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乙酰肝素酶在膀胱移行细胞癌中的表达及其与预后的关系
目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其对膀胱癌预后判断的意义.方法 应用免疫组化法,分别对80份膀胱癌组织中HPA的表达和微血管密度(MVD)进行检测.20份非肿瘤膀胱组织作为对照.结果 80份膀胱癌组织中HPA阳性率57.5%(n=46),非癌膀胱组织中HPA表达均为阴性,两组差异有统计学意义(P＜0.01).HPA表达阳性率随着膀胱癌分期、分级的增高及淋巴结转移而升高(P＜0.05).膀胱癌组织中HPA阳性组MVD值为45.24±9.95,显著高于阴性组(34.0±10.34)(P＜0.01).HPA表达阳性组的膀胱癌患者的2、3、5年生存率低于阴性组(分别P＜0.05,P＜O.05和P＜0.01),COX模型多因素分析显示HPA是膀胱癌的一种独立预后不良因子.结论 HPA的表达与膀胱移行细胞癌的临床病理特征和新血管生成相关,是膀胱癌一种新的独立预后不良因子.
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寻常型银屑病患者血清HPA和VEGF水平检测及与PASI评分的相关性分析
目的 检测寻常型银屑病患者血清肝素酶(HPA)和血管内皮生长因子(VEGF)水平并探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测90例寻常型银屑病患者血清HPA和VEGF水平,并以60名正常人作对照.结果 寻常型银屑病患者血清HPA和VEGF水平均显著高于对照组(P,＜0.05);进行期患者血清HPA和VEGF水平均显著高于静止期患者(P＜0.05);血清HPA和VEGF水平均与银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分呈正相关(P＜0.05).结论 寻常型银屑病患者血清中HPA和VEGF水平显著升高,与疾病活动和严重程度密切相关,有助于对银屑病病情的判断.
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负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定
目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-hpa).方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315-hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-hpa,并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-hpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml.电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制.PCR双引物鉴定Ad-hpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段.结论成功包装了负盘.
关键词： 肝素酶 腺病毒科 复制缺陷型腺病毒载体 转染 -
肝素酶与肿瘤发生发展的研究进展
肝素酶(heparanase,Hpa)是一种糖苷内切酶,可特异性地降解硫酸肝素,破坏细胞外基质和血管基底膜的完整性,释放结合于硫酸肝素上的生长因子、酶类分子等生物活性分子,促进细胞增生和微血管的生长,使肿瘤易于生长转移.国内外的大量研究已证明了肿瘤组织中肝素酶异常高表达,而抑制肝素酶的活性或表达可明显抑制肿瘤的生长、转移和血管发生.
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四唑蓝比色法测定肝素酶活性
目的:建立一种检测肝素酶活性的简便快捷的方法.方法:肝素酶作用于肝素/硫酸肝素特定位点的β-1,4糖苷键生成还原性醛基末端,还原性醛基末端可将生色底物四唑蓝还原成蓝色产物.颜色变化反映还原性醛基基团数量的改变的特性,被用于肝素酶活性的检测.结果:四唑蓝比色法的结果表明,颜色的改变程度与酶活性成正比;凝胶和SDS-PAGE电泳法验证了四唑蓝比色法的结果.结论:四唑蓝比色法可较准确地反映肝素酶活性,可以成为测定肝素酶活性的简便、经济、有效的方法.
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肝素酶及其研究进展
目的 综述肝素酶及其研究进展.方法 根据文献对近年来肝素酶的研究进展进行整理、分析、归纳.结果与结论 肝素酶在医药工业领域有着重要的应用价值和前景.了解肝素酶的结构性质,优化肝素酶的发酵生产条件以及对重组肝素酶的研究对进一步拓宽素酶的生产和应用有着重要的意义.
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肝素酶的研究进展
肝素酶(heparanase,Hpa)是近年来研究较多的一类-D糖苷内切酶(endo-D-glucuronidase),它既存在于正常组织,如胎盘和淋巴器官,对胚胎形成,神经系统发育,新生血管形成,炎症反应发挥着正常的生理功能;也表达于多种恶性肿瘤细胞表面,促进细胞的侵袭和转移,诱导肿瘤血管生成,降低肿瘤患者的生存率.Hpa定位于溶酶体,既可以作为酶,也可以作为黏附分子,与局部pH值有关.研究证实,活性Hpa为8×103和50×103两种亚型以非共价结合形成的异二聚体.目前,以抑制Hpa活性及其表达作为肿瘤治疗目的的研究正在进行之中.
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肝素酶mRNA在胃癌组织中的表达及其与c-met表达的关系
目的研究胃癌组织中肝素酶mRNA的表达与胃癌临床病理特征及肿瘤微血管密度之间的关系,并探讨胃癌组织中的肝素酶表达增高的机制.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测47例手术切除的胃癌组织及癌旁组织中肝素酶mRNA的表达,免疫组织化学法检测c-met在胃癌组织中的表达,CD34免疫组织化学染色,计数肿瘤微血管密度.结果胃癌组织中肝素酶表达阳性率明显高于相应的癌旁组织(74.5% vs 19.1%,P<0.01).肝素酶表达阳性组的胃癌组织,其微血管密度显著高于阴性组(51±15 vs 31±10,P<0.01).肝素酶mRNA的表达与胃癌患者的肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度以及TNM分期有关,与胃癌患者的年龄、性别、分化程度及有无远处转移无关.胃癌组织中c-met阳性率为85.1%,与肝素酶mRNA表达之间的相关系数为0.714(P<0.01).结论胃癌组织中肝素酶mRNA表达水平增高,肿瘤微血管密度增高,促进了胃癌的生长、浸润及转移,与胃癌预后不良的临床病理特征有关.c-met癌基因可能参与了肝素酶的表达调控.
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肝素对脓毒症肝损伤小鼠肝组织和血清肝素酶水平的影响
目的 探讨肝素对脓毒症肝损伤小鼠体内肝素酶(HPA)表达的影响.方法 6~8周龄健康雄性C57BL/6小鼠48只,按照随机数字表法将动物分组.24只采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症小鼠模型(CLP组);24只进行假手术处理(Sham组),仅开腹、关腹,不予结扎.Sham组和CLP组各有12只动物进行肝素预处理(Sham+UFH组、CLP+UFH组),分别于术前30min及术后12h经小鼠尾静脉注射8U普通肝素(UFH,稀释至200μL);另外12只小鼠注射等量生理盐水.分别于术后4、24h留取各组小鼠血清及肝脏组织标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清HPA、白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色,观察肝组织病理学改变;采用免疫组化法检测肝组织HPA表达.结果 与Sham组比较,CLP组血清HPA、IL-6、IL-1β、TNF-α、ALT、AST水平均明显升高,且随时间延长呈进一步升高趋势;HE染色显示肝组织炎性细胞浸润,肝细胞坏死;免疫组化显示肝组织HPA表达水平明显增加,说明脓毒症动物模型制备成功.与CLP组比较,CLP+UFH组术后4h血清HPA、炎性因子、转氨酶水平即明显下降〔HPA(ng/L):76.72±2.75比101.55±7.54,IL-6(ng/L):51.16±5.68比63.89±3.26,IL-1β(ng/L):31.53±2.90比40.87±2.88,TNF-α(ng/L):171.76±5.60比194.62±14.13,ALT(μg/L):0.26±0.09比0.62±0.17,AST(μg/L):1.03±0.22比1.45±0.08,均P<0.05〕,24h时虽较4h显著升高,但仍显著低于CLP组〔HPA(ng/L):125.30±7.80比302.50±17.81,IL-6(ng/L):81.16±4.54比176.56±5.45,IL-1β(ng/L):61.13±2.80比113.73±3.96,TNF-α(ng/L):328.47±10.79比599.62±10.20,ALT(μg/L):0.38±0.17比0.91±0.26,AST(μg/L):1.16±0.15比1.88±0.08,均P<0.05〕.HE染色显示,CLP+UFH组术后24h肝组织水肿较CLP组明显减轻,炎性细胞浸润减少.免疫组化显示,CLP+UFH组术后4h肝组织HPA表达水平〔A值(×10-3)〕即较CLP组明显下降(2.49±0.93比6.05±1.22,P<0.05),24hHPA表达下降更为明显(1.86±0.77比7.55±0.35,P<0.05).Sham+UFH组各指标与Sham组比较差异均无统计学意义.结论 脓毒症小鼠肝脏HPA表达增加,血清HPA水平升高,肝素可能通过拮抗HPA的作用减轻脓毒症小鼠肝损伤.
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奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶表达的影响
目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶(Hpa)表达的影响并探讨其作用机制.方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后取处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的OCT共培养24h和48h,以半定量RT-PCR法及免疫细胞化学法检测OCT对胃癌细胞Hpa表达的影响.结果:1)胃癌细胞与1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT共培养24h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.001);与1×10-5mol/L和1×106mol/L的OCT共培养48h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.000).1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT与胃癌细胞共培养48h对HpamRNA表达的抑制效果优于24h(P=0.002和0.003).OCT1×10-7mol/L组,OCT1×10-8mol/L组及对照组各组之间HpamRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05).2)胃癌细胞经1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的OCT作用24h和48h后,Hpa蛋白的表达也相应下降.结论:OCT1×10-5mol/L和OCTl×10-6mol/L两种浓度能够有效抑制SGC-7901胃癌细胞株Hpa的表达,从而可能对肿瘤的侵袭转移起到抑制作用.
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肝素酶调节对肝癌细胞粘附侵袭能力的影响
目的：探讨人肝素酶（HPSE）对肝癌细胞粘附、侵袭能力的影响。方法：RT-PCR、Western blot检测人肝癌细胞系BEL-7402、HepG2、HCCLM3中HPSE的表达。构建4个HPSE的miR载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-HPSE（pcDNA-miR-HPSE）和表达载体pIRES2-EGFP-HPSE；分别转染HPSE高表达和低表达细胞。荧光显微镜观察转染效率，RT-PCR和Western blot检测转染细胞HPSE表达；酶标仪检测细胞粘附能力，Transwell小室检测侵袭转移能力。结果：HPSE mRNA和蛋白在在3种肝癌细胞中相对表达量均高于正常肝细胞（P<0.05），以HCCLM3表达高，HepG2低（P<0.05）；4种miR载体和表达载体鉴定符合要求；转染效率75%～85%；miR载体均能抑制HCCLM3细胞HPSE表达，以pcDNA-miR-HPSE-1抑制效果佳（P<0.01）；表达载体可提高HepG2细胞HPSE表达（P<0.05）；HCCLM3细胞转染pcDNA-miR-HPSE-1后，粘附率、侵袭和迁移细胞数均下降约50%（P<0.01）；HepG2细胞转染pIRES2-EGFP-HPS后上述各指标分别升高近40%（P<0.05）。结论：不同性质的HPSE载体可对肝癌细胞粘附和侵袭转移能力进行双向调节；HPSE不但参与肝癌细胞侵袭转移，亦可能与肝癌细胞粘附有关。
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eIF4E反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中eIF4E HPA表达的影响
目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中elF4E及肝素酶(HPA)蛋白、mRNA表达的影响,并观察其对EC9706细胞侵袭力的抑制效果.方法:针对eIF4E mRNA翻译起始区设计经硫代磷酸化修饰的反义寡核苷酸(ASODNS),经脂质体转染食管癌EC9706细胞,采用原位杂交、Western Blot和Boy-den chamber侵袭实验等方法检测抑制前后EC9706细胞中eIF4E及HPA表达情况及细胞侵袭力改变.结果:elF4E ASODNS转染食管癌EC9706细胞24、48、72h后,eIF4E及HPA的mRNA与蛋白表达量均较对照组有所降低(P＜0.05).且均以转染72h的抑制效应为明显,在每个时间段内随剂量增加elF4EASODNS抑制效应明显增强(P＜0.05);eIF4EASODNS对HPA蛋白、mRNA表达的抑制效应和对eIF4E蛋白、mRNA表达的抑制效应,呈正相关关系(蛋白r=10.02, mRNA r=10.17,P均<0.01);eIF4EASODNS体外转染食管癌EC9706细胞后,其穿越Matrigel的细胞数明显少于细胞对照组、空白对照组和无关对照组(P均<0.05).结论:elF4E ASODNS可抑制食管癌EC9706细胞中eIF4E、HPA蛋白及mRNA表达,且可抑制食管癌EC9706细胞的浸润转移.该研究结果为临床治疗食管癌等恶性肿瘤浸润转移奠定一定的理论基础.
关键词： 真核细胞起始因子4E 反义寡核苷酸 人食管癌EC9706细胞株 肝素酶 转染 -
肝素酶与肿瘤转移的研究进展
恶性肿瘤要实现转移必须完成两个关键步骤:突破由基底膜(BM)和细胞外基质(ECM)构成的组织屏障和形成新生血管.硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate protoglycan,HSPG)作为BM、ECM和血管壁的主要成分之一,其降解对于肿瘤的转移具有重要的促进作用.经研究发现肝素酶(heparanase,HPA)不仅能直接降解HSPG,还可以协同碱性纤维细胞生长因子(bFGF)等生物因子,促进肿瘤细胞生长、血管生成和肿瘤转移[1].
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肝素酶与胃癌转移及预后的关系
目的 探讨肝素酶(heparanase)在胃癌组织中表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测80例胃癌石蜡切片和20例正常胃黏膜中肝素酶的表达情况;分析其表达与胃癌患者年龄、性别、分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系.结果 80例胃癌中有49例(61%)呈肝素酶阳性表达,主要表达在癌细胞质和(或)细胞膜中,在正常胃黏膜上皮则呈阴性表达,肝素酶在胃癌中表达明显增高(P<0.05).表达与胃癌的分化程度、分期、浸润深度、淋巴结转移有关,与患者年龄、性别无关.结论 肝素酶在胃癌组织中的表达较正常胃黏膜上皮明显上调,其表达与胃癌的侵袭及转移能力密切相关.
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胃癌腹腔冲洗液肝素酶和存活素的相关研究
目的 探讨检测胃癌腹膜转移的方法.方法 收集50例胃癌患者及8例胃良性病变患者的腹腔冲洗液.采用流式细胞术(FCM)检测胃癌患者术中腹腔冲洗液肝素酶(HPA)和存活素(Survivin)的表达情况,并采用薄层液基细胞制片术进行腹腔冲洗液细胞学(PLC)检查.结果 50例胃癌患者腹腔冲洗液中HPA阳性表达为52.0％(26/50)；Survivin阳性表达率58.0％ (29/50),HPA和Survivin联合检测阳性率为68.0％ (34/50),两者阳性率皆高于PLC 22.0％的阳性率(P＜0.01);HPA的阳性率与浸润深度、组织分化程度以及TNM分期呈正相关；Survivin的阳性率与肿瘤浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关.8例良性病变患者腹腔冲洗液中HPA和Survivin无阳性表达.结论 (1)腹腔冲洗液HPA和Survivin的检测可作为判断肿瘤恶性程度和预后的一项指标.(2)FCM方法检测腹腔冲洗液HPA和Survivin可能成为临床预测胃癌腹膜转移的一种方法.
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肝素酶在胃正常组织、胃腺瘤和胃癌组织中的表达及临床意义
目的探讨肝素酶表达在胃癌发展中的作用.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定42例胃癌和26例非癌组织中肝素酶的表达情况,采用χ2检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系.结果胃癌中有26例肝素酶呈阳性表达(阳性率61.9%);非癌组织中只有1例呈弱阳性表达(阳性率3.8%).肝素酶mRNA在胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期明显比Ⅰ、Ⅱ期表达阳性率高(P＜0.05),而且更倾向于在有浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移的胃癌组织中表达(P＜0.05).结论肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移.肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一.
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血栓弹力图肝素酶对比试验指导临床用药1例
1病历资料患者女性,55岁,因"自感左下腹部波动性肿物3天"于2011年11月2日入我院血管外科.入院后,结合病史、查体及相关辅助检查,明确诊断为腹主动脉、肾周动脉瘤、腹主动脉瘤附壁血栓夹层、高血压3级(极高危险组),于2012年11月28日在全麻下行"腹主动脉瘤切除、人工血管重建术",术后24小时内患者出现无尿症状、尿素、肌酐呈持续上升趋势,出现呼吸困难,2012年12月1日开始,行CRRT血液净化治疗.2012年12月2日,患者呼吸困难进行性加重,血氧饱和度进行性下降,进行呼吸机辅助呼吸,气管切开过程顺利,气切处渗血较多.加压止血后,仍有大量渗出,腹水引流量增加.2012年12月3日,患者行血栓弹力图(TEG)肝素酶对比试验,普通杯检测R值120 min,K值未测出,α角5.1度,MA值8;肝素酶杯检测R值26.8 min,K值20.1,α角11 9度,MA值42.5,提示患者体内有大量肝素残余,并且凝血因子缺乏,需要补充新鲜冰冻血浆、冷沉淀血小板.依照血栓弹力图结果提示,给予鱼精蛋白、新鲜冰冻血浆、冷沉淀血小板后.患者气切处渗血明显减少,逐渐停止,腹水引流量减少.
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硫酸乙酰肝素、肝素酶及其与肿瘤转移的关系
细胞外基质和基底膜的降解是癌细胞穿透组织屏障发生转移的重要步骤.硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是细胞外基质和基底膜的组成成分,其多糖侧链可以被葡萄糖苷内切酶-肝素酶,特异性识别并切割,以破坏细胞外基质和基底膜的完整性,促进肿瘤转移.临床上肿瘤患者肝素酶高表达与肿瘤恶性程度和转移发生密切相关.深入了解硫酸乙酰肝素、肝素酶及它们与肿瘤转移相关的作用机制有助于我们寻找肿瘤治疗的新思路.本文将从硫酸乙酰肝素的合成调控、功能、肝素酶的转录和活性调节、肝素酶表达与肿瘤患者的临床特征,以及硫酸乙酰肝素、肝素酶与肿瘤转移的关系进行综述.
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肝素酶信号通路在肝癌转移中的研究进展
肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球第六位常见的和第三大肿瘤致死的恶性肿瘤[1].手术切除仍然是早期肝癌的主要的治疗手段,但是术后复发一直是切除或射频消融的主要难题[1].肿瘤的早期转移和侵袭是主要的表现,乙酰肝素酶(heparinase,HPSE)和肿瘤的关系已有令人信服的证据,HPSE的水平的提升,对肿瘤的倍增和侵袭转移有决定性作用.干扰影响HPSE表达的分子信号通路可能是解决肿瘤的复发的新方式.本文就HPSE及其肿瘤转移的信号通路和抑制剂方面作出综述.
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肝素酶与胃癌侵袭转移的关系
胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一,位居消化道肿瘤之首.多年来,胃癌的发生发展及其侵袭转移一直是众多学者研究的热点.肝素酶(Hpa)是一类β-D糖苷内切酶(endo-β-D-glucuronidase),它既可存在于正常组织, 也表达于多种恶性肿瘤细胞表面,以水解的方式降解组织屏障中的糖蛋白成分硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPGs),释放HSPGs结合的生物活性分子,促进细胞的侵袭和转移,诱导肿瘤血管生成,降低肿瘤患者的生存率.此文就Hpa与胃癌侵袭转移的关系作一综述.
