首页 > 文献资料
-
1-04 反式BPDE诱导人支气管上皮细胞恶性转化
目的探索苯并(a)芘代谢物反式BPDE诱导人支气管上皮细胞16HBE转化的理想实验方案,构建恶性转化的细胞模型,为后期进一步研究其致癌分子机制提供理想的材料.方法细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量,以不同剂量反式BPDE 1次或多次处理细胞,观察培养的不同阶段转化灶出现情况,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征,比较各组转化细胞的集落形成率.结果以0.1、0.5、1.0、2.0 μmol/L的剂量,对细胞多次间断染毒,传代15次,是反式BPDE诱导16HBE细胞恶性转化的理想方案.其集落形成率分别为2.0‰o、5.5‰、7.0‰、10.5‰,剂量-反应关系呈现良好的直线相关,r=0.974 1.结论反式BPDE能诱导人支气管上皮细胞16HBE转化,构建理想的恶性转化的细胞模型.
-
丹参酸乙的抗氧化作用对大鼠肝星状细胞增生的影响
目的:研究丹参酸乙(salvianolic acid B,SAB)的抗氧化作用对大鼠肝星状细胞(hepatic stallate cells,HSC)增生周期的影响.方法:采用原位灌注法消化大鼠肝脏,108g@L-1nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞,分别以不同浓度的SAB或MDA/SAB处理细胞,3H-TdR掺入法观察细胞的增生能力,流式细胞术分析细胞周期各时相变化及凋亡情况.结果:1和10 tanol@L1SAB可显著抑制HSC的增生(2862±123M&2988±407 vs 4986±727,P＜0.05,P＜0.01),这种作用主要是抑制了细胞周期过程中G期向S期的过渡;1和10 pmol@L1SAB均可抑制MDA刺激的HSC增生(3067±73l&3042±321vs4007±587,P＜0.05,P＜0.01);两组剂量的SAB均不促进HSC的凋亡.结论:丹参酸乙可抑制体外培养HSC的增生,这种抑制作用与SAB的抗氧化作用有一定的关系.
-
格尔德霉素对肝癌细胞Akt磷酸化及细胞周期的影响
目的:研究热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对肝癌细胞生长的影响并探讨相关机制.方法:用MTT法检测药物对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,并用流式细胞术分析细胞周期与凋亡状况.Western印记杂交法检测细胞内蛋白激酶B/AKT磷酸化状态的变化.结果:400μmoL/L浓度的GA处理细胞后,HepG2细胞胞内磷酸化AKT的水平明显下降(24 h为对照组66.03%,48h为对照组34.02%);GA作用后细胞呈现G2/M期阻滞并伴有凋亡率增加;同时MTT法显示GA对HepG2细胞有生长抑制作用,用药时间越长抑制率越高,24h和48h的抑制率分别为4.09%和21.74%.结论:通过GA抑制Hsp90的功能能够抑制肝癌细胞的生长并促进其凋亡,这一效应与信号传导系统活化状态的改变有关.
-
MPO及Ox-HDL可能通过调节单核细胞 NLRP3表达影响IL-1β的产生
目的：观察不稳定型心绞痛患者外周血单核细胞MPO和NLRP3表达水平，并分析其相关性。观察MPO及ox-HDL对人单核细胞NLRP3、IL-1β的调节作用。
方法：本研究入选120例受试者，其中不稳定型心绞痛患者80例（UA组），均为近一次胸痛发作12 h以内入院的患者[平均胸痛时间为（7.13±1.91） h]。按性别和年龄匹配入选正常健康人群40例（对照组）。在入院时即刻经肘静脉采外周血，用梯度离心法，分离单核细胞。用流式细胞技术检测外周血单核细胞MPO及NLRP3表达水平，并用ELISA法检测血浆IL-1β水平。用MPO、HDL及ox-HDL处理THP-1单核细胞24 h后，用RT-PCR及Western blot检测细胞NLRP3及其下游caspase-1和IL-1β的表达水平。用特异性siRNA敲减THP-1单核细胞NLRP3后，再用MPO，HDL及ox-HDL处理细胞，观察NRP3下游分子caspase-1和IL-1β的表达水平。 -
β1－肾上腺素受体自身抗体诱导的自噬和凋亡之间关系的研究
目的：通过使用自噬激动剂、自噬抑制剂、凋亡抑制剂以及蛋白阻滞剂处理或预处理已由β1－肾上腺素受体自身抗体（β1－AA）造模的H9c2细胞，探讨能否通过人为因素调控细胞自噬从而下调心肌细胞凋亡，改善心功能受损。方法：采用不含ED－TA的0．25％胰蛋白酶消化传代H9c2心肌细胞，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基进行培养，主动免疫Wistar大鼠获得的β1－AA对细胞进行24 h造模处理，或用自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂3－甲基腺嘌呤、自噬抑制剂氯喹、凋亡抑制剂、蛋白阻滞剂分别单独给予或者联合处理细胞，采用Western blot以及RT－PCR对自噬的变化进行检测；对自噬变化组采用流式细胞术以及线粒体跨膜电位检测法对凋亡进行检测。结果：H9c2细胞约90％满时可传代并每隔约2天传代一次；β1－AA可诱导H9 c2细胞发生自噬和凋亡；自噬和凋亡在一定范围内彼此影响，协同决定细胞死亡的发生。结论：β1－肾上腺素受体自身抗体诱导的自噬和凋亡在一定范围内彼此之间相互调节。
-
Omentin－1对THP－1巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响
目的：探讨omentin－1对巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达及其介导胆固醇流出的影响。方法：用omentin－1处理THP－1源性巨噬细胞24 h后，Western blot检测ABCA1蛋白水平，HPLC检测胞内总胆固醇（ TC）游离胆固醇（ FC）及胆固醇酯（ CE）含量，液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出，油红O染色观察胞内脂滴情况。结果：Omentin－1呈浓度依赖性上调巨噬细胞ABCA1的表达，促进胞内胆固醇流出，降低胞内TC、FC和CE含量，抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。而ABCA1 siRNA与omentin－1共处理细胞后，明显抑制omentin－1促胆固醇流出的作用，胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成明显加剧。结论：Omentin－1通过促进巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出，抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。
-
NADPH氧化酶介导地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡
目的：观察地塞米松（ dexamethasone，Dex）对胰岛β细胞凋亡的影响及NADPH氧化酶（ Nox）表达水平的变化。方法：将大鼠胰岛β细胞系INS－1细胞分为正常对照组及不同浓度的地塞米松处理组。培养48 h后MTT法检测细胞增殖情况；An－nexin V－FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况；real－time PCR检测Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达水平；荧光法检测ROS释放量；Western blot检测Nox4蛋白表达水平。结果：地塞米松诱导INS－1细胞凋亡具有明显的剂量依赖性，随Dex浓度增加，凋亡细胞数明显增多，并且在此过程中NADPH氧化酶Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达上调，Nox4蛋白表达水平随Dex浓度增加而升高，0．1μmol／L Dex处理细胞24h即可见ROS释放量明显增加，差异均具有统计学意义。结论：地塞米松诱导INS－1细胞凋亡可能与上调Nox1、Nox3、Nox4和p47phox表达，增加ROS生成，促进氧化应激反应有关。
-
PERK／Nrf2途径参与毒胡萝卜素和衣霉素诱导的H9 c2细胞内质网应激相关细胞凋亡
目的：研究蛋白激酶R样内质网激酶（ PERK）／核因子红系相关因子2（ Nrf2）途径介导的内质网应激反应在不同浓度的毒胡萝卜素（thapsigargin， TG）和衣霉素（tunicamycin， TM）诱导的H9c2细胞凋亡中的作用。方法：在不同浓度TG和TM诱导的H9c2细胞模型上，采用Annexin V／PI双标法和TUNEL法检测细胞凋亡，CCK－8法检测细胞活力；以Western blot检测磷酸化PERK、Nrf2及活化转录因子4（ ATF4）等蛋白水平，免疫荧光法检测Nrf2的核转位。结果：与对照组比较，TG浓度为20 nmol／L、TM浓度为160μg／L处理H9c2细胞48 h时可诱导H9c2细胞凋亡，增加PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达；内质网应激抑制剂牛磺酸和熊去氧胆酸处理细胞后明显减轻TG和TM诱导的H9c2细胞凋亡，并下调PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达。结论：PERK／Nrf2途径参与TG和TM诱导的H9c2细胞内质网应激相关细胞凋亡。
-
lgG抗-E引起新生儿溶血病1例
1临床资料1.1病例简介患儿母亲31岁,孕5产2,8年前曾产下一健康女婴,近2年来孕3次均不明原因自然流产.2005年3月1 9日在本市医学院附院产下一男婴,24小时内发生皮肤黄染并进行性加重,总胆红素280.1μmol/L,Hb105μmol/L,其母无输血史.在遵义医学院输血科检测血样发现直抗强阳性后,将标本送到本室.经血型血清学检测,测得母亲体内含有高效价的lgG抗-E.经换血治疗后,患儿痊愈出院.1.2检查试剂与方法抗-A,抗-B,抗-D,抗-C,抗-E,抗-e,抗-lgG,抗lgG+C3d,抗C3、谱细胞、聚凝胺试剂均由上海血液中心生物制剂有限公司提供,酶处理细胞由本室自制.进行直抗试验、释放试验、游离试验、抗体筛查、效价测定[1].
-
临床转化应用中有关脂肪源性干细胞获取需要解决的问题
目前,有关脂肪源性干细胞(Adiposederived stem cells,ADSC)的分离和提取主要以Zuk等[1-2]提出的方法为蓝本(见表1),进行改进形成各自使用的实验步骤[3].由于实验室分离、提取多用于基础研究,当中获取细胞的过程多数未能顾及临床应用时所考虑的问题,如:传播动物源性疾病的风险、生产的时间、治疗的成本等.然而,转化医学"From Bench to Bedside"的目标就是将实验室研究的成果应用于临床创造新的疗法.在此之前,必须透彻地分析每个处理细胞的步骤是否会对人体存有潜在的危害,用起来是否经济、是否简便易于操作等,以便新的疗法能够服务于大众的医疗需求.本文综合动物及人体来源提取脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSC)的过程[3-7],从ADSC分离、提取、扩增三方面进行剖析,以期为临床转化应用提供参考.
