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氯化铝染毒对大鼠海马APP基因甲基化的影响
目的 观察氯化铝(AlCl3)对大鼠海马淀粉样前体蛋白(APP)启动子区甲基化及β淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响.方法 健康6月龄雄性SPF级SD大鼠40只,分成4组(正常对照组和AlCl3低、中、高剂量组),每组10只,各组分别腹腔注射AlCl30、10、20和30 mg/kg组,正常对照组注射相应体积生理盐水,连续5天,休息2天,共8周.甲基化特异性PCR法(MSP)检测海马APP启动子区的甲基化状态,实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定APP mRNA表达水平,ELISA法测APP、Aβ42蛋白表达量.结果 随着AlCl3浓度的增加,大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P＜0.05),AlCl3中、高剂量组穿越平台的次数明显减少(P ＜0.05);AlCl3染毒组海马APP启动子区甲基化检出率降低(x2=27.61,P＜0.05),其中,高剂量组APP甲基化的检出率低于其余3组(P＜0.01),APP甲基化的检出率随AlCl3染毒剂量增加而降低的趋势(趋势x2=19.08,P＜0.01).各AlCl3染毒组APP mRNA的表达水平高于生理盐水组(F=8.973,P＜0.05).与正常对照组比较,各AlCl3染毒组大鼠海马APP、Aβ42蛋白浓度均增高(F=11.14,P=0.032;F=17.82,P=0.018).与低剂量组相比,中剂量组APP蛋白表达量增加,高剂量组APP、Aβ42蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).Aβ42蛋白免疫组化法检测结果示,中、高剂量组海马神经细胞内外出现棕黄色物质,考虑有Aβ的沉积.结论 氯化铝染毒可引起大鼠海马APP启动子甲基化水平降低,进而影响APP mRNA表达水平增高,海马组织APP表达量增多,从而导致Aβ产生增多而沉积.
关键词： 氯化铝 APP启动子区甲基化 APP mRNA APP β淀粉样蛋白 -
白矾、氢氧化铝和氯化铝对小鼠学习、记忆及肝肾功能影响的比较研究
目的比较白矾、氢氧化铝和氯化铝对小鼠学习、记忆和肝肾功能的影响及停药后的恢复情况.方法白矾[KAl(SO4)2·12H20]、氢氧化铝[Al(OH)3]和氯化铝(AlCl3)按照铝含量相同的两个剂量14.25mg/(kg·d)和57 mg/(kg·d),小鼠ig给药60 d后,用高效毛细管电泳仪测定动物血清和脑组织中的铝含量;避暗法测定小鼠学习、记忆能力;分光光度法测定小鼠血清中谷丙转氨酶和尿素氮含量.结果除白矾小剂量组外,各组小鼠均出现学习、记忆障碍,避暗潜伏期(STL)比对照组明显缩短(P＜0.01),血清铝含量显著升高(P＜0.01),各大剂量组脑铝含量显著升高(P＜0.01),伴血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05).停药2周后,学习、记忆障碍仍然存在,STL比对照组明显缩短(P＜0.01),但有恢复的趋势;血清铝含量均恢复正常,除氯化铝大剂量组血清BUN及脑铝含量仍高于对照组外(P＜0.05,P＜0.01),其余各组各指标均恢复正常.结论白矾、氢氧化铝和氯化铝长期、大剂量给药均可致小鼠学习、记忆障碍,肝、肾功能损伤;氯化铝大剂量组脑铝含量及血清BUN水平恢复较慢,其余各指标均可恢复.
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高效毛细管电泳法研究口服铝制剂对小鼠血清和脑组织中铝含量的影响
目的:用高效毛细管电泳仪测定小鼠血清和脑组织中铝含量的方法,研究口服白矾、氢氧化铝和氯化铝对小鼠血清和脑组织中铝含量的影响.方法:白矾、氢氧化铝和氯化铝按照铝含量相同的2个剂量14.25,57 mg·kg-1·d-1ig给药60d后,用高效毛细管电泳仪测定小鼠血清和脑组织中铝含量.结果:血清铝测定的回收率为96.5%～103%,脑铝测定的回收率为92.2%～105.3%,有较好的准确性和稳定性.白矾、氢氧化铝和氯化铝各组均出现血清铝含量比对照组显著升高(P<0.001),各大剂量组脑铝含量比对照组显著升高(P<0.001);停药2周后,除氯化铝大剂量组脑铝含量仍高于对照组外(P<0.01),其余各组均恢复正常.结论:高效毛细管电泳法可用于测定小鼠血清和脑组织中的铝含量.小鼠口服白矾、氢氧化铝和氯化铝等含铝化合物60d后,均有血、脑铝含量升高;停药14d后血铝可恢复正常,氯化铝大剂量组小鼠脑铝恢复较慢.说明铝在小鼠体内的代谢、排泄与所用含铝化合物的化合状态有关.
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骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法
骨和牙体组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大.常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术.
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铝中毒痴呆模型大鼠海马脂质过氧化和谷氨酰胺合成酶活性变化
哺乳动物神经系统易遭受氧化攻击,近年来氧化应激(Oxidative Stress)被认为是神经退行性病变过程中重要的一级事件,神经胶质细胞的谷氨酰胺合成酶(GS)对于脑内谷氨酸代谢起关键作用.为进一步探明老年性痴呆(AD)的发病机制,我们于2000年3月至10月,采用氯化铝经口染毒建立大鼠痴呆模型,观察大鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷氨酰胺合成酶(GS)活性和丙二醛(MDA)含量的变化.
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不同酒精浓度对铝中毒痴呆大鼠的影响
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)亦称老年性痴呆,是一种渐进性神经退行性疾病,表现为全面的认知功能障碍,严重危害老年人身心健康,给社会和家庭带来了沉重的负担.多数国内外研究发现适量饮酒可以使痴呆的危险性降低[1],而嗜酒或大量饮酒会导致学习记忆障碍[2].铝是慢性蓄积性神经毒物,可以选择性地蓄积在大脑受累神经元内,导致神经纤维缠结(NFT,neurofibrillary tangles)和老年斑(SP,senile plaque)生成.本实验采用铝中毒制作AD动物模型[3],探究饮酒量对AD进展的影响.
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百合食疗对老年性痴呆症预防作用的实验研究
目的:研究百合食疗对老年性痴呆(AD)模型大鼠行为学、免疫力及SOD活力、脑组织TChE的影响.方法:采用三氯化铝和D-半乳糖复合造模的方法塑造老年性痴呆大鼠模型,百合分30g、50g两组对老年性痴呆模型大鼠进行预防.造模后第30天开始测试各组大鼠的学习记忆能力,然后取血和脑组织,测血清超氧化物歧化酶(SOD),脑组织匀浆乙酰胆碱酯酶(TChE)等指标,对空白组、百合30g组、百合50g组、模型组、布洛芬组的各指标分别进行统计处理.结果:百合30g组、百合50g组的学习记忆能力和血清SOD活性均高于模型组,脑组织TChE的浓度低于模型组,具有显著差异性(P<0.05),但百合30g和50g组间无显著性差异.结论:百合对预防老年性痴呆有一定效果.
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饮用水采用氯化铝除氟处理的研究
水样中氟含量在5 mg/L以下时,按含氟量10倍投入铝(Al3+),可使处理过的水氟含量降到1 mg/L以下.处理过的水pH值应控制在6.5-7.5之间,如水的pH值过低,应当加适量的氧化钙以提高水pH值.
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氯化铝对大鼠基底前脑内侧隔核神经元APP蛋白表达的影响
目的:研究氯化铝对大鼠基底前脑内侧隔核APP蛋白表达的影响.方法:选用雄性Wistar大鼠20只,随机分为老龄组(18个月)、老龄给药组(自18个月始给予腹腔内注射氯化铝至21个月),21个月后进行Morris水迷宫训练及测试,观察大鼠的行为学改变.然后采用免疫组织化学SP法检测大鼠内侧隔核APP蛋白表达的变化情况.结果:老龄给药组大鼠逃避潜伏期与老龄组相比时间增加(P＜0.05);老龄给药组内侧隔核APP蛋白阳性反应物的平均光密度值与老龄组相比显著增高(P＜0.05).结论:老龄给药组大鼠内侧隔核APP蛋白表达明显高于老龄组,说明长期接触氯化铝可能导致基底前脑内侧隔核神经元APP蛋白表达或聚集增加.
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纳络酮对铝中毒小鼠免疫功能的改善作用
目的:在小鼠灌服氯化铝造成动物中毒模型的基础上,探讨纳络酮对铝中毒小鼠免疫功能的保护作用.方法:将小鼠随机分为3组,除对照组外其它两组制备动物铝中毒模型,再应用纳络酮对治疗组进行治疗,然后分别对各组进行腹腔巨噬细胞吞噬功能和T、B淋巴细胞转化率测定.结果:铝中毒组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及T、B淋巴细胞转化率均明显减低形成典型的铝中毒症状;治疗组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及T、B淋巴细胞转化率明显升高;对照组无明显变化.结论:应用氯化铝可制备出典型的小鼠铝中毒模型;应用纳络酮对铝中毒小鼠进行治疗可产生明显的免疫损伤保护和改善作用.
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石菖蒲α-细辛醚对Lithium-Pilocarpine癫痫模型GABA系统的调控作用
目的 探讨石菖蒲α-细辛醚治疗对Lithium-Pilocarpine模型大鼠抗癫痫作用可能的分子机制.方法 建立Lithium-Pilocarpine模型,通过观察α-细辛醚治疗对Lithium-Pilocarpine模型大鼠GABA含量、GAD67表达、GABA-T活性及GABAA受体表达的影响.结果 ①模型组大鼠癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)后12 h～24 h海马GABA含量及GAD67表达明显降低 (P<0.01),持续至SE后72 h,SE后各时相脑内GABA-T活性明显增高(P<0.01),以海马区GABA-T活性增高为突出,持续至SE后1周仍明显高于正常对照组;③ SE后12 h～24 h脑内GABAAR-mRNA表达明显降低,GABAAR-mRNA表达高峰主要发生在SE后48 h～72 h;④ 石菖蒲α-细辛醚治疗能显著增加大鼠SE后各时相海马GABA含量,增强GAD67及GABAA-RNA表达,并持续数日以上,至SE后1周恢复正常;能降低 SE后增高的GABA-T活性,其下调海马区GABA-T活性的作用强于额叶.结论 石菖蒲α-细辛醚可能通过抑制GABA-T活性以降低GABA分解代谢,上调GAD67表达使GABA合成增加,上调GABAA受体表达以增强GABA介导的抑制功能来发挥抗癫痫作用.
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老年期痴呆中医实验研究进展
随着人口老龄化的发展，老年期痴呆已成为老年人的常见病和疑难病，被喻为21世纪人类健康的第四大敌，它不仅增加社会经济负担，而且严重影响老年人的工作、生活质量。因此老年期痴呆的研究正越来越受到医学界的重视，特别在实验研究方面进展较快。本文拟从动物模型、中药作用机理方面的研究作一综述。1 研究进展1.1 动物模型制作的研究为了进一步开展对老年期痴呆的研究，实验动物模型的研制具有重要价值。目前常用的老年期痴呆动物模型有以下几种制作方法：化学损伤法(如氯化铝，东莨菪碱，亚硝酸钠，喹啉酸，神经毒性氨基酸等)、脑缺血再灌注法、自然老年鼠模型等方法，但各种模型各有其优缺点，如东莨菪碱引起的胆碱能功能损害可逆转，氯化铝造模周期长，有的难以全面出现老年期痴呆的特征性改变，有的价格昂贵限制应用。国内不少学者在这方面作了有益的探索。如李亚明等研制了能够反映AD病理特征的由D-半乳糖合鹅膏覃酸造成的“AD”大鼠模型，认为是目前较为理想的AD模型之一［1］。莫飞智等研制了肾血管性高血压鼠(RHR)脑反复缺血拟VD动物模型，发现痴呆大鼠先后表现为肝阳上亢、肝肾不足、气血两虚、肾髓不足等证候，认为该VD模型其血管解剖接近人类，来源广，易于手术和管理，造模操作简单，痴呆率高，存活期长，可用于对VD进行较长时期的慢性研究［2］。
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纳络酮对氯化铝导致的小鼠学习记忆障碍及血中锌铜锰含量变化的影响
通过口服氯化铝建立小鼠学习记忆障碍模型,在此模型的基础上用跳台法观察了纳络酮对铝中毒小鼠学习记忆障碍的改善作用,并采用火焰原子吸收分光光度法测定了小鼠血中锌(Zn)、铜(Cu)、锰(Mn)的含量.结果显示,氯化铝可导致小鼠学习记忆障碍,且降低血中Zn、Cu含量(P＜0.05),而纳络酮有改善铝中毒小鼠学习记忆障碍的作用,同时也增加了血中Zn、Cu含量.
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铝对斑马鱼幼鱼的神经毒性作用及其转录组学研究
目的 探讨铝对斑马鱼的神经毒性作用及其在转录水平的机制.方法 选取受精1d后发育良好的斑马鱼胚胎,随机分为2组,分别给予单纯培养基(对照组)和50μg/L浓度的AlCl3处理6d(AlCl3处理组).检测幼鱼自主运动行为、活性氧(ROS)释放及转录组学变化.结果 与空白对照组相比,经AlCl3处理后的斑马鱼,表现出运动轨迹明显无规律,游泳速度减慢,差异有统计学意义(P＜0.05);AlCl3增加斑马鱼幼鱼的活性氧释放(P＜0.05);转录组学数据显示,AlCl3处理组与对照组相比,Neurogenin 1等19个与退行性神经疾病相关的基因表达发生显著变化(P＜0.0001),22个显著变化的基因富集在MAPK信号通路.结论 铝对斑马鱼具有神经毒性作用,其分子机制可能与Neurogenin 1等19个基因表达的变化及MAPK信号通路的调控有关.
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羊抗钙化预处理的同种带瓣大血管作右心室流出道重建
目的 探讨乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理,能否降低同种带瓣主动脉(CVH)的钙化.方法 18只幼羊,分别植入经乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理(实验组)和用生理盐水浸泡(对照组)的CVH,作右心室流出道移植重建.移植后18个月(1年半),处死动物,取出CVH,作肉眼、光镜(HE染色及VonKossa法染色)观察,原子吸收火焰法测定组织钙含量.处死前均作心脏彩超检查(测定肺动脉瓣膜直径、平均跨瓣压差、跨瓣峰压、心排量及心排指数).结果 共完成CVH植入18例.其中,实验组1例术中吻合口出血死亡,1例术后16天死于胸腔内感染；对照组2例分别于随访9、12个月时死亡(尸体解剖见CVH瓣膜均钙化严重、明显狭窄),其余14例均成活到18个月.心脏超声:实验组CVH瓣膜柔软,光滑,无增厚及钙化,活动正常,跨瓣压差低(接近正常).对照组CVH瓣膜增厚及钙化,管壁亦有钙化灶,瓣膜轻、中、重度返流及狭窄,跨瓣压差增高.两组均未见赘生物及血栓形成.CVH取出后见:实验组管道质地柔软,内膜光滑.瓣膜质地纤细,无退行性或钙化改变；对照组CVH管壁多处钙化,瓣膜不均匀增厚、钙化.Von Kossa染色见:实验组CVH管壁无黑色钙盐,对照组管壁及瓣膜有黑色钙盐.光镜:实验组见血管中层纤维细胞形态完整,细胞核无裂解和浓缩,胞浆均匀,平滑肌细胞呈梭状,排列整齐,结构完整,瓣膜细胞结构清楚；对照组血管中层纤维细胞及平滑肌细胞排列疏松,纤维结构有断裂,瓣膜细胞有少许呈死后自溶,主动脉管壁及瓣膜可见较多钙化灶.与实验组比较,对照组主动脉壁及瓣膜的钙含量均明显增加.实验组带瓣血管血流动力学明显优于对照组.结论 以乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理CVH,可降低其钙化,作右心室流出道重建,可获得更好的血流动力学效果,有可能成为新的CVH材料.
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氯化铝对人精子毒性作用及美洛昔康对其干预作用的体外试验研究
目的:研究氯化铝(A1Cl3)对人精子的毒性作用及美洛昔康对其的干预作用.方法:采用体外试验方法,取5份正常人精液,每份精液稀释成1×106个/mL后均分为8份,4份为1组,每组4个亚组,第1组为对照组（生理盐水）和AlCl3低、中、高剂量组(5、10、15 mol·L-1);第2组在第1组的基础上,除对照组改为加入美洛昔康1×10-5 mo1·L-1外,其余3组均预先加入美洛昔康1×10-5mol·L-1.在37℃水浴箱中孵育0、2、4h后检测精子存活率及活动率,精浆中超氧化物歧化酶(SOD)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性.结果:AlCl3对精子的存活率、活动率、SOD活性均有抑制作用,对AST活性具有增强作用,并呈浓度、时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01)；加入美洛昔康后,在相应浓度及时间点,各组精子的存活率、活动率、SOD活性、AST活性均有好转,但不能完全改善.结论:体外试验中,A1Cl3对人精子具有明显的毒性作用,美洛昔康对其具有明显的改善作用.
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阿尔茨海默病小鼠自发性活动分析
目的:探讨阿尔茨海默病模型小鼠自发性活动的度的生物节律变化.方法:用0.5%氯化铝制作阿尔茨海默病小鼠模型,采用小鼠自主活动测试仪对实验前后小鼠的活动度进行连续7d的检测.结果:在12D/12L光暗循环影响下,正常小鼠黑暗相的活动度明显比光照相多(P＜0.05);而建立阿尔茨海默病疾病模型后,小鼠在光照及黑暗条件下的活动度无显著差异性(P＞0.05).结论:阿尔茨海默病导致小鼠的活动度失去生物节律性.
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阿尔茨海默病对小鼠体能的影响
目的:探讨阿尔茨海默病(AD)对小鼠体能的影响.方法:将实验小鼠随机分为三组,分别是AD模型组、生理盐水对照组及正常对照组.采用0.5%氯化铝对小鼠行连续5d的侧脑室注射复制阿尔茨海默病小鼠模型,生理盐水对照组用同样的方法侧脑室内注射等体积生理盐水.采用ZB-200疲劳转捧仪对各组小鼠体能进行检测,检测小鼠在转棒仪上的滞留时间.结果:AD模型组小鼠在转棒仪上的滞留时间与盐水对照组及正常对照组小鼠相比较具有显著统计学差异(P＜0.05),而盐水对照组与正常对照组小鼠在转棒仪上的滞留时间无统计学差异(P＞0.05).结论:AD对小鼠的体能有显著影响,使得其的体能明显下降.
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氯化铝中毒小鼠不同脑区M受体含量的比较观察
目的 通过慢性铝中毒造成老年痴呆小鼠模型，探讨其对M受体含量的影响。方法 健康昆明种雄性小鼠60只，随机分为2组，每组30只，模型组动物以氯化铝100mg／k，腹腔注射，隔日一次，连续50天，后一次，腹腔注射氯化铝后，以跳台法进行学习训练，并记录潜伏期及错误次数。24小时后再测记忆成绩，测试结束后，动物迅速断头取脑，冰台分离海马及脑皮层，检测各自的M受体亚型含量(ELISA法)。结果 模型组记忆潜伏期明显缩短(P＜0.01)，学习潜伏期明显延长(P＜0.01)，学习和记忆的错误次数明显增多(P＜0.01)；模型小鼠皮层与海马M1受体亚型含量明显较空白组低(P＜0.05或P＜0.01)，但M2受体亚型含量皮层、海马均无显著性差异。结论 通过慢性铝中毒成功建立老年痴呆小鼠模型；氯化铝能明显降低小鼠皮层及海马M1受体含量。
