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结核性脑膜炎脑脊液免疫学诊断
目的 分析结核性脑膜炎脑脊液的特征,初步研究其免疫学诊断方法及效果.方法 对我院在2010年11月-2012年5月接收检测的120例患者进行回顾性分析,通过乳胶凝集反应对结核性脑膜炎的脑脊液进行免疫学诊断,再利用速率散射比浊法测定结核性脑膜炎患者组和正常人组脑脊液中免疫球蛋白系列的指标,并进行分析.结果 我院在2010年11月-2012年5月收治的120例患者中(结核性脑膜炎患者35例,其他脑膜炎患者45例,肺结核患者22例,非脑膜炎18例)经过乳胶凝集反应得出,滴度＞40具有较低的假阳性(7.7%),与其他组阳性率比较,具有明显的统计学差异(P＜0.01);在结核性脑膜炎患者中,脑脊液免疫球蛋白系列指标均升高,并且有显著差异.结论 结核性脑膜炎的脑脊液免疫学诊断具有很高的敏感性和特异性,具有广阔的应用前景.
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阿尔茨海默病与血管性痴呆的实验室研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种多因异质性疾病,血管性痴呆(vaseular dementia,VD)是因血管源性脑损伤引起的严重智能障碍,AD和VD是老年性痴呆症的首发原因.它们的早期诊断是其治疗和预后的限制性因素.目前从血液和脑脊液中发现一些具有诊断和鉴别诊断意义的生化及免疫指标,如β淀粉样蛋白(β amyloid protein,Aβ)、糖基化血红蛋白终产物(glycosylated hemoglobin end products,AGEs)、精氨酸加压素(arginine vesopresin,AVP)、乙酰化胆碱酯酶(AchE)、Tau蛋白、载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)等,有望成为AD和VD的早期诊断极有价值的指标.
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梗阻性黄疸的血清学及免疫学诊断
张延龄教授梗阻性黄疸的血清学和免疫学诊断在判定导致黄疸的病变为良性抑或恶性性质及其定位意义不很大,但不可否认某些项目仍具有参考价值,如血清胆红素测定有助于了解黄疸的程度,应列为常规.测定胆红素结合型和非结合型浓度可以鉴别肝细胞性、溶血性或梗阻性原因的黄疸;即使在以结合性胆红素增加为主的梗阻性黄疸,有因运输或排泌障碍引起的,如见于DubinJohnson综合征、Rotor综合征、肝硬化、淀粉样变性、肝炎或妊娠,也有因胆道梗阻引起的,如见于胆石症、胆道狭窄、壶腹周围癌肿、胆管癌、慢性胰腺炎或原发性硬化性胆管炎等,需予以鉴别,并说明不是所有的梗阻性黄疸都需要手术.这一检查是人们熟知的项目,不加讨论,下面介绍几种新开展的检查方法.
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儿童原发性免疫缺陷病135例临床分析
目的 分析儿童原发性免疫缺陷病(PID)的临床发病及诊断情况,增强儿科医师对该类疾病的认识.方法 回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院1993年5月至2007年12月诊断的135例PID患儿的临床资料,包括发病时症状体征、性别、发病年龄、家族史、免疫学结果 及诊断情况.结果 135例患儿中以抗体缺陷多,占34.8%.吞噬细胞缺陷占18.5%,其他明确的免疫缺陷综合征占14.8%,联合免疫缺陷占11.9%,免疫失调性疾病占5.9%,补体缺陷占0.7%,其他PID占13.3%.男女比例为110:25,临床诊断与基因诊断比例为98:37.1993-1996年诊断9例,1997-2000年诊断23例,2001-2003年诊断31例,2004-2007年诊断72例,诊断病例数逐年增加.其中2001-2003年基因诊断7例,2004-2007年基因诊断30例.结论 PID为一组主要见于婴幼儿的遗传病,是引起儿童反复、严重、致残、致死性感染的重要原因.近年来诊断的PID病例数逐年增加,基因分析是确诊该类疾病的重要手段.
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结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素的原核表达及其在结核病血清学诊断中的应用
目的 原核表达与纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素结合血凝黏附素(heparin-bindinghaemagglutinin adhesion,HBHA),并初步评估其在结核病血清学诊断中的价值.方法 采用PCR法从M.tbH37Rv基因组中扩增hbha基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28ah,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组HBHA(rHBHA)蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,Western blot法分析其抗原特异性.收集71例确诊的结核病患者和30名健康体检者血清,采用ELISA法检测血清中的抗HBHA IgA、IgG抗体水平,并以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原,评估rHBHA在结核病血清学诊断中的价值.结果 重组表达质粒pET-28ah经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化,可得到高纯度的rHBHA蛋白;纯化的rHBHA蛋白可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合;结核病患者(TB)组血清中抗rHBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康对照(HC)组(P＜0.05),且TB组的rHBHA抗原特异性IgA水平也显著高于HC组(P＜0.05),而两组间ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgA水平差异无统计学意义(P＞0.05);ROC曲线分析显示,rHBHA抗原检测IgA的诊断效能较好,曲线下面积为0.711,其他两种对照抗原ESAT-6、Ag85A的IgA诊断效能一般,曲线下面积分别为0.512和0.531.结论 rHBHA抗原用于结核病的诊断效能较好,可作为结核病血清学诊断的备选抗原之一.
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肺炎支原体P30黏附素基因的原核表达及初步应用
目的 构建肺炎支原体P30黏附素基因原核表达质粒并进行表达;以纯化的rP30蛋白为抗原,建立间接斑点-ELISA(dolt-ELISA)法,用于评价rP30蛋白在肺炎支原体(MP)感染诊断中的价值.方法 以MP基因组DNA为模板,PCR扩增P30基因,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)/P30,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;Western blot检测表达产物的反应原性;以纯化复性后的rP30蛋白为抗原,建立问接dolt-ELISA法,对40份临床疑似肺炎支原体感染患儿血清进行检测.结果 表达的rP30蛋白相对分子质量约为52 000,表达母约占菌体总蛋白的13%,主要以包涵体形式存在,经Ni2+-NTA树脂纯化后,纯度约为93%.Western blot证实,rP30蛋白可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应.用rP30蛋白建立的间接dolt-ELISA法,其敏感性和特异性分别为95.45%和72.22%,准确性为85%.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了rP30蛋白,为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法.也为进一步探讨P30蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础.
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结核病免疫学诊断方法的研究进展
简要介绍了结核病基本概念,针对细胞免疫诊断、结核病体液免疫诊断和非特异性免疫诊断等技术研究进展进行了概述,并在此基础上总结了结核病免疫学诊断方法研究需解决的主要问题和研究方向.
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血清标记抗体对系统性红斑狼疮疾病的诊断
系统性红斑狼疮(SLE)的诊断采用LE细胞检查,其试验阳性率低,干扰素多,常影响诊断效果,抗DNP(脱氧核蛋白)抗体是SLE的标记抗体,对SLE疾病的诊断有意义.
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细胞表面分化抗原CD15在264例成人白血病细胞上的表达
近年来的研究表明,流式细胞术(FCM)检测结果对于确定白血病的诊断与分型至关重要.以往采用横向分析的方法对白血病进行免疫分型的报道较多,而对于某一个特定标志在白血病免疫学诊断中的作用报道较少.笔者采用CD45/SSC双参数设门的多色FCM,对CD15在264例白血病患者白血病细胞中的表达作了分析,以进一步探讨CD15对白血病患者的诊断意义.
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弓形虫病的免疫学诊断进展
弓形虫病是全球广泛分布、对人类造成严重危害的人兽共患病.多见于艾滋病患者和肿瘤病人,而先天性弓形体病可导致流产、早产、畸胎、死胎等.因此,弓形虫病的防治和早期诊断已引起人们关注,必须寻找一种敏感而特异的早期诊断方法和诊断试剂.同国外的一些试剂盒相比,目前我国还缺少令人满意的诊断试剂盒.本文简要介绍近年弓形虫病免疫学检测有关的抗原及抗体研究.
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重组日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶单克隆抗体在急性血吸虫病临床诊断中的应用
目的 研究重组抗原26 ku日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶(SjGST)及其单克隆抗体在血吸虫患者分子诊断中的应用.方法 用已纯化的重组SjGST抗原免疫近交系(BALB/c)小鼠,数周后取免疫鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择性培养基筛选出杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化,扩大培养制备针对重组SjGST抗原的单克隆抗体细胞株.亲和层析法纯化单克隆抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急性血吸虫病患者和非流行区正常人血清.结果 成功获得重组蛋白26 ku SjGST,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带.成功获得能够长期分泌抗重组SjGST单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA与蛋白质印迹试验均显示杂交瘤细胞培养上清中含有重组SjGST抗体.EIASA检测患者血清结果 表明,26 ku SjGST用于急性血吸虫病患者血清中抗体检测的阳性率为90.6%,26 ku SjGST抗体用于急性血吸虫病患者血清中循环抗原检测的阳性率为59.4%.结论 该重组蛋白用于急性血吸虫病患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,26 ku SjGST抗体对循环抗原的检测可作为抗体检测的有效补充.
关键词： 谷胱甘肽-硫-转移酶 单克隆抗体 日本血吸虫 免疫学诊断 -
结核分枝杆菌rdES AT-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究
目的：构建结核分枝杆菌（MTB）融合基因2×esat-6原核表达载体，利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化早期分泌抗原ESAT-6重组二聚体（rdESAT-6），Western blot分析其抗原性，并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法以DNA疫苗HG856A2为模板扩增2×esat-6基因，构建pMF41-2×esat-6原核表达载体，电转化耻垢分枝杆菌，诱导表达rdESAT-6蛋白，Western blot分析其抗原性。收集126例确诊的结核病患者和42名健康体检者的血清，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和结核斑点金免疫渗滤试验（TB-DOT）检测血清结核抗体，评估rdESAT-6在结核血清学诊断中的价值。结果成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒，以包涵体形式表达了rdESAT-6蛋白，纯化的蛋白纯度在95％以上，可与小鼠抗ESAT-6血清发生特异性反应。126例结核病患者血清检测结果表明，rdESAT-6蛋白在MTB 阳性组和阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79．75％（63/79）、61．70％（29/47），好于TB-DOT的62．03％（49/79）、44．68％（21/47）（P＜0．05）。2种方法对42名健康体检者血清诊断特异性均为95．24％（40/42）。结论 MTB的融合蛋白rdESAT-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性，可作为结核病血清学诊断的优选抗原。
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弓形虫病免疫学诊断研究进展
弓形虫病是严重危害人类健康的人兽共患病,临床表现缺乏特异性,且弓形虫病原学检出率低.免疫学检测具有敏感、特异、快速、简便等特点,已成为辅助诊断弓形虫病的常用方法.该文综述了弓形虫病免疫学诊断方法的研究进展.
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新孢子虫病免疫学诊断和免疫预防的研究进展
新孢子虫病是一种对多种动物危害严重的原虫病,给畜牧业带来很大的经济损失,特别是奶牛饲养业.新孢子虫病越来越被人们所关注,特别是诊断和防制成为国内外兽医界研究的热点.该文对新孢子虫病免疫诊断方法的适用范围、优缺点及新孢子虫病免疫预防机制和疫苗研究情况进行了综述.
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慢性重型肝炎患者T细胞亚群的变化
本文通过对慢性重型肝炎(CSH)患者T细胞亚群的测定,了解其细胞免疫功能的变化,试图为CSH患者的免疫学诊断和免疫功能调节治疗提供实验依据.现将结果报道如下.
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日本血吸虫虫卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表达及其在诊断中的应用
目的 真核表达日本血吸虫虫卵蛋白,并评价其在血吸虫病免疫学诊断中的作用. 方法 提取日本血吸虫虫卵RNA,逆转录后获得cDNA.PCR扩增日本血吸虫虫卵特异性或高表达基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856 (SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324 (SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjPPIase)和SJCHGC06529 (SjRobl),亚克隆至真核表达载体pPIC9K.重组质粒电转至毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导目的蛋白表达.镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化获取重组蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对其进行分析鉴定.以血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl单用,3个重组蛋白两两伍用,及全部伍用作为包被抗原,ELISA法检测血吸虫感染小鼠血清、急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清中相应抗体的反应性. 结果 PCR扩增获得7个日本血吸虫虫卵高表达基因,经酵母重组表达和Ni-NTA亲和层析纯化后成功获得3个重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl.SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,所获得的重组蛋白为目的蛋白.ELISA检测结果显示,血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清中均可检测出被SjE16、SjPPIase和SjRobl识别的特异性IgM和IgG抗体.在急性血吸虫病患者中上述3种抗原IgM的检出率分别为80％、60％和80％,IgG检出率分别为40％、80％和70％.伍用组中,SjE16和SjRobl伍用抗原,检测急性血吸虫病患者血清中IgM抗体的敏感性为100％,高于其单独为抗原的敏感性. 结论 获得的3个日本血吸虫虫卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸虫病诊断的潜能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸虫病诊断敏感性.
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华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价
目的 应用华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白(rCs2)建立2种华支睾吸虫病免疫学检测方法,并进行初步评价.方法 以可溶性rCs2作为诊断抗原,建立间接ELISA检测方法,并研制胶体金免疫层析检测(GICA)动力流体型试条,检测血清中的特异性抗体.采用ELISA法和GICA试条共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性患者、15例日本血吸虫病患者、15例卫氏并殖吸虫病患者和13例猪囊尾蚴病患者的血清,以及33份健康人血清.为进一步评价诊断价值,8只新西兰兔各感染600个华支睾吸虫囊蚴,随机均分为感染组和治疗组,感染第56天,治疗组各兔给予吡喹酮治疗[150 mg/(kg·d)×2 d],用ELISA法和GICA法检测两组兔0~44周抗rCs2特异性抗体的消长.结果 ELISA法的敏感性为71.4%(25/35),特异性为93.4%(71/76),总符合率为86.5%(96/111),与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病和猪囊尾蚴病患者血清的交叉反应阳性率分别为1/15、1/15和1/13.GICA试条检测法的敏感性为85.7%(30/35),特异性为92.1%(70/76),总符合率为90.1%(100/111).经ELISA检测,感染组兔自感染后第4周抗rCs2特异性抗体水平开始上升,于第6周达到高峰,随后快速下降,至第20周已呈较低水平;治疗组的特异性抗体消长趋势同感染组,同一时点的2组实验兔的抗体水平差异无统计学意义(P>0.05).GICA试条检测结果表明,2组兔血清均仅在4~16周检出阳性.结论 以PPMPⅠ型抗原rCs2建立的间接ELISA方法和GICA动力流体型试条对华支睾吸虫病具有较好的诊断价值.
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丙型肝炎药物的研究进展
1974年国外学者提出了非甲非乙型肝炎之后,1989年在东京召开的国际非甲非乙型肝炎和经血传播的传染病学术会议上,将它正式命名为丙型肝炎,从此对丙型肝炎的研究不断取得进展.美国学者成功地获得丙型肝炎病毒(HCV)基因组的cDNA克隆,为开展这类肝炎的免疫学诊断奠定了基础.近年来丙型肝炎发病率逐渐上升,HCV感染遍及世界各地,欧洲东部及非洲的感染率高,我国正常人群中HCV的感染率有逐年上升的趋势.丙肝流行的严重性已引起世界各国的高度重视,并着手研究开发治疗丙肝的药物.本文就近年来国内外学者在该领域的研究情况作一介绍.
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武汉市血吸虫病间接血凝试验查病质量控制效果
日本血吸虫病是一种严重危害我国血吸虫病疫区人民健康,影响社会经济发展的寄生虫病.经过50多年的努力,血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就.然而由于诸多因素的影响,部分地区疫情有所回升.血吸虫病诊断在防治中占有重要地位,也是确定化疗目标人群(对象)的依据.间接血凝试验(IHA)有较高敏感性和特异性,操作简单,价格低廉,是血吸虫病流行病学调查中血清免疫学诊断常用方法之一.但IHA试剂盒稳定性欠佳,各地血吸虫病查病质量难以控制,2000～2004年武汉市开展了IHA查病质量控制研究,报告如下.
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血吸虫病低度流行区3种免疫学诊断方法的费用-效果
目的评价3种血吸虫病免疫学诊断方法在低度流行区应用的费用-效果.方法在江苏省江滩型血吸虫病低度流行区选择一自然人群,用胶体染料试纸条法(DDIA)、双面胶纸环卵沉淀试验(DGS-COPT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时进行检测.以粪便孵化法和改良加藤氏法阳性确诊病人作为金标准,运用卫生经济学方法,评价3种免疫学诊断方法的费用-效果.结果3种方法总费用相近,DDIA每查出1例血吸虫病人的费用和漏检病人造成的损失分别比ELISA少7.17%和200%,查出1例血清学试验阳性者费用和人均检查费用分别比ELISA多5.8%和23.16%.DGS-COPT各项费用均比DDIA和ELISA为高.粪检阳性者中,DDIA、DGS-COPT和ELISA的阳性符合率分别为94.4%、72.2%和83.3%.结论在血吸虫病低度流行区,胶体染料试纸条法经济实用.
