脂蛋白所诱导的PAI-1基因表达的影响
目的 探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX)-1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所诱导1型纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响.方法 不同浓度ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用倒置显微镜观察内皮细胞形态变化,通过反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)测定LOX-1、PAI-1 mRNA表达.Western blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定LOX-1、PAI-1蛋白的表达.结果 不同浓度ox-LDL组.LOX-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达明显增加,且呈浓度依赖性(P＜0.01);用250 p,g/mL Poly(I)与HUVECs预先作用2h后,再加入50 μg/ml的ox-LDL培养24h,与未加Poly(I)相比,LOX-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达明显减少(P＜0.05).结论 ox-LDL可以调节培养的脐静脉内皮细胞LOX-1和PAI-1表达;LOX一1作为ox-LDL特异性受体,介导了ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞表达LOX-1.同时该实验提示了ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞表达PAI-1是通过LOX-1介导的.
关键词： 血凝素氧化低密度脂蛋白受体-1 氧化型低密度脂蛋白 动脉硬化 内皮细胞 -
非洛地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响
目的：研究非洛地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞中细胞间黏附分子-1( ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA、蛋白表达影响及其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法将氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共孵育,筛选合适的 ox-LDL干预浓度梯度与时间,与不同浓度的非洛地平(0.1,1,10μmol/L)共孵育24 h,real time-PCR检测细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达,Western blot检测ICAM-1、VCAM-1蛋白表达变化。将HUVECs与U937单核细胞共培养,高倍镜下观察细胞形态变化,计数被黏附的HUVECs个数并计算黏附率。结果随着ox-LDL刺激浓度(6,12.5,25 mg/L)的增加,ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平及蛋白表达逐渐上调,当ox-LDL浓度增加为25 mg/L时,作用为显著(P<0.05)。非洛地平可抑制ICAM-1、VCAM-1 mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05)；25 mg/L ox-LDL处理时被黏附的HUVECs较空白对照明显增多(P<0.01)；0.1μmol/L非洛地平显著抑制HUVECs与U937的相互黏附(P<0.01)。结论非洛地平通过下调人脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的表达从而抑制单核-血管内皮细胞黏附。
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外周血ox-LDL浓度与血脂状态关系的研究
目的:观察人外周血氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度与血脂状态的关系. 方法:采取病人外周血,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清ox-LDL浓度及血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白蛋固醇(LDL)、脂蛋白(a)[LP(a)]的浓度,对检测结果进行相关性分析.结果:ox-LDL浓度与TC、LDL的相关系数分别为0.516、0.504,具有统计学意义.外周血ox-LDL浓度与TG、LP(a)之间未发现相关性.结论:人外周血ox-LDL浓度与血TC、LDL存在正相关关系.
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额尔敦-乌日勒对动脉粥样硬化兔血清ox-LDL含量及主动脉LOX-1表达的影响
目的:探讨额尔敦-乌日勒对动脉粥样硬化兔氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)含量及植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响.方法:采用喂饲高脂饲料建立家兔AS模型,将60只家兔随机分为正常对照组,模型组,额尔敦-乌日勒高、中、低剂量组和辛伐他汀组.实验结束后,采用酶联免疫吸附法测定血清OX-LDL含量以及实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)方法检测主动脉LOX-1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,额尔敦-乌日勒高、中剂量组血清ox-LDL含量明显降低(P＜0.05);额尔敦-乌日勒高剂量组主动脉LOX-1 mRNA的表达明显低于模型组(P＜0.05).结论:额尔敦-乌日勒可降低动脉粥硬化兔ox-LDL含量和LOX-1的表达,从而起到抗动脉粥硬化作用.
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低密度脂蛋白影响巨噬细胞的SAPK信号通路
目的研究氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)对巨噬细胞增殖、坏死及凋亡影响的非清道夫受体途径，及对应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)信号通路的影响。方法 采用3个时间水平(24，48，72h)、4个剂量水平(0，50，100，200mg／L)的两因素析因设计,观察Ox-LDL对清道夫受体A(scavenger receptorA，SRA)基因敲除小鼠巨噬细胞增殖、坏死及凋亡影响的时间、剂量效应关系；Ox-LDL对该细胞SAPK活性的影响。结果 Ox-LDL可诱导SRA基因敲除小鼠巨噬细胞增殖、凋亡及坏死，并与其作用浓度和剂量相关(P＜0.01)，同时Ox-LDL可引起SAPK活性水平发生变化。结论 Ox-LDL对SRA基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞的影响主要为诱导增殖作用，高浓度时伴有一定致凋亡、坏死作用，其致细胞增殖、凋亡作用可能部分与SAPK信号途径有关，提示非清道夫受体途径在Ox-LDL导致巨噬细胞功能改变过程中可能起重要作用。
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氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞基因表达
目的通过研究氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)诱导血管内皮细胞基因表达谱的改变,为阐明氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化形成的分子机制提供科学依据.方法采用含有4000条全长已知人类基因cDNA,以及96条参照基因cDNA克隆制作的基因表达谱芯片,筛查氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)作用6 h对人脐静脉血管内皮细胞的基因表达谱改变的影响.结果Ox-LDL可诱导3条基因表达下调,5条基因表达上调.结论氧化型低密度脂蛋白的早期作用即可诱导内皮细胞相关基因的表达改变;首次发现氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞H731蛋白,ST2蛋白,Cyclin B1(细胞周期蛋白B1)和KDRF(KM-102-derived reductase-like factor,KM-102源性还原酶样因子)等基因表达的改变,为揭示氧化型低密度脂蛋白引起血管内皮细胞功能障碍的机制提供线索.
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ERK1/2在氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的研究细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase 1 and 2,ERK1/2或p42-44MARK)信号通路在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用.方法采用3个时间水平(24h、48h、72h),4个剂量水平(0,50,100,200μg/ml)的两因素析因设计观察Ox-LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cels,VSMCs)增殖影响的时间、剂量效应关系;Ox-LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞ERK1/2活性影响;ERK1/2的特异断剂U0126对Ox-LDL诱导兔主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响.结果Ox-LDL在剂量为50,100μg/ml时,可诱导血管平滑肌细胞增殖,当Ox-LDL剂量达到200μg/m1时,细胞增殖能力迅速降低,并与其作用时间和剂量显著相关(P值均＜0.01);Ox-LDL可引起血管平滑肌细胞ERK1/2活性的改变;ERK1/2的特异阻断剂U0126可完全抑制Ox-LDL诱导的VSMCs增殖.结论Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞增殖与其作用浓度、时间相关;ERK1/2信号通路可能在Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖过程中起着关键的信号转导作用.
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耐力运动对高脂饮食小鼠一氧化氮及氧化型低密度脂蛋白水平的影响
目的:研究耐力性运动对高脂饮食小鼠血浆一氧化氮以及氧化型低密度脂蛋白水平的影响,探索耐力性运动是否有可能作为药物以外的预防动脉硬化的手段.方法:实验在天津体育学院实验中心完成.采用南京建成生物工程公司试剂盒测定一氧化氮浓度,依试剂盒说明书操作.氧化型低密度脂蛋白的测定方法如下:将血浆0.3 mL注入预先加入EDTA(100 mmol/L)的试管中,加入柠檬酸钠和肝素的混合溶液3 mL(柠檬酸钠0.064 mol/L,肝素5万U/L),震荡混匀后室温放置15 min,4 000 r/min离心15 min,弃上清,在沉淀物中加入Tris-HCL 0.3 mL(0.02 mol/L,pH值8.6)再次溶解,取再次溶解液0.3 mL依次加入乙酸1.5 mL(200 g/L),硫代巴比妥酸1.5 mL(8 g/L),震荡混匀后,沸水浴60 min,流水冷却后,加入正丁醇4 mL,强力震荡混匀,3 000 r/min离心5 min,532 nm波长下测定吸光度.结果:高脂饮食组动物血浆一氧化氮水平[(24.90±9.06)μmol/L]明显低于正常饮食组[(45.03±10.23)μmol/L](P＜0.05),而高脂饮食结合运动干预组动物血浆一氧化氮水平[(38.11±12.71)μmol/L]明显高于高脂饮食组(P＜0.05),并与正常饮食对照组相比无显著性差异(P＞0.05).另外,高脂饮食组动物血浆氧化型低密度脂蛋白水平[(4.13±0.66)μmol/L]明显高于正常饮食对照组[(2.04±0.52)μmol/L](P＜0.05),而高脂饮食结合运动干预组[(2.46±0.49)μmol/L]明显低于高脂饮食组(P＜0.05),并与正常饮食对照组无显著性差异(P＞0.05).结论:耐力性运动可有效的逆转高脂饮食造成体内一氧化氮水平的下降及氧化型低密度脂蛋白水平上升.
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氧化型低密度脂蛋白及脂质代谢对老年脑梗死的影响
目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对老年脑梗死的作用及影响.方法:对30例老年脑梗死患者进行了血浆Ox-LDL、高密度脂蛋白-C, (HDL-C)、低密度脂蛋白 - C , (LDL-C) 、Cho、TG、apoA、 apoB,血浆内皮素水平测定,同时观察血液流变学指标,并与23例健康老年人对照.结果:老年脑梗死组血浆Ox-LDL、内皮素水平明显增高;LDL-C、Cho、TG与对照组比较亦增高;HDL-C降低,血液流变学指标明显异常,而且Ox-LDL的变化与血浆内皮素水平、血液流变学指标呈正相关,与HDL-C、 LDL-C、 Cho、TG、 apoA、 apoB无明显相关性.结论:Ox-LDL导致动脉粥样硬化,促进血浆内皮素分泌,影响血液流变性,引起脑缺血、缺氧促进脑梗死的发生和发展.
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重组腺病毒介导脂联素对人脐静脉内皮细胞损伤的作用和机制
背景:血管内皮细胞紧贴于血管壁,在血管稳态平衡的调节中发挥着至关重要的作用.目的:分析腺病毒介导的脂联素过表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞动脉粥样化损伤、核因子κB p65核蛋白及其信号通路下游促炎因子的负性调控作用.方法:实验分4组:正常对照组,采用人脐静脉内皮细胞常规培养,未用ox-LDL诱导;ox-LDL诱导组,用30 mg/L的ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞48 h;二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预+ox-LDL诱导组,先用100 μmol/L的PDT℃处理细胞1h,再用ox-LDL 30 mg/L诱导48 h;Ad-APN-eGFP干预+ox-LDL诱导组,以MOI=100 pfu/cell转染人脐静脉内皮细胞2h后,用ox-LDL 30 mg/L诱导48 h.各组干预后检测各项指标.结果与结论:①ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞造成内皮细胞损伤模型,激活核因子κB信号通路,核因子κBp65核蛋白的表达量增加;②rAd-APN-eGFP转染能够抑制核因子κB通路的激活,使核因子κB p65核蛋白表达量降低,降低核因子κB调节的下游促炎分子VCAM-1、ICAM-1、MCP-1的基因和蛋白表达,增加抗炎因子内皮型一氧化氮合酶的基因和蛋白表达,差异有显著性表达;③结果说明,rAd-APN-eGFP载体转染人脐静脉内皮细胞,通过有效抑制ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞的核因子κB激活,减轻ox-LDL诱导的细胞促炎损伤和细胞凋亡,与使用PDTC干预具有相近的效果;④结果证实rAd-APN-eGFP和PDTC一样可通过抑制核因子κB通路的激活来减轻动脉粥样硬化这种炎症反应.
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血管内皮细胞与动脉粥样硬化的关系
血管内皮细胞(VEC)是介于血液与血管壁之间的屏障,其损伤被认为是动脉粥样硬化(AS)发病的早期关键性环节.Ross指出,AS的发生是由于VEC和平滑肌细胞受各种危险因子如病毒、机械损伤、免疫复合物,特别是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的损伤,而使血管局部产生的一种过度的慢性炎性增生反应[1].内皮细胞(EC)形态结构受损和功能改变, 导致血管屏障功能的损害,使血液中的脂质和单核细胞等更易沉积在内皮下间隙,进一步形成泡沫细胞.
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瓜蒌皮对高血脂合并心肌缺血大鼠氧化应激状态动态调节作用研究
目的:研究瓜蒌皮对高血脂合并急性心肌缺血(HL-AMI)大鼠氧化应激状态的动态调节作用,从调整异常氧化应激状态的角度揭示该药材干预冠心病(CHD)痰浊壅塞证的机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组(Ctrl)、HL-AMI组、瓜蒌皮干预组(Trich).首先采用高脂乳剂灌胃,造成高脂血症(HL)大鼠模型,再结扎冠状动脉左前降支制造急性心肌缺血(AMI)模型.瓜蒌皮水煎液(20 g/kg)灌胃给药.上述每组大鼠再分为7个亚组.各亚组分别于冠脉结扎手术后的1～7 d分批处死,腹主动脉取血.生化试剂盒检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的活性或含量.绘制AMI后7d内上述指标动态变化曲线.结果:AMI手术后,HL-AMI组大鼠血浆的SOD、T-AOC及CAT水平显著低于对照组大鼠;而LPO及ox-LDL含量明显升高.灌服瓜蒌皮水煎液的大鼠,其血浆上述氧化应激指标水平的异常变化得到了显著逆转(P＜0.05或P＜0.01).结论:对于HL-AMI大鼠,瓜蒌皮可显著改善其AMI后异常的氧化应激状态,较强的抗氧化活性可能是该药材防治CHD痰浊壅塞证的机制之一.
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氧化型低密度脂蛋白:致动脉粥样硬化和抗动脉粥样硬化的双重作用
研究证明,氧化型低密度脂蛋白(oxLDL),而不是低密度脂蛋白,是致动脉粥样硬化的独立危险因素.oxLDL主要通过巨噬细胞上的清道夫受体摄入oxLDL,引起血管壁泡沫细胞的堆积和脂纹的形成;oxLDL还改变了内皮细胞、平滑肌细胞、血小板的多种功能,使之释放多种致炎细胞因子,促进了炎症细胞的趋化和聚集.但近有报道认为,口服免疫耐量的oxLDL可弱化早期和晚期动脉粥样硬化.因此,oxLDL不仅能导致动脉粥样硬化,在某些情况下,还具有抗动脉粥样硬化的作用.本文从辩证法的角度出发,系统的阐述oxLDL的这一双重作用.
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CD4+CD25+调节性T细胞对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制
目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制.方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞.在ox-LDL作用下,HUVECs与CD4+CD25+T细胞共培养,24小时后收集HUVECs.应用流式细胞术测定HUVECs抗原提呈分子(HLA DR,CD86,CD80)的表达,Cell Counting Kit-8法(CCK-8) 测定HUVECs刺激CD4+CD25- T细胞增殖的能力,Transwell小室实验初步探讨Treg作用于HUVECs的具体机制.结果:与对照组比较,Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈分子的表达及刺激T细胞增殖的能力.用Transwell隔离后,与or-LDL刺激组比较,HUVECs抗原提呈分子表达及其刺激T细胞增殖的能力无明显变化.结论:Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈能力,其作用机制可能为下调CD86的表达,且依赖细胞直接接触.
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肝硬化患者血浆氧化型低密度脂蛋白测定
本研究应用酶联免疫吸附法对肝硬化患者血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)进行测定.结果表明:正常对照组,肝硬化代偿期组和肝硬化失代偿期组血清Ox-LDL分别为(420.7±112.1)μg/L、(634.1±167.3)μg/L和(716.3±259.5)μg/L,后两组与正常对照组比较差异均有显著性(P＜0.01).肝硬化失代偿期患者OX-LDL与ALT及胆红素呈正相关(P＜0.05)与白蛋白呈负相关(P＜0.05).结果提示OX LDL是肝硬化发展过程中至肝损害的因素之一.OX-LDL测定对肝硬化的病情判断有一定意义.
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血清resistin、ox-LDL、hs-CRP在缺血性脑血管病发病机制中的作用及临床意义
目的 探讨血清抵抗素(resistin)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)在脑血管病发病机制中的作用及临床意义.方法 缺血性脑血管患者91例为观察组,28例可逆性缺血性脑损伤患者(RIBD组)、36例短暂性脑缺血发作患者(TIA组)、27例局限性脑梗塞患者(FCI组),选同期健康志愿者71例为对照组.对比各组血清resistin、oX-LDL、hs-CRP水平,并分析其与脑血管病严重程度相关性.结果 FCI、RIBD、TIA组血清resistin、ox-LDL、hs-CRP水平明显高于对照组(P＜0.05);RIBD、FCI组resistin、ox-LDL、hs-CRP水平明显高于TIA组(P＜0.05);Spearman相关分析显示血清resistin、ox-LDL、hs-CRP水平与脑血管严重程度呈正相关性(r1=0.902,P1=0.010;r2=0.765,P2=0.010;r3 =0.829,P3=0.000).结论 血清resistin、ox-LDL、hs-CRP水平与脑血管病严重程度相关,并参与脑血管病的发生与发展.
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阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮基质金属蛋白酶-1表达的影响
目的探讨不同浓度的阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA表达的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时加人oxLDL(100 μg/ml),作用24 h后分别加入不同浓度的阿托伐他汀(1～30 μmol/L),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定MMP-1 mRNA的表达.结果 ox-LDL可诱导HUVECs MMP-1 mRNA的表达;不同浓度的阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的MMP-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性(1、10及30 μmol/L)(均P＜0.05).结论阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的HUVECs MMP-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性;具有抗炎作用,其机制可能与抑制MMP-1的表达有关.
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氧化型低密度脂蛋白诱导分子伴侣GRP78在3T3-L1脂肪细胞中的表达
目的 观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导3T3-L1脂肪细胞内质网应激相关分子伴侣葡萄糖调节蛋白78( GRP78)的表达,探讨ox-LDL对脂肪细胞内质网应激的诱导作用.方法 体外培养3T3-L1脂肪细胞,分别给予不同浓度ox-LDL(50,100,200 μg/nl)及内质网应激阳性对照诱导剂衣霉素(Tun)处理.用RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达,筛选出佳干预浓度,用佳浓度的ox-LDL分别干预脂肪细胞6、12、24h,分别用RT-PCR、Western印迹法检测GRP78 mRNA、蛋白表达情况.结果 ox-LDL呈浓度依赖方式诱导脂肪细胞GRP78表达,其表达强度随时间延长而增强,24h达高峰(P＞0.05).结论 ox-LDL可诱导3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激,促使未折叠蛋白反应信号通路的分子伴侣表达增加.
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17β-雌二醇对氧化型低密度脂蛋白由钙介导细胞骨架损伤的抑制作用
目的通过观察17β-雌二醇(17β-E2)与氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)作用于血管内皮细胞后细胞内微丝肌动蛋白的变化以及同细胞内钙离子变化间的关系,以探讨雌激素的血管保护作用机制.方法采用ECV 304脐静脉内皮细胞株体外培养,分为空白对照组,OX-LDL(200 μg/ml)组,4×10-7 mol/L E2作用组,E2保护组,采用激光扫描共聚焦显微镜分别观察OX-LDL作用后12 h时的胞内钙离子的变化及OX-LDL作用24 h时的细胞骨架微丝的改变.结果 OX-LDL作用12 h后细胞内钙离子浓度明显升高,而细胞骨架微丝也在24 h后发生明显的破坏.雌激素预处理后可明显抑制OX-LDL作用导致后细胞内钙离子浓度的升高,并且明显地防止细胞骨架微丝损伤的发生.结论 17β-E2可能通过抑制OX-LDL导致的细胞内钙离子升高从而防止细胞骨架微丝损伤的发生,这可能是雌激素产生血管保护作用的机制之一.
