狗骨髓基质干细胞体外分化为肌源性细胞的初步观察

用贴壁法体外分离骨髓基质干细胞,实验组5-氮胞苷诱导,对照组加入等量培养基,用相差显微镜和免疫组织化学方法观察、鉴定培养细胞.探讨成年狗骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌细胞的可行性,为心肌梗死和心力衰竭的细胞移植治疗提供新的细胞系.结果表明,实验组诱导后4周,多数培养细胞由梭形变为杆状,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白I染色阳性;对照组多数培养细胞为梭形,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性,肌钙蛋白I染色阴性.结果提示,成年狗骨髓基质干细胞体外可诱导分化为肌源性细胞.

17β雌二醇对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化初期细胞骨架的影响

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的：研究老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞（ BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法分离、培养小鼠BMSCs，细胞分4组：空白组（加完全培养基），3个剂量老鹳草素实验组（老鹳草素，1×10－7，1×10－8，1×10－9 mol· L－1），CCK－8法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化，碱性磷酸酶（ ALP）试剂盒检测细胞ALP活性，茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量。结果在成骨诱导培养1，3，5，7 d，老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖，同时细胞凋亡率显著降低，呈剂量依赖性。第3天，3个剂量老鹳草素实验组A450值分别为0.41±0.06，0.37±0.04，0.33±0.05，较空白组（0.29±0.03）显著增加（P ＜0.05），细胞凋亡率分别为（2.53±0.40）％，（3.02±0.46）％，（3.71±0.54）％，较空白组（4.22±0.58）％显著降低（ P＜0.05）；与空白组比较，G0／G1期细胞比例显著降低， S 期细胞比例及细胞 ALP 活性显著增加（均P＜0.05）。在成骨诱导培养21 d，与空白组比较，各剂量老鹳草素组的矿化结节数量显著增加（P＜0.05）。结论老鹳草素通过调控BMSCs细胞周期、抑制凋亡促进BMSCs的增殖，还明显促进BMSCs向成骨方向分化。

经皮自体移植浓缩骨髓干细胞治疗骨不连的动物实验研究

目的 对浓缩骨髓干细胞治疗骨不连的实验研究,为应用浓缩骨髓干细胞治疗骨不连提供依据.方法 制作兔骨不连模型随机分为两组:A组干细胞组,B组内固定植骨术组.定期拍片测量骨折间隙宽度变化(8周、12周)、免疫组化观察.结果 两组术后8周、12周X线、组织病理均形成骨性连接,新骨形成、骨改建及骨髓成熟度指标相当,且两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植自体浓缩的骨髓干细胞参与了骨不连的成骨,有利于骨折的愈合,有望成为一种较好的骨不连治疗方法.

同种异体骨髓基质干细胞移植对兔激素性股骨头缺血性坏死血清血管内皮生长因子的影响

目的 研究同种异体骨髓基质干细胞(MSC)移植对兔激素性股骨头缺血性坏死(SANFH)血清血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将45只健康新西兰兔随机分为3组:空白组、模型组和治疗组,每组各15只.模型组和治疗组,第1、3周马血清10 ml/kg耳缘静脉注射,于第5周腹腔注射醋酸泼尼松龙7.5 mg/kg,1次/d,连续3 d;空白组,第1、3周生理盐水10 ml/kg兔耳缘静脉注射,于第5周腹腔注射生理盐水1 ml,1次/d,连续3 d.治疗组于第6周行MSC移植.第10周测血清中VEGF水平.结果 治疗组兔血清VEGF水平较模型组明显偏高( P＜0.01).结论 MSC移植使兔SANFH模型血清VEGF水平升高.

兔骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定

目的 探讨兔骨髓基质干细胞(MSC)体外分离培养及鉴定.方法 白兔髂骨抽取骨髓,采用密度梯度离心法分离纯化出MSC,并增殖.观察MSC的生长情况及形态学特点,流式细胞仪检测第3代MSC表面抗原的表达情况.结果 体外培养的兔MSC贴壁生长,呈长梭形,可增殖形成克隆;MSC阳性表述CD29,CD90,但CD34,CD45呈阴性.结论 利用密度梯度离心法获取的MSC具有大量增殖的能力,表达CD29,CD90,不表达CD34,CD45.

骨髓基质干细胞诱导分化滑膜样细胞移植预防屈肌腱粘连的实验研究

目的 探讨移植的骨髓基质干细胞诱导分化的滑膜样细胞是否具有明显的防止屈肌腱粘连的功效.方法 提取兔骨髓基质干细胞诱导下分化为滑膜样细胞.经鉴定后,将滑膜样细胞移植于大白兔损伤的跟腱处,术后l、2、4、8周取材,进行大体标本粘连等级评定、生物力学测试及组织学观察.结果 对分化的滑膜样细胞鉴定,光镜下、电镜下均符合滑膜细胞结构特征,免疫组化Vimentin阳性,CD68阴性,符合成纤维细胞样滑膜细胞(B型滑膜细胞)的特征.滑膜样细胞移植术后,光镜及扫描电镜发现肌腱表面光滑,被覆大量滑膜样细胞.同一时相点实验组同对照组相比粘连明显减轻( P＜0.05).结论 骨髓基质干细胞在一定条件下可以诱导分化为滑膜样细胞.滑膜样细胞移植可以有效的防止肌腱粘连.

NRG1转染对骨髓基质干细胞表达VEGF的影响

目的 探讨神经调节因子1(neuregulin-1,NRG1)转染是否可以促进骨髓基质干细胞(bone marrow stromalcells,BMSCs)表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF).方法 提取与培养3只SD大鼠的BMSCs,采用NRG1质粒转染BMSCs并提取上清液,采用ELISA法测定转染组上清液中VEGF的含量,将非转染BMSCs的样本作为对照组,采用免疫组化方法检测细胞VEGF的表达.结果 BMSCs多数细胞处于伸展状态,呈梭形;经ELISA方法检测,转染组上清液VEGF的含量随时间增加呈增长趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);经免疫组化检测,转染组细胞VEGF阳性率为91.07％,对照组细胞阳性率为70.82％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NRG1转染可以促进BMSCs表达VEGF.

骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

骨髓基质干细胞具有取材简单、增殖速度快、培养过程中始终保持多向分化的潜能等特点,已经成为干细胞研究领域的热点,是好的组织工程种子细胞之一,还可以诱导分化为神经细胞.本文对骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展作一综述.

诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的 研究和评价转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞(SMCs)向软骨细胞分化的影响.方法 从大白兔的髂骨骨髓液中提取和分离骨髓基质干细胞,将无血清Mc5A培养液分为四组,含有5 ng的TGF-β1和100 ng的IGF-I组为A组、含有TGF-β1为B组、含有IGF-1组为C组及无血清Mc5A培养液为D组作为空白对照,先进行单层细胞培养的10天,再置于松质骨基质明胶(BMG)支架中继续培养10天,然后进行甲苯胺蓝染色、蛋白多糖含量的测定.结果 第5、10天后,各组单层细胞培养的细胞个数均有显著性差异,即A组＞B组＞C组＞D组;第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量检测结果,即A组＞C组＞B组＞D组(P＜0.05).结论 早期应用TGF-β1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力,而IGF-I可提高TGF-β1对骨髓基质干细胞软骨分化作用.

补肾活血汤结合组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的 进一步验证补肾活血汤对骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔关节软骨缺损的影响,评价修复效果.方法 取兔骨髓基质干细胞进行密度离心法结合贴壁培养法体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)载体上,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药补肾活血汤灌胃为复合组,并设立单纯中药组、单纯于细胞复合体组、空白组为对照组.4、8、12周后分别对修复组织进行形态学观察及组织学检查.进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果.结果 术后12周,复合组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于其他各组.结论 骨髓基质干细胞复合体能修复家兔膝关节软骨缺损,中药补肾活血汤能促进软骨的修复,且提高了修复质量.

骨髓基质干细胞多向分化及临床应用

骨髓基质干细胞（ bone marrow stromal cells，BM-SCs）与胚胎干细胞（ embryonic stem cell，ES细胞）相比较，因具有取材方便、来源丰富、扩增迅速、较强的多向分化能力以及没有伦理问题等优点而受到极大关注［1～3］。 BMSCs分化能力的研究，对于各种疑难疾病的治疗具有重大意义。笔者现就BMSCs的多向分化和临床应用现状做一综述。

骨髓基质干细胞及其在中枢神经系统疾病治疗中的应用前景

成体中枢神经系统损伤后再生能力差,细胞移植治疗可望成为一条有效的治疗途径.研究表明,骨髓中的基质干细胞除具备向间充质细胞分化的能力外,在一定条件下还具有向神经细胞分化的可塑性,且容易获得和导入外源基因,因而被认为是中枢神经系统疾病细胞治疗和基因治疗理想的种子细胞,具有广阔的应用前景.

肥胖与牙周炎相关机制的研究进展

肥胖和慢性牙周炎是临床常见的慢性疾病,且两者之间存在双向关系:肥胖主要通过炎性因子参与牙周炎的发生发展,而牙周炎会通过炎性介质、口腔内细菌分布及饮食结构改变来促进肥胖的发生.干细胞治疗是牙周再生治疗的研究热点,干细胞的多向分化能力由自身生物学特性及所处微环境的共同作用决定.肥胖可使机体处于慢性低度炎症状态,显著影响干细胞微环境,从而影响干细胞的多向分化能力,这一过程的具体影响及内在机制有待进一步研究.

骨髓基质干细胞构建组织工程神经修复神经缺损的研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)存在于骨髓和其他一些组织(如脂肪等),它不仅具有干细胞的基本特征,而且具有自我更新和多向分化的潜能,它分离、培养的成功,以及向神经细胞分化的成功,为修复周围神经损伤提供了一种新的组织工程学种子细胞来源.本文就BMSCs作为种子细胞构建组织工程神经过程中的机制和所面临的新挑战进行综述,以探讨一种更新更有价值的周围神经缺损修复思路.

大鼠骨髓基质干细胞分离、纯化与诱导分化的研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)是一类具有自我增殖和分化潜能的多能干细胞,在骨髓中含量极少.目前对其生物学特性研究比较成熟,在培养过程中展示出贴壁性、异质性、自我更新能力、可塑性、易受细胞因子影响及低免疫原性等生物学特征.BMSCs独特的生物学特性及目前的研究现状都预示着其具有广泛的应用前景.现就大鼠BMSCs的生物学特性、分离与纯化、诱导分化的方法等方面予以综述.

骨髓基质干细胞与施万细胞联合移植对周围神经缺损的修复作用

目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)与施万细胞(SCs)联合移植对周围神经损伤的修复作用.方法 雌性SD大鼠48只随机分为A、B、C、D4组,每组各12只；制作右下肢长10 mm坐骨神经缺损模型后,A组注入全贴壁法培养的BMSCs与差速贴壁结合阿糖胞苷法培养的SCs,B组仅注入BMSCs,C组仅注入SCs,D组注入磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照.分别于4、8周观察动物一般状态,测定坐骨神经功能指数(SFI)、神经传导速度(NCV)以及免疫组化检测表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平.结果 4周时,SFI绝对值A组(53.07±5.36)优于B组(62.73±7.63)、C组(67.17±8.06)、D组(77.56±2.79),差异有统计学意义(P＜0.05)；A组损伤侧NCV[(20.38±3.13)m/s]优于B组[(16.54±2.18) m/s]、C组[(17.74±0.93)rm/s]、D组[(8.25±1.73)m/s],差异有统计学意义(P＜0.05).8周时,SFI值A组(35.43±4.5)优予B组(48.25±3.62)、C组(51.48±3.93)、D组(70.53±5.48),差异有统计学意义(P＜0.05)；A组损伤侧NCV值[(25.67±2.18)m/s]优于B组[(19.69±4.07)m/s]、C组[(21.37±3.17)m/s]、D组[(10.93±1.59)m/s],差异有统计学意义(P＜0.05).4、8周时A、B、C组EGF和bFGF表达平均光密度值(AOD)与D组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BMSCs与SCs联合移植能够促进损伤轴突的再生,恢复神经功能,对周围神经损伤具有明显的修复作用.

兔骨髓基质干细胞的培养与鉴定体系的建立

目的 探讨兔骨髓基质干细胞的培养与鉴定体系的建立方法与效果.方法 空气栓塞的方式处死SPF级新西兰大白兔6只,分离骨髓组织,利用贴壁培养分离纯化兔骨髓基质干细胞,多次传代后以流式细胞术检测细胞表面抗原;以BrdU标记骨髓基质干细胞,将骨髓基质干细胞注入兔颅内,分别于注射1、3周后取脑组织制作石蜡切片,进行免疫荧光染色.结果 通过贴壁法培养幼年兔骨髓细胞可获得较纯化的骨髓基质干细胞.免疫细胞化学染色显示骨髓基质干细胞中CD44+细胞率超过90％,细胞核未着色;流式细胞仪测定培养骨髓基质干细胞的CD90+细胞率为94.5％,CD34+细胞率为0.24％.BrdU标记显示得到了能够掺DNA合成期的骨髓基质干细胞,标记细胞所占的比例在40.0％以上.结论 通过贴壁法培养幼年兔骨髓细胞呈多角短梭形,可获得骨髓基质干细胞,BrdU可作为体内示踪骨髓基质干细胞的标志物之一.

体外非接触性共培养对MSC向软骨细胞诱导分化的实验观察

目的:探讨骨髓基质干细胞(MSCs)与软骨细胞体外非接触性共培养成软骨的可行性.方法:分离、培养、扩传兔MSCs及软骨细胞,MSCs以1×105个/ml接种于共培养板内孔,第1代软骨细胞以1×104个/ml接种于共培养板外空板.48h后将内孔插如外孔中,补充全培养基覆盖于MSC细胞层上.以相同密度MSC单独培养为空白对照,观察共培养7d和14d流式细胞仪观察MSC的Ⅱ型胶原蛋白变化情况.结果:实验空白组在7d和14d,Ⅱ型胶原蛋白均阴性表达,符合MSC特性.非接触共培养1周后,Ⅱ型胶原蛋白阳性表达,与空白对照比较,P<0.01,具有统计学意义;非接触共培养2周后,Ⅱ型胶原蛋白也阳性表达,与空白对照比较,P<0.01,同样具有统计学意义;实验14d组与实验7d组比较,P<0.01,具有非常显著性差异.结论:软骨微环境在MSCs成软骨分化及体内软骨形成中具有重要作用,软骨细胞能有效地诱导MSCs向软骨细胞分化并促进MSCs体内软骨形成.

骨髓基质干细胞临床研究进展

随着细胞研究的发展,骨髓基质干细胞的临床应用越来越受到重视.本文对骨髓基质干细胞的生物学特性、取材、分离、培养、临床前期研究成果和面临的问题进行了综述.