首页 > 文献资料
-
GCN5特异性质粒筛选及其对MSCs分化的影响
目的 筛选有效质粒片段,探讨组蛋白乙酰化平衡对MSCs分化的影响.方法 提取针对GCN5基因的3条shRNA(ZJ1、ZJ2、ZJ3)重组质粒及阴性对照质粒HK,分别转染入经5-aza诱导的MSCs,24 hA荧光显微镜观察细胞、流式细胞仪检测转染效率、Western-blot分析GCN5蛋白表达,ELBA检测组蛋白乙酰化酶活性.结果 质粒转染效率大于20%;ZJ3转染组组蛋白乙酰化酶活性及GCN5蛋白表达量均有明显降低,抑制效率分别为[(49.0±0.6)%,(35.7±0.1)%,P＜0.05];组蛋白乙酰化水平与MSCs分化进程密切相关,质粒ZJ3可有效抑制不同分化阶段MSCs中乙酰化酶水平,抑制效率分别为[(27.0±0.1)%,(26.7±0.1)%,(25.4±0.1)%,P＜0.05].结论 成功筛选出有效质粒片段ZJ3,初步确证GCN5抑制状态可导致组蛋白乙酰化失衡,从而调控MSGs的分化进程,为后期MSCs移植的临床应用奠定实验基础.
-
组蛋白去乙酰化酶2在烟雾致COPD大鼠肺组织中表达下降
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pneumonia dis-ease,COPD)是一种有多种炎性因子、炎性介子参与的气道慢性炎性反应疾病,其炎性反应过程复杂使病情反复迁延[1].组蛋白乙酰化酶(histone acetylase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶( histone deacetylase,HDAC)在各种炎性反应基因的表达中起重要作用.因此,COPD气道炎性反应可能与之变化所致的炎性反应基因表达增加有关.本实验使用烟熏制备COPD大鼠模型,探讨HDAC2和肺组织炎性变化之间的关系,为COPD治疗提供新途径.
-
探讨组蛋白乙酰化酶对心脏发育基因NKX2.5的动态调控作用
目的：探讨小鼠心脏发育过程中组蛋白乙酰化酶p300和p300/CBP辅助因子（PCAF）对心脏发育基因NKX2.5的动态调控作用，为进一步明确心脏发育的调控机制提供新的理论基础。
方法：收集胚胎14.5 d、16.5 d及新生0.5 d和7 d的正常C57BL/6小鼠心脏，实验分为4组：胚胎14.5 d组（n=10）、胚胎16.5 d组（n=10）、新生0.5 d组（n=5）、新生7 d组（n=3）。采用染色质免疫共沉淀技术，运用抗p300、PCAF、组蛋白H3K9ac抗体沉淀与其相结合的脱氧核糖核酸（DNA）片段，实时荧光定量聚合酶链反应扩增抗体所富集的DNA片段来检测NKX2.5启动子区域p300和PCAF结合水平及H3K9ac乙酰化水平。此外，运用逆转录聚合酶链反应检测NKX2.5基因信使核糖核酸（mRNA）表达水平。
结果：p300和PCAF结合水平在心脏发育的不同阶段均具有时序性：p300的结合水平在胚胎16.5 d组（0.063±0.021）、新生0.5 d组（0.019±0.008）、新生7 d组（0.011±0.003）均低于胚胎14.5 d组（0.231±0.033），且新生0.5 d组和新生7 d组均低于胚胎16.5 d组，差异均有统计学意义（P均<0.05）；PCAF结合水平在胚胎16.5 d组（0.063±0.021）、新生0.5 d组（0.019±0.008）、新生7 d组（0.011±0.003）均低于胚胎14.5 d组（0.185±0.023），差异均有统计学意义（P均<0.05）。H3K9ac乙酰化水平及NKX2.5基因mRNA表达水平在心脏发育的不同阶段均具有时序性：H3K9ac乙酰化水平在胚胎16.5 d组（0.098±0.014）、新生0.5 d组（0.074±0.010）、新生7 d组（0.045±0.014）均低于胚胎14.5 d组（0.119±0.020），且新生7 d组低于胚胎16.5 d组，差异均有统计学意义（P均<0.05）；NKX2.5基因mRNA表达水平在胚胎16.5d组（0.701±0.181）、新生0.5 d组（0.502±0.159）、新生7 d组（0.529±0.131）均低于胚胎14.5 d组（1.000±0.130），差异均有统计学意义（P均<0.05）。
结论：组蛋白乙酰化酶p300和PCAF动态调控NKX2.5启动子区域H3K9ac乙酰化水平，且在小鼠心脏发育过程中NKX2.5 mRNA呈现动态表达。 -
以组蛋白去乙酰化酶为靶标的抗癌药物研发进展
基因表达的精确控制是细胞增殖分化和器官正常生长和发育的基础.基因转录和激活程序依赖于组蛋白乙酰化酶(histone acetylase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)的协同作用.当HDAC过度表达并被转录因子募集,就会导致特定基因的不正常抑制,从而导致癌症及其他疾病.目前以HDAC作为抗癌靶点的研究方兴未艾,现综述HDAC类似蛋白(HDLP)的晶体结构和当前存在的HDAC抑制剂的作用机制、结构种类、研发状况和构效关系,以及新的HDAC抑制剂CS055的研发策略.
-
缺氧对星形胶质细胞DNA甲基化及组蛋白乙酰化相关酶的表达影响
目的 研究缺氧对原代培养星形胶质细胞DNA甲基化相关酶及组蛋白乙酰化相关酶水平的影响.方法 原代培养的星形胶质细胞经氧糖剥夺处理后,Western blot方法检测细胞DNA甲基转移酶,DNA去甲基转移酶,组蛋白乙酰化酶及组蛋白去乙酰化酶的表达.结果 原代培养的星形胶质细胞缺氧处理48 h后,DNA甲基转移酶的表达升高,DNMT3A和DNMT1与对照组相比分别升高了49％和83％,DNA去甲基转移酶的表达降低了36％;组蛋白去乙酰化酶的表达升高到对照组的2.1倍,而组蛋白乙酰化酶的表达则升高得更为明显,为对照组的20倍.结论 缺氧可以改变星形胶质细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化相关酶的表达,从而影响基因的表达.
-
组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶与胚胎发育
过去十几年从酵母和哺乳动物中鉴定出6类组蛋白乙酰化酶(HATs)和4类组蛋白去乙酰化酶(HDACs). HATs和HDACs分别与基因转录的活化和抑制有关.胚胎早期组蛋白乙酰化阶段性分布与合子基因组的转录调节有关,组蛋白去乙酰化引起的转录抑制状态对早期胚胎发育至关重要.应用基因敲除/基因敲入HATs/HDACs方法建立的小鼠胚胎模型死于胚胎期或出现某些器官形态发育及功能异常.不同的HATs/HDACs对胚胎特定器官形成必不可少,与某些先天性疾病的发生密切相关.
-
蛋白酶体抑制剂MG132对姜黄素诱导K562和Raji细胞HDAC1、P300表达的研究
近年来的研究显示泛素-蛋白酶体通路在细胞组蛋白乙酰化、去乙酰化的调控中发挥了重要的作用.有研究报道姜黄素可抑制肿瘤细胞增殖[1],影响细胞周期[2],姜黄素可通过调节组蛋白乙酰化、去乙酰化而发挥其作用[3].我们通过探讨姜黄素和蛋白酶抑制剂MG132联含姜黄素作用K562细胞、Raji细胞对组蛋白乙酰化酶(HDAC1)、P300蛋白的影响进一步明确了姜黄素发挥作用是否是通过泛素-蛋白酶体通路.
-
慢性阻塞性肺疾病组蛋白去乙酰化酶与糖皮质激素抵抗
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种慢性气道炎症,炎症基因的表达受组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)和组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferase,HAT)调控,通常组蛋白乙酰化增高促进基因转录,降低则抑制基因转录.糖皮质激素(glucocorticoid,GC)的一个重要作用是募集HDAC2到基因表达位点,使基因组蛋白乙酰化程度降低,从而抑制炎症基因表达.由吸烟引起的COPD患者,香烟烟雾氧化应激使得HDAC2减少,降低了GC的抗炎作用,导致GC抵抗,而GC抵抗是COPD抗炎治疗的主要障碍.本文讨论GC抵抗的一些分子机制,为COPD患者治疗方案的制定及改善预后提供理论参考依据.
-
组蛋白乙酰化酶及去乙酰化酶与肺部疾病
组蛋白乙酰化酶与组蛋白去乙酰化酶可通过调节染色体结构而影响炎症基因的表达,亦可以通过调节非组蛋白的乙酰化和去乙酰化参与疾病的进程.在肺部疾病中,两者的相互平衡导致基因的异常表达或者相关调控因子的异常表达与肺癌、COPD、哮喘、激素抵抗等疾病密切相关,这也为各种组蛋白去乙酰化酶类药物应用于肺部疾病的治疗提供了理论基础.
-
组蛋白乙酰化对细胞分化的调控及其机制
近来大量实验提示体内组蛋白乙酰化状态的改变会影响到细胞的分化.目前研究主要集中在组蛋白乙酰化状态对肿瘤细胞分化、干细胞分化和胚胎发育等的影响.但其相关作用机制仍不十分清楚.本文就组蛋白乙酰化过程对细胞分化的调控以及其调控的机制进行讨论.
-
N-乙酰转移酶NAT10在软组织肿瘤中的表达及意义
目的:观察N-乙酰转移酶NAT10蛋白在软组织肉瘤中的表达及与类型、分级的关系.方法:通过原核表达NAT10蛋白免疫制备特异性多克隆抗体,并经免疫印迹鉴定;以组织芯片-免疫组化检测166例软组织肉瘤和28例良性肿瘤及瘤样病变中NAT10蛋白的表达.结果:制备多克隆抗体经Western印迹鉴定与NAT10具有特异结合性.免疫组化显示166例软组织肉瘤中NAT10蛋白阳性95例,阳性率为57%(95/166),28例良性肿瘤及瘤样病变中4例阳性14%(4/28),两者间有显著性差异(P＜0.05).NAT10表达的主要分布为:滑膜肉瘤76%(13/17)、恶性纤维组织细胞瘤75%(15/20)、原始神经外胚叶瘤(PNET)70%(16/23)、横纹肌肉瘤70%(7/10)、恶性外周神经鞘膜瘤50%(11/22)、隆突性皮肤纤维肉瘤50%(7/14)、平滑肌肉瘤43%(6/14)、脂肪肉瘤42%(8/19)、黏液性纤维肉瘤38%(6/16).统计比较显示:滑膜肉瘤与黏液性纤维肉瘤和脂肪肉瘤,以及恶性纤维组织细胞瘤与黏液性纤维肉瘤之间NAT10表达具有显著性差异(P＜0.05);而其它各组间无明显差异(p＞0.05).同时,NAT10蛋白强阳性表达(≥++)多存在于滑膜肉瘤(53%,9/17)、横纹肌肉瘤(40%,4/10)及恶性纤维组织细胞瘤(40%,8/20).在FNCLCC分级中,19例I级肉瘤中NAT10阳性表达率为42%(8/19),44例II级肉瘤为43%(19/44),70例III级肉瘤为73%(51/70).III级NAT10阳性率显著高于II级组和I级组(均为P＜0.05).结论:研究表明N-乙酰转移酶NAT10表达于多种人软组织肉瘤,尤其在高度恶性肉瘤,因此有可能为软组织肉瘤的分级及预后因子.
-
组蛋白乙酰化酶p300和CREB结合蛋白在小鼠胚胎心发育中的时序表达
目的:探讨p300和CREB结合蛋白(CBP)在小鼠胚胎心发育过程中的时序表达规律.方法:选取胎龄7.5～18 d、出生1 d、3月小鼠正常心,采用免疫组织化学法观察p300和CBP在小鼠胎心发育中的表达分布及变化规律.结果:p300在胚胎心发育各个时期及出生1 d和3月成年鼠的心各部分均有很强表达.CBP在E7.5不表达;在E8.5～E9.5的心管中较强表达;E10.5～E16.5及E18和生后1 d心肌较强表达,房室瓣和小梁网较弱表达,室间隔肌部弱表达而膜部几乎不表达;3月成年鼠心肌和小梁较弱表达,室间隔极弱表达.结论:p300对发育早期的生心细胞诱导特化和中期的室间隔形成作用较CBP更大.
-
组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的抗肿瘤机制及其对消化系肿瘤的治疗作用
表观遗传修饰(epigenetic modification)调控基因表达,其主要包括DNA甲基化和组蛋白乙酰化.关于DNA甲基化在消化系肿瘤中的作用,笔者已在本刊2003年第2期中有所论述[1].在组蛋白乙酰化的可逆过程中,组蛋白乙酰化酶(即组蛋白乙酰基转移酶,histone acetyltransferases,HATs)和组蛋白脱乙酰基酶(histone deacetylases,HDACs)分别起乙酰化和去乙酰化作用.乙酰化的组蛋白相关基因表达增强.鉴于有关组蛋白乙酰化,尤其是HDAC抑制剂抗肿瘤作用的研究日趋增多,本文对此作一简要回顾和展望.
-
结肠癌分子治疗的靶:DNA甲基化和组蛋白乙酰化
DNA甲基化和组蛋白乙酰化是哺乳类动物重要的两种基因表达的后生调节方式.甲基化主要是指位于胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷(CpG)中的胞嘧啶为甲基基团所修饰.基因组中CpG积聚的区域谓之"CpG岛".生理情况下,多数基因的CpG岛是非甲基化的,而孤立的CpG则多半处于甲基化状态.基因的5′端(启动子区等)含有丰富的CpG岛,其甲基化则基因表达受抑制.甲基化是由甲基化酶(DNA methyltransferase,DNMT)1、3a和3b催化形成的.DNA和组蛋白共同构成染色质.组蛋白主要有H3、H4、H2A和H2B等.其乙酰化状态由组蛋白乙酰化酶(histone acetvlases,HATs)和去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)调控.一些转录因子如p300等具有HAT活性;同时丁酸盐和Trichostatin(TSA)等具HDAC的拮抗作用.两类物质都可使乙酰化水平上调,使染色质处于开放状态,便于DNA中的基因转录与表达.通常,甲基化的基因伴同相应的组蛋白去乙酰化;反之亦然.
-
曲古抑菌素A对恶性黑素瘤的抗癌作用
组蛋白乙酰化和去乙酰化在基因的转录调控中发挥着重要作用,组蛋白乙酰化水平由组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的动态平衡调节.HAT和HDAC的异常与肿瘤的发生有着密切的关系[1].近年来大量研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)可抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞分化和凋亡,并可发挥免疫调节作用,是新一代具有广泛应用前景的抗肿瘤药[2].曲古抑菌素A源自链霉菌代谢产物,先作为抗真菌药物使用,近来研究表明其具有明显的组蛋白去乙酰化酶抑制剂活性,对肝癌、胃癌、口腔癌及人神经母细胞瘤等肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用[3].本实验主要研究曲古抑菌素A对恶性黑素瘤细胞A375的细胞毒作用并对比研究曲古抑菌素A对A375和正常黑素细胞的细胞毒性.
-
组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶在细胞增生分化和肿瘤发生中的作用
真核细胞组蛋白N端赖氨酸残基的乙酰化与基因的转录激活有关。多种具有组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性的调节因子，通过对组蛋白乙酰化过程的调节，在基因表达调控中发挥着重要作用。HAT和HDAC的异常与肿瘤发生有密切的关系。
-
组蛋白乙酰化酶RNAi慢病毒文库构建及其对胆囊癌细胞的感染
目的 构建人基因组中16个组蛋白乙酰化酶的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体文库,为进一步研究表观遗传因子对胆囊癌的调控机制提供有利的工具.方法 依据shRNA引物设计原则,分别针对每个基因设计4对shRNA引物,将引物退火形成粘性末端后连接至慢病毒载体；经菌落PCR、酶切验证正确后,进行转化及质粒抽提.结果 构建了16个组蛋白乙酰化酶基因的shRNA慢病毒载体,共64个shRNA慢病毒载体克隆；并对胆囊癌细胞SGC996和GBC-SD进行了病毒感染的MOI值(multiplicity of infection)摸索,以确保可通过RNA interference(RNAi)慢病毒干扰的方式对这两株细胞进行研究.结论 成功构建了16个组蛋白乙酰化酶的shRNA慢病毒载体,从而为在SGC996和GBC-SD胆囊癌细胞中研究人组蛋白乙酰化酶奠定坚实的基础.
-
组蛋白乙酰化酶介导的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化在孕期乙醇暴露致 MEF2C 过表达中的作用
目的：探讨组蛋白乙酰化酶介导的组蛋白 H3K9ac 的高乙酰化在孕期乙醇暴露致 MEF2C 过表达中的作用，为防治乙醇所致的心脏发育异常提供新的干预靶点。方法选取 C57BL／6小鼠作为研究对象，随机分为5组：空白对照组、二甲基亚砜（DMSO）组、乙醇组、乙醇＋漆树酸组、漆树酸组。收集胎鼠心脏，采用染色质免疫共沉淀技术和 Western blot 检测小鼠心肌组织中 MEF2C 启动子区域组蛋白乙酰化酶的结合量及组蛋白 H3K9ac 的乙酰化水平。运用实时荧光定量 PCR 检测心脏核心转录因子 MEF2C mRNA 表达水平。结果胎鼠心脏核心转录因子 MEF2C 启动子区域组蛋白 H3K9ac 乙酰化水平乙醇组（1．30±0．19）显著高于空白对照组（0．45±0．01），差异有统计学意义（P ＜0．05）；且乙醇组胎鼠心脏组蛋白乙酰化酶 E1 A 结合蛋白（p300）、p300／环磷酸腺苷反应元件结合蛋白辅助因子（PCAF）、类固醇受体辅活化子-1（SRC1）在 MEF2C 启动子区域的结合量（1．68±0．08、1．08±0．05、1．18±0．05）显著高于空白对照组（0．82±0．08、0．42±0．02、0．39±0．08），差异均有统计学意义（P 均＜0．05）。胎鼠心脏 MEF2C mRNA 表达量在乙醇组（1．36±0．12）显著高于空白对照组（0．29±0．03），差异有统计学意义（P ＜0．05）。组蛋白乙酰化酶抑制剂漆树酸能够显著降低 MEF2C 启动子区域 p300、PCAF 结合量（1．52±0．05比0．63±0．09，1．13±0．04比0．45±0．04）及组蛋白H3K9ac 乙酰化水平（1．58±0．08比0．67±0．05），显著下调心脏核心转录因子 MEF2C 的表达（1．36±0．12比0．41±0．05），差异均有统计学意义（P 均＜0．05）。结论p300、PCAF 介导的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化可能是孕期乙醇暴露致心脏核心转录因子 MEF2C 过表达的重要调控因素。漆树酸能够通过抑制 p300、PCAF 在启动子区域的结合量显著降低乙醇所致的组蛋白 H3K9ac 高乙酰化，从而下调 MEF2C 的过表达。
-
丙戊酸钠调控组蛋白乙酰化对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡影响
目的 探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制.方法 不同浓度的VPA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平,荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测p21基因mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果经VPA作用后,人宫颈癌Hela细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA表达增加；同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加.结论 VPA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡.
-
细胞复制性衰老及早衰过程中组蛋白整体乙酰化改变
目的 检测人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导细胞早衰过程中组蛋白整体乙酰化修饰的改变.方法 应用细胞免疫荧光实验观察组蛋白乙酰化水平变化,并基于ELISA样反应方法检测组蛋白总体去乙酰化酶的活性变化,荧光定量PCR检测乙酰化酶mRNA表达,荧光定量PCR和Western印迹检测去乙酰化酶表达变化及曲古霉素A对相应酶表达的影响.结果 在细胞复制性衰老及细胞早衰过程中,组蛋白H3和H4整体乙酰化水平逐渐下降;去乙酰化酶活性逐渐降低;与年轻细胞组相比,中年细胞与复制性衰老细胞组P300表达下降;中年细胞组PCAF稍升高,复制性衰老细胞组降低;早衰起始组P300和PCAF均升高,早衰持续组P300降低;中年细胞组HDAC1表达稍降低;复制性衰老细胞组HDAC2稍降低;而HDAC3均降低;早衰起始组HDAC1,HDAC3有不同程度升高;早衰持续组HDAC2,HDAC3降低显著,而HDAC1明显升高.曲古霉素A诱导P300,PCAF表达,而降低HDAC1,HDAC2和HDAC3表达.结论 组蛋白H3和H4整体低乙酰化是衰老细胞的伴随状态;细胞复制性衰老与过氧化氢诱导的早衰内在调控机制存在差别.
