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山莨菪碱保护钙超载损伤心肌细胞的图象分析研究
目的采用噻唑蓝(MTT)染色法在图像分析系统下观察KCL致心肌细胞钙超载损伤情况及山莨菪碱对其的保护作用.方法用新生2~3d SD大鼠的乳鼠进行心肌细胞原代培养,待贴壁并稳定搏动后,进行分组给药.KCL致钙超载损模型组(KCL 200mM,2%聚乙二醇-400),Anisodamine预保护组(Anisodamine0.3mM,0.6mM,0.8mM),继续培养48h.用MTT法染色后在CASI-1000图象分析仪下测定单位视野内(n=25)存活心肌细胞数量和细胞染色的灰度值.结果用图象分析仪进行形态学观察发现,山莨菪碱保护的KCL致钙超载损伤心肌细胞存活数及存活细胞形成Formazan的灰度值较损伤模型组明显降低.结论山莨菪碱对KCL致钙超载损伤的心肌细胞有保护作用,能够降低线粒体酶系统的损伤程度.
关键词: 噻唑蓝 钙超载损伤 CIAS-1000图象分析系统 山莨菪碱 -
TPGS修饰的紫杉醇pH敏感脂质体处方优化及制剂学性质的考察
目的 筛选生育酚聚乙二醇琥珀酸盐(tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)与紫杉醇(paclitaxe,PTX)的质量比例,对TPGS修饰的PTX pH敏感脂质体进行处方优化及制剂学性质的考察.方法 采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法以逆转耐药为指标筛选TPGS与PTX的质量比;采用薄膜分散法制备脂质体,对制剂进行单因素考察,并以包封率、载药量和24 h稳定性(24 h包封率和24 h载药量)为指标,应用星点设计-效应面法对处方及工艺进行优化.测定脂质体的粒径、Zeta电位和体外释药行为.结果 TPGS与PTX的优质量比例为1∶1,制剂的优处方和工艺确定为m(dioleoyl phosphoethanolamine,DOPE)∶m(cholesteryl hemisuccinate,CHEMS)∶m(hydrogenated soybean phospholipids,HSPC)=6∶4∶2,m(TPGS)∶ m(PTX)=1∶1,投药量:1.02 mg,水化时间:12.29 min,水化温度:35℃,超声条件:200W,5min.脂质体的包封率为83.54%,载药质量分数为6.52%,24 h包封率和载药质量分数分别为80.03%和5.97%,稳定性良好.脂质体粒径为(115.8±2.03)nm,Zeta电位为(-56.47±1.55)mV.在pH5.0条件下脂质体释药速率明显增加.结论 星点设计成功实现了对处方的优化,且模型预测性良好;优处方制备的脂质体具有较高的包封率和载药量,粒径较小且分布均匀,体外释放表现出一定的pH敏感性.
关键词: 紫杉醇 生育酚聚乙二醇琥珀酸盐 pH敏感脂质体 星点设计-效应面法 噻唑蓝 -
早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元远期MTT代谢率的影响
目的探讨早期无镁细胞外液处理后惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元远期MTT代谢率的影响.方法以原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型,根据对培养6d皮层神经元的不同处理分为三组:正常DMEM培养液组(NOT)、正常细胞外液组(CONT)和无镁细胞外液组(MGF).神经元分别在上述三种液体中孵育3 h,然后换为正常DMEM培养液继续培养,在培养7,12及17 d时测定皮层神经元MTT代谢率.结果与CONT和NOT组相比,MGF组培养7和12 d皮层神经元MTT代谢率分别为62.71%与55.42%,均明显降低(P<0.05).培养17 d的皮层神经元MTT代谢率三组中两两比较无统计学差异(P>0.05).结论 发育中大鼠皮层神经元早期惊厥样放电可以导致神经元功能较长期的改变.
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回心草单体成份对内皮细胞的保护作用及对血管内皮细胞分泌NO和NOS的影响
研究回心草活性部位分离的单体成分对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞NO及NO合酶的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制.采用H2O2建立体外培养的HUVEC操作模型,用噻唑蓝(MTT)法测定5个单体对H2O2损伤的内皮细胞的光密度(OD);用试剂盒检测各剂量组细胞上清液中一氧化氮浓度和细胞内一氧化氮不同种类的合成酶的活性.结果表明H2O2 1mmol/L为合适的细胞刺激浓度;回心草活性部位的5个单体成分药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,与模型组比较细胞抑制率均有显著差异(P<0.05或P<0.01);进行一氧化氮、一氧化氮合成酶含量的测定,与模型组比较亦有显著差异(P<0.05或P<0.01).所以,回心草活性部位的5个单体成分直接作用于H2O2损伤的内皮细胞,均可以减轻内皮细胞的损伤.增加NOS活性,促进NO的分泌.
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依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的内环境影响因素
目的:观察内环境因素(pH和甘氨酸及离子浓度)对依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的影响.方法:大鼠原代培养皮质神经元,在不同的实验溶液(模拟缺血后脑内环境的变化)以缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)3 h和再灌12 h诱导皮质神经元损伤,以噻唑蓝(MTT)还原反应和乳酸脱氢酶(LDH)释放观察损伤变化.观察不同实验溶液对抗脑缺血药物依达拉奉抗缺血性损伤作用的影响.结果:在弱碱性(pH 7.8)或含甘氨酸(10μmol/L)的实验溶液中,OGD损伤加重;在弱酸性(pH 6.5)或高Mg2+(1.8 mmol/L)条件下,OGD损伤减轻.依达拉奉(1μmol/L)能逆转在pH 6.1、7.4、7.8或含甘氨酸溶液中OGD损伤;而对pH 6.5、高Mg2+或低Ca2+溶液中的OGD损伤未显示保护作用.结论:内环境因素改变可影响缺血性损伤程度和依达拉奉抗损伤作用.
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分次剂量可变方案照射MCF-7乳腺癌细胞的实验研究
目的 用人乳腺癌细胞MCF-7研究不等分次剂量(VFS)照射方案的效果.方法 10组相同数目的MCF-7细胞样本,用MTT分析方法获得不同的分次剂量方案照射后的细胞存活率(S)进行比较.结果 除1组外,其余9组VFS方案照射后获得的S值均小于CFS照射后的S值,其中有统计学意义的有3组;在相同变化幅度的情况下,递减的VFS照射方案所获得的效果要好于递增VFS照射方案,其中有显著的统计学意义的有2组.结论 实验结果与理论计算结果一致,所以,VFS方案,尤其是分次剂量递减的VFS方案可能应用于临床以提高治疗效果.
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人重组IFN-γ对STAT-1在卵巢癌细胞中表达调控的研究
目的:研究IFN-γ对卵巢癌耐药细胞株SKOV3TS及敏感细胞株SKOV3中STAT-1表达的调控.方法:应用RT-PCR方法、细胞免疫荧光法检测SKOV3TS与SKOV3在IFN-γ作用前后STAT-1 mRNA及蛋白的表达.用MTT法检测不同浓度IFN-γ作用卵巢癌细胞株不同时间后对细胞增殖率的影响.结果:卵巢癌SKOV3TS、SKOV3细胞株均有STAT-1表达,且主要集中于胞浆.并且随着IFN-γ作用时间延长,STAT-1蛋白表达增强.IFN-γ作用两种细胞株24h及48h后STAT-1 mRNA表达均增加,且差异有统计学意义(P<0.01),但不同浓度IFN-γ作用相同时间后STAT-1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).IFN-γ可显著抑制SKOV3TS和SKOV3细胞增殖,也呈时间依赖性(P<0.01).IFN-γ对SKOV3组的抑制率较SKOV3TS组高(P<0.05).结论:IFN-γ能够促进STAT-1表达,抑制卵巢癌细胞增殖.
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藻蓝蛋白对体外培养缺氧PC12细胞保护作用的佳剂量
目的 探讨藻蓝蛋白对体外培养缺氧PC12细胞保护作用的佳剂量.方法 将培养好的PC12细胞制成缺氧/复氧模型,应用藻蓝蛋白干预治疗.噻唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的吸光度,观察细胞的活性及数量的变化;共聚焦显微镜测定Rhodamine123标记的PC12细胞内的荧光强度,观察线粒体膜电位的变化.结果 缺氧/复氧后,PC12细胞的吸光度和细胞内的荧光强度均明显降低.藻蓝蛋白治疗后,各剂量组PC12细胞的吸光度明显升高,以5μg·mL-1组显著,P<0.01;细胞内的荧光强度明显增强,以10μg·mL-1组显著,P<0.01.结论 藻蓝蛋白对缺氧/复氧后PC12细胞保护作用的佳剂量可能为5~10 μg·mL-1.
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口岸医疗器械产品体外细胞毒性结果分析
目的 了解2012年-2014年出入境检测机构送检医疗器械细胞毒性的分布状况.方法 参考医疗器械生物学评价ISO标准,采用L929细胞系对样品浸提液进行直接或间接细胞毒性评价,直接法细胞暴露于不同浓度浸提液,采用MTT测量细胞活力作为终点.间接法在细胞上添加琼脂,浸提液湿润的滤纸置于琼脂上,镜检细胞的毒性反应.结果 送检的184份医疗器械样品,合格样品数为150份,总合格率为81.5%,不同管理分类和目录分类的医疗器械合格率不一,检出细胞毒性大小存在较大差异.结论 生产企业和检测机构应重点关注细胞毒性大的医疗器械,尤其是Ⅲ类管理类别产品,在生产和出口检测环节给予严格把关.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HCT-8和HT29细胞株的作用及对Notch1与Notch2的基因表达的影响
表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中含量高、活性强的单体,具有抗癌作用[1]。本研究旨在观察EGCG对结肠癌细胞HCT-8和HT29细胞增殖的抑制作用及对Notch1与Notch2基因的影响,探讨其抑癌机制。一、材料与方法1.噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对细胞增殖的抑制作用:将细胞接种于96孔板中,将孔中添加终质量浓度为0 mg/L(对照组),10、20、35 mg/L EGCG(实验组)的完全培养基,孵育24、72 h,加入CCK-8反应液,酶标仪读数后,计算抑制率。
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聚桂醇在体外对肝癌细胞的杀伤作用
聚桂醇是一种新型硬化剂,本研究旨在观察聚桂醇对肝癌细胞的杀伤作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株HepG2;聚桂醇注射液(陕西天宇制药有限公司);四氮唑盐(Sigma-aldrich);680酶标仪( Bio-rad).2.实验方法:(1)细胞株生长杀伤实验[噻唑蓝(MTT)比色法]:取对数生长期HepG2细胞,制成细胞混悬液,接种于96孔板,每孔100μl(含3000个细胞).
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α干扰素对肾癌细胞生长的影响
近年来,关于干扰素(WN)在肾癌治疗方面的研究多为临床研究,体外研究报道尚少.我们2008年4月至2008年10月通过对肾癌786-0细胞株体外培养,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测IFN-α对肾癌细胞的抑制率,运用流式细胞仪(FACS)检测IFN-α对肾癌细胞凋亡的影响,探讨IFN-α对肾癌细胞生长的影响.
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尼美舒利对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响
我们通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察体外尼美舒利对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用,并探讨其可能的作用机制,为临床开辟新的抗癌途径提供依据[1].
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细胞素及合用异博定对人乳腺癌细胞多药耐药性逆转作用的研究
我们利用人乳腺癌耐药细胞系以流式细胞术及噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-2、α-干扰素(α-IFN)单用及与异博定合用对细胞耐药性的调节作用,结果报道如下.
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氨磷汀对噻唑蓝实验结果的影响
目的 研究氨磷汀对噻唑蓝(MTT)实验结果的影响.方法 实验共分4组:调零组(培养基)、对照组(培养基和细胞)、氨磷汀组(培养基和氨磷汀)、氨磷汀+细胞组(培养基、细胞和氨磷汀),如常规实验加入MTT,立即观察颜色改变及酶联免疫检测仪490 nm处测吸光度(A)值,孵育4 h后再次检测各组A值.结果 ①调零组、对照组加MTT后均无颜色改变,A值一直在很低水平(0.087±0.021和0.093±0.018),孵育4 h仍无呈色反应,A值也无明显变化(0.076±0.015和0.103±0.022, P>0.05);②氨磷汀组、氨磷汀+细胞组加MTT后均立即呈现蓝紫色,0.5 mmol ·L-1 氨磷汀时A值分别为0.215±0.013和0.274±0.013,较调零组、对照组均明显升高(P<0.01),且随着氨磷汀浓度增高A值也明显升高(P<0.01);孵育4 h后氨磷汀组A值无继续升高(0.247±0.031, P>0.05),而氨磷汀+细胞组A值仍有升高(0.381±0.022, P<0.05).结论 氨磷汀本身及代谢产物可能与MTT直接反应并呈色,改变MTT实验中的A值,干扰MTT实验结果.
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罗汉松种子提取物对人胃癌细胞的体外抑制作用
目的:初步研究罗汉松种子提取物对人胃癌细胞MGC-803的抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度梯度的罗汉松种子提取物作用人胃癌MGC-803细胞24,48,72 h的增殖抑制率。采用RT-PCR检测MGC-803细胞凋亡相关基因bcl-2和p53 mRNA的表达。结果不同质量浓度罗汉松种子提取物对MGC-803细胞均有增殖抑制作用,且随着质量浓度的增加和作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。RT-PCR结果显示,不同质量浓度罗汉松种子提取物作用于MGC-803细胞,bcl-2 mRNA水平随质量浓度的增加而明显下降,而p53 mRNA水平则随质量浓度的增加而显著增强。结论罗汉松种子提取物对人胃癌细胞MGC-803有明显的体外抑制作用,其抑制作用与药物的质量浓度和作用时间呈正相关,可能与其调控相关凋亡基因的表达有关。
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噻唑蓝法测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用
目的: 探讨噻唑蓝法应用于测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用的可能性 . 方法 : 将被测试物与肿瘤细胞共同孵育 2h后撤去测试物 , 加入新鲜培养液培养 48h, 然后加入噻唑蓝染液 , 4h后酶标仪测定 . 结果 : 所测试的两种免疫偶合物对靶肿瘤有较强的细胞毒作用 , 这种作用明显强于对非靶细胞的作用 . 结论 : 噻唑蓝法是一种敏感、简单、客观性强的测定免疫偶合物细胞毒作用的方法 . 所测定的两种免疫偶合物具有临床应用价值 .
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原代舌癌细胞药敏实验研究
舌癌是头颈部常见的恶性肿瘤,对其生物学特性的了解还不完善,因而影响治疗效果.目前研究表明,恶性肿瘤应进行综合治疗,化疗是其重要组成部分,但化疗疗效除受肿瘤组织学类型影响外,常存在个体差异,使相同的治疗却结果不同.本研究应用手术切除的新鲜舌癌组织制备单细胞进行培养,以MTT(噻唑蓝)比色法和流式细胞术法,观察临床常用化疗药物的敏感性,为临床化疗提供依据.
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刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响
目的 研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit cornealendothelial cells,RCECs)生长的影响.方珐采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI 1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI 1640培养基作为对照.神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSSll,0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析.结果 成功进行了 RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达.ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<O.001),且1O%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<O.001).结论 ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂.
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三种方法制作人脱细胞真皮基质的生物学特性比较
1 材料与方法1.1 主要试剂鼠抗人Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白抗体,鼠抗人波形蛋白抗体,鼠抗人结蛋白抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;dispaseⅡ、Ⅰ型胶原酶、噻唑蓝(MTT)购自美国sigma公司.