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系统性红斑狼疮患者血清白介素 10水平与外周血单一核细胞分泌白介素 12水平的关系
在 Th细胞向 Th1/Th2细胞分化过程中,白介素 12(IL-12)是决定免疫反应的性质和功效的关键性细胞因子 [1,2],它甚至可以使已建立的 Th2型为主的反应向 Th1型转变 [3]。我们的实验表明系统性红斑狼疮 (SLE)患者 IL-12水平降低主要由单一核细胞分泌能力下降引起,而 IL-10对单一核细胞功能有很强的抑制作用。有报道 SLE患者单一核细胞和活化的 B细胞分泌 IL-10的能力都是增强的,且 IL-10在 SLE的发病中起一定作用 [4]。我们检测了 SLE患者血清 IL-10水平,并分析其与体外 IL-12分泌水平的关系。同时,在体外予抗 IL-10单抗,观察其对 SLE患者外周血单一核细胞 (PBMC)分泌 IL-12水平的影响。
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寻常型银屑病患者外周血单一核细胞增殖活性与尿新蝶呤关系
有学者认为银屑病是细胞免疫异常而导致表皮细胞过度增殖性疾病[1]。新蝶呤是细胞免疫反应终产物[2],是体内“淋巴细胞—巨噬细胞”轴所介导的免疫系统激活程度标志物[3]。为了探讨银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)增殖活性与新蝶呤关系,我们采用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定PBMC增殖活性,同时测定尿中新蝶呤浓度,观察新蝶呤与PBMC增殖活性的关系。一、材料与方法(一)病例:寻常型银屑病患者31例,其中男20例,女11例;年龄5~58岁,平均(32.8±12.6)岁;进行期26例,静止期5例,病程1个月至31年。
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系统性红斑狼疮患者淋巴细胞CD126 的表达
我们分别采用流式细胞仪结合微量全血双标记免疫荧光法和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了33例SLE患者CD3+与CD19+淋巴细胞表面CD126表达水平和外周血单一核细胞(PBMC)内CD126 mRNA表达水平,现报道如下。
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系统性硬化病患者外周血CD4+T细胞CD40L DNA甲基化研究
[目的]探讨系统性硬化病(SSc)患者外周血CD4+T细胞中CD40L基因调控序列的甲基化状态.[方法]密度梯度离心法分离SSc患者(女16例,男10例)和健康对照组(女15例,男10例)外周血单一核细胞,磁珠分选CD4+T细胞,提取DNA,亚硫酸氢钠处理DNA,巢式PCR扩增CD40L基因调控序列片段(包括启动子和增强子),转化进入大肠杆菌,每个样本挑取8个克隆进行测序.[结果]亚硫酸盐基因组测序结果显示,健康女性CD40L基因调控序列一半为甲基化,一半为去甲基化,女性SSc患者CD40L基因启动子和增强子区域平均甲基化水平均显著低于女性健康对照(P值均< 0.01);男性SSc患者和男性健康对照CD40L基因启动子和增强子区域几乎全部为去甲基化,两组平均甲基化水平差异无统计学意义(P值均>0.05).[结论]女性SSc患者CD4+T细胞中失活的X染色体上CD40L调控序列低甲基化,可能是导致CD40L在女性SSc患者CD4+T细胞中过度表达的原因之一.
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系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Th17相关转录因子RORγt mRNA的表达
目的 探讨Th17细胞在系统性红斑狼疮(SLE)免疫炎症反应中的作用机制.方法 逆转录PCR(RT-PCR)检测12例活动期SLE患者、9例非活动期SLE患者和12例正常人对照PBMC中维A酸相关孤儿核受体γt (RORγt) mRNA表达水平.活动期SLE患者组、非活动期SLE患者组与正常人对照组PBMC中RORγt mRNA表达水平采用近似F检验(Welch方法)和校正的多重比较方法(Dunnett's T3)进行分析.结果 活动期SLE患者、非活动期SLE患者及正常人对照RORγt mRNA表达水平分别为1.06±0.44,0.65±0.25,0.22±0.08,3组之间差异有统计学意义(F=23.286,P< 0.01).其中活动期SLE患者组显著高于非活动期患者组(F=2.453,P<0.05)及正常人对照组(F=6.504,P<0.05),非活动期SLE患者组显著高于正常人对照组(F=3.343,P<0.05).SLE患者RORγt mRNA表达水平和SLEDAI之间存在显著正相关(rp=0.623,P< 0.01).结论 证实SLE患者存在Th17细胞极化现象,拮抗调控Th17细胞分化的关键转录因子RORγt能减轻SLE的免疫炎症反应而达到治疗SLE的目的.
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寻常型白癜风患者外周血单一核细胞、血清及皮肤组织液中巨噬细胞游走抑制因子检测
目的 检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在寻常型白癜风患者外周血单一核细胞(PBMC)、血清及皮肤组织液中的表达,探讨其临床意义.方法 应用实时逆转录PCR及酶联免疫吸附试验检测39例寻常型白癜风患者与31例性别、年龄相匹配的正常人对照者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清、皮肤组织液中MIF的含量.结果 寻常型白癜风患者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清、皮肤组织液中MIF的含量分别为6.70(2.64 ~ 8.65)、32.76(10.67~40.98) μg/L、167.80(107.40 ~ 219.60) μg/L,显著高于正常人对照组(Z值分别为5.895、5.936、4.715,P值均<0.05);进展期白癜风患者分别为7.89(3.89 ~ 9.12)、37.80(29.50 ~ 45.70) μg/L、211.50( 131.70 ~ 248.75) μg/L,显著高于稳定期患者(Z值分别为2.213、2.141、2.100,P值均<0.05).白癜风患者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清中MIF的含量与疾病严重程度评分呈正相关(r值分别为0.486、0.453,P值均<0.05).结论 MIF可能在寻常型白癜风的发病过程中发挥一定作用.
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过敏性紫癜患者外周血CD146的表达及意义
目的 检测CD146在过敏性紫癜(HSP)患者血清及外周血单一核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在HSP发病机制中的意义.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HSP患者急性期、恢复期及正常人对照组血清中可溶性CD146(sCD146)水平;采用实时荧光定量RT-PCR法检测PBMC中CD146 mRNA的相对表达水平,并分析CD146与疾病活动的相关性.结果 HSP患者急性期、恢复期及正常人对照组sCD146水平分别为(0.84±0.49)、(0.52±0.15)和(0.23±0.08) ng/L,急性期高于恢复期(t=3.44,P< 0.05),恢复期高于正常人对照组(t=8.90,P< 0.05).HSP患者急性期、恢复期及正常人对照组PBMC中CD146 mRNA的相对表达水平分别为26.34±2.55、14.18±2.49和10.08±2.08,急性期明显高于恢复期(t=18.69,P< 0.05),恢复期高于正常人对照组(t=6.92,P<0.05).结论 CD146可能在HSP的发病中起一定作用.
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带状疱疹患者单一核细胞Toll样受体3和9的表达
目的 探讨Toll样受体TLR3和TLR9在带状疱疹发病机制中的作用.方法 采用流式细胞仪检测40例带状疱疹患者外周血单一核细胞(PBMC)上TLR3和TLR9的表达水平.16例正常人群为对照组.结果 带状疱疹患者PBMC上TLR3和TLR9的表达水平均明显高于正常人对照组(P<0.01).带状疱疹患者PBMC上TIR3和TLR9的表达水平与发病时间存在负相关关系(r值分别为- 6.23,-5.88,P值均<0.01),但与性别、年龄无相关性.带状疱疹患者PBMC上TLR3和TLR9表达在各年龄组间(< 40岁,40 ~ 50岁,>50岁),差异具有统计学意义(F=3.410,P<0.01),且<40岁年龄组TLR3和TLR9的表达明显高于其他两组.结论 TLR3和TLR9可能参与带状疱疹发病.
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地塞米松对系统性红斑狼疮阴虚内热证患者外周血单一核细胞基因表达谱的影响
目的 探讨地塞米松对系统性红斑狼疮(SLE)阴虚内热证患者外周血单一核细胞(PBMC)基因表达谱的影响.方法 用地塞米松孵化SLE阴虚内热证患者PBMC,收集孵化后细胞进行PBMC的基因表达谱检测.结果 地塞米松上调85个PBMC基因,下调126个PBMC基因.结论 地塞米松调控SLE阴虚内热证患者PBMC的基因所属功能簇众多,基因编码的功能蛋白分布细胞多个部位,不是所有基因调控结果均有利于SLE缓解,一些基因调控作用对研究地塞米松治疗SLE的机制有帮助.
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白癜风患者外周血白介素17和孤独核受体的表达
目的 探讨Thl7细胞在白癜风免疫发病机制中的作用.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测白癜风患者进展期、稳定期和正常人外周血血清中白介素17(IL-17)水平;采用实时荧光定量RT-PCR方法检测外周血单一核细胞中孤独核受体(RORγt)mRNA表达水平,并分析其与疾病活动的相关性.结果 进展期与稳定期白癜风外周血中IL-17、RORγt表达水平与正常人对照组相比显著升高(P<0.01).结论 Th17细胞可能与白癜风的发病机制密切相关.
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复方甘草酸苷对斑秃患者外周血单一核细胞中y干扰素、肿瘤坏死因子β表达的调节作用
目的 探讨甘草酸苷对斑秃患者外周血单一核细胞(PBMC)γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)表达的调节作用.方法 轻度斑秃患者18例、重症斑秃患者24例及正常人20例为检测对象,用密度梯度离心法常规分离PBMC,用逆转录-聚合酶链反应检测PBMC经植物血凝素和复方甘草酸苷共同刺激后IFN-γ和TNF-β的表达水平.结果 重症斑秃组患者IFN-γ及TNF-β水平均明显高于轻度斑秃组及正常人对照组(P值均< 0.05),轻度斑秃组高于正常人对照组(P值均<0.05).甘草酸苷与植物血凝素共同刺激斑秃患者PBMC后可下调IFN--γ及TNF-β表达水平(P值均<0.05).结论 甘草酸苷可抑制斑秃患者Th1型细胞因子表达,逆转Th1型反应.
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激活蛋白-1在皮肌炎患者外周血单一核细胞中的表达及糖皮质激素对其表达的影响
目的 探讨激活蛋白-1(AP-1)在皮肌炎患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及糖皮质激素对其表达的影响.方法 分别提取15例正常人和20例皮肌炎患者(为未使用过糖皮质激素的初发患者或停止糖皮质激素治疗1个月以上者,初发12例,复发8例)的PBMC,每例的PBMC等分为2份,一份加入含80 μmol/L地塞米松和10%小牛血清的RPMI 1640培养液培养48 h后待用,另一份直接-80℃保存待用.用电泳迁移率改变实验检测不同组别PBMC中AP-1的活性.结果 AP-1在正常人PBMC中为低表达(灰度面积值为4.93±0.15 mm2).皮肌炎初发组和复发组患者PBMC加地塞米松前的AP-1表达(灰度面积值分别为30.23±0.49 mm2和34.79±0.61 mm2)均明显高于地塞米松处理后AP-1表达(灰度面积值分别为5.59±0.39 mm2和5.69±0.39 mm2),地塞米松处理前复发组PBMC的AP-1活性高于初发组(P<0.01).结论 AP-1活性增强可能是导致皮肌炎炎症反应及复发的重要因素之一.糖皮质激素可以一定程度抑制AP-1活性.
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玫瑰糠疹患者单一核细胞转录因子T-bet mRNA及GATA-3mRNA的表达
目的 探讨T-bet、GATA-3在玫瑰糠疹发病机制中的意义.方法 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术检测17例玫瑰糠疹患者和20例正常人外周血单一核细胞中T-bet mRNA和GATA-3mRNA的表达.结果 玫瑰糠疹患者外周血中T-bet mRNA与GATA-3 mRNA Avg△Ct值分别为3.33±0.94与5.22±0.69,对照组分别为4.31±1.11与4.36±1.02.患者的T-bet mRNA表达高于对照组(P<0.05),GATA-3表达低于对照组(P<0.05).结论 玫瑰糠疹患者外周血中T-bet/GATA-3升高,Th1优势表达,细胞免疫异常在玫瑰糠疹发病过程中可能具有重要作用.
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系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CX3CR1趋化因子受体mRNA的表达
目的:探讨趋化因子受体CX3CR1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达,及其与疾病活动的相关性.方法:收集93例确诊的SLE患者和30例正常人的PBMC,提取RNA.应用RT-PCR方法检测CX3CRl mRNA表达水平,并与疾病活动度评分(SLEDAI)作直线相关性分析.结果:①CX3CR1 mRNA在PBMC中的表达水平,活动期(3.735±0.557)与非活动期(0.530 ±0.045),两者差异有统计学意义(t=2.606,P=0.01);非活动期与对照组(0.146±0.02)间的差异有统计学意义(t=5.831,P=0.000);患者组(2.819±1.347)与对照组间的差异有统计学意义(t=3.921,P=0.000).②SLE患者组CX3CR1 mRNA水平与疾病活动度评分(SLEDAI)呈正相关(r=0.445,t=4.523,P<0.001).③不具有血管炎、肌炎、肾损及血小板减少的患者与具有上述相应临床特征的患者比较,CX3CR mRNA表达水平更高,差异具有统计学意义.结论:CX3CR1mRNA表达水平在活动期SLE比非活动期增高,与疾病的活动性(SLEDAI)呈正相关.CX3CR1可能反映疾病的活动性、参与特异器官受累的发生.
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当归饮子对人外周血单一核细胞增殖的影响
采用MTT比色法测定当归饮子水煎剂对人外周血单一核细胞增殖功能的影响.结果显示,10-1~10-7mg/ml范围内的当归饮子能单独或协同PHA发挥促进人外周血单一核细胞增殖的作用.
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梅毒血清固定患者外周血单一核细胞CD40和CD40L的表达
近年来梅毒患者血清固定(sero-resistance)发病率显著增高,1梅毒血清固定的确切原因目前尚不清楚,认为与机体细胞免疫功能受抑制有关.2,3 本研究对梅毒血清固定患者外周血单一核细胞(PBMC)中CD40和CD40L的表达进行检测,探讨CD40和CD40L与梅毒血清固定的关系.
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自体疣皮下包埋对扁平疣患者外周血单一核细胞产生IL-2的影响
我科2002年1月~2004年3月用自体疣皮下包埋免疫疗法治疗扁平疣患者取得了较好的疗效,本研究进一步观察了其治疗前后外周血单一核细胞(PBMC)产生IL-2的能力的变化情况,以探讨自体疣包埋治疗扁平疣的作用机制.
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HO-1对银屑病患者外周血单一核细胞TNF-α和IL-10生成的影响
目的:确定血红素氧合酶同工酶1(HO-1)对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC) TNF-α和IL-10分泌的影响.方法:分离培养PBMC,应用免疫印迹法检测PBMC中HO-1的表达,用ELISA法检测上清中TNF-α和IL-10水平.结果:CoPP(HO-1特异性诱导剂-钴原卟啉)可诱导健康者和银屑病患者PBMC表达HO-1蛋白,表达量随CoPP浓度的增加而增加.4种不同浓度CoPP所诱导的HO-1均可抑制TNF-α的分泌和增强IL-10的分泌,其抑制和增强作用均在CoPP 10μmol/L 浓度下达高峰.结论:HO-1可调节银屑病患者PBMC TNF-α和IL-10的分泌,从而可能对银屑病起到抗炎和免疫调节作用.
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当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞NF-κB及IFN-γ的影响
目的:确定体外当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)与角质形成细胞(KC)NF-κB表达及IFN-γ分泌的影响.方法:将正常人KC+银屑病患者PBMC混合培养(A组),正常人KC和正常人PBMC混合培养作为作对照(B组).当归多糖作用于两组,采用Western Blot检测混合细胞中NF-κB的蛋白表达水平,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中IFN-γ的水平.结果:A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平明显高于B组(P<0.01);经当归多糖作用后,A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前降低(P<0.05),而B培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前升高(P<0.05).结论:当归多糖可能通过抑制NF-κB活化、减少IFN-γ分泌,对银屑病治疗发挥作用.
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银屑病患者外周血单一核细胞中趋化因子受体CXCR1及CXCR2 mRNA的表达
目的:探讨银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)中CXC型趋化因子受体CXCR1及CXCR2的表达水平及其临床意义.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测了进行期斑块状银屑病患者33例及其中16例患者治疗后PBMC中CXCR1及CXCR2mRNA的表达,设30名健康人作为正常对照,并将检测结果与患者皮损面积及严重程度指数(PASI)进行了相关性分析.结果:斑块状银屑病患者PBMC中CXCR2mRNA表达水平为1.38±0.87,明显高于健康人对照组0.73±0.58,治疗后患者1.21±0.62仍高于健康对照组(P<0.05);CXCR1 mRNA表达水平为0.26±0.28,与健康对照组及同一组患者治疗后相比均无明显差异,分别为:0.17±0.26,0.27±0.31(均P>0.05);银屑病患者PBMC中CXCR2mRNA水平高于CXCR1 mRNA水平,二者均与PASI之间无明显相关性.结论:CXCR2可能参与了银屑病的发病机制.