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动物细胞同工酶检测方法的改良及其应用
同工酶是一类催化功能相同但化学组成和结构不同的酶,广泛地存在于高等生物细胞内.不同种属来源的细胞具有不同的同工酶分布,通过电泳分离可得到它们特异性的同工酶图谱,因此同工酶检测可作为种属鉴别的依据.
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高效毛细管电泳分离氨基酸对肝癌肝硬化的诊断价值
目的:建立高效毛细管电泳分离氨基酸的方法探讨肝癌肝硬化患者血清氨基酸变化.方法:用毛细管电泳法对17种常见氨基酸的2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,优化缓冲液浓度、pH、有机溶剂及表面活性剂对分离影响的条件,对正常人,肝癌及肝硬化患者各20例的血浆游离氨基酸进行测定.结果:在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸,异亮氨酸外均达到基线分离.9 min内分离18种氨基酸,线性在20-1 000μmol/L范围,回收率为77.5-113.3%,批内精密度2.6-11.4%,批间精密度5.8-19.7%.肝硬化组酪氨酸、丝氨酸、色氨酸明显升高,丙氨酸明显下降;肝癌组酪氨酸、半胱氨酸、缬氨酸明显升高,脯氨酸明显下降.结论:以浓度为30 mmol/L pH9.9的硼砂溶液含150 g/L异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果佳,分离时间30 min,出峰17个.毛细管电泳测定血浆游离氨基酸对肝癌肝硬化诊断和治疗有一定指导意义.
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结核分支杆菌基因组DNA指纹技术在结核病流行病学中的应用
结核分支杆菌基因组DNA指纹技术,可以在种、株水平对结核分支杆菌进行鉴定,因此在结核病学的多个领域,尤其是流行病学中有很大的应用价值。 一、结核分支杆菌基因组DNA指纹技术及标准方法的确立 将结核分支杆菌的基因组DNA采用特殊的技术切割成大小不同的片段,电泳分离,就可以清楚地看到像人的皮肤指纹一样具有特征性的条带。这就是结核分支杆菌的DNA指纹。建立结核分支杆菌DNA指纹的主要技术有:限制性片段长度多态性(RFLP)方法和聚合酶链反应(PCR)方法。RFLP方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如插入序列IS6110[1]、IS1081[2],多态性富含GC重复序列[3],(GTG)5寡聚脱氧核苷酸[4]等,利用限制性内切酶酶切特征性片段上的某一位点,电泳分离、Southern blot而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法具有良好的特异性和稳定性,已成为结核分支杆菌株水平鉴定的主要方法[5,6]。PCR方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如IS6110、DR[7]、16S rDNA[8],设计特异的引物进行多种方式的聚合酶链反应,电泳分离,而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法简单快速,但特异性和稳定性不及RFLP方法,目前作为RFLP方法的补充。
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高效毛细管电泳分离复方洗必泰栓
复方洗必泰栓是一种消毒杀菌药,对厌氧菌、需氧菌和毛滴虫等感染性疾病具有高效低毒的治疗效果.该栓剂中主要成分为甲硝唑和醋酸洗必泰.用高效液相色谱法(HPLC)测定单独含有甲硝唑或洗必泰的制剂已有报道[1~3].
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ELISA法定量检测长春新碱诱导的K562及K562/VCR凋亡
细胞凋亡是一种不同于细胞坏死的细胞死亡方式,具有特殊的形态学及生物化学特征.其生物化学变化主要表现为内源性核酸内切酶的激活.它依赖于Ca2+、Mg2+的核酸内切酶从核小体间连接处将双链DNA切断,形成以180bp为小单位的DNA片断,经琼脂糖电泳分离后形成"DNA梯子",故可用琼脂糖电泳法检测细胞凋亡,但此方法只能进行定性分析,而无法对细胞凋亡进行定量检测.本试验采用ELISA法检测凋亡细胞组蛋白-DNA片断,并将测定结果与流式细胞仪PI染色法进行了比较.
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高分辨电泳分离血清前白蛋白及其在肝病方面应用探讨
肝硬化、肝癌、各种肝病长期危害人类的健康,而血清前白蛋白(PA)是肝功能损害的敏感指标[1],且半衰期短,对肝病的早期发现、病情观察、治疗和预后判断都有重要的意义,但一般方法检测结果不够理想,我们采用高分辨血清蛋白电泳检测PA,并对其在肝病方面的临床应用做了一些探讨.
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全自动电泳技术的临床应用
全自动电泳仪是目前较先进的进行电泳分析技术的精密仪器,该仪器是用琼酯糖凝胶板作载体,把血清蛋白分区带,此方法使用方便,更适合临床应用.我科采用SH-2020全自动电泳系列,对我院病人作血清蛋白电泳分离,分离出的区带结果,对临床诊断具有一定价值.
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毛细管区带电泳分离血清蛋白的进展
毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis,CZE)用于血清蛋白分离的临床应用是在二十世纪90年代早中期开始的[1].在这期间,用于血清蛋白分离的琼脂糖电泳(AGE)与CZE方法比较的文章已有报道.报告指出,使用一个单一的毛细管设备,CZE给出的血清蛋白分离图谱能够与AGE相媲美.
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LDL-C直接测定与PVS沉淀法和F公式计算的比较
LDL是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素.测定LDL-C的方法有:经典方法是超速离心分离LDL,耗资费时.电泳分离LDL的方法也不够简便;化学法分离VLDL,然后测定HDL与LDL部分的胆固醇,减去HDL-C即得LDL-C,操作麻烦,分离效果也不好.
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电泳分析精浆蛋白质
目的:探讨精浆蛋白质特性以及对男性不育症的影响.研究其作为男性不育症蛋白质诊断指标的科学性、可行性和实用性.方法:利用自动化琼脂糖区带电泳对精浆蛋白质进行分离.结果:碱性琼脂糖凝胶电泳可将精浆蛋白质分为6个组分,分别命名为A带、B带、C带、D带、E带、F带.弱精组C带低于正常组,E带高于正常组,弱畸精组B带低于正常组.结论:由于弱精组C带低于正常组、E带高于正常组,弱畸精组B带低于正常组.推测弱精的原因除免疫因素外,还可能与其它未知因素有关.与弱精和弱畸精相关的蛋白质可能位于C带、E带和B带中.也就是这些蛋白电泳时位于γ区和靠近α2区,主要是一些球蛋白.至于具体哪些蛋白在其中起作用以及作用大小,尚需进一步探讨.
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6个STR基因座在宁夏山区回族聚居区的多态性
128名无关个体血样,取自宁夏回族聚居之南部山区6县.Chelex法提取DNA,按Promega公司试剂盒操作方法进行D16S539、D7S820、D13S317、CSF1PO、TPOX、TH01等6个基因座的复合扩增,并进行聚丙烯酰胺变性胶电泳分离和银染检测,得到基因分型及各基因座等位基因频率分布(表1).
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浙江汉族人群9个STR基因座的遗传多态性调查
利用四色荧光标记复合扩增的方法,在同一反应管内复合扩增D3S1358、vWA、FGA、D8S1179、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317及D7S820九个STR基因座.扩增产物用ABl310型基因分析仪进行毛细管电泳分离,自动荧光检测予以分型.经对200名浙江汉族无关个体进行群体遗传学调查,获得该9个STR基因座的频率分布,以及各基因座的杂合度(H)、个人识别能力(DP)、偶合率(PM)、非父排除率(EPP)和多态性信息总量(PIC)等群体遗传学参数,为法医学应用提供理论依据,现报告如下.
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STR FGA基因座变异 1例
在采用 PCR-STR技术进行亲子鉴定的案例中,发现 1例 FGA基因座变异,现报道如下。 1 案情摘要 某男( 35岁,汉族)和某女( 32岁,汉族)携 " 儿子 " 来本室要求做亲子鉴定。 2 检验过程 分别抽取该女、 " 儿子 " 及该男静脉血各 1ml,用 Na2EDTA. 2 H2O抗凝,分别标明 1号 " 、 2号 " 、 3号 " ,备检。用 Chele x-100 提取 1号、 2号、 3号检材的 DNA,然后进行 F13A01、 FES/FPS、 D1 9S253、 TPOX、 D7S820、 D12S391、 CYP19、 TH01、 FGA、 D3S1359、 D13S317、 FOLP2 3、 GABRB15、 CSF1P0、 vWA、 D5S818、 D7S2846、 D2S441、 D3S1358、 D7S221共 20个座位的 PCR扩增,扩增产物用含 4mol/L尿素、 0.5mm厚的变性聚丙烯酰胺凝胶( T6%、 C5%)电泳分离、银染,得到各位点的扩增片段长度多态性图谱。根据扩增片段电泳迁移的距离,借用顶蓬原则,参考各座位在中国汉族人群的基因频率分布资料进行各位点基因型命名,并计算父权概率( RCP)小值。结果显示,本案检验的 20个 STR座位除 FGA外有 19个座位的结果符合孟德尔遗传定律,经计算 RCP大于 99.99%,认定亲权关系。孩子仅 FGA 座位在父亲的基因型中(杂合子)找不到相同的基因,不符合孟德尔遗传定律 ,推测 FGA座位存在突变。
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PCR-RFLP用于 ABO分型遇到的问题及解决方法
用 PCR-RFLP技术进行 ABO基因分型,是从基因水平进行 ABO血型判定,具有操作简单、结果准确等优点,特别是能够解决 " 非分泌 " 型斑迹的血型鉴定问题,在法医学中具有重要的应用价值。近年来这种技术已广泛地被国内外众多法医界学者采用,取得了较好的效果 [1-3]。我们实验室应用 PCR-RFLP方法 [4 ]在对刑事案件中 100 多份血斑、混合斑生物物证进行 ABO基因型检测的过程中,对绝大多数生物物证的血型都能做出明确的判定。但曾遇到过两份生物物证,一份是手帕上微量的血迹 ,另一份是阴道擦拭棉签,在结果判定上遇到了问题,不能明确判定血型。原因是,人 ABO基因 233~ 433区域扩增产物经电泳分离后产生的本该为 200bp一条区带,而这两份样品 233~ 433区域扩增产物经电泳分离后除产生 200bp区带外,在 178 bp 位置另显现一条清晰的区带,从而干扰了 KpnI酶切结果的判读,导致不能确定两份样品的基因型。为解决这类样品的 ABO基因分型问题,我们取该手帕血 DNA,对 ABO基因的 233~ 433 与 660~ 788两个区域进行序列分析,报告如下。